米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合片劑對貓自然感染胃腸道蠕蟲的療效觀察

季正劍，張佶，李建梅，候照峰，葉狀，彭月梅，劉丹丹，許金俊，陶建平*

(1. 揚州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院/江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚州 225009；2. 高郵市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，江蘇 高郵 225600；3. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽科學(xué)研究所，江蘇 揚州 225125 )

貓因食性復(fù)雜和活動范圍廣泛而易感各種寄生蟲，其中胃腸道蠕蟲感染較為廣泛，據(jù)報道貓常見感染蠕蟲的種類包括吸蟲(華枝睪吸蟲、棘口吸蟲、橫川氏后殖吸蟲)、絳蟲(泡狀帶絳蟲、犬復(fù)孔絳蟲、曼氏迭宮絳蟲)、線蟲(心絲蟲、鉤蟲、弓首蛔蟲)等[1-2]，這些寄生蟲感染會引起程度不一的臨床癥狀，從亞臨床感染或輕度胃腸道疾病到嚴(yán)重腹瀉、厭食、貧血、發(fā)育障礙甚至死亡，特別是在高強(qiáng)度感染的幼齡動物身上[3]。此外，一些貓科胃腸道寄生蟲具有人畜共患的潛在危險，可能引起公眾健康問題，如貓弓蛔蟲、華支睪吸蟲、賈第鞭毛蟲、隱孢子蟲等[4]。因此，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)拇胧﹣矸乐呜埣纳x病， 包括使用安全有效的抗寄生蟲藥物，如近年來備受關(guān)注的具有廣譜抗線蟲、絳蟲、吸蟲等特性的藥物米爾貝肟(milbemycin oxime)與吡喹酮(praziquantel)復(fù)合制劑[5]。

米爾貝肟屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗體內(nèi)外寄生蟲藥物，是米爾貝霉素A3與A4的肟化衍生物，其作用機(jī)制是強(qiáng)化體內(nèi)外寄生蟲的主要神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)γ-氨基丁酸的結(jié)合力，使氯離子持續(xù)進(jìn)入細(xì)胞膜內(nèi)，使膜電位處于持續(xù)超極化狀態(tài)而使蟲體神經(jīng)傳導(dǎo)中斷進(jìn)而麻痹、死亡。據(jù)報道米爾貝肟能防治犬貓體內(nèi)外寄生蟲，如心絲蟲、鉤蟲、鞭蟲、蛔蟲以及毛囊蟲、疥癬、虱、跳蚤等，但對吸蟲與絳蟲無效[6]。吡喹酮是一種?；愢拎侯惢衔铮彩且环N廣譜抗絳蟲和吸蟲藥物，其作用機(jī)制是直接作用于寄生蟲被膜，并破壞寄生蟲結(jié)構(gòu)，同時影響寄生蟲碳水化合物代謝，破壞寄生蟲體內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)和膜對鈣離子的通透性，從而導(dǎo)致寄生蟲肌肉組織的強(qiáng)直收縮和隨后的表皮解體[7]。米爾貝肟與吡喹酮聯(lián)合應(yīng)用不僅擴(kuò)大了驅(qū)蟲譜，而且提高了驅(qū)蟲效率，安全可靠，其口服咀嚼片配方已商業(yè)化。本研究旨在評估含有米爾貝肟(2 mg/kg)和吡喹酮(5 mg/kg)的商業(yè)口服制劑(Milbermax?)對自然感染胃腸道蠕蟲的貓的治療效果，為貓寄生蟲病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物

家貓150只，分別購自揚州市、泰州市、鎮(zhèn)江市和無錫市的城郊或農(nóng)村，年齡為1.5月齡至成年。貓運至實驗室后分籠飼養(yǎng)7～10 d，使其適應(yīng)環(huán)境和馴服，并觀察貓的精神狀態(tài)與飲欲食欲等。同時逐一采集貓剛排出的新鮮糞便，分別用飽和鹽水漂浮法與水洗沉淀法檢查蠕蟲蟲卵。挑選貓弓首蛔蟲(Toxocaracati)、毛細(xì)線蟲(Capillariaspp.)、鉤蟲(Hookworm)、華支睪吸蟲(Clonorchissinensis)、棘口吸蟲(Echinostomatidae)、心形咽口吸蟲(Haryngostomumcordatum)、曼氏迭宮絳蟲(Spirometramansoni)、犬復(fù)孔絳蟲(Dipylidiumcaninum)等蟲卵中之一呈陽性，且精神狀態(tài)與食欲良好的貓用于試驗。共105只貓。

1.1.2 試驗藥物

Milbermax?(Novartis Sante Animale)。規(guī)格：① 每片含米爾貝肟16 mg和吡喹酮40 mg；② 每片含米爾貝肟4 mg和吡喹酮10 mg。

吡喹酮片劑，由哈爾濱宏達(dá)動物藥品廠生產(chǎn)。規(guī)格0.2 g/片。

1.2 方法

1.2.1 試驗設(shè)計

給藥前1 d 將糞便蟲卵檢查呈陽性的貓逐只稱重、編號，挑選體況相近的貓隨機(jī)分組如下。Ⅰ組：Milbermax?組(米爾貝肟2 mg/kg+吡喹酮5 mg/kg)，Ⅱ組：吡喹酮單方組(吡喹酮5 mg/kg)，Ⅲ組：陽性對照組，每組35只貓(表1)。Milbermax?組參照說明書中的給藥方案與給藥途徑給藥。吡喹酮單方組按貓體重計算用藥量，一次口服。陽性對照組一次口服無活性成分的片劑(外觀與復(fù)方米爾貝肟相近)。給藥后每天觀察試驗組貓的精神狀態(tài)、飲欲食欲及排蟲情況，收集排出的蟲體或節(jié)片進(jìn)行蟲種鑒定，以了解排蟲種類和排蟲高峰。同時在給藥前1 d和給藥后第7天與第14天，收集感染毛細(xì)線蟲的貓新鮮糞便，用麥克馬斯特氏法(McMaster method)計算每克糞蟲卵數(shù)(eggs per gram，EPG)[8]。給藥后第15天結(jié)束試驗，對所有試驗貓進(jìn)行安樂死，隨后按寄生蟲學(xué)完全剖檢法，收集各只貓消化道、肝臟、氣管與肺臟、膀胱內(nèi)的蟲體，進(jìn)行蟲體種類鑒定[8-11]，并以蟲種類別分別計數(shù)。

表1 感染不同種類蠕蟲的貓數(shù)量 只

1.2.2 檢測項目

驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率：根據(jù)在貓體內(nèi)檢獲的各種蠕蟲的蟲體數(shù)，按下列公式計算各試驗組各種蠕蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率[12]。

驅(qū)蟲率=[(對照組平均殘留蟲體數(shù)-試驗組平均殘留蟲體數(shù))/對照組平均殘留蟲體數(shù)]×100%。

驅(qū)凈率=(驅(qū)凈蟲體的動物數(shù)/全部試驗動物數(shù))×100%。

蟲卵減少率與蟲卵轉(zhuǎn)陰率：根據(jù)給藥前及給藥后不同時間點貓糞便中的毛細(xì)線蟲卵的變化情況，按下列公式計算各試驗組毛細(xì)線蟲卵的減少率與蟲卵轉(zhuǎn)陰率[12]。

蟲卵減少率=[(驅(qū)蟲前EPG-驅(qū)蟲后EPG)/驅(qū)蟲前EPG]×100%。

蟲卵轉(zhuǎn)陰率=(蟲卵轉(zhuǎn)陰貓數(shù)/驅(qū)蟲貓數(shù))×100%。

應(yīng)用SPSS軟件對各試驗組給藥前后EPG平均數(shù)及組間不同時期蟲卵減少率進(jìn)行描述性統(tǒng)計，并用Duncan氏新復(fù)極差法對組間平均值進(jìn)行多重比較(P<0.05)。

1.2.3 效果評價

按糞便蟲卵數(shù)變化，每只試驗動物的臨床藥效試驗結(jié)果按以下標(biāo)準(zhǔn)評價[12]：

治愈：糞便中蠕蟲蟲卵減少率≥90%，試驗動物的體征恢復(fù)正常。

有效：糞便中蠕蟲蟲卵減少率≥60%，試驗動物的體征好轉(zhuǎn)但未完全恢復(fù)正常。

無效：糞便中蠕蟲蟲卵減少率<60%，試驗動物病情無明顯緩解，仍有腹瀉、嘔吐等臨床表現(xiàn)。

按驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率評價：高效驅(qū)蟲藥，其一次給藥后的驅(qū)凈率在60%以上[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床觀察

在整個試驗期間，所有試驗貓的精神狀態(tài)、飲欲食欲、排便情況均正常。貓給藥后最早在給藥后1 h有蟲體排出，最遲在給藥后第6天排出蟲體，排出蟲體的高峰期在給藥后48～72 h。用肉眼在糞便中能檢視到的蟲體主要是貓弓首蛔蟲和絳蟲。

2.2 驅(qū)蟲效率

2.2.1 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對華支睪吸蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢華支睪吸蟲卵呈陽性的47只貓，給藥15 d后對華支睪吸蟲的剖檢結(jié)果見表2。陽性對照組貓感染華支睪吸蟲最多的達(dá)1 212條，最少為13條，每只貓平均282.3條。Milbermax?組體內(nèi)殘留活蟲數(shù)每只貓平均7.6條，吡喹酮單方組為19.3條。Milbermax?組驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均高于吡喹酮單方組，分別為97.3%和53.3%，而吡喹酮單方組為93.2%和31.3%。

表2 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對華支睪吸蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.2 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對棘口吸蟲與心形咽口吸蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢棘口吸蟲或心形咽口吸蟲卵呈陽性的54只貓，給藥15 d后對棘口吸蟲或心形咽口吸蟲的剖檢結(jié)果見表3。陽性對照組中感染棘口吸蟲的貓有8只，平均每只貓感染13條，其中最少為1條，最多達(dá)76條；感染心形咽口吸蟲的貓有13只，平均每只貓感染98.9條，其中最少為4條，最多達(dá)536條；其中3只貓同時感染兩種吸蟲。在Milbermax?組的1只貓腸道內(nèi)檢獲4條心形咽口吸蟲，其對棘口吸蟲的驅(qū)蟲率和驅(qū)凈率均達(dá)100%，對心形咽口吸蟲的驅(qū)蟲率達(dá)99.7%，驅(qū)凈率為92.3%，而吡喹酮單方組對棘口吸蟲與心形咽口吸蟲的驅(qū)蟲率和驅(qū)凈率均達(dá)100%。

表3 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對棘口與心形咽口吸蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.3 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對曼氏迭宮絳蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢曼氏迭宮絳蟲卵呈陽性的36只貓，給藥15 d后對曼氏迭宮絳蟲的剖檢結(jié)果見表4。陽性對照組貓感染曼氏迭宮絳蟲最多的為13條，最少1條，平均5.3條。Milbermax?組剖檢時體內(nèi)殘留活蟲平均數(shù)為0.8條，吡喹酮單方組0.9條，二者驅(qū)蟲率相近，但就驅(qū)凈率而言Milbermax?組(75.0%)高于吡喹酮單方組(50.0%)。

表4 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對曼氏迭宮絳蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.4 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對犬復(fù)孔絳蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢犬復(fù)孔絳蟲卵呈陽性的9只貓，給藥15 d后對犬復(fù)孔絳蟲的剖檢結(jié)果見表5。陽性對照組貓感染犬復(fù)孔絳蟲最多的25條(均未發(fā)育至有成熟節(jié)片)，最少2條，平均10.7條。Milbermax?組和吡喹酮單方組對犬復(fù)孔絳蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均達(dá)100.0%。

表5 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對犬復(fù)孔絳蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.5 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對貓弓首蛔蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢貓弓首蛔蟲卵呈陽性的20只貓，給藥15 d后對貓弓首蛔蟲的剖檢結(jié)果見表6。陽性對照組貓感染貓弓首蛔蟲最多的20條，最少2條，平均8.2條。Milbermax?組對貓弓首蛔蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均達(dá)100.0%。

表6 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對貓弓首蛔蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.6 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對鉤蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢鉤蟲卵呈陽性的6只貓，給藥15 d后對鉤蟲的剖檢結(jié)果見表7。陽性對照組貓感染鉤蟲最多的19條，最少5條，平均11.7條。Milbermax?組對鉤蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均為100.0%。

表7 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對鉤蟲的驅(qū)蟲效率

2.2.7 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對毛細(xì)線蟲的驅(qū)蟲效果

糞檢毛細(xì)線蟲卵呈陽性的18只貓，給藥前和給藥后第7天與第15天分別采集新鮮糞便，以麥克馬斯特氏法計數(shù)蟲卵，計算各貓給藥后不同時間的毛細(xì)線蟲EPG和蟲卵減少率，統(tǒng)計平均值，結(jié)果見表8。在給藥后第7天，Milbermax?組蟲卵減少率為90.9%，蟲卵轉(zhuǎn)陰為率80.0%。在給藥后第14天，Milbermax?組的蟲卵減少率為100.0%，蟲卵轉(zhuǎn)陰率為90.0%。吡喹酮單方組對毛細(xì)線蟲無效。

用Duncan氏新復(fù)極差法，對Milbermax?組、吡喹酮單方組以及陽性對照組給藥前及給藥后不同時期EPG平均值間進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示Milbermax?組在給藥后第7天、第14天的蟲卵數(shù)顯著低于吡喹酮單方組和陽性對照組(P<0.05)，但給藥后第7天與第14天Milbermax?組的蟲卵平均數(shù)間無顯著差異(P>0.05)(表8)。

表8 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對毛細(xì)線蟲的驅(qū)蟲效率

3 討論

3.1 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對華支睪吸蟲的驅(qū)蟲效果

家貓是食肉動物，喜食淡水魚、蝦。而魚、蝦是華支睪吸蟲、貓后睪吸蟲、棘口吸蟲等的中間宿主[13]。在揚州、泰州、鎮(zhèn)江和無錫的城郊和農(nóng)村地區(qū)，湖河渠溝密布，水域面積大，水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)達(dá)，魚、蝦十分常見，貓生吃到魚、蝦的頻率極高。此外，用于本試驗研究的貓均非城市寵物貓，一般不用任何藥物進(jìn)行驅(qū)蟲。因此，在用糞檢法篩選陽性感染貓時吸蟲的感染率較高，尤其是后睪科吸蟲。在對陽性對照組的貓剖檢時也發(fā)現(xiàn)華支睪吸蟲的感染強(qiáng)度最高，其中有兩只貓分別感染華支睪吸蟲1 131條和1 212條，感染心形咽口吸蟲也達(dá)536條。華支睪吸蟲和貓后睪吸蟲在分類上屬后睪科，均寄生于貓的肝膽管內(nèi)，兩者的蟲卵在形態(tài)與結(jié)構(gòu)上很相似，不易區(qū)分。但華支睪吸蟲的睪丸呈分枝狀，貓后睪吸蟲的睪丸呈裂狀分葉，兩者很容易鑒別[14]。在本研究中，剖檢時從貓肝臟內(nèi)獲得的蟲體經(jīng)種類鑒別發(fā)現(xiàn)均為華支睪吸蟲，故所有試驗組均按華支睪吸蟲計算驅(qū)蟲效果。本研究中米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對華支睪吸蟲的驅(qū)蟲率達(dá)97.3%，但驅(qū)凈率為53.3%，驅(qū)凈率低的原因可能：一是貓感染華支睪吸蟲的強(qiáng)度較大，因為給藥后15 d剖檢時殘留于貓膽管內(nèi)的蟲體中有部分蟲體雖然外觀完整，但蟲體顏色已發(fā)黃，表明已發(fā)生死亡；二是劑量不夠或需重復(fù)用藥。

3.2 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對棘口吸蟲和咽口吸蟲的驅(qū)蟲效果

在我國報道寄生于貓的棘口科吸蟲有：槍頭棘隙吸蟲(Echinochasmusbeleocephalus)、日本棘隙吸蟲(E.japonicus)、藐小棘隙吸蟲(E.liliputanus)和葉形棘隙吸蟲(E.perfoliatus)等，該科蟲體的鑒別要點是蟲體前端口吸盤周圍有頭冠(或頭領(lǐng))，其上有1～2行頭棘。蟲卵呈卵圓形，淡黃色或金黃色，有卵蓋，內(nèi)含一個卵細(xì)胞和多個卵黃顆粒，但在棘口科的各種類間難以鑒別[15]。因此，在本試驗中按棘口吸蟲計算驅(qū)蟲效果。心形咽口吸蟲分類上隸屬雙穴科(Diplostomatidae)、咽口屬(Pharyngostomum)，是一種體長僅有1.4～2.1 mm的小型吸蟲，其蟲卵與棘口吸蟲卵相比卵黃顆粒少而間隙大，但兩者的大小和形態(tài)相近，且在貓體內(nèi)可發(fā)生混合感染。因此，在本研究中按吸蟲卵形態(tài)進(jìn)行分組，然后按陽性組剖檢時檢獲的兩種吸蟲數(shù)和貓感染數(shù)分別統(tǒng)計驅(qū)蟲效果。本研究中米爾貝肟與吡喹酮聯(lián)合應(yīng)用對棘口吸蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均為100%，對心形咽口吸蟲的驅(qū)蟲率與驅(qū)凈率均>90.0%，表明米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對棘口吸蟲和咽口吸蟲具有良好的驅(qū)蟲效果。

3.3 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對毛細(xì)線蟲的驅(qū)蟲效果

寄生于貓的毛尾目(Trichurata)線蟲主要有毛尾科(Trichuridae)的貓毛尾線蟲(Trichurisfelis)和鋸齒毛尾線蟲(T.serratas)，毛細(xì)科(Capillariidae)的肺毛細(xì)線蟲(Capillariaaerophila)和貓毛細(xì)線蟲(C.feliscati)[8-11]，前兩者寄生于貓的大腸(主要是盲腸)，后兩者分別寄生于貓的氣管與支氣管以及膀胱內(nèi)。毛細(xì)線蟲和毛尾線蟲的蟲卵均呈棕黃色，腰鼓形，兩端有卵塞，易從糞便中鑒別。毛尾線蟲外觀呈鞭狀，附著在腸黏膜上，易識別。但毛細(xì)線蟲細(xì)長呈絲狀，不易分離鑒別。為了判定糞檢結(jié)果的正確性，我們在試驗正式實施前對糞檢蟲卵呈陽性的數(shù)只貓進(jìn)行了寄生蟲學(xué)剖檢，結(jié)果在毛細(xì)線蟲或毛尾線蟲卵呈陽性的貓體內(nèi)均未能在其腸道、肺與膀胱內(nèi)找到毛尾線蟲或毛細(xì)線蟲。故在隨后的試驗中用蟲卵減少率與轉(zhuǎn)陰率來評價藥物對毛尾目線蟲的驅(qū)蟲效率。而且在剖檢陽性對照組的貓時，也沒有發(fā)現(xiàn)一例感染毛尾線蟲。因此，我們將該類蟲卵歸屬于毛細(xì)線蟲。本研究中米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑給藥14 d后對毛細(xì)線蟲的蟲卵減少率為100.0%，蟲卵轉(zhuǎn)陰率為90.0%，表明米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對毛細(xì)線蟲亦具有良好的驅(qū)蟲效果。

3.4 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對其他胃腸道蠕蟲的驅(qū)蟲效果

據(jù)報道米爾貝肟與吡喹酮聯(lián)合應(yīng)用可以有效防治貓(犬)心絲蟲、貓弓首蛔蟲、絳蟲、結(jié)膜吸吮線蟲等[16-18]。Cvejic等[5]的研究表明米爾貝肟與吡喹酮分別以2 mg/kg和5 mg/kg的劑量給藥對多房棘球絳蟲100%有效，本研究中米爾貝肟(2 mg/kg)與吡喹酮(5 mg/kg)復(fù)合制劑對犬復(fù)孔絳蟲100%有效，但對曼氏迭宮絳蟲的驅(qū)蟲率和驅(qū)凈率分別為84.9%和75.0%，原因可能與不同種屬絳蟲對藥物的敏感性有差異相關(guān)。Schenker等[19]研究發(fā)現(xiàn)米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對貓感染成熟貓弓首蛔蟲和其四期幼蟲有很高的療效，本研究結(jié)論與之相符。本研究中米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對鉤蟲的驅(qū)蟲效果達(dá)100%，高于文獻(xiàn)報道的米爾貝肟單獨使用對三期犬鉤口線蟲幼蟲的驅(qū)蟲效果[20]。

另外，本研究首次報道了米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對棘口吸蟲、心型咽口吸蟲、華支睪吸蟲及毛細(xì)線蟲的驅(qū)蟲效果，結(jié)果顯示米爾貝肟與吡喹酮聯(lián)合應(yīng)用對棘口吸蟲、心型咽口吸蟲、華支睪吸蟲及毛細(xì)線蟲有良好的驅(qū)蟲效果，且Milbermax?組與吡喹酮單方組相比，驅(qū)蟲效率更高，驅(qū)蟲普更廣。

3.5 米爾貝肟與吡喹酮復(fù)合制劑對試驗動物的安全性

米爾貝肟毒性低，殺蟲活性高，其口服半數(shù)致死量在500 mg/kg以上，是臨床推薦用量的2 000倍以上[21-22]。在本研究中Milbemax?組，在整個試驗期間貓均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，這一結(jié)果與文獻(xiàn)報道相一致[23-24]，表明含有米爾貝肟和吡喹酮的口服咀嚼片(Milbemax?)為控制貓胃腸道蠕蟲病提供了一種新的和安全有效的方法。

4 結(jié)論

米爾貝肟(2 mg/kg)與吡喹酮(5 mg/kg)復(fù)合制劑對貓感染的貓弓首蛔蟲、毛細(xì)線蟲、鉤蟲、華支睪吸蟲、棘口吸蟲、心形咽口吸蟲、曼氏迭宮絳蟲和犬復(fù)孔絳蟲等均有良好的驅(qū)蟲效果，是一種安全有效的貓類寄生蟲廣譜驅(qū)蟲藥物。