141例羊水胎兒細(xì)胞嵌合體核型分析及其風(fēng)險(xiǎn)指征探索

李南,王立芝

嵌合體通常是指在同一個(gè)體同時(shí)存在來(lái)源相同或不同合子的兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞系。羊水細(xì)胞胎兒染色體核型嵌合現(xiàn)象是產(chǎn)前診斷中常見(jiàn)的問(wèn)題，由于羊水細(xì)胞胎兒染色體核型來(lái)源的多樣性，受到標(biāo)本來(lái)源、實(shí)驗(yàn)室體外培養(yǎng)等因素影響[1-2]，具有嵌合體核型的胎兒出生后的表型不確定，且臨床結(jié)局多樣[3]，因此也是臨床咨詢中比較棘手的問(wèn)題。如何根據(jù)嵌合體核型的胎兒已有的風(fēng)險(xiǎn)因素對(duì)孕婦進(jìn)行合理的妊娠建議及指導(dǎo)，是臨床醫(yī)生所關(guān)心的問(wèn)題。本研究總結(jié)我院產(chǎn)前診斷中心10年來(lái)孕中期胎兒羊水細(xì)胞染色體嵌合核型，探索產(chǎn)前診斷風(fēng)險(xiǎn)指征是否與胎兒嵌合體核型檢出有相關(guān)性，為臨床遺傳咨詢工作提供參考依據(jù)。

1 對(duì)象方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性分析2010年1月至2020年5月在成都市婦女兒童中心醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心行羊水穿刺檢查的26 477例孕婦病歷資料，及其羊水胎兒細(xì)胞檢查結(jié)果。所有研究對(duì)象均對(duì)相關(guān)檢查知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 孕婦病歷資料收集 包括孕婦年齡、血清學(xué)篩查結(jié)果、B超檢查結(jié)果、孕期不良因素接觸情況、異常妊娠史、夫妻雙方異常染色體攜帶情況等。

1.2.2 羊水細(xì)胞培養(yǎng)與核型分析 在超聲指導(dǎo)下行羊膜腔穿刺，抽取20 mL羊水，分離脫落細(xì)胞進(jìn)行雙瓶培養(yǎng)，1周后收取細(xì)胞，常規(guī)制片，上清作為第3瓶繼續(xù)培養(yǎng)。依據(jù)人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制(2016)進(jìn)行描述，做染色體核型分析，計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞，分析5個(gè)核型，若發(fā)現(xiàn)嵌合體則增加計(jì)數(shù)，必要時(shí)收獲第3瓶細(xì)胞補(bǔ)充。

1.2.3 羊水細(xì)胞嵌合體核型判定 兩個(gè)或兩個(gè)以上的不同核型分別來(lái)自兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶，且每個(gè)培養(yǎng)瓶的異常細(xì)胞都相同，則診斷為嵌合體核型，而以下3種情況均予以排除：① 兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)一個(gè)異常核型；② 有兩個(gè)或兩個(gè)以上相同的異常細(xì)胞，但都來(lái)自同一個(gè)培養(yǎng)瓶；③ 兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶都發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，但異常細(xì)胞核型不同。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

病例數(shù)據(jù)采用Excel整理錄入，對(duì)嵌合體核型的檢出情況進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)嵌合體核型和孕婦產(chǎn)前診斷指征的相關(guān)性采用非條件Logistic回歸分析，P<0.05時(shí)納入回歸模型，篩選出相關(guān)變量并計(jì)算其OR值。

2 結(jié)果

2.1 異常核型種類及檢出情況

26 477例羊水胎兒細(xì)胞中共發(fā)現(xiàn)異常核型844例，發(fā)生率為3.19%，其中嵌合體為141例，發(fā)生率為0.53%；844例異常核型中，常染色體異常為最多，占65.6%(554/844)，性染色體異常占16.4%(139/844)，嵌合體異常占16.7%(141/844)，其他異常占1.2%(10/844)；在產(chǎn)前診斷指征組中，以高齡組、血清篩查高危和超聲異常組的異常核型人數(shù)最多，夫妻一方染色體異常或孕婦低智組發(fā)生率最高、其次是超聲異常組和其他異常組，不良因素接觸史組沒(méi)有檢出，發(fā)生率最低，詳見(jiàn)表1。

表1 各因素組羊水胎兒細(xì)胞異常核型種類及發(fā)生率

2.2 嵌合體異常核型的構(gòu)成情況

羊水胎兒細(xì)胞嵌合體核型中以性染色體數(shù)目異常最常見(jiàn)，占全部嵌合體核型的49.65%，其次是常染色體異常，占41.13%。在性染色體異常嵌合中主要是數(shù)目異常，占82.86%，其中45,X占81.03%；在常染色體異常嵌合中，數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異?；鞠喈?dāng)，分別占48.28%和51.72%，其中數(shù)目異常以21-三體居多，占67.86%。與非嵌合體核型異常組比較，性染色體異常、45,X和常染色體數(shù)目異常的占比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均≤0.01)，詳見(jiàn)表2。

表2 羊水胎兒細(xì)胞嵌合體異常核型與非嵌合體異常核型的構(gòu)成及比較

2.3 相關(guān)性分析

對(duì)7類產(chǎn)前診斷指征進(jìn)行非條件Logistic回歸分析，采用逐步向前回歸方法，回歸變量P<0.05納入回歸模型，篩選出B超異常、孕婦低智或夫妻一方染色體異常攜帶、高齡+血清篩查高危與嵌合體核型有相關(guān)性，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)比(OR值)分別增加0.914、2.993和6.553倍，提示可能是嵌合體核型的危險(xiǎn)因素，而其他產(chǎn)前診斷指征與嵌合體發(fā)生不相關(guān)，詳見(jiàn)表3。

表3 嵌合核型的多元Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

本研究共檢出嵌合體核型141例，在羊穿人群中的發(fā)生率為0.532%，比Hsu等[2]報(bào)道的0.3% 略高，與張麗芳等[4]報(bào)道的相似。嵌合體核型就數(shù)量上主要分布在血清篩查高危組，其次是高齡因素組，總體上和張?jiān)缕嫉萚5]的報(bào)道相同；就發(fā)生率看，均是夫婦一方染色體異常組(本研究含孕婦低智)最高，提示其很可能是嵌合體核型的原因之一，推測(cè)可能和遺傳易感性有關(guān)；但在本研究中，超聲異常征象組發(fā)生率為0.878%，遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)的0.260%[5]，可能和早期頸項(xiàng)透明層未作為B超篩查指標(biāo)有關(guān)，也可能是指征分類的差異。不良因素接觸的164例中未發(fā)現(xiàn)嵌合體核型，與未接觸不良因素的總?cè)巳簩?duì)比，嵌合體發(fā)生率無(wú)顯著性差異(χ2=0.86,P=0.35)，尚不能排除與不良因素接觸的相關(guān)性。

嵌合體核型的發(fā)生率低，病例少，本研究中141例嵌合體來(lái)自近10年來(lái)的26 477例羊穿病例。結(jié)果顯示，嵌合體核型主要是以性染色體異常嵌合為主，占49.65%，而非嵌合核型異常中，性染色體異常占19.77%，性染色體異常的構(gòu)成比前者遠(yuǎn)高于后者，差異有顯著性，提示嵌合體更容易發(fā)生在性染色體上，以數(shù)目異常為主，尤其是45,X的嵌合；或者是不容易發(fā)生在常染色體異常上。

盡管高齡已是羊水穿刺診斷的指征，但仍有少數(shù)高齡孕婦會(huì)堅(jiān)持再做血清篩查，本研究中有64例孕婦為高齡+血清篩查高危，也將其作為一個(gè)觀察因素進(jìn)行分析。通過(guò)多元Logistic逐步回歸進(jìn)一步分析，高齡、血清篩查高危、異常生育史及其他異常均被排除(不良因素接觸未進(jìn)入分析)，余下高齡+血清篩查高危、B超、孕婦低智或夫妻一方染色體異常攜帶為嵌合體發(fā)生的相關(guān)因素，其風(fēng)險(xiǎn)比可作為臨床咨詢的參考；其中，高齡+血清篩查高危時(shí)，發(fā)生嵌合體異常的風(fēng)險(xiǎn)增加6.55倍，提示高齡孕婦加做血清篩查可能對(duì)嵌合體異常的發(fā)現(xiàn)有一定意義。

劉維強(qiáng)等[6]對(duì)嵌合體遺傳咨詢的述評(píng)中認(rèn)為，B超發(fā)現(xiàn)胎兒存在結(jié)構(gòu)或器官的異常，對(duì)胎兒的發(fā)育和預(yù)后判斷總體上歸于高危風(fēng)險(xiǎn)。本研究中B超異常與檢出嵌合體相關(guān)，與其觀點(diǎn)一致，但風(fēng)險(xiǎn)比增加僅0.914倍，對(duì)產(chǎn)前診斷有弱指導(dǎo)意義；由于因果關(guān)系上，嵌合體異常是原因，兩者相關(guān)也提示部分病例的B超結(jié)構(gòu)異?？赡苁怯捎谇逗象w核型異常引起，因此提示如果B超異常外加嵌合體核型時(shí)，可能胎兒的發(fā)育和預(yù)后會(huì)較差。

孕婦低智不排除與染色體異常有關(guān)，由于少部分孕婦未行染色體檢查，因此將其和夫妻一方染色體異常攜帶歸為一類，本研究結(jié)果顯示，其風(fēng)險(xiǎn)比增加了2.99倍，提示嵌合體核型可能是由于遺傳因素引起，提示羊水細(xì)胞嵌合體核型時(shí)，對(duì)親代染色體進(jìn)行補(bǔ)充檢查，有助于臨床咨詢中對(duì)胎兒風(fēng)險(xiǎn)情況的判定。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了3類產(chǎn)前診斷指征與羊水細(xì)胞嵌合體核型的檢出有相關(guān)性，對(duì)遺傳咨詢風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)有一定參考作用，但由于羊水細(xì)胞核型異常到胎兒細(xì)胞核型異常還存在諸多不確定性，染色體異常嵌合到胎兒異常表型更是缺少指導(dǎo)性研究結(jié)論，所以還有待新技術(shù)、多環(huán)節(jié)進(jìn)一步研究驗(yàn)證。