自動(dòng)化及免疫學(xué)技術(shù)在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展

吳柳萍

（羅城仫佬族自治縣中醫(yī)醫(yī)院，廣西 羅城，546400）

感染性疾病是指由真菌、細(xì)菌、病毒等致病微生物引起的相關(guān)疾病，該類(lèi)疾病多為炎癥性疾病，對(duì)呼吸、消化等多系統(tǒng)均產(chǎn)生影響。常有肺炎、泌尿系統(tǒng)、腸炎等，患者多伴有體溫升高、局部炎癥等全身癥狀，面對(duì)該類(lèi)疾病需提高警惕，及時(shí)給予合理有效的診斷及治療，謹(jǐn)防疾病惡化給患者生命健康造成嚴(yán)重傷害[1-2]、降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)。傳統(tǒng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于該類(lèi)疾病的診療中，但有研究[3-4]表明該技術(shù)存在檢測(cè)效率低、準(zhǔn)確率不足等弊端。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步，微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)得到更多應(yīng)用，該技術(shù)可有效針對(duì)人體各個(gè)系統(tǒng)的感染性疾病，彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)的不足。本文通過(guò)分析幾種常見(jiàn)的微生物快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展，現(xiàn)報(bào)道如下：

1.微生物自動(dòng)化鑒定技術(shù)

傳統(tǒng)微生物鑒定技術(shù)需經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)細(xì)菌培養(yǎng)階段，這樣的方式會(huì)顯著降低檢測(cè)效率，且該操作易出現(xiàn)失誤[5]。蘇章庭，周露的研究[6]對(duì)比了傳統(tǒng)技術(shù)與微生物自動(dòng)化鑒定技術(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)微生物自動(dòng)化鑒定技術(shù)檢測(cè)時(shí)間低于前者，且在節(jié)省人力資源、提升檢測(cè)精準(zhǔn)度方面均有優(yōu)勢(shì)。全自動(dòng)微生物專(zhuān)家檢測(cè)系統(tǒng)：這一專(zhuān)家系統(tǒng)是美國(guó)微生物學(xué)會(huì)1999年首次提出，該系統(tǒng)是指根據(jù)臨床微生物種類(lèi)等，同時(shí)結(jié)合臨床發(fā)表、出版的數(shù)據(jù)信息，為檢測(cè)結(jié)果提供解釋說(shuō)明[7-8]。該技術(shù)大幅度提升了檢測(cè)速度，在幾小時(shí)內(nèi)即可輸出檢測(cè)結(jié)果。該技術(shù)為臨床傳染性疾病提供診斷依據(jù)與治療建議。全自動(dòng)微生物培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)：該系統(tǒng)采用不可逆CO2顏色改變技術(shù)，可快速檢測(cè)出培養(yǎng)皿內(nèi)是否有微生物生長(zhǎng)[9]。其優(yōu)勢(shì)在于技術(shù)人員不需要做復(fù)雜操作，僅需要將培養(yǎng)皿置于檢測(cè)儀器中，檢測(cè)結(jié)束后，儀器會(huì)自動(dòng)分開(kāi)陽(yáng)性與陰性結(jié)果[10]，顯著提升了檢測(cè)效率及精準(zhǔn)度。

2.免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)

臨床對(duì)于抗原及抗體檢測(cè)時(shí)均要對(duì)患者行靜脈抽血提取血清，故存在于體外的抗原及抗體反應(yīng)亦被稱(chēng)為血清學(xué)試驗(yàn)。該試驗(yàn)極大簡(jiǎn)化了微生物病原檢測(cè)的步驟，提高了檢測(cè)效率，是臨床微生物檢測(cè)的主要方法之一[11]。

2.1 凝集反應(yīng)在溫度、酸堿度、電解質(zhì)合適的條件細(xì)菌等抗原與抗體可發(fā)生特異性結(jié)合，并能出現(xiàn)肉眼可觀察到的凝集反應(yīng)，即反應(yīng)后出現(xiàn)的凝集塊[12]。該反應(yīng)較適用于肺炎鏈球菌、志賀菌、沙門(mén)菌等菌落的分型與鑒定。有研究[13]指出該檢測(cè)手段具有操作便捷、檢測(cè)效率高、準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)。

2.2 沉淀反應(yīng)該反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在有電解質(zhì)存在的情況下，按適當(dāng)比例所形成的可見(jiàn)沉淀物現(xiàn)象。主要包括環(huán)狀、瓊脂擴(kuò)散法、絮狀三種類(lèi)型。其中環(huán)狀類(lèi)型常用于炭疽、肺炎鏈球菌的診斷、鑒定。絮狀常用于定量測(cè)定毒素、類(lèi)毒素等[14]。

2.3 酶聯(lián)免疫技術(shù)該技術(shù)于1974 法國(guó)研究者首次提出，近些年數(shù)據(jù)[15]發(fā)現(xiàn)，免疫酶技術(shù)在臨床使用頻率正不斷提高，使用范圍極廣，該技術(shù)主要通過(guò)酶的特殊作用將所檢物質(zhì)轉(zhuǎn)化，其主要利用了抗原抗體的特殊反應(yīng)。同時(shí)提取微生物代謝出來(lái)的酶，并將其置于特殊的顯色底板上并觀察顯色反應(yīng)，最后對(duì)培養(yǎng)微生物進(jìn)行著色。該技術(shù)主要應(yīng)用于傳染性流感及肺炎等，其具有靈敏度較高、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，同時(shí)其可從定性及定量?jī)蓚€(gè)方向展開(kāi)檢測(cè)。

2.4 熒光免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)是指將抗原抗體特異與熒光技術(shù)結(jié)合，檢測(cè)過(guò)程中將熒光素作為特殊標(biāo)記物，檢測(cè)主要通過(guò)顯微鏡下對(duì)熒光素的觀察來(lái)確定。這種技術(shù)具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。另外有研究[16]提出在該技術(shù)上改造出來(lái)的快速檢驗(yàn)紙片法在特殊微生物檢測(cè)方面效果良好，靈敏度較高。例如，金黃色葡萄菌，大腸菌等。

2.5 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)該反應(yīng)原理是補(bǔ)體能被任何抗原抗體復(fù)合物激活，并且其能將紅細(xì)胞和溶血素的復(fù)合物結(jié)合。多用于檢測(cè)立克次體、螺旋體患者體內(nèi)抗體及病毒分型中。

3.微生物快速檢測(cè)注意事項(xiàng)

近些年研究[17-19]表明微生物快速檢查過(guò)程中有諸多注意事項(xiàng)，其是影響最終檢測(cè)結(jié)果的重要因素，故在檢測(cè)過(guò)程中需提高重視程度。根據(jù)研究得出以下幾個(gè)結(jié)論，培養(yǎng)基的滅菌及使用：配制是需仔細(xì)查看是否在有效期內(nèi)并保證其是密封保存，培養(yǎng)基在使用前需經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒處理，嚴(yán)格管理培養(yǎng)基保存溫度；檢測(cè)環(huán)境的維持：大環(huán)境方面需保證檢測(cè)室門(mén)窗關(guān)閉，避免空氣流動(dòng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。小環(huán)境方面及時(shí)對(duì)檢查設(shè)備進(jìn)行清理及滅菌，并在檢測(cè)前提前開(kāi)啟紫外燈；樣本采集及檢測(cè)：保證采樣器的無(wú)菌性，采集人員在采集樣本前要充分做到手部及身體暴露部位滅菌處理。

微生物培養(yǎng)環(huán)節(jié)需嚴(yán)格按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》進(jìn)行，定時(shí)觀察培養(yǎng)基情況，若出現(xiàn)異常應(yīng)及時(shí)處理，防止其對(duì)后期檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。

4.小結(jié)

隨著近些年傳染病的爆發(fā)，微生物檢驗(yàn)技術(shù)越來(lái)越受到人們重視，同時(shí)在傳染病大規(guī)模傳播的情況下，各種微生物快速檢測(cè)的效率及精準(zhǔn)度成了臨床需面對(duì)的巨大挑戰(zhàn)。臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)需充分結(jié)合數(shù)字化、自動(dòng)化等高新技術(shù)，綜合考慮疾病因素及患者情況，為患者選用最有效率的檢測(cè)方法。臨床目前的微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)已基本成熟，但尚未形成統(tǒng)一規(guī)范化、統(tǒng)一性檢測(cè)方案，同時(shí)隨著醫(yī)療技術(shù)進(jìn)步，各種新型微生物檢驗(yàn)技術(shù)開(kāi)始應(yīng)用于臨床，故后續(xù)研究仍需在提升檢測(cè)效率、增強(qiáng)檢測(cè)精準(zhǔn)度等方面作出深入探討。