• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      三種海螵蛸的處理方法及抗菌活性研究?

      2021-11-11 11:39:00朱文靜陳四清謝國駟劉宇巖胡文革
      關(guān)鍵詞:海螵蛸烏賊弧菌

      朱文靜, 陳四清, 謝國駟, 李 杰, 田 蕊, 劉宇巖, 邊 力, 胡文革??

      (1. 石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 新疆 石河子 832000; 2. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所,青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國家實(shí)驗(yàn)室 海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266071)

      抗生素的濫用使得耐藥菌株越來越多,多種藥物對(duì)耐藥菌的療效減弱,甚至出現(xiàn)“超級(jí)細(xì)菌”[1],在耐藥菌株大量產(chǎn)生的背景下,中藥卻因靶點(diǎn)多、來源廣等特點(diǎn)未出現(xiàn)明顯耐藥性[2],所以近年來研究人員對(duì)大量中草藥進(jìn)行了篩選提取,以找出更多的抗菌物質(zhì)。陳勇川等[3]研究黃芩苷/黃芩素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌抗藥性時(shí),發(fā)現(xiàn)黃芩素可顯著逆轉(zhuǎn)耐藥菌對(duì)苯唑西林的高度耐藥;胡歡等[4]對(duì)卷柏、夏枯草等36種中藥材乙醇提取物體外抗菌活性發(fā)現(xiàn)有15種草藥有廣譜抗菌性;張永剛等[5]研究18種中草藥對(duì)哈維氏弧菌抑菌活性發(fā)現(xiàn)僅兩種中草藥無抑菌性;戴碧鑫等[6]對(duì)大黃原藥材和藥渣進(jìn)行抗菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其簡單水提液即有抗菌性。中草藥是中國傳統(tǒng)醫(yī)藥精華,對(duì)其進(jìn)行抗菌活性篩選有廣闊的開發(fā)前景。

      海螵蛸為傳統(tǒng)中藥,又名烏賊骨,《中醫(yī)藥典》[7]把烏賊科無針烏賊(Sepiellamaindroni)或金烏賊(Sepiaesculenta)的干燥內(nèi)殼收錄為海螵蛸。海螵蛸含碳酸鈣、微量元素、氨基酸、殼聚糖等多種成分,其性咸,溫,具有生肌止血,制酸止痛,解毒消炎等功效[8-11]。近年來,學(xué)者們運(yùn)用分離成分等現(xiàn)代方法對(duì)海螵蛸的藥理作用和臨床應(yīng)用進(jìn)行研究,證實(shí)其具有中和胃酸[12]、抗?jié)僛13]、成骨[14]、止血[15]等作用。雖然海螵蛸藥用范圍較廣,但在海產(chǎn)品加工中,常作為廢料處理,甚至在藥用過程中還要去掉硬殼層,造成了海螵蛸資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。

      目前,對(duì)海螵蛸的研究較少,且多集中在臨床治療潰瘍、止血、成骨及其各種成分應(yīng)用等,尚未有關(guān)于其抗菌活性的研究。本研究對(duì)金烏賊海螵蛸的簡單水溶物進(jìn)行抗菌試驗(yàn),待確定其具有抗菌活性后,研究幾種處理對(duì)抗菌活性的影響,最后探究金烏賊、曼氏無針烏賊和虎斑烏賊(Sepiapharaonis)三種烏賊海螵蛸對(duì)幾種人體和海洋常見致病菌的抗菌性及差異。本研究旨在豐富抗菌中藥材,為海螵蛸抗菌性的開發(fā)利用提供依據(jù),避免海螵蛸資源浪費(fèi)。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

      1.1.1 供試藥材 金烏賊、曼氏無針烏賊、虎斑烏賊分別采自于山東、福建、廣東沿海,解剖出內(nèi)骨后,用軟毛刷輕刷表面臟污墨跡等,用蒸餾水沖干后自然晾干。

      1.1.2 供試菌株 試驗(yàn)用菌包括:金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)、哈氏弧菌(Vibrioharveyi)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、白色念珠菌(Candidaalbicans),其中前五株由中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所病研室提供,后三株為標(biāo)準(zhǔn)菌株。

      1.1.3 試劑 2216E瓊脂、2216E液體培養(yǎng)基、Mueller-Hinton瓊脂、沙氏葡萄糖肉湯均購自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司,牛肉膏蛋白胨肉湯購自索萊寶科技有限公司。

      1.2 實(shí)驗(yàn)方法

      1.2.1 原材料處理 三種海螵蛸經(jīng)粉碎過50目篩,在烘箱低溫(60 ℃)烘干至恒重,裝于50 mL離心管放干燥器中保存?zhèn)溆谩?/p>

      1.2.2 藥液原液制備 預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)金烏賊海螵蛸對(duì)金黃色葡萄球菌抑制效果明顯,因此通過選用金烏賊海螵蛸不同處理方法藥液對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌性的比較,研究確定三種海螵蛸的藥液原液制備方法,具體方法如下(每種方法重復(fù)3個(gè)平板):

      步驟A:海螵蛸粉末的初步處理(見表1)。

      表1 金烏賊海螵蛸處理方法Table 1 Treatment of cuttlebone

      步驟B:海螵蛸的溶劑選擇:稱取海螵蛸2 g,分別加滅菌蒸餾水、滅菌0.9% NaCl 溶液、60%乙醇、80%乙醇、無水乙醇至10 mL,用A確定的最佳方法處理后檢測抗菌效果,選擇抗菌效果最好的溶劑作為最佳溶劑。

      步驟C:海螵蛸固液比的確定:分別稱取5.00、3.35、2.50、2.00、1.65 g海螵蛸粉末于離心管,補(bǔ)足B確定的最佳溶劑至10 mL,用A確定的最佳方法處理后檢測抗菌效果,得到最佳固液比。

      步驟D:海螵蛸粉末的浸泡時(shí)間:用A確定的最佳方法處理、B確定的最佳溶劑、C確定的最適固液比分別在實(shí)驗(yàn)4、6、8、12、24、36 h檢測抗菌效果。

      確定好最佳處理方法后,分別稱取三種海螵蛸粉末20 g,按上述篩選的最佳方法處理后,用旋蒸儀在60 ℃以下減壓濃縮成1 g/mL的浸液,經(jīng)過0.22 μm濾膜濾過后放在抗生素藥敏瓶中備用。

      1.2.3 藥敏紙片制備 用打孔器對(duì)干凈且吸水性較強(qiáng)的優(yōu)質(zhì)定性濾紙打孔成6 mm 的圓形的濾紙片,并置于潔凈干燥的玻璃培養(yǎng)皿中,在 121 ℃的條件下高壓蒸汽滅菌30 min,滅菌后置于生物安全柜內(nèi)備用。實(shí)驗(yàn)開始時(shí),每個(gè)濾紙片加10 μL 1 g/mL的浸液。

      1.2.4 微生物培養(yǎng)活化及菌懸液制備 制備牛肉膏蛋白質(zhì)肉湯、沙氏肉湯、2216E液體培養(yǎng)基、2216E瓊脂和Mueller-Hinton瓊脂,121 ℃滅菌15 min,瓊脂冷卻后在無菌環(huán)境倒入培養(yǎng)皿。在生物安全柜內(nèi),將供試菌株用接種環(huán)接種在其對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基內(nèi),28℃搖床恒溫培養(yǎng)18 h,用0.5號(hào)麥?zhǔn)媳葷峁艽_定菌液濃度后稀釋至107~108CFU/mL 備后續(xù)的藥敏紙片抑菌實(shí)驗(yàn)用,105~106CFU/mL備后續(xù)的最小抑菌濃度使用。

      1.2.5 海螵蛸對(duì)受試菌株的抑菌作用 在生物安全柜中,每個(gè)平板加100 μL 細(xì)菌肉湯(每個(gè)菌種都接種于Mueller-Hinton平板,溶藻弧菌和哈氏弧菌另接入2216E固體平板),用涂布棒涂板后放上加藥液的濾紙片,設(shè)置四環(huán)素藥敏片作陽性對(duì)照組,陽性對(duì)照試驗(yàn)一次,三種海螵蛸藥液在每種平板上均重復(fù)3次測定。

      將處理好的細(xì)菌平板于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24 h,到培養(yǎng)時(shí)間結(jié)束后取出,觀察菌落的生長情況,采用十字交叉方法測量抑菌圈的直徑,記錄數(shù)據(jù),每組重復(fù)3次,取平均值,抑菌圈直徑>20 mm為極敏,直徑在15~20 mm之間為高敏;直徑在10~14 mm之間為中敏;直徑<10 mm為低敏;直徑<8 mm為無抗菌性[16-18]。最后計(jì)算的平均值轉(zhuǎn)換為抑菌率評(píng)價(jià)抑菌效果。實(shí)驗(yàn)中將抑菌率作為評(píng)價(jià)抗菌效果的指標(biāo),抑菌率的計(jì)算公式如下:

      1.2.6 最小抑菌濃度測定 采用二倍稀釋法測定MIC(Minimum inhibitory concentration),均按照CLSI 2012版指南進(jìn)行[19](細(xì)菌用MH肉湯培養(yǎng)液,真菌用液體沙氏培養(yǎng)基)。按無菌操作吸取藥液和菌懸液各100 μL于96孔板第1孔至第11孔中,第12孔加入配制溶劑和菌懸液各100 μL作為陰性對(duì)照。96孔板置于恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)24 h,吸取每個(gè)不同濃度梯度的藥液接種于普通培養(yǎng)基上,每種藥物3個(gè)重復(fù),置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。肉眼觀察藥物最低濃度無細(xì)菌生長,即為該藥的MIC。

      1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

      處理方法所得結(jié)果用Excel進(jìn)行平均值計(jì)算并作圖;藥敏結(jié)果采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA),用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s) 表示。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 海螵蛸的處理方法

      2.1.1 滅菌方法 據(jù)表1不同方法滅菌處理的金烏賊海螵蛸粉末藥液抑菌效果見表2。

      表2 海螵蛸滅菌方法對(duì)抑菌活性的影響Table 2 Effect of cuttlebone sterilization on antibacterial activity

      從表2可知,A0雖有抑菌效果,但藥敏紙片周圍有一圈紅色菌落,A1、A2、A3無抑菌效果,A4、A5有效果,A5效果最好。A0粉末未滅菌,自身可能帶有未知菌,因此藥敏紙片周圍會(huì)有一圈菌。

      2.1.2 溶劑種類 據(jù)1.2.2步驟B不同溶劑處理的金烏賊海螵蛸粉末藥液抑菌效果見表3。

      表3 溶劑對(duì)抑菌效果的影響Table 3 Effect of solvent on antibacterial activity

      表3抗菌圈大小結(jié)果顯示,五種溶劑對(duì)海螵蛸藥液抗菌效果的影響是80%乙醇>60%乙醇>無水乙醇>蒸餾水=0.9% NaCl 溶液,80%乙醇處理效果最好。

      2.1.3 固液比 據(jù)1.2.2步驟C不同固液比處理的金烏賊海螵蛸粉末藥液抑菌效果見圖1。

      圖1 固液比對(duì)抑菌活性的影響Fig.1 Effect of solid-liquid ratio on antibacterial activity

      從圖1可以看出,隨海螵蛸粉末比例的降低,藥液抗菌效果先上升后下降,固液比1∶4時(shí)抗菌效果最好。

      2.1.4 浸泡時(shí)間 據(jù)1.2.2步驟D不同時(shí)間處理的金烏賊海螵蛸粉末藥液抑菌效果見圖2。

      圖2 時(shí)間對(duì)抑菌活性的影響Fig.2 Effect of time on bacteriostatic activity

      從圖2可知,隨浸泡時(shí)間的延長,海螵蛸藥液抗菌效果先快速增強(qiáng),在6 h時(shí)達(dá)到最大,隨著浸泡時(shí)間的增長,藥液抗菌效果逐漸下降。

      2.2 海螵蛸對(duì)受試菌株的抑菌作用

      稱三種海螵蛸粉末各20 g,依據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,按固液比1∶4加入80%酒精于錐形瓶中, 80 W超聲波3次,60 ℃,每次20 min,震蕩混合6 h,用旋蒸儀在60 ℃以下減壓濃縮去酒精成1 g/mL的浸液,0.22 μm濾膜過濾。為防止酒精殘留的影響,增加一個(gè)80%酒精對(duì)照組,100 mL 80%酒精同樣在旋蒸儀旋蒸。在涂布過菌的平板上加上濾紙片,每個(gè)濾紙片加10 μL藥液,每種菌重復(fù)3個(gè)板,結(jié)果見表4。

      表4 三種海螵蛸對(duì)8株受試菌的抑菌效果Table 4 Inhibition zones of three cuttlebone against 8 tested strains

      由表4可知,三種海螵蛸對(duì)銅綠假單胞菌、副溶血弧菌和白色念珠菌均無抑制作用;對(duì)金黃色葡萄球菌、溶藻弧菌和哈氏弧菌均有抑制作用,以金烏賊海螵蛸抑制哈氏弧菌效果最好,抑菌圈、抑菌率最大(12.23 mm、103%);金烏賊和曼氏無針烏賊對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸桿菌有抑制作用,虎斑烏賊無抑制作用。

      2.3 最小抑菌濃度

      測定最小抑菌濃度時(shí),為了防止酒精殘留對(duì)菌的影響,同時(shí)設(shè)置同條件處理的80%酒精對(duì)照管。根據(jù)表4結(jié)果,選取抑菌率>50%的菌種進(jìn)行最小抑菌濃度的測定,測定結(jié)果如表5所示。

      表5結(jié)果顯示,金烏賊海螵蛸和曼氏無針烏賊對(duì)枯草芽孢桿菌MIC>125 mg/mL,抑制效果較弱,虎斑烏賊無抑制效果;對(duì)金黃色葡萄球菌金烏賊海螵蛸和曼氏無針烏賊MIC為31.25 mg/mL,有一定抑制效果,虎斑烏賊MIC>125 mg/mL,抑制較弱;對(duì)海洋常見的菌哈氏弧菌和溶藻弧菌金烏賊、曼氏無針烏賊MIC分別為3.9、15.6 mg/mL,虎斑烏賊分別為15.6、31.25 mg/mL,說明金烏賊、曼氏無針烏賊抑制效果好,虎斑烏賊有一定抑制效果。

      表5 三種海螵蛸對(duì)受試菌的MIC測定Table 5 MIC determination of three cuttlebone against tested strains /(mg·mL-1)

      3 討論

      3.1 海螵蛸處理方法的比較

      海螵蛸是傳統(tǒng)的中藥,具有消炎、制酸止痛作用。不同的處理方法會(huì)使海螵蛸抗菌活性發(fā)生變化,本研究結(jié)果表明,中藥常用的水煮法獲得的海螵蛸粉末水煮液對(duì)細(xì)菌無效,粉末紫外、高壓處理的也無效,可能是因?yàn)楦邷?、紫外破壞海螵蛸?nèi)對(duì)抗菌有效的分子結(jié)構(gòu)。結(jié)合范薏淇等[11]綜述海螵蛸成分含有殼聚糖,殼聚糖多由天然甲殼類動(dòng)物外骨骼和藻類中提取,具有廣譜抗菌活性[20-22],超聲波處理組藥液效果最好,可能原因是殼聚糖不易溶于水,超聲波具有滅菌作用,可以幫助部分殼聚糖溶解而不破壞分子結(jié)構(gòu),因此,用超聲波處理加滅菌蒸餾水的海螵蛸粉末獲得藥液為最佳滅菌方法。

      (①金烏賊Sepia esculenta;②曼氏無針烏賊Sepiella maindroni;③虎斑烏賊Sepia pharaonis.)圖3 海螵蛸對(duì)各種細(xì)菌的抑菌圈Fig.3 Inhibition zone of cuttlebone against various bacteria

      海螵蛸在治療潰瘍創(chuàng)傷時(shí),民間使用方法多是直接撒于創(chuàng)傷處,但直接用海螵蛸粉末測定抗菌活性不便操作,因此試驗(yàn)采用浸泡提取藥液進(jìn)行。根據(jù)湯嘉文[23]論述的中藥抗菌機(jī)制,并結(jié)合李蘭等[24]發(fā)現(xiàn)的海螵蛸主要成分為碳酸鈣,還含有一些其它金屬離子,推測海螵蛸的抗菌作用機(jī)制可能是破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。因海螵蛸碳酸鈣含量高,在80%乙醇溶液中會(huì)有部分Ca2+水解出,帶正電荷的Ca2+會(huì)和帶負(fù)電的細(xì)菌細(xì)胞膜產(chǎn)生靜電作用,改變和破壞細(xì)菌表面膜結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)菌死亡[25],而有些成分,如氨基酸、多糖脂溶性較好,因此純水、純乙醇均沒有80%酒精抑菌效果好。付若秋等[26]研究牡丹皮體外抗菌效果發(fā)現(xiàn)的水提取物強(qiáng)于乙醇提取物,可能與牡丹皮水溶性的抗菌物質(zhì)為主有關(guān),胡歡[4]對(duì)36種中藥抗菌活性研究時(shí)所用溶劑與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同,說明80%乙醇是海螵蛸的理想提取劑。

      唐麗娟等[27]研究海螵蛸多糖的最佳提取條件時(shí),發(fā)現(xiàn)固液比對(duì)多糖的提取有影響,推測海螵蛸提取液藥效也會(huì)受到固液比影響,本實(shí)驗(yàn)海螵蛸與80%乙醇不同固液比的抗菌效果表明固液比1∶4時(shí)抗菌圈直徑最大,效果最好,這一結(jié)果與唐麗娟的研究結(jié)果一致,即固液比影響海螵蛸提取液的藥效,固液比1∶4效果最好。

      每種中藥的浸泡提取時(shí)間都有一定要求,依據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果,金烏賊海螵蛸粉末在不同浸泡時(shí)間處理下,4~6 h 藥液抗菌圈增大,6 h后藥液抗菌圈逐漸減小,浸泡6 h的藥液抗菌圈最大。分析原因可能是在6 h前,海螵蛸有效成分未能充分浸泡溶解,6 h左右溶解最好,隨著時(shí)間延長,溶解的有效成分在溶液中可能發(fā)生反應(yīng)或變化,從而使藥效減弱。

      3.2 海螵蛸抗菌活性的比較

      海螵蛸具有治療沙眼[28]、潰爛期褥瘡[29]的功效,沙眼和潰爛期褥瘡會(huì)面臨感染細(xì)菌的危險(xiǎn),而用海螵蛸則可治療,說明海螵蛸具有抗菌作用,表4中對(duì)8株受試菌的抑菌實(shí)驗(yàn)藥敏性分析顯示,對(duì)金烏賊和曼氏無針烏賊海螵蛸金黃色葡萄球菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌表現(xiàn)為中敏,枯草芽孢桿菌表現(xiàn)為低敏,大腸桿菌雖然有抑菌圈,但直徑較小,表現(xiàn)為不敏感;對(duì)虎斑烏賊海螵蛸金黃色葡萄球菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌表現(xiàn)為低敏。

      實(shí)驗(yàn)中,80%酒精對(duì)照組菌落生長均不受影響,而加藥組菌株生長受到明顯抑制,可以排除80%酒精殘留的影響,說明利用80%酒精幫助提取海螵蛸藥液是可行。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),海螵蛸在2216E培養(yǎng)基上,對(duì)哈氏弧菌和溶藻弧菌有抑菌效果,在MH培養(yǎng)基上,幾乎無抑菌效果現(xiàn)象,這說明海螵蛸的藥效會(huì)受到環(huán)境因子的影響,具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

      顧青青等[30]對(duì)不同產(chǎn)地的海螵蛸核苷類成分測定中發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)核苷類成分差異較大,這一結(jié)果與本研究的三種海螵蛸效果不同有相似之處。顧青青采集的不同產(chǎn)地海螵蛸,來自福建、山東、海南等地,由于沒有進(jìn)行種類鑒定,有可能是不同品種烏賊的海螵蛸,造成成分差異,這也是造成藥效差異的一個(gè)重要因素。為此推測海螵蛸的藥效與種類、產(chǎn)地密切相關(guān)。

      另外綜合比較抑菌圈與MIC發(fā)現(xiàn),金烏賊和曼氏無針烏賊的海螵蛸藥液抑菌效果明顯強(qiáng)于虎斑烏賊,與《中國藥典》中僅把前兩種認(rèn)定為海螵蛸一致。而不把虎斑烏賊列為海螵蛸,除了抗菌效果沒有金烏賊和曼氏無針烏賊明顯外,其資源不足也是一大原因。董正之[31]曾對(duì)中國近海頭足類分布狀況進(jìn)行統(tǒng)計(jì),黃海區(qū)域占優(yōu)勢的物種是金烏賊、東海區(qū)域占優(yōu)勢的物種是曼氏無針烏賊,而虎斑烏賊則主要分布在西北太平洋和北印度洋等熱帶海域沿海[32-34]。同時(shí),金烏賊作為世界烏賊科中重要的經(jīng)濟(jì)種類之一,年產(chǎn)量在世界烏賊科種類中居第二位[35],其捕撈量遠(yuǎn)超虎斑烏賊,因而得到的內(nèi)殼量也多。

      綜上所述,影響海螵蛸抗菌活性的因素較多,產(chǎn)地、提取方法等都會(huì)有影響,而部分中藥常有“體外無效,經(jīng)體內(nèi)代謝后起效”的現(xiàn)象,體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)也可能會(huì)有很大差距,因此后續(xù)試驗(yàn)可以嘗試進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。目前對(duì)中藥抗菌性的應(yīng)用多聯(lián)合西藥[3,36],實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)海螵蛸抗菌效果較抗生素差,正式應(yīng)用時(shí)可與其它藥物聯(lián)合。另外,雖然虎斑烏賊海螵蛸抑菌活性差,但其規(guī)格比金烏賊和曼氏無針烏賊大,在南海有較大的產(chǎn)量,因此作為海產(chǎn)品加工中的副產(chǎn)品,也應(yīng)該進(jìn)一步研究其藥理功能,充分發(fā)揮海洋資源作用。

      猜你喜歡
      海螵蛸烏賊弧菌
      海螵蛸的配伍規(guī)律及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展▲
      銷量增長200倍!“弧菌克星”風(fēng)靡行業(yè),3天殺滅98%弧菌
      趣說烏賊
      副溶血弧菌檢測方法的研究進(jìn)展
      如何有效防控對(duì)蝦養(yǎng)殖中的弧菌病
      海螵蛸在制酸止痛應(yīng)用中不同服藥方式驗(yàn)案舉隅
      海螵蛸止血作用的現(xiàn)代研究進(jìn)展
      被誤解的烏賊
      烏賊
      副溶血弧菌噬菌體微膠囊的制備及在餌料中的應(yīng)用
      佛坪县| 吉首市| 溧阳市| 景宁| 得荣县| 惠来县| 缙云县| 淮滨县| 康保县| 洪江市| 麦盖提县| 务川| 保亭| 淮北市| 乳源| 和平区| 兴化市| 卢湾区| 郯城县| 西城区| 得荣县| 内乡县| 调兵山市| 景德镇市| 南木林县| 江陵县| 巧家县| 阿坝县| 温州市| 伊宁市| 古蔺县| 昌平区| 佳木斯市| 通山县| 上犹县| 罗城| 台北市| 泰来县| 清丰县| 喀什市| 临西县|