周澤湘，范文浩，方 劉，，阮國(guó)良，，郭小澤，劉 昕，鄭維友

（1.長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院/小龍蝦繁育與健康養(yǎng)殖創(chuàng)新技術(shù)研究中心，湖北 荊州 434025；2.湖北省水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，湖北 荊州 434026；3.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，南昌 330008）

克氏原螯蝦（Procambarus clarkii），俗稱(chēng)小龍蝦，是淡水螯蝦的一種，原產(chǎn)于北美洲，后傳入日本，20世紀(jì)30年代由日本傳入中國(guó)［1］。溫度是影響甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)、繁衍及存活的重要因子［2-4］。研究表明，溫度突變會(huì)對(duì)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）的存活產(chǎn)生顯著影響［5］，日本沼蝦（Macrobrachium nip?ponense）多數(shù)幼體在溫度達(dá)到30 ℃以上時(shí)會(huì)產(chǎn)生熱應(yīng)激反應(yīng)，死亡率升高［6］。倪靜靜等［7］研究了水溫對(duì)克氏原螯蝦食性的影響，當(dāng)溫度為15～30 ℃時(shí)，克氏原螯蝦的攝食會(huì)隨溫度的升高而增加，溫度為5 ℃和35 ℃時(shí)，其攝食會(huì)停止。王慶等［8］通過(guò)冬季加溫試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，溫度變化可刺激克氏原螯蝦雌蝦抱卵，溫度為18～26 ℃時(shí)，卵的孵化時(shí)間會(huì)隨溫度的升高而縮短。以上研究均說(shuō)明水溫對(duì)甲殼動(dòng)物的生長(zhǎng)、存活、攝食及孵化都會(huì)產(chǎn)生重要的影響。

近年來(lái)，長(zhǎng)江中下游小龍蝦養(yǎng)殖區(qū)域大規(guī)模暴發(fā)“五月瘟”，當(dāng)水溫在18～25 ℃時(shí)，死亡率達(dá)90%以上［9］。養(yǎng)殖試驗(yàn)表明，水溫變化已成為克氏原螯蝦大批死亡的誘因，當(dāng)水溫低于10 ℃時(shí)克氏原螯蝦抗應(yīng)激能力提高，死亡率下降，當(dāng)水溫高于25 ℃時(shí)應(yīng)激反應(yīng)十分強(qiáng)烈，死亡率較高［10］。目前，規(guī)避養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)的主要措施就是提早上市，在溫度達(dá)到風(fēng)險(xiǎn)值前完成養(yǎng)殖銷(xiāo)售環(huán)節(jié)。而提早上市最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)就是要提早出苗，克氏原螯蝦苗種培育階段主要在冬末春初，因此溫度條件對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要。本試驗(yàn)在不同水溫條件下對(duì)克氏原螯蝦幼蝦的存活、生長(zhǎng)、攝食及消化酶活性進(jìn)行研究，旨在為克氏原螯蝦的苗種室內(nèi)培育及苗種下塘管理提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用克氏原螯蝦幼蝦（體長(zhǎng)為37.64±0.11 mm，體重為3.11±0.04 g）購(gòu)于湖北省荊州市萬(wàn)金小龍蝦養(yǎng)殖專(zhuān)業(yè)合作社。先將300 尾幼蝦放入室內(nèi)養(yǎng)殖池暫養(yǎng)，養(yǎng)殖用水為曝氣的自來(lái)水，根據(jù)棲息習(xí)性在水中放置一些遮避物［11］，讓其適應(yīng)室內(nèi)養(yǎng)殖環(huán)境，暫養(yǎng)及試驗(yàn)期間所投喂的飼料均為商品飼料（表1）。

表1 小龍蝦飼料營(yíng)養(yǎng)成分表

1.2 試驗(yàn)方法

采用120 cm×60 cm×20 cm 養(yǎng)殖箱，每個(gè)養(yǎng)殖箱放入15 尾幼蝦，試驗(yàn)設(shè)置的溫度分別為23、26、29、31 ℃，用加熱棒控制溫度，每個(gè)溫度條件設(shè)置3 個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)前幼蝦停食24 h，挑選身體健康、四肢健全、規(guī)格一致的個(gè)體，測(cè)量其體長(zhǎng)、全長(zhǎng)和體重（長(zhǎng)度精確到0.01 mm，重量精確到0.01 g）。正式開(kāi)始試驗(yàn)后，每日投餌2 次（早上8：00，下午6：00），日投喂量3%，投喂結(jié)束后2 h 通過(guò)虹吸法收集殘餌，并烘干稱(chēng)量。每天對(duì)養(yǎng)殖箱換水1 次，換水的溫度與養(yǎng)殖設(shè)置的溫度基本保持一致，換水量為養(yǎng)殖總水體的1/3，水中溶氧量>5 mg/L，pH 7.0～8.5，試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為8 周。采樣前停食24 h，統(tǒng)計(jì)每箱試驗(yàn)蝦數(shù)目，測(cè)量體長(zhǎng)、全長(zhǎng)和體重，每箱分別解剖6 尾蝦，取其胃腸組織0.10 g，加0.90 mL 生理鹽水，用勻漿器磨碎，4 ℃下3 000 r/min 離心10 min，收集上清液，-80 ℃保存，用于后期消化酶指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo) 各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)，體長(zhǎng)（mm）：從克氏原螯蝦的眼睛到尾基部之間的長(zhǎng)度。全長(zhǎng)（mm）：從克氏原螯蝦的額頭前部到尾末端之間的長(zhǎng)度。體重（g）：吸干蝦體表面的水分，稱(chēng)取整尾蝦的重量；增重率（%）＝［試驗(yàn)?zāi)┪r均質(zhì)量（g）-試驗(yàn)初蝦均質(zhì)量（g）］×100/試驗(yàn)初蝦均質(zhì)量（g）；特定生長(zhǎng)率（%/d）＝［Ln 試驗(yàn)?zāi)┪r均質(zhì)量（g）-Ln 試驗(yàn)初蝦均質(zhì)量（g）］×100/飼喂天數(shù)（d）；肥滿(mǎn)度（%）=平均體重（g）×100/平均體長(zhǎng)3（cm）；存活率（%）=試驗(yàn)?zāi)┪r的數(shù)量×100/試驗(yàn)始蝦的數(shù)量。

1.3.2 攝食指標(biāo)的測(cè)定 養(yǎng)殖期間記錄投喂量，收集每個(gè)養(yǎng)殖箱中殘余的飼料，烘箱烘干，稱(chēng)量，計(jì)算攝食量。飼料系數(shù)=［最終體重（g）-初始體重（g）］/攝食量（g）；肝體比（%）=肝臟質(zhì)量（g）/初始體重（g）×100%；攝食率（%/d）=200×攝食量（g）/［初始體重（g）+最終體重（g）］/t。

1.3.3 消化酶活性的測(cè)定 解剖試驗(yàn)蝦取出胃、腸道，將組織在預(yù)冷的磷酸緩沖液（0.02 mol/L，pH 7.5）（1 g/5 mL）中用玻璃勻漿器冰浴中勻漿，4 ℃下10 000 r/min 離心10 min，取上清液作為消化酶分析樣品，4 ℃保存，24 h 內(nèi)分析完畢。蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性的檢測(cè)，均采用南京建成生物科技有限公司試劑盒測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，使用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，用最小顯著極差法（LSD）進(jìn)行多重比較，P<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦存活、生長(zhǎng)的影響

由表2 可知，克氏原螯蝦幼蝦的體長(zhǎng)在26 ℃下增長(zhǎng)最快，顯著高于另外3 個(gè)溫度條件（P<0.05），在29 ℃和31 ℃下體長(zhǎng)增長(zhǎng)較快，均顯著高于23 ℃（P<0.05）。幼蝦的體重變化在26 ℃條件下，顯著高于23 ℃條件（P<0.05），體重增重率為197.35%，29 ℃和31 ℃條件下的體重增重率分別為168.85% 和158.81%，23 ℃條件下幼蝦體重變化最小，僅增加101.32%。在4 個(gè)溫度條件下特定生長(zhǎng)率也發(fā)生了顯著性差異，其中26 ℃條件下的特定生長(zhǎng)率顯著高于其他3 個(gè)溫度條件（P<0.05），29 ℃和31 ℃條件下特定生長(zhǎng)率顯著高于23 ℃（P<0.05），23 ℃條件下的特定生長(zhǎng)率最低。溫度差異對(duì)克氏原螯蝦肥滿(mǎn)度并未產(chǎn)生顯著變化（P>0.05）。在溫度為23 ℃條件下，克氏原螯蝦幼蝦成活率最高，達(dá)100%，顯著高于另外3 個(gè)溫度條件（P<0.05），26、29、31 ℃條件下存活率之間沒(méi)有顯著性差異（P>0.05），其中31 ℃條件下幼蝦的成活率最低，僅為89%。

表2 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦生長(zhǎng)的影響

2.2 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦攝食的影響

由表3 可知，在4 個(gè)溫度下，幼蝦的飼料系數(shù)呈現(xiàn)不同的變化，23 ℃下飼料系數(shù)最高，顯著高于其他3 個(gè)溫度條件（P<0.05），而26 ℃下飼料系數(shù)最低?？耸显r攝食率在4 個(gè)溫度條件下沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）。幼蝦的肝體比在23～29 ℃條件下逐漸增大，并在29 ℃達(dá)到最大，且29 ℃的肝體比顯著大于23 ℃的肝體比（P<0.05），當(dāng)溫度達(dá)31 ℃時(shí)，肝體比略有降低，但仍高于23 ℃和26 ℃條件下的肝體比。

表3 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦攝食的影響

2.3 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦消化酶活性的影響

由表4 可知，隨著溫度升高，蛋白酶活性逐漸增強(qiáng)，溫度為29 ℃時(shí)，蛋白酶活性顯著高于其他3 個(gè)溫度條件的蛋白酶活性（P<0.05），隨著溫度進(jìn)一步升高，蛋白酶活性下降，但仍高于23 ℃和26 ℃的蛋白酶活性?？耸显r幼蝦脂肪酶活性變化在4 個(gè)溫度條件下呈先升后降的趨勢(shì)，23 ℃時(shí)脂肪酶活性最低，隨著溫度升高，脂肪酶活性逐漸增強(qiáng)，29 ℃時(shí)幼蝦脂肪酶活性最強(qiáng)，當(dāng)溫度為31 ℃時(shí)，脂肪酶活性略有降低，但仍顯著高于23 ℃和26 ℃時(shí)的脂肪酶活性（P<0.05）。在4 個(gè)溫度下，克氏原螯蝦幼蝦淀粉酶活性變化趨勢(shì)同蛋白酶和脂肪酶的變化趨勢(shì)一致，23 ℃時(shí)淀粉酶活性最低，顯著低于其他3 個(gè)溫度條件下的淀粉酶活性（P<0.05），其他3 個(gè)溫度條件下淀粉酶活性差異不顯著（P>0.05）。

表4 不同溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦消化酶活性的影響

3 小結(jié)與討論

3.1 溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦生長(zhǎng)性能的影響

溫度是影響甲殼動(dòng)物存活的一個(gè)重要因素，甲殼動(dòng)物對(duì)溫度變化有一定耐受范圍，如日本對(duì)蝦（Penaeus japonicus）蝦苗耐受的溫度范圍為15～30 ℃［12］。張龍崗等［13］研究表明克氏原螯蝦對(duì)溫度有較強(qiáng)的耐受性，耐受范圍為0～38 ℃，適宜生長(zhǎng)范圍為24～30 ℃。本試驗(yàn)溫度范圍為23～31℃，發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦幼蝦在23 ℃下成活率為100%，隨著溫度升高，其他3 個(gè)溫度下的存活率顯著低于23 ℃的存活率。生產(chǎn)實(shí)踐表明，克氏原螯蝦機(jī)體內(nèi)通常有較高的白斑病毒攜帶率，環(huán)境溫度的變化會(huì)對(duì)其免疫能力造成顯著影響，高溫容易引起病毒暴發(fā)，死亡率可達(dá)80%～90%［14］。楊章武等［15］也發(fā)現(xiàn)當(dāng)水溫高于33 ℃后，凡納濱對(duì)蝦幼體活力下降、死亡增多、生長(zhǎng)緩慢，并且溫度越高，死亡率越高。李銘等［16］研究發(fā)現(xiàn)水溫為25 ℃時(shí)，水中微生物豐度急劇增加，微生物增加導(dǎo)致克氏原螯蝦幼蝦死亡率增加。在不同環(huán)境溫度條件下，克氏原螯蝦的新陳代謝和機(jī)體防御能力將發(fā)生改變，從而導(dǎo)致存活率下降。本研究發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦幼蝦在26 ℃下增重率與特定生長(zhǎng)率最快。日本對(duì)蝦幼體在27 ℃生長(zhǎng)最快，生物量的增加最高［12］。韓曉磊等［17］研究也表明水溫為25～30 ℃是克氏原螯蝦生長(zhǎng)發(fā)育的最適溫度。溫度對(duì)克氏原螯蝦幼體的生長(zhǎng)有明顯的影響，在適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)，可以明顯促進(jìn)幼體的生長(zhǎng)，但高溫也容易導(dǎo)致較高的死亡率與低生長(zhǎng)性能。在肥滿(mǎn)度指標(biāo)上，4個(gè)試驗(yàn)組并沒(méi)有顯著性差異，說(shuō)明克氏原螯蝦幼蝦在早期發(fā)育階段體質(zhì)量的增加符合體重與體長(zhǎng)增長(zhǎng)曲線(xiàn)比例。

3.2 溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦攝食的影響

克氏原螯蝦是一種比較貪食的水生動(dòng)物，這也是甲殼類(lèi)動(dòng)物的共同特性，在非極端溫度下，其攝食率受溫度的波動(dòng)較小，這與李銘等［16］研結(jié)果一致。溫度對(duì)克氏原螯蝦攝食行為以及消化能力都會(huì)產(chǎn)生影響，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)26 ℃下飼料系數(shù)最低，說(shuō)明此溫度條件下，幼蝦攝食的能量最大效率地用于生長(zhǎng)，這與日本對(duì)蝦研究結(jié)果相似［18］。溫度過(guò)低蝦體需要一部分能量維持基礎(chǔ)代謝，溫度過(guò)高會(huì)造成蝦體長(zhǎng)時(shí)間處于溫度脅迫導(dǎo)致其生理功能紊亂［13］，以及頻繁的活動(dòng)與打斗會(huì)消耗能量，從而影響飼料的轉(zhuǎn)化效率。幼蝦的肝體比的變化趨勢(shì)與3 種消化酶活性表現(xiàn)一致，這也充分說(shuō)明了蝦蟹的肝胰腺作為重要代謝器官，在適宜的溫度條件下能有效地促進(jìn)物質(zhì)能量的代謝與轉(zhuǎn)化。

3.3 溫度對(duì)克氏原螯蝦幼蝦消化酶活性的影響

消化酶活性的高低可以直接反映動(dòng)物本身對(duì)食物攝食和消化的情況，酶活性越高，蝦的生長(zhǎng)狀況越好。本試驗(yàn)中在23～29 ℃范圍內(nèi)，隨溫度的升高，3種消化酶活性逐漸升高，在29 ℃時(shí)消化酶活性最強(qiáng)，發(fā)現(xiàn)幼蝦的攝食率與肝體比指標(biāo)在該溫度下也最高，幼蝦的消化代謝能力隨溫度升高而隨之增大。本試驗(yàn)結(jié)果與薛素燕等［19］研究溫度對(duì)中華原鉤蝦（Eogammarus possjeticus）攝食率和消化酶活力影響的結(jié)果相似。邵蓬等［20］和田相利等［21］認(rèn)為適宜溫度有利于機(jī)體將更多的能量用于機(jī)體生長(zhǎng)和繁殖，而水溫過(guò)低會(huì)顯著抑制克氏原螯蝦的消化能力，影響水生生物的營(yíng)養(yǎng)代謝水平，從而抑制機(jī)體的生長(zhǎng)。在高溫的環(huán)境下消化酶活性會(huì)降低，造成蝦體不適，代謝紊亂，從而導(dǎo)致克氏原螯蝦生長(zhǎng)緩慢和攝食量減少甚至少數(shù)停食［22］。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)飼養(yǎng)水溫條件，在苗種培育階段采取合適的投喂策略，有效提高飼料效率，而溫度的控制可以通過(guò)蝦稻田或者池塘挖掘水溝和筑臺(tái)調(diào)節(jié)水位來(lái)控制水溫，為克氏原螯蝦的苗種培育及苗種下塘管理提供指導(dǎo)。