蜂王漿抗氧化作用研究進(jìn)展

王 琦，劉玉玲，蘭鳳明，王 志

（吉林省養(yǎng)蜂科學(xué)研究所，吉林 吉林 132108）

自由基是一些帶有未成對(duì)電子的原子或基團(tuán)，化學(xué)性質(zhì)活潑，具有很強(qiáng)的氧化性（HAN L，2017）。生物體在日常新陳代謝過程或受電磁輻射、環(huán)境污染外界因素影響會(huì)產(chǎn)生一系列的自由基，主要指活性氧，如O2-、OH-、DPPH（王晨慧，2020） 等。自由基的強(qiáng)氧化性對(duì)生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、脂肪等分子具有很強(qiáng)的破壞作用，干擾細(xì)胞的正常生理活動(dòng)（Floyd，2010；何軒，2013）。為了減少自由基的損傷，維持正常的生命活動(dòng)，生物體內(nèi)具有一套完整的自由基清除系統(tǒng)，使生物體氧化和抗氧化作用達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡（劉國艷，2002）。而當(dāng)這種平衡被打破后，生物體便會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成氧化損傷。據(jù)研究，細(xì)胞線粒體、DNA、脂質(zhì)過氧化等氧化損傷可引起細(xì)胞損傷、腫瘤、免疫損傷等疾病，也是衰老的主要原因之一（FINKEL ，2000）。因此，針對(duì)抗氧化機(jī)理、抗氧化物質(zhì)展開研究對(duì)人類健康具有重要意義。

目前，已有多項(xiàng)研究表明一些食品及其提取物具有良好的自由基清除和抗氧化能力（吳國宏，2020；Ruch，1989；Frankel，1995）。蜂王漿是蜂群中哺育蜂頭部腺體的分泌物，主要用于哺育3 日齡以下幼蟲和飼喂蜂王，同時(shí)對(duì)蜜蜂的級(jí)型分化起著重要作用（王華峰，2018）。蜂王漿營養(yǎng)價(jià)值豐富，富含氨基酸、蛋白質(zhì)、糖類、脂肪酸、維生素等人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)。此外，蜂王漿中特有的王漿酸（10-HDA）、王漿主蛋白（MRJPs 蛋白質(zhì)族）等活性物質(zhì)使得蜂王漿具有一定的藥用價(jià)值（Filippo，2016）。已有研究表明，蜂王漿在抗菌消炎、抗衰老、預(yù)防癌癥以及保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等方面均有一定的積極意義。除此之外，蜂王漿還是一種不可多得的抗氧化劑，因此，已有學(xué)者在該領(lǐng)域展開了一系列研究。

1 蜂王漿中的主要抗氧化物質(zhì)

蜂王漿的抗氧化功效與其高活性成分有關(guān)，總體而言，目前蜂王漿中抗氧化物質(zhì)大致可分為酶類和非酶類兩種。蜂王漿中的王漿酸（10-HDA）、王漿主蛋白（MRJPs） 等蛋白質(zhì)類、肽類、酚類、超氧化物歧化酶等物質(zhì)均具有一定的抗氧化活性，這些物質(zhì)的協(xié)同作用能夠有效清除生物體內(nèi)活性氧，減輕生物氧化損傷。

1.1 10-HDA 的抗氧化作用

10-HDA，即10-羥基- 癸烯酸，蜂王漿中特有的一種不飽和脂肪酸，因此也被稱為王漿酸，可占蜂王漿濕重的1.4%～1.8%左右（Bogdanov S，2011）。10-HDA的抗氧化作用與其化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。在10-HDA 的第10個(gè)碳原子上存在一個(gè)羥基, 此羥基由于氧原子的電負(fù)性較大,故氫原子上的電子較易失去,從而起到抗氧化作用（侯春生，2008）。Makino（2016） 發(fā)現(xiàn)10-HDA 的抗氧化作用是通過提高EC-SOD 的表達(dá)所實(shí)現(xiàn)的；結(jié)果表明，蜂王漿中10-HDA 及其衍生物4-HPO-DAEE 以及其他兩種脂肪酸（10-HDAA、DEA） 均能通過抑制組蛋白脫乙酰酶的活性來增強(qiáng)組蛋白H4 的乙?；瘉硖岣逧S-SOD 的表達(dá)，其中10-HDA 衍生物4-HPO-DAEE 的作用更強(qiáng)，這源于它除H4 外還能夠提高H3 的乙?；?/p>

1.2 蛋白質(zhì)及其酶解產(chǎn)物的抗氧化作用

MRJPs 是蜂王漿中特有的蛋白質(zhì)族，具有極高的生物活性，有著一定的抗氧化活性。Park（2020） 研究了重組蛋白AmMRJPs1-7 的抗氧化功效，結(jié)果表明，AmMRJPs1-7 可以通過降低Caspase-3 的活性起到抗氧化的作用，其中AmMRJPs2-5 的效果明顯；而且研究還證實(shí)了AmMRJPs1-7 清除DPPH 自由基的抗氧化能力，同樣是AmMRJPs2-5 的效果明顯。Gu（2018） 將蜂王漿酶解，并測(cè)定了其抗氧化活性，結(jié)果表明相同濃度下酶處理的蜂王漿對(duì)DPPH 的清除活性比蜂王漿高20%。朱作藝（2020） 發(fā)現(xiàn)蜂王漿蛋白肽對(duì)ABTS 自由基、DPPH 自由基、羥自由基以及超氧陰離子均有清除能力，其中對(duì)羥自由基的清除能力最強(qiáng)，多肽的抗氧化活性受氨基酸序列影響；此外，蜂王漿原蛋白并不具備抗氧化活性，其抗氧化活性主要來自蛋白酶的水解產(chǎn)物。Nagai T（2006） 使用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶三種蛋白酶對(duì)蜂王漿進(jìn)行處理后測(cè)定其抗氧化活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與蜂王漿水提物和酶提物相比，經(jīng)過蛋白酶處理的蜂王漿抗氧化活性較高。這表明蜂王漿經(jīng)蛋白酶處理后的分解產(chǎn)物的抗氧化活性確實(shí)高于蜂王漿本身，但蜂王漿本身是否也存在抗氧化作用仍需要進(jìn)一步研究。

1.3 超氧化物歧化酶（SOD） 的抗氧化作用

超氧化物歧化酶（SOD） 能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成氧和過氧化氫，在人體的氧化和抗氧化平衡中起到至關(guān)重要的作用。Jeon（2014） 采用H2O2處理人類肝癌細(xì)胞HepG2，對(duì)蜂王漿的抗氧化作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，蜂王漿能有效減少過氧化脂的生成量，SOD 活性明顯增高，并表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性，這與SOD 的自由基清除作用有關(guān)。與Jamnik（2007） 發(fā)現(xiàn)蜂王漿在酵母細(xì)胞中起抗氧化作用存在劑量依賴的結(jié)論相符。Asadi（2019） 研究了使用蜂王漿對(duì)精索靜脈曲張大鼠的保護(hù)作用，該病由氧化應(yīng)激反應(yīng)所導(dǎo)致，睪丸中的脂質(zhì)過氧化增多，并破壞精子生成周期，最終導(dǎo)致不孕不育；研究發(fā)現(xiàn)RJ 治療組大鼠體內(nèi)SOD 水平顯著上升，具有明顯的抗氧化作用，能夠有效改善由該病所引起的睪丸退化。

2 蜂王漿抗氧化活性的影響因素

通過研究發(fā)現(xiàn)，蜂王漿中含有大量具有抗氧化作用的活性物質(zhì)，能夠起到清除機(jī)體自由基，維持氧化-抗氧化平衡的作用。而因取漿時(shí)間、貯藏溫度、處理方式等差異，蜂王漿的抗氧化活性也存在一定差異。

2.1 取漿時(shí)間

Zheng（2011） 對(duì)24 h、48 h、72 h 采收的蜂王漿成分進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，24 h 樣品中10-HDA和蛋白質(zhì)含量隨著時(shí)間增加而減少，而SOD 活性則無明顯變化。Liu（2008）則認(rèn)為24 h 采收的蜂王漿中SOD 活性在大多數(shù)情況下顯著高于48 h 和72 h，這可能與蜂群的地理、遺傳差異有關(guān)。因此，隨著采收時(shí)間的增加，蜂王漿中抗氧化活性物質(zhì)減少，可能會(huì)對(duì)蜂王漿抗氧化效果產(chǎn)生影響。這在諶迪（2020） 的研究中得到了驗(yàn)證，蜂王漿的抗氧化活性與MRJPs 含量存在一定正相關(guān)性；不同月份采收的蜂王漿中MRJPs 含量存在差異，總抗氧化活性也不同，其中5 月和9 月采收的蜂王漿總抗氧化能力最強(qiáng)。這與不同月份的氣溫不同有關(guān)，因此貯藏溫度對(duì)蜂王漿抗氧化活性也存在影響。

2.2 貯藏

陳婉玉（2013） 發(fā)現(xiàn)蜂王漿中SOD 活性與貯藏溫度及貯藏時(shí)間有關(guān)，其活性隨著貯藏溫度的升高和貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。而在朱紅娟（2013） 的研究中卻發(fā)現(xiàn)，蜂王漿的DPPH 自由基清除能力雖然在貯藏期中有所下降，但除了新鮮蜂王漿外，清除能力最強(qiáng)的為4℃下貯藏了6 個(gè)月的樣品。這可能與蜂王漿中其他不同活性成分的共同作用有關(guān)，具體機(jī)理尚待研究。

2.3 不同處理

姜建輝分析了新疆黑蜂蜂王漿的水溶性蛋白酶解產(chǎn)物的最佳酶解條件，結(jié)果顯示在溫度37℃、反應(yīng)時(shí)間3 h、pH 2.0、E/S 2.5%時(shí)，酶解產(chǎn)物抗氧化活性最佳。Nabas Z（2014） 將蜂王漿和不同益生菌進(jìn)行混合測(cè)定其抗氧化活性，結(jié)果表明，蜂王漿與益生菌的合生元作用具有顯著的抗氧化作用；其中添加7.5%蜂王漿和2.5%蜂王漿的嗜酸乳桿菌發(fā)酵乳樣品在500μg/mL 濃度下，對(duì)自由基可達(dá)96.8%和93.3%的清除率。王藝（2019） 研究了超聲波處理對(duì)蜂王漿蛋白功能和結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果表明，超聲波處理能夠改善蜂王漿水解物的抗氧化活性，這與超聲波改變了其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)。

2.4 其他蜂王漿產(chǎn)品

除新鮮蜂王漿外，市面上仍有許多蜂王漿產(chǎn)品銷售。陳艷珍（2014） 發(fā)現(xiàn)，由真空低溫干燥制成的蜂王漿凍干粉仍具有抗氧化功效，可提高實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)兩種抗氧化酶SOD 和CAT 的活性，從不同程度上延緩由于注射D-半乳糖引起小鼠體內(nèi)的擬衰老變化。通過環(huán)糊精包和技術(shù)支撐的蜂王漿-β- 環(huán)糊精包合物能夠有效提高蜂王漿的穩(wěn)定性和水溶性（劉佳霖，2018）。劉佳霖（2019） 研究發(fā)現(xiàn)蜂王漿-β- 環(huán)糊精包合物內(nèi)活性物質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值與新鮮蜂王漿基本一致，自由基清除能力和總抗氧化能力有所減弱，但其抗氧化作用更加持久，而且具有良好的穩(wěn)定性和水溶性等優(yōu)點(diǎn)。

3 展望

蜂王漿是蜂王發(fā)育、產(chǎn)卵的“秘密武器”，其營養(yǎng)價(jià)值不言而喻。各國學(xué)者自發(fā)現(xiàn)蜂王漿的抗氧化作用以來便開展了一系列的研究，但有一些問題尚未解決。首先，關(guān)于蜂王漿中的王漿主蛋白本身是否具有抗氧化活性仍存在一定爭(zhēng)議，一部分學(xué)者認(rèn)為其本身就具有一部分活性；但另一部分學(xué)者則認(rèn)為原蛋白并不具備抗氧化活性，而其經(jīng)過酶解后的產(chǎn)物具有抗氧化活性。其次，蜂王漿在貯藏過程中抗氧化活性變化的相關(guān)機(jī)理有待進(jìn)一步研究。最后，大部分研究均從單一角度或少數(shù)幾個(gè)角度進(jìn)行分析，如王漿酸的抗氧化活性研究、不同處理下王漿主蛋白抗氧化活性的變化等；而實(shí)際上，蜂王漿的抗氧化作用是在如王漿酸、王漿主蛋白、酚類、酶類等多種因素的共同作用下發(fā)揮作用的。因此，統(tǒng)籌多種不同因素對(duì)蜂王漿的抗氧化作用及其機(jī)理進(jìn)行分析是其未來的研究方向之一。

此外，已有研究表明過度的氧化應(yīng)激反應(yīng)是阿爾茨海默等神經(jīng)類疾病的誘因之一（Swomley，2017）。而近年來，人們逐漸發(fā)現(xiàn)了蜂王漿對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)與修復(fù)作用（Yamaura，2013），因此該領(lǐng)域可能是未來蜂王漿抗氧化作用及藥用價(jià)值的研究方向之一。