檢驗(yàn)功能性提取物抗過敏活性方法綜述

李 晶 ，張夢潔 ，邢麗杰 ， 羅瑞峰

（1. 新疆農(nóng)墾科學(xué)院，新疆石河子 832000；2. 石河子大學(xué)食品學(xué)院，新疆石河子 832000）

0 引言

過敏反應(yīng)（Allergic reaction），是常見的一類機(jī)體免疫反應(yīng)[1]。由于體質(zhì)不同，人們過敏反應(yīng)癥狀也不同，輕者可以引起皮疹、呼吸不暢，重者可致過敏性休克甚至死亡。根據(jù)免疫反應(yīng)機(jī)制不同，又分為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ型，常見的是Ⅰ型與身體中透明質(zhì)酸酶活性有關(guān)[2-3]。過敏是一種免疫應(yīng)答，由外源性或內(nèi)源性抗原攻擊細(xì)胞導(dǎo)致的免疫損傷。大多數(shù)的食物過敏是由牛乳、雞蛋、魚和甲殼類水產(chǎn)物、堅果類、麥類、動物皮毛、花粉、某些化學(xué)物質(zhì)等引起的[4-5]。

食物過敏原：①牛乳。牛乳中大部分成分都可以導(dǎo)致過敏，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，以牛乳酪蛋白的致敏性較強(qiáng)[6-7]。由牛乳蛋白過敏原引發(fā)的食物過敏不良反應(yīng)稱為牛乳過敏，兒童牛乳過敏較為常見，據(jù)報道約有2.5%的幼兒出現(xiàn)過牛乳過敏癥狀[8]。②雞蛋。蛋清中許多成分導(dǎo)致過敏，其中主要過敏原有溶菌酶、卵類黏蛋白和卵白蛋白（Ovalbumin，OVA）[9]，其中含量最多的是卵白蛋白OVA[10]。雞蛋過敏是一種較常見的食物過敏，在兒童過敏中雞蛋過敏最為普遍。③蝦。蝦味道鮮美、營養(yǎng)豐富，普遍受人歡迎，但易致敏。在易引起食物過敏的食物中，蝦及其制品是非常重要的一類，聯(lián)合國糧農(nóng)組織相關(guān)研究部門將其列入八大類易致敏食物中[11]。蝦中主要的過敏物質(zhì)有磷酸丙糖異構(gòu)酶（Triosephosphate isomerase）[12]、原肌球蛋白 （Tropomyosin）[13]、血藍(lán)蛋白 （Hemocyanin）[14]、精氨酸激酶 （Arginine kinase）[15]等。

據(jù)報道，目前全世界約有22%的人受過敏性疾病的困擾，中國則約有 2 億多人患有過敏性疾病，并且每年患病率只增不減[16]。現(xiàn)如今已有很多抗過敏活性成分被發(fā)現(xiàn)，比如一些功能性多糖、類黃酮化合物、多酚類化合物、益生菌等。對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的試驗(yàn)方法的研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，以期為抗過敏研究提供參考。食物過敏目前研究的方法主要分為體內(nèi)和體外2 個方面。

1 試驗(yàn)動物抗過敏試驗(yàn)方法

1.1 過敏性休克試驗(yàn)法

過敏性休克試驗(yàn)法是將過敏原(如異種動物蛋白和血清)刺激機(jī)體產(chǎn)生IgE 抗體，使試驗(yàn)動物處于過敏狀態(tài)。當(dāng)過敏動物再次接觸相同過敏原時，動物體內(nèi)產(chǎn)生的抗體與對應(yīng)的抗原結(jié)合，引起肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放出組織胺等過敏化學(xué)物質(zhì)，過敏物質(zhì)會作用于血管導(dǎo)致過敏性休克[1]。

金亞宏等人[17]在茵陳五芩散抗變態(tài)反應(yīng)作用研究中的試驗(yàn)方法是將馬血清靜脈注射豚鼠使其過敏，然后用馬血清抗原再刺激，在注射抗原刺激前1 h 給藥。觀察記錄豚鼠過敏癥狀及死亡狀況，過敏體征表現(xiàn)按體征積分進(jìn)行統(tǒng)計比較為：0 =無明顯癥狀；1 =撓鼻子和撓頭；2 =眼睛腫脹，行動緩慢，呼吸緊張，瀉肚；3 =呼吸困難，眼睛呆滯；4 =抽搐，無法行動；5 =死亡。

Tianyi Jiang 等人[18]用卵清蛋白將小鼠致敏，此試驗(yàn)設(shè)計了預(yù)防組合治療組，預(yù)防組從0～42 d 每隔1 d灌胃口服大棗cAMP 提取物，治療組在36～42 d 每天灌胃口服大棗提取物，觀察體征表現(xiàn)和休克死亡情況。例如，試驗(yàn)動物能減少過敏體征表現(xiàn)，或能抑制過敏性休克死亡，即表示該抗過敏物質(zhì)大棗提取物具有抗過敏作用。

該方法是研究抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)作用的常用方法，機(jī)理清晰、操作簡單、結(jié)果真實(shí)。

1.2 被動皮膚過敏反應(yīng)

被動皮膚過敏反應(yīng)（PCA reaction），是一種局部過敏反應(yīng)，給予受體同種或異種動物有結(jié)合性質(zhì)的抗體所引起的過敏，是檢測抗體或者抗原的敏感度的試驗(yàn)方法[19]。

大鼠或小鼠同種被動皮膚過敏試驗(yàn)法：使大鼠或小鼠過敏后再給予相同抗原刺激，引起肥大細(xì)胞產(chǎn)生一些過敏物質(zhì)，這些物質(zhì)使皮膚血管的通透性增加，這個過程稱之為肥大細(xì)胞脫顆粒。在給予抗原刺激時，注入染料，染料就可滲透入皮膚，根據(jù)局部皮膚染料滲透的多少，可判斷血管通透性的變化。可用比色測定法測定，也可直接測量顏色反應(yīng)斑的大小[20-21]。

王欽富[22]炒紫蘇子醇提物抗過敏試驗(yàn)采用這種方法，采用大鼠抗卵白蛋白抗體，測定藥物對抗原攻擊的過敏體征所產(chǎn)生藍(lán)斑大小的影響。對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，對比各組抑制IgE 所致的I 型過敏反應(yīng)的效果，從而得出了最佳炒紫蘇子組分和劑量。

2 體外抗過敏試驗(yàn)方法

2.1 肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)

在動物機(jī)體各處的微血管周邊廣泛分布肥大細(xì)胞（Mast cell）。肥大細(xì)胞可以產(chǎn)生許多調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)平衡的物質(zhì)，也可以參與免疫反應(yīng)，生產(chǎn)一定量的IgE Fc 受體，釋放過敏介物質(zhì)，具有簡單的胞吞功能。并且肥大細(xì)胞具有強(qiáng)嗜堿性顆粒，存在于血液中的這些顆粒（如組織胺、肝素等） 通過肥大細(xì)胞崩解釋放，會在組織內(nèi)引起炎癥，稱為速發(fā)型過敏反應(yīng)，該過程稱為肥大細(xì)胞脫顆粒[19]。

Sakai S 等人[23]利用肥大細(xì)胞模型探究類胡蘿卜素的作用，結(jié)果表明類胡蘿卜素可以通過抑制過敏誘導(dǎo)的IgE 聚合而抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的產(chǎn)生。Gao Y 等人[24]研究發(fā)現(xiàn)，深海放線菌代謝產(chǎn)物 CDMW 可誘導(dǎo)激活之后肥大細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而影響肥大細(xì)胞釋放過敏介質(zhì)。Sheikh R 等人[25]采用抗原誘導(dǎo)RBL-2H3 細(xì)胞脫顆粒模型研究蓮子草醇提物的抗過敏活性，研究發(fā)現(xiàn)蓮子草醇提物可以顯著減少β -氨基己糖苷酶的釋放和抑制過敏反應(yīng)，證明了蓮子草醇提物具有一定的抗過敏活性，為今后的藥物開發(fā)提供了研究依據(jù)。Doseok H 等人[26]研究了 40 種黃酮類化合物對肥大細(xì)胞脫顆粒的抑制作用，證明了幾種黃酮類化合物具有一定的抗過敏功效。

肥大細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)普遍在抗過敏試驗(yàn)中應(yīng)用，是一種條理清晰、技術(shù)成熟的抗過敏試驗(yàn)方法。

2.2 透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)

透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase） 可以降低透明質(zhì)酸活性，從而達(dá)到提高組織中液體滲透力目的的酶[19]?？姑羲幠芤种仆该髻|(zhì)酸酶的活性，因此將抗敏物質(zhì)加入透明質(zhì)酸酶中，檢測酶抑制活性是研究抗過敏作用的一項指標(biāo)。

李楊等人[27]研究中草藥提取物的抗過敏功效時，采用了透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)，測定茶多酚、防風(fēng)多糖、仙人掌、洋甘菊等草藥提取物對透明質(zhì)酸酶活性的抑制率，利用紫外分光光度計測定吸光度，計算各草藥提取物抑制率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這幾種草藥提取物或成分均表現(xiàn)一定的抗過敏功效。

韋保耀等人[28]以我國藥食兼用的紫蘇葉提取物HA，HB，HC，HD 作為研究對象，采用透明質(zhì)酸酶體外試驗(yàn)。結(jié)果表明，紫蘇提取物HD 能顯著抑制透明質(zhì)酸酶活性，紫蘇提取物HC 次之。證明紫蘇葉提取物HD 抗過敏功效最好。

透明質(zhì)酸酶體外抑制試驗(yàn)作為植物有效成分的初步篩選方法，具有簡便、快捷的優(yōu)點(diǎn)。

3 結(jié)語

越來越多的研究表明，多種功能食品具有抗過敏作用。隨著食品醫(yī)藥學(xué)及其他學(xué)科的發(fā)展，抗過敏試驗(yàn)研究方法也在不斷完善，努力探索出組分的作用機(jī)理。運(yùn)用現(xiàn)代試驗(yàn)手段研究功能性食品，將有助于發(fā)掘效果好、無毒、無副作用的抗過敏功能食品，并可能為該類疾病的防治提供有效的預(yù)防改善措施。