張 麗

（鄆城縣人民醫(yī)院病理科，山東 菏澤274700）

臨床上，黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤（MALTL）多見于老年人，其發(fā)病率相對(duì)低下[1]?；颊甙l(fā)病與自身免疫性疾病、病原體感染所致慢性炎癥關(guān)系密切，在生物學(xué)行為與臨床表現(xiàn)上類似于慢性炎癥，其缺乏特異性診斷抗體，鑒別和診斷存在較大難度[2-3]。本文分析了黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的分子病理診斷結(jié)果，現(xiàn)闡述如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2016年1月至2019年10月收治的MALTL患者50例，回顧性分析其相關(guān)資料，患者年齡為20～70（57.3±3.9）歲；男女比為21/29。病灶分布主要在胃部19例（38.0%）、乳腺1例（2.0%）、甲狀腺4例（8.0%）、肺5例（10.0%）、眼附屬器及眼眶6例（12.0%）、腸6例（12.0%）、唾液腺9例（18.0%）。標(biāo)本獲取方式：活檢標(biāo)本14個(gè)、局部切除標(biāo)本20個(gè)、手術(shù)根治性切除標(biāo)本16個(gè)。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 所用儀器：電泳儀、PCR擴(kuò)增儀；PCR引物及擴(kuò)增試劑盒、第二抗體MaxVision/HRP檢測(cè)試劑盒、第一抗體lambda（Lamb14）、kappa（多克?。?、CD20、CD3、CD21、CK、CD10、BCL-2、Cyclin D1、CD5、CD23等。

1.2.2 測(cè)定方法 所有患者均制作石蠟包埋標(biāo)本，實(shí)施免疫組織化學(xué)檢測(cè)和IgH基因克隆性重排，具體為（1）免疫組織化學(xué)檢測(cè)：取石蠟標(biāo)本切片行蒸餾水洗凈、水花、脫蠟等處理后，采用PBS沖洗液沖洗，3min/次，共3次。之后行相應(yīng)抗原修復(fù)，再次同法沖洗。將沖洗液去除后，在室溫下將一抗加入濕盒孵育1h，再次同法沖洗。將沖洗液去除后，將二抗（MaxVision/HRP試劑）滴加后，室溫下濕盒孵育15min，再次同法沖洗，去除沖洗液，滴加DAB試劑顯色，終止顯色加入蒸餾水沖洗，木素復(fù)染，并脫水、封片。采用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，測(cè)試試劑盒為MaxVision/HRP，正常淋巴結(jié)作為陽(yáng)性對(duì)照。（2）IgH基因克隆性重排：采用PCR擴(kuò)增處理石蠟包埋組織的DNA，取DNA樣本6個(gè)/次，之后對(duì)PCR1擴(kuò)增試劑進(jìn)行配制，之后裝入7個(gè)50μL微型管中，各為20μL，在1～6號(hào)管裝入6個(gè)DNA樣本，7號(hào)為空白陰性對(duì)照。配制PCR2擴(kuò)增試劑，以上述方法分裝，并同法擴(kuò)增，最后采取瓊脂糖凝膠電泳，獲取電泳結(jié)果和圖像。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察分析其原發(fā)病灶形態(tài)學(xué)、分布、免疫球蛋白重鏈（IgH）基因克隆性重排、免疫表型等情況，評(píng)估依據(jù)[4]：免疫組化：Kappa和lambda陽(yáng)性細(xì)胞在高倍鏡下計(jì)數(shù)，核周圍及細(xì)胞漿出現(xiàn)棕色顆粒。Kappa輕鏈限制：Kappa/lambda＞4：1；lambda輕鏈限制lambda/Kappa＞2：1。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用SPSS22.0軟件統(tǒng)計(jì)。百分比資料行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料行t檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)，說(shuō)明存在較高的檢驗(yàn)價(jià)值。

2 結(jié)果

本組50例患者病灶分布主要在胃部（38.0%）；MALTL標(biāo)本在低倍鏡下少數(shù)為結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，多數(shù)呈彌漫性生長(zhǎng)，且存在多樣化形態(tài)的淋巴瘤細(xì)胞。免疫組化顯示BCL-2均呈陽(yáng)性，CD21、cyclinD1、CD23、CD50、CD1、CD3均呈陰性；BCL-2、CD20均呈陽(yáng)性；14個(gè)標(biāo)本lambda或kappa為優(yōu)勢(shì)表達(dá)，敏感性28.0%（14/50）；16個(gè)標(biāo)本lambda或kappa與IgH基因單克隆性重排為陰性，31個(gè)標(biāo)本出現(xiàn)IgH基因單克隆性重排，二者聯(lián)合測(cè)定陽(yáng)性率68.0%（34/50）。

3 討論

隨著近幾年臨床對(duì)MALTL研究的增加，多數(shù)研究表明該病癥多發(fā)于中老年人，且女性高于男性，年齡平均在60歲左右，而胃腸道屬于主要發(fā)病部位[5]。本研究中，50例患者病灶分布主要在胃部（38.0%），該結(jié)果與既往研究較為接近。在對(duì)多種淋巴瘤進(jìn)行診斷過(guò)程中，形態(tài)學(xué)觀察是最基本的手段。本文結(jié)果

中MALTL標(biāo)本在低倍鏡下少數(shù)為結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，多數(shù)呈彌漫性生長(zhǎng)，可以看出隨著臨床上對(duì)分子生物學(xué)的廣泛應(yīng)用，加之其自身的不斷成熟，腫瘤細(xì)胞檢測(cè)中逐漸應(yīng)用基因重排檢測(cè)。由IgH基因的克隆性重排在于MALTL患者普遍存在，所以患者鑒別診斷中可應(yīng)用分子病理學(xué)檢測(cè)。結(jié)果顯示：免疫組化結(jié)果中BCL-2均呈陽(yáng)性，CD21、cyclinD1、CD23、CD50、CD1、CD3均呈陰性；BCL-2、CD20均呈陽(yáng)性；MALTL標(biāo)本lambda或kappa與IgH基因單克隆性重排二者聯(lián)合測(cè)定陽(yáng)性率68.0%?？梢园l(fā)現(xiàn)，黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的分子病理診斷具有積極作用和價(jià)值。本文結(jié)果與部分國(guó)外報(bào)道相比，其IgH基因單克隆性重排陽(yáng)性率相對(duì)較低，分析其可能原因?yàn)椴糠謽?biāo)本中混雜淋巴瘤細(xì)胞或者炎癥細(xì)胞，對(duì)DNA純度造成了影響，所以還需對(duì)DNA提純技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化和提升[6]。

綜上，臨床診斷MALTL時(shí)免疫組織化學(xué)檢測(cè)、組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)均為基礎(chǔ)手段，而lambda或kappa限制性表達(dá)與IgH基因單克隆性重排檢測(cè)等聯(lián)合可達(dá)到更高陽(yáng)性率，值得研究。