單克隆
- 單克隆接種/成像設(shè)備VIPS在CHO工程細(xì)胞株單克隆篩選中的應(yīng)用
。工程細(xì)胞株的單克隆源性指用于制備產(chǎn)品的細(xì)胞要求來源于同一祖細(xì)胞,是影響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素,獲取工程細(xì)胞株單克隆源性的證明是藥物研發(fā)整體控制策略的關(guān)鍵步驟[3-4]。傳統(tǒng)單克隆篩選采用有限稀釋法,克隆形成率較低,為確保獲得足夠的候選克隆,每次實(shí)驗(yàn)均需接種30~50塊96孔板,且進(jìn)行連續(xù)2輪篩選,工作量極大[5-8]。采用單克隆篩選儀器ClonePix 并基于半固體培養(yǎng)基進(jìn)行單克隆挑選可提高克隆形成率,但也需進(jìn)行連續(xù)2 輪篩選或另加1 輪有限稀釋法篩選亞克隆
中國生物制品學(xué)雜志 2023年12期2024-01-02
- 禽腺病毒血清4型中國流行株fiber2蛋白單克隆抗體制備與鑒定
4 細(xì)胞融合與單克隆抗體制備1.4.1 細(xì)胞融合及雜交瘤細(xì)胞的篩選取沖刺免疫后3 d的小鼠的脾臟組織,分離脾細(xì)胞后與SP2/0 細(xì)胞用PEG1500進(jìn)行融合。融合后3 d,用含有HAT的RPMI 1640篩選培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。用以fiber2蛋白為包被抗原的間接ELISA篩選能夠分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。選取檢測結(jié)果為陽性、生長狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)孔、亞克隆以及凍存。1.4.2 腹水的制備與純化取0.5 mL弗氏不完全佐劑對2只16周齡雌性BALB/c小鼠
畜牧與獸醫(yī) 2023年11期2023-11-10
- 單克隆抗體技術(shù)在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用
抗綿羊紅細(xì)胞的單克隆抗體,由此發(fā)現(xiàn)了可產(chǎn)生抗體的雜交瘤細(xì)胞。他們發(fā)現(xiàn),雜交瘤細(xì)胞具有單一的特異性抗原識別位點(diǎn),具有小鼠淋巴細(xì)胞的特性和骨髓瘤細(xì)胞持續(xù)增殖的能力[1]。單克隆抗體的識別性專一,只針對特定的抗原決定簇反應(yīng),大大提高了敏感性。雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的是針對淋巴細(xì)胞的特異性抗體,以及其在組織培養(yǎng)中生長的骨髓瘤細(xì)胞的永生特征。重要的是,雜交瘤是單克隆的,因?yàn)榕囵B(yǎng)的細(xì)胞起源于一個細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞可注射到組織相容性小鼠體內(nèi)產(chǎn)生腹水細(xì)胞腫瘤,此方法成為高濃度單克隆
中國畜禽種業(yè) 2022年3期2022-11-22
- FDA批準(zhǔn)緊急使用授權(quán)禮來新冠抗體Bebtelovimab對Omicron有效
的中和IgG1單克隆抗體(mAb),維持了針對目前已知和報(bào)道的所有變異株的結(jié)合和中和活性,包括Omicron和BA.2。此次獲批是基于一項(xiàng)2期隨機(jī)單劑量臨床試驗(yàn),評估了bebtelovimab單藥和bebtelovimab聯(lián)合其他單克隆抗體治療輕至中度COVID-19的療效。該試驗(yàn)的安慰劑對照部分招募了380名低風(fēng)險(xiǎn)患者。在這部分試驗(yàn)中,患者被隨機(jī)分為單次輸注bebtelovimab、bebtelovimab與其他單克隆抗體或安慰劑。結(jié)果顯示,與安慰劑相比
首都食品與醫(yī)藥 2022年19期2022-11-19
- 雞白細(xì)胞介素18單克隆抗體的制備與鑒定
-18的商品化單克隆抗體或試劑盒較為罕見。為此,本試驗(yàn)制備了抗chIL-18單克隆抗體,為深入研究chIL-18的生物學(xué)功能及炎性小體細(xì)胞焦亡的檢測打下基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 質(zhì)粒、細(xì)菌種類、蛋白、細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)動物 pGEX-6p-1、pET-28a兩種質(zhì)粒,大腸埃希菌(E.coli)BL21/DH5α,標(biāo)簽蛋白His-IL-1、His-IFN-β、His-IL-10,骨髓瘤細(xì)胞SP2/0,均為本實(shí)驗(yàn)室留存;6~8周齡BALB/c小鼠,購自北京維通利
中國獸醫(yī)雜志 2022年9期2022-11-17
- 犬瘟熱病毒核衣殼蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
的特異性反應(yīng)。單克隆抗體具有靈敏高、特異性強(qiáng)和制備方便等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷與治療[10]。國內(nèi)檢測CDV的抗體產(chǎn)品質(zhì)量不一,雖然國外有比較成熟化的抗體產(chǎn)品,但其價格高昂。前期研究已制備了高純度、特異性強(qiáng)的CDV NP。本研究以CDV NP為抗原免疫BALB/c小鼠,采用PEG1500為化學(xué)誘導(dǎo)劑,進(jìn)行細(xì)胞融合,間接ELISA法篩選單克隆雜交瘤細(xì)胞,進(jìn)行腹水誘生,并對制備的抗體進(jìn)行生物特性鑒定。本研究制備的CDV NP單抗對犬瘟熱的診斷及防控具有
- 抗破傷風(fēng)類毒素單克隆抗體的制備與鑒定①
抗破傷風(fēng)類毒素單克隆抗體的制備為破傷風(fēng)疫苗效價檢測新方法的建立、低含量破傷風(fēng)類毒素測定、吸附度測定等奠定基礎(chǔ),以提升我國破傷風(fēng)疫苗質(zhì)量控制水平。1 材料與方法1.1 材料破傷風(fēng)類毒素由本室提供;HRP標(biāo)記的羊抗鼠二抗為Invitrogen產(chǎn)品;石蠟油為MP Bio‐medical產(chǎn)品;DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清為Gibco產(chǎn)品;G蛋白柱為GE Healthcare產(chǎn)品;超濾管為Milli‐pore產(chǎn)品;96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板為Greiner Bio-One G
中國免疫學(xué)雜志 2021年18期2021-09-25
- 伯氏瘧原蟲PbPH表達(dá)特點(diǎn)和單克隆抗體傳播阻斷效應(yīng)研究
備了抗PbPH單克隆抗體,通過WB和IFA檢測PbPH的表達(dá)階段和抗PbPH單克隆抗體的特異性,并通過體外配子體出絲和動合子形成實(shí)驗(yàn)檢測抗PbPH單克隆抗體的傳播阻斷效果。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 試驗(yàn)材料 伯氏瘧原蟲(Plasmodiumberghei)ANKA 株,為中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室保存;6~8周齡的雌性BALB/c小鼠購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。1.1.2 培養(yǎng)基 裂殖體培養(yǎng)基:RPMI1640,50 mg/L
微生物學(xué)雜志 2021年2期2021-07-01
- PD-1/PD-L1在骨肉瘤中的研究進(jìn)展
-L1為靶點(diǎn)的單克隆抗體可以有效阻斷PD-1/PD-L1信號通路,促使T細(xì)胞恢復(fù)免疫活性,提高其殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。目前經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)上市的抗體有6種,其中帕博利珠單克隆抗體(pembrolizumab)、納武利尤單克隆抗體(nivolumab)和西米普利單克隆抗體(cemiplimab)均是PD-1單克隆抗體,阿特珠單克隆抗體(atezolizumab)、阿維魯單克隆抗體(avelumab)和度伐魯單克隆抗體(durvalumab)均是PD-L1單克隆
現(xiàn)代免疫學(xué) 2021年3期2021-04-17
- 豬細(xì)小病毒中和性單克隆抗體的制備與鑒定
16]。中和性單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、敏感性高,能夠阻斷病毒感染等特點(diǎn),被廣泛用于病毒的免疫學(xué)檢測、免疫保護(hù)評價和病毒感染機(jī)制研究等領(lǐng)域[17-20]。孫建慧等[21]利用桿狀病毒表達(dá)的重組PPV VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,經(jīng)細(xì)胞融合后采用免疫過氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)篩選,共獲得8 株抗PPV 的單克隆抗體,這些單克隆抗體均與PPV 感染的豬睪丸細(xì)胞反應(yīng)。劉秀芬等[22]利用
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年12期2021-02-16
- 抗豬瘟病毒中和性單克隆抗體的制備與鑒定
制備了一系列的單克隆抗體,廣泛應(yīng)用于CSFV診斷方法的建立[19-20]。中性單克隆抗體能夠有效抑制病毒感染活性,在病毒與宿主的相互作用、病毒中和性抗原表位研究和免疫評價方法建立方面發(fā)揮重要作用。但是,具有中和活性的CSFV單克隆抗體報(bào)道較少,限制了CSFV的相關(guān)研究[21-24]。為此,分別以CSFV SM株和桿狀病毒表達(dá)的CSFV E2蛋白免疫BABL/c小鼠,用經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)篩選針對CSFV E2蛋白中和表位的特異性單克隆抗體,為進(jìn)一步研究CSFV
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年12期2019-12-05
- 《動物細(xì)胞融合與單克隆抗體》教學(xué)設(shè)計(jì)
動物細(xì)胞融合和單克隆抗體”是人教版高中生物選修3《現(xiàn)代生物科技專題》的動物細(xì)工程的內(nèi)容,其中的單克隆抗體技術(shù)是動物細(xì)胞工程的新技術(shù),與當(dāng)前人類社會的生活、生產(chǎn)密切相關(guān),是本節(jié)教材的重點(diǎn)內(nèi)容;但又因其實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)復(fù)雜,目前普通中學(xué)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、精密儀器和藥品配備等大都不能滿足學(xué)生實(shí)驗(yàn)需求,故又是難點(diǎn)內(nèi)容。傳統(tǒng)課堂教學(xué)中一般以講述形式先對動物細(xì)胞融合部分進(jìn)行授課,再學(xué)習(xí)單克隆抗體的制備。經(jīng)過多年教學(xué)實(shí)踐,筆者發(fā)現(xiàn)以上述形式開展教學(xué),學(xué)生往往印象不深刻且很難深入理
學(xué)校教育研究 2019年2期2019-09-22
- 豬流感病毒NP蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
體的概念。由于單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)[11],已被廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)診斷中。為此,本研究利用H1N1和H3N2病毒感染犬腎MDCK細(xì)胞,建立免疫過氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA)單克隆抗體檢測方法,篩選具有保守性的SIV單克隆抗體,為豬流感的檢測奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 供試動物、細(xì)胞系和毒株SPF級雞胚購自北京勃林格殷格翰維通生物技術(shù)有限公司,SPF級6~8周齡雌性BALB/c小鼠購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動物繁殖有限公司,H1N1
河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年8期2019-08-23
- IPMA篩選豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體方法研究
]。病毒特異性單克隆抗體是研究病毒免疫機(jī)制,特別是體液免疫識別機(jī)制的基本工具,也是開發(fā)和診斷檢測試劑的必需材料。制備病毒的單克隆抗體需要經(jīng)過抗原純化、小鼠免疫、細(xì)胞融合、單抗篩選、鑒定等重要步驟。其中,單抗篩選是指用病毒抗原來識別鑒定混合在大量雜交瘤細(xì)胞中少數(shù)能夠分泌特異性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的過程。建立準(zhǔn)確、簡單、快速的高通量病毒單克隆抗體篩選方法,在細(xì)胞融合后用于短時間內(nèi)數(shù)百至數(shù)千個培養(yǎng)上清樣品的篩選,是制備病毒單克隆抗體的關(guān)鍵技術(shù)。PRRSV具有高
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2019年3期2019-07-05
- MDCK單克隆細(xì)胞生長特性分析
6]。MDCK單克隆細(xì)胞是本實(shí)驗(yàn)室由MDCK工作庫細(xì)胞通過有限稀釋法所制備,共制備114株.不同的MDCK單克隆細(xì)胞株在生長特性上有較大的差異.本研究前期通過有限稀釋法將MDCK細(xì)胞進(jìn)行單克隆化,獲得了自建MDCK單克隆細(xì)胞庫,庫內(nèi)共有114株單克隆細(xì)胞.現(xiàn)通過復(fù)蘇MDCK單克隆細(xì)胞,統(tǒng)計(jì)細(xì)胞復(fù)蘇活率、生長狀態(tài)、生長速度和生長形態(tài)等特性,確定MDCK單克隆細(xì)胞庫的可用性,旨在為后期篩選病毒敏感的MDCK單克隆細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提供資源和理論參考,為流感疫苗的生產(chǎn)提供
- 有血液學(xué)意義的單克隆免疫球蛋白血癥1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)
啟科【摘要】 單克隆免疫球蛋白血癥由一組異質(zhì)性疾病組成, 其特征在于B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞克隆性增殖產(chǎn)生免疫球蛋白, 漿細(xì)胞疾病的特征在于單克隆漿細(xì)胞的增殖。大多數(shù)患者血液或尿液中可檢測到單克隆免疫球蛋白。這種疾病譜廣泛、疾病表現(xiàn)多樣, 可侵及多器官, 如心臟、肝臟、皮膚、腎臟和神經(jīng)等, 而且大多為少見甚至是罕見疾病, 而有血液學(xué)意義的單克隆免疫球蛋白血癥報(bào)道較少, 此病發(fā)病率低, 極易被誤診。【關(guān)鍵詞】 單克隆免疫球蛋白血癥;腫瘤單克隆免疫球蛋白血癥由一組異
中國實(shí)用醫(yī)藥 2019年36期2019-01-30
- 抗牛免疫球蛋白G單克隆抗體的制備及鑒定
18-19]。單克隆抗體具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、均一性好的特點(diǎn)。國外學(xué)者已研制出抗牛IgG、IgG1、IgG2和IgG Fc片段的抗體[18-21]。國內(nèi)高東微[22]、王平[23]、韓秀娥[24]等研究了牛IgG單克隆抗體的制備,但目前還沒有商品化的抗牛IgG單克隆抗體,僅有的2 株單克隆抗體由國外進(jìn)口,價格十分昂貴。因此,利用雜交瘤技術(shù)制備分泌抗牛IgG的單克隆抗體,對于牛IgG的免疫學(xué)檢測技術(shù)的建立,具有重要的實(shí)際應(yīng)用價值和理論研究意義。1 材料與方
食品科學(xué) 2019年2期2019-01-28
- 單克隆抗體抗腫瘤藥物研究進(jìn)展與市場動態(tài)分析
研究背景最初,單克隆抗體藥物源于鼠身體中的細(xì)胞。隨著患者應(yīng)用鼠源單抗相關(guān)藥物的增多,此種藥物負(fù)面作用也在臨床治療中所顯現(xiàn)出來。因此,國內(nèi)外著重研究治療效果相對的較好的抗體藥物。伴隨著生物技術(shù)的進(jìn)步,2007年利用能夠產(chǎn)生人類抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠XenoMouse技術(shù),首個完全人源化單克隆抗體藥物Panitumumab上市,代表著著單克隆抗體抗腫瘤藥物進(jìn)入了一個新的發(fā)展階段。2.單克隆抗體抗腫瘤類藥物新藥研制狀況2.1 單克隆抗體來源的抗腫瘤類藥物經(jīng)典品種隨著基
醫(yī)藥前沿 2019年7期2019-01-05
- 232例膜增生性腎小球腎炎的重新評估
著對補(bǔ)體調(diào)節(jié)及單克隆免疫球蛋白相關(guān)腎損害的認(rèn)識,對MPGN分類有了新的看法。2012年,Sethi等[2]在新英格蘭雜志提出MPGN的新分類,將MPGN根據(jù)免疫熒光分為免疫球蛋白伴補(bǔ)體(Ig和C3均陽性)沉積的MPGN和單純補(bǔ)體(Ig-、C3+)沉積的C3腎小球病,前者(免疫復(fù)合物介導(dǎo)的MPGN)再根據(jù)血、尿有無單克隆免疫球蛋白(monoclonal gammopathy,M蛋白)、病毒感染等體液標(biāo)志物分為單克隆免疫球蛋白和自身免疫、感染相關(guān)的MPGN。隨
腎臟病與透析腎移植雜志 2018年4期2018-08-31
- 單克隆抗體純化方法比較論述
830000)單克隆抗體制備的理論基礎(chǔ)是F. Macfarlane Burnet的克隆選擇學(xué)說(1959):每個哺乳動物B淋巴細(xì)胞有特異性抗體的潛力??贵w鏈的恒定區(qū)域可能會改變在淋巴細(xì)胞克隆的分化過程中,但可變區(qū)保留這種奇異的特異性。1975年Kohler和Milstein開發(fā)出一種能提高抗原表位的特異性抗體技術(shù);這種技術(shù)被命名為雜交瘤技術(shù),用這種方法生產(chǎn)的抗體稱為單克隆抗體。隨著單克隆抗體的廣泛應(yīng)用,其純化技術(shù)也在快速發(fā)展。本文將介紹幾種試用于中小規(guī)模的
中國畜牧獸醫(yī)文摘 2018年1期2018-01-23
- 用于狂犬病暴露后預(yù)防處置的重組單克隆抗體
犬病病毒中和性單克隆抗體為人類進(jìn)行有效的狂犬病暴露后處置奠定了基礎(chǔ)。同人或馬狂犬病多克隆免疫球蛋白相比,人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體具有數(shù)個顯著的優(yōu)勢。最先進(jìn)的人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體應(yīng)當(dāng)廣譜中和狂犬病病毒街毒株,與狂犬病病毒糖蛋白保守的抗原決定簇結(jié)合,在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中對狂犬病病毒表現(xiàn)出高的中和效價。組合使用的人源化或全人狂犬病病毒中和性單克隆抗體應(yīng)當(dāng)分別識別不重疊的抗原表位。本文綜述了對抗狂犬病治療性抗體的基本要求,討論了尋求新的狂犬
中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志 2018年5期2018-01-17
- 對單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展的認(rèn)識
於瑞敏 陳贏對單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用研究進(jìn)展的認(rèn)識● 於瑞敏 陳贏單克隆抗體是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的重要內(nèi)容,本文對單克隆抗體的類別進(jìn)行了簡單分析,并且明確指出了現(xiàn)階段應(yīng)用的多種單克隆抗體制備技術(shù),同時,也對單克隆抗體制備技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展進(jìn)行了一定的介紹,希望能夠?yàn)槲覈茖W(xué)研究事業(yè)的發(fā)展提供一定的理論支持。單克隆抗體;制備技術(shù);應(yīng)用研究在分子生物學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展的影響下,單克隆抗體技術(shù)逐漸被應(yīng)用在多個領(lǐng)域。單克隆抗體就是用特定的培養(yǎng)基篩選出既能穩(wěn)定生
保健文匯 2017年12期2017-11-01
- 重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測技術(shù)應(yīng)用
重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測技術(shù)應(yīng)用食品潛在污染物種類繁多,發(fā)展簡便、快速、高靈敏、低成本的檢測方法是保障食品安全的根本途徑?;?span id="j5i0abt0b" class="hl">單克隆抗體的各類免疫分析技術(shù)是現(xiàn)代食品安全快速檢測技術(shù)發(fā)展的主要方向之一。因此,高活性單克隆抗體的制備及其應(yīng)用自然為眾多研究者所關(guān)注。單克隆抗體的制備過程涉及到很多技術(shù)環(huán)節(jié),包括抗原制備、免疫劑量設(shè)計(jì)、細(xì)胞融合、活性雜交瘤細(xì)胞篩選以及抗體純化等。江南大學(xué)胥傳來教授團(tuán)隊(duì)發(fā)展了基于理論模型來預(yù)測抗原抗體配對的新方
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2017年3期2017-04-07
- 單克隆抗體藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展
傅秀慧,劉曉志單克隆抗體藥物耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展張懷民1,傅秀慧2,劉曉志3*單克隆抗體藥物的問世,使疾病治療的方式發(fā)生了革命性的變化。過去的20年,單克隆抗體藥物在癌癥、自身免疫等疾病的治療領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用。單克隆抗體藥物低毒和高特異性優(yōu)勢是其成功的關(guān)鍵。單克隆抗體藥物的這兩個優(yōu)勢使其快速替代傳統(tǒng)的化學(xué)療法,但其治療效果也同樣受到耐藥性的困擾。耐藥性是導(dǎo)致單克隆抗體藥物治療效果被抑制的原因之一,單克隆抗體藥物靶向結(jié)合腫瘤細(xì)胞后又被清除的情況,稱為抗體的
實(shí)用藥物與臨床 2017年1期2017-04-03
- 抗雞白細(xì)胞介素4單克隆抗體的制備及鑒定
雞白細(xì)胞介素4單克隆抗體的制備及鑒定關(guān)曉宇,徐志超,王永強(qiáng),李曉齊,曹紅,鄭世軍中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100193為了制備雞白細(xì)胞介素4 (chIL-4) 單克隆抗體,將成熟的chIL-4基因亞克隆至原核表達(dá)載體pET-28a和pGEX-6P-1上,然后在大腸桿菌中分別誘導(dǎo)重組蛋白His-chIL-4和GST-chIL-4的表達(dá),并純化。將純化后的His-chIL-4作為免疫原免疫BALB/c小鼠,經(jīng)4次免疫后,取小鼠
生物工程學(xué)報(bào) 2017年1期2017-03-07
- 氨基端前B型鈉尿肽單克隆抗體的制備及其鑒定
端前B型鈉尿肽單克隆抗體的制備及其鑒定諶海蘭 陳 特 畢小云(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科,重慶 400016)目的 通過經(jīng)典單克隆抗體制備技術(shù)制備氨基端前B型鈉尿肽(NT-proBNP)單克隆抗體,將單克隆抗體進(jìn)行特異性和親和力鑒定,并用于免疫學(xué)檢測試劑盒的開發(fā)。方法 用帶His-Trx-標(biāo)簽蛋白的NT-proBNP免疫Balb/C小鼠制備單克隆抗體。使用PEG1500化學(xué)融合法將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合。用不帶標(biāo)簽的NT-proBNP
中國老年學(xué)雜志 2017年3期2017-02-28
- 抗鵝免疫球蛋白輕鏈單克隆抗體的鑒定及其應(yīng)用
免疫球蛋白輕鏈單克隆抗體的鑒定及其應(yīng)用郭永麗,高明春,羅修鑫,鞠環(huán)宇,安東,劉瑩,王君偉東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030郭永麗, 高明春, 羅修鑫, 等. 抗鵝免疫球蛋白輕鏈單克隆抗體的鑒定及其應(yīng)用. 生物工程學(xué)報(bào), 2016, 32(11): 1531?1538.Guo YL, Gao MC, Luo XX, et al. Characterization and application of a monoclonal antib
生物工程學(xué)報(bào) 2016年11期2016-12-12
- 傳染性囊病病毒(IBDV)VP3蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
V)VP3蛋白單克隆抗體的制備與鑒定王彬,李淑芹,李曉齊,曹紅,王永強(qiáng),鄭世軍(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京海淀100193)為制備抗IBDV VP3蛋白的單克隆抗體,以VP3-His蛋白免疫BALB/c小鼠,經(jīng)4次免疫、融合、亞克隆,篩選出1株能夠穩(wěn)定分泌抗VP3蛋白單克隆抗體的細(xì)胞株,命名為4H8F7C10。經(jīng)間接ELISA方法檢測,小鼠的腹水效價為2.05× 106,單克隆抗體的解離常數(shù)(kD)為9.67×10-8,此株抗體
中國獸醫(yī)雜志 2016年8期2016-11-11
- 人IgE-Fc結(jié)構(gòu)域的基因克隆、原核表達(dá)及單克隆抗體的制備
隆、原核表達(dá)及單克隆抗體的制備崔璐璐,畢嘉成,李俊鑫,劉綠艷,葉秀峰,鄭明星,萬曉春,于廣【摘要】目的通過制備小鼠抗人 IgE 單克隆抗體,為過敏性疾病的研究及診斷打下基礎(chǔ)。方法以 CRL8033 細(xì)胞的 cDNA 為模板擴(kuò)增人 IgE Fcε3-4 段基因序列并將其連接到 pET-32a(+) 載體中,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)大腸桿菌并進(jìn)行表達(dá)。然后將表達(dá)所得包涵體進(jìn)行變復(fù)性,把復(fù)性所得蛋白進(jìn)行親和純化,通過 SDS-PAGE驗(yàn)證純化效果。最后將純化的蛋白
中國醫(yī)藥生物技術(shù) 2016年3期2016-06-21
- 細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率的比較※
科)細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率的比較※劉 燕1,朱吉海2,孫 偉1,趙 珺1(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;2.青海大學(xué)附屬醫(yī)院心胸外科)目的 比較細(xì)胞轉(zhuǎn)染中單克隆與混克隆干擾基因效率。方法 采用胃泌素特異干擾載體轉(zhuǎn)染人胃癌原代細(xì)胞株L25,經(jīng)G418抗性篩選獲得混克隆和單克隆細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR、Western blot和免疫熒光三種方法對混克隆細(xì)胞和單克隆細(xì)胞干擾胃泌素基因的效率進(jìn)行比較。結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示混克隆細(xì)胞胃泌素mRNA
中國高原醫(yī)學(xué)與生物學(xué)雜志 2016年4期2016-04-19
- 單克隆抗體治療炎癥性腸病的進(jìn)展
230601)單克隆抗體治療炎癥性腸病的進(jìn)展聶琳,章禮久(安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,安徽 合肥230601)摘要:治療炎癥性腸病應(yīng)用較為廣泛的抗腫瘤壞死因子藥物,出現(xiàn)了很多治療失敗的情況。各種新型的有潛力成為治療IBD的藥物已經(jīng)被多個臨床試驗(yàn)所評估,考慮到單克隆抗體的靶向性較好,副作用較少等優(yōu)點(diǎn),該文收集了最新的相關(guān)文獻(xiàn)并歸納總結(jié)了單克隆抗體治療IBD的進(jìn)展。關(guān)鍵詞:結(jié)腸炎,潰瘍性;克羅恩?。豢贵w,單克隆炎癥性腸病(inflammatorybowe
安徽醫(yī)藥 2016年5期2016-03-18
- 單克隆抗體的制備現(xiàn)狀及應(yīng)用前景
610021)單克隆抗體的制備現(xiàn)狀及應(yīng)用前景劉 曦(信息產(chǎn)業(yè)電子第十一設(shè)計(jì)研究院科技工程股份有限公司,四川成都 610021)隨著我國細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)以及分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,單克隆抗體作為重要的生命科技相關(guān)研究技術(shù)在食品、農(nóng)業(yè)、生物科技以及醫(yī)學(xué)等各不同領(lǐng)域均得到較為廣泛的應(yīng)用。其在蛋白質(zhì)的相關(guān)結(jié)構(gòu)以及功能和基因工程等相關(guān)方面發(fā)揮著極為重要的作用,現(xiàn)本文主要對單克隆抗體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的相關(guān)疾病診斷以及疾病治療等方面進(jìn)行闡述。單克隆抗體;制備;應(yīng)用前景近年來,
化工設(shè)計(jì)通訊 2016年4期2016-03-13
- 豬偽狂犬病毒單克隆抗體的研究進(jìn)展
張秋月單克隆抗體是指由雜交瘤細(xì)胞分泌,針對復(fù)合抗原分子上單個抗原決定簇的抗體。其制備原理是將骨髓瘤細(xì)胞sp2/0和免疫過的小鼠的脾細(xì)胞在促融劑作用下融合,然后檢測其上清液的抗體,將陽性孔經(jīng)過4~5次亞克隆之后進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),收集上清液及制備腹水,最后將雜交瘤細(xì)胞凍存起來以備將來所需。隨著科技的發(fā)展,單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用也更加廣。由于其可以針對特異的抗原決定簇,可用于疾病的特異性治療。血清治療根據(jù)定義可知其是運(yùn)用免疫血清來治療疾病,但是血清包含的免疫球蛋白是多
新農(nóng)業(yè) 2015年6期2016-01-05
- 胃泌素釋放肽前體雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法的建立及其應(yīng)用
驗(yàn)室自行研制的單克隆抗體進(jìn)行篩選;采用改良過碘酸鈉法對抗體進(jìn)行辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標(biāo)記,從而建立雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA),并將此方法應(yīng)用于癌癥患者PGRP濃度的檢測,現(xiàn)報(bào)道如下。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 PGRP抗原(本實(shí)驗(yàn)室自行研制);抗原決定簇PGRP(31-98)序列中N端到C端的3個抗原肽段—GSLKQQLRE
醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào) 2015年1期2015-09-28
- 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較
楊芳化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較楊芳目的 對比化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果。方法 選取大便標(biāo)本90例,采用化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種試驗(yàn)方法,對其進(jìn)行便隱血檢測。結(jié)果 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法3種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出率分別為2、0.2、0.2mg/ L;化學(xué)法對人和動物的血紅蛋白可發(fā)生反應(yīng),聯(lián)合免疫法和單克隆抗體僅和人的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng);維生素C濃度超過10g/L可引起化學(xué)法的陰性結(jié)
當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2015年7期2015-07-31
- 臨床三種常規(guī)糞便隱血實(shí)驗(yàn)的方法學(xué)評估
洞法、血紅蛋白單克隆抗體法(單克隆抗體法)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(Tf)/血紅蛋白(Hb)聯(lián)合免疫法(聯(lián)合免疫法)進(jìn)行性能評估。方法通過300例臨床樣本和不同的動物血紅蛋白(Hb)、維生素C(VitC)進(jìn)行檢測,從靈敏度、干擾性實(shí)驗(yàn)、反應(yīng)時間等檢測指標(biāo)來反映三種方法的檢驗(yàn)效能。結(jié)果匹拉米洞法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測Hb最低濃度分別為2.5μg/ml、0.1μg/ml、0.1μg/ml,聯(lián)合免疫法檢測Tf的最低濃度為0.05μg/ml。匹拉米洞法可以和人以及不同動
海南醫(yī)學(xué) 2015年7期2015-04-13
- 單克隆抗體制備的篩選過程及意義
摘要:隨著單克隆抗體技術(shù)應(yīng)用的愈加廣泛,其生產(chǎn)技術(shù)也日臻完善。本文就單克隆抗體制備的篩選過程及意義進(jìn)行了闡述。關(guān)鍵詞:單克隆;抗體;篩選中圖分類號:R392 文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A 文章編號: 1674-0432(2014)-17-20-11975年英國劍橋皇家醫(yī)學(xué)委員會分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的Kohler和Milstein成功的用細(xì)胞雜交方法把能夠產(chǎn)生針對特定抗原的抗體分泌細(xì)胞分離出來,在體外長期傳代并分泌特異性抗體,這些細(xì)胞經(jīng)過克隆化,可以形成單克隆細(xì)胞,能產(chǎn)生針
吉林農(nóng)業(yè) 2014年9期2014-09-18
- EPO單克隆抗體抑制CFU-E研究
,陳 有EPO單克隆抗體抑制CFU-E研究黃學(xué)文,李素芝,黃 躍,謝曉餓,劉厚東,閆春城,石泉貴,丁浩平,何 鋒,陳 有目的 探討EPO單克隆抗體是否具有抑制紅系集落形成單位(CFU-E)形成的功能。方法 對大鼠骨髓進(jìn)行定向體外CFU-E培養(yǎng),按以下條件進(jìn)行分組培養(yǎng):空白對照組(不加EPO)、常規(guī)組(加EPO,不加EPO單克隆抗體)、EPO單克隆抗體干預(yù)組(EPO+EPO單克隆抗體)。培養(yǎng)168 h后,觀察各組CFU-E數(shù)量。結(jié)果 空白對照組、常規(guī)組、EP
西南國防醫(yī)藥 2014年1期2014-07-25
- C型凝集素受體Dectin-2和Dectin-3的單克隆抗體制備
ectin-3單克隆抗體的單克隆雜交瘤細(xì)胞,并初步鑒定其生物學(xué)活性,為進(jìn)一步研究Dectin-2和Dectin-3的生物學(xué)功能研究提供有效的工具。1 材料與方法1.1 材料質(zhì)粒 pET28a(+)、pRV3-Dectin-2、pRV3-Dectin-3及菌株E.coliDH5α與BL21(DE3)由本實(shí)驗(yàn)室保存;RT-PCR反應(yīng)試劑盒、高保真DNA聚合酶購自美國TaKaRa公司;限制性內(nèi)切酶BamHⅠ、XholⅠ和T4 DNA連接酶購自美國Thermo公司
- 用血清游離輕鏈分析法檢測單克隆Y-病
輕鏈分析法檢測單克隆Y-病王繼貴(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院,湖南長沙410011)單克隆免疫球蛋白游離輕鏈,對單克隆γ-病是一種重要的診斷標(biāo)志物.150多年來一直沿用尿加熱試驗(yàn)檢查Bence-Jones蛋白,以及用血清蛋白電泳及尿蛋白電泳檢查M蛋白區(qū)帶,診斷單克隆γ-病.這些方法敏感度低,特異性差,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足該病診斷和分類的要求.近十年來,發(fā)展了血清游離輕鏈的自動化免疫試驗(yàn),能獨(dú)立地測定κ鏈、λ鏈、κ/λ比率和游離輕鏈總量,大大地提高了單克隆γ-病的診斷、分類
實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué) 2014年3期2014-04-04
- 化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較
000化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床比較張野鐵嶺市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧鐵嶺112000目的探討化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法檢測便隱血的臨床效果。方法選取該院2013年5月—2014年5月間收治的大便標(biāo)本90例作為研究對象,通過靈敏性、干擾性和特異性對化學(xué)法、單克隆抗體法和聯(lián)合免疫法三種試驗(yàn)方法進(jìn)行比較,并采用三種試驗(yàn)方法同時對90例大便標(biāo)本進(jìn)行便隱血檢測。結(jié)果聯(lián)合免疫法、化學(xué)法以單克隆抗體法三種方式檢測出血紅蛋白的最低檢出濃度分別為2
中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè) 2014年36期2014-03-07
- 犬瘟熱病毒截短P蛋白單克隆抗體的制備與鑒定
V)P1蛋白的單克隆抗體(McAb),本研究利用重組犬瘟熱病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并將其脾淋巴細(xì)胞與SP2/0進(jìn)行融合,用CDV包被ELISA板,通過間接ELISA法篩選出兩株穩(wěn)定分泌抗CDV-P1的雜交瘤細(xì)胞株(E9E4C10、E9F8D9)。間接ELISA檢測腹水效價均為1∶106,亞類鑒定結(jié)果均為IgG2b。Western blotting和間接免疫熒光(IFA)分析結(jié)果表明,兩株單克隆抗體均能與重組P1蛋白和CDV發(fā)生反應(yīng);ELISA疊加
中國畜牧獸醫(yī)文摘 2014年3期2014-01-27
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒單克隆抗體的制備和鑒定
。對PRRSV單克隆抗體的研究可為PRRSV快速檢測方法的建立提供技術(shù)支持,是PRRS研究中的熱點(diǎn)之一。本研究采用純化的PRRSV全病毒作為抗原,通過淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù),獲得了高親和力、高特異性抗PRRSV M蛋白的單克隆抗體,并對單克隆抗體的生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定,為建立基于單克隆抗體的雙抗體夾心ELISA、間接免疫熒光試驗(yàn)、膠體金試紙條等快速檢測技術(shù)奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 毒種和細(xì)胞PRRSV HUB1毒株、Marc-145細(xì)胞、小鼠骨髓瘤SP2
中國動物檢疫 2012年9期2012-09-11
- HER-2陽性乳腺癌靶向治療藥物研究進(jìn)展
加以綜述。1 單克隆抗體1.1 曲妥珠單克隆抗體 曲妥珠單克隆抗體(trastuzumab)是人源化的重組抗HER-2單克隆抗體,是一個95%來自人和5%來自鼠的IgG抗體。曲妥珠單克隆抗體能夠選擇性作用于HER-2的細(xì)胞外部分,通過阻斷HER-2介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、降低細(xì)胞膜HER-2蛋白濃度、加速HER-2受體蛋白降解、參與抗血管生成作用導(dǎo)致細(xì)胞生長受抑制和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,以及通過ADCC誘導(dǎo)機(jī)體殺死腫瘤細(xì)胞。曲妥珠單克隆抗體是針對HER-2靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的第
實(shí)用醫(yī)藥雜志 2012年8期2012-04-13