現(xiàn)代分離技術(shù)在藥品分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展

唐郡遙

（沈陽(yáng)藥科大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

藥物分析是藥品質(zhì)量保障的關(guān)鍵，隨著人們對(duì)美好生活的追求，醫(yī)藥工業(yè)面臨著激烈的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)，因此對(duì)藥物分析提出了更高的要求。在藥品結(jié)構(gòu)認(rèn)證及藥品鑒定中常采用色譜法與毛細(xì)管電泳法解決問題。氣相色譜技術(shù)現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用，是一種高選擇性、操作簡(jiǎn)單的技術(shù)，一般對(duì)固定液載體要求較高，在中藥揮發(fā)油分析、體內(nèi)藥物分析、溶劑殘留分析中發(fā)揮重要作用。高效液相色譜技術(shù)由于不受試樣揮發(fā)性限制，應(yīng)用范圍更廣，選擇性高。毛細(xì)管電泳法注效很高，溶劑和試樣消耗少，通過改變操作與緩沖溶液組成可以使選擇性提高，從而被廣泛應(yīng)用。

1 氣相色譜法

1.1 西藥

托莫西汀的半衰期約為5 h，在代謝不良者中可達(dá) 21 h，因此分析托莫西汀含量是非常重要的。KUL[1]等利用氣相色譜法分析血漿中托莫西汀的含量。該方法分析時(shí)間短，樣品制備簡(jiǎn)單，定量下限為200 ng·mL-1，相關(guān)系數(shù)＞0.99。全血樣品雙氯芬酸雖被認(rèn)為是安全性較高的藥物，但對(duì)于動(dòng)物群類而言具有劇毒性。因此 SZPOT[2]等結(jié)合電子沖擊建立了一種超靈敏的氣相色譜法，經(jīng)采用雙氯芬酸-d4作為內(nèi)標(biāo)，在多反應(yīng)模式下測(cè)定分析物，回收率和基質(zhì)效應(yīng)值分別在 92.2%~105.9%和 7.8%~5.9%之間。同時(shí)，氣相色譜也廣泛應(yīng)用于分析沉淀藥物的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，DAVIDSON[3]等在此提供了在 3個(gè)不同實(shí)驗(yàn)室的5種不同儀器上測(cè)量的13種不同藥物標(biāo)準(zhǔn)的GC-MS測(cè)量的附加結(jié)果，經(jīng)過數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示一些離子豐度與相關(guān)系數(shù)超過0.9，得出結(jié)論GC方法測(cè)定更嚴(yán)格。LIU[4]等在沙坦類藥物中，建立了一種氣相色譜-質(zhì)譜方法，通過測(cè)定沙坦類藥物中的n-亞硝胺從而觀測(cè)檢測(cè)范圍，在新的氣相色譜-質(zhì)譜研究下，亞硝胺的沙坦物質(zhì)檢測(cè)范圍從0.002 μg·g-1到 0.150 μg·g-1，回收率為 87.68%~123.76%。α-吡咯啉酮（α-PVP）可以檢測(cè)急性中毒患者，GRAPP[5]等通過氣相色譜-質(zhì)譜方法檢測(cè)出α-PVP資料濃度為29 ng·mL-1，同時(shí)檢測(cè)出尿液乙?；蟮漠a(chǎn)物。

1.2 中藥

中藥中提取的成分精油（EOs）被認(rèn)為是在抗真菌物質(zhì)應(yīng)用中很好的天然替代品，MOU[6]等通過采用氣相色譜-質(zhì)譜法分析化學(xué)成分，以及主成分分析（PCA）確定EOs組成與生境之間可能的關(guān)系，得出開發(fā) CPEOs微乳液（M-CPEOs），可以提高生物利用度的結(jié)論。菖蒲根莖是一種化濕開胃較好的藥物，在菖蒲的石油醚提取物研究中，PRABHA[7]等利用氣相色譜分析，發(fā)現(xiàn)其中5種化合物可能對(duì)植物病原體敏感，認(rèn)為可能與治療微生物疾病有關(guān)。西達(dá)藥是由多種中草藥合成的，MEENA[8]等利用氣相色譜質(zhì)譜分析，鑒定出西達(dá)藥中有24種化合物，其中的十六烷酸具有抗真菌作用，以此證明其在感染病中應(yīng)用。連花清瘟膠囊是一種抗病毒常用藥，但其中結(jié)構(gòu)復(fù)雜，故很少人研究其中的化學(xué)結(jié)構(gòu)。FU[9]等采用氣相色譜結(jié)合高效液相色譜方法，證明有17種化合物特征，主成分為薄荷醇，其他為萜類化合物。WAN[10]等采用氣相色譜法對(duì)雙唑草腈原藥進(jìn)行分析，以三氯甲烷為溶劑，結(jié)果表明回歸系數(shù)為0.999 8，平均回收率為100.20%。

陳皮與青皮均為常用中藥，二者化學(xué)組成成分相似，但也有著差異。ZHAO[11]等利用陳皮、青皮含有大量揮發(fā)性成分這一性質(zhì)，通過二維氣相色譜方法，分析樣品中的揮發(fā)成分進(jìn)行鑒別，并且二維氣相色譜鑒定出的組分多于普通氣相色譜，降低了化合物的共洗脫。當(dāng)歸是一種可以用來止血的中藥材，ZHANG[12]等利用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)當(dāng)歸成分進(jìn)行分析，當(dāng)采用甲醇超聲提取15 min時(shí)，鑒定出33種化合物，可以證明氣相色譜-質(zhì)譜方法可以有效研究中藥成分。乳香揮發(fā)油具有陣痛功效，WANG[13]等利用氣相色譜質(zhì)譜方法分析乳香揮發(fā)油成分，并進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，證明其中乙酸辛酯、萜品油烯等化學(xué)成分16個(gè)，可能與靶點(diǎn)作用，通過神經(jīng)活動(dòng)調(diào)節(jié)達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。ZHANG[14]等利用氣相色譜質(zhì)譜結(jié)合固相萃取方法，鑒定蒼術(shù)水煎液的化學(xué)成分，結(jié)果確定茅術(shù)醇等 4種化學(xué)成分，回收率達(dá)93.23%～104.52%。連翹是木犀科植物連翹的果實(shí)，具有清熱解毒作用，F(xiàn)ENG[15]等通過不同時(shí)期揮發(fā)油成分進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜方法研究，共鑒定出 28種化學(xué)成分，比較不同時(shí)期成分，發(fā)現(xiàn)4種差異成分。通過研究中藥材成分，可以為后期藥材開發(fā)利用提供依據(jù)，XUE[16]等通過對(duì)照法，利用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對(duì)太行菊揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，證明太行菊揮發(fā)油主要含有醇類、萜烯類、酮類等成分。中藥材是我國(guó)寶貴的資源，在其種植時(shí)常噴灑農(nóng)藥以保證產(chǎn)率，REN[17]等通過氣相色譜法檢測(cè)藥材中易氣化、熱穩(wěn)定的農(nóng)藥殘留，結(jié)果證明各組分的分離效果較好。草藥壓縮球可以緩解炎癥與疼痛，TANGYUENYONGWATANA[18]等采用頂空氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)，測(cè)定中草藥中的揮發(fā)性成分，結(jié)果證明有51種揮發(fā)成分。

2 高效液相色譜法

2.1 西藥

HPLC是最適合檢測(cè)和質(zhì)量控制最常用的技術(shù)，ARAúJO[19]等對(duì)金絲桃甲烷提取物進(jìn)行 HPLC檢驗(yàn)，保留時(shí)間為22.93 min，KOYU[20]等用HPLC檢測(cè)了不同條件下穿葉草提取物貯藏條件的影響。在室溫下 6個(gè)月，HYP的降解率約為 62%，而在40 ℃下，降解量為85%，在5 ℃時(shí)的最大降解率為45%。因此，HPLC用于植物提取物中以及藥物和給藥系統(tǒng)中的穩(wěn)定性研究是可行的。HPLC的使用提供了固體劑型中HYP的含量測(cè)定，也證明了在這些藥物劑型的穩(wěn)定性研究中是可行的。ZHENG[21]等利用高效液相色譜結(jié)合液液萃取測(cè)定人血漿中9種精神類藥物，在甲醇甲酸水溶液洗脫之后，得到較好提取率，相關(guān)系數(shù)大于 0.995，精度為77.24%~1 217.71%。癲癇病是較為普通的神經(jīng)疾病之一，人們將在唾液中檢測(cè)抗癲癇藥物作為有效的替代方法，CARONA[22]等利用高效液相色譜技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證明精度值在 3.45%~10.76%之間變化。為了研究注射用乙酰谷酰胺中乙酰谷酰胺的含量，ZHOU[23]等利用高效液相色譜方法，以磷酸鹽為緩沖液，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明建立的方法穩(wěn)定性高，可有效測(cè)定乙酰谷酰胺的含量和有關(guān)物質(zhì)。鹽酸阿霉素是一種抗腫瘤藥物，CHEN[24]等通過高效液相色譜法，以甲醇-水對(duì)鹽酸阿霉素進(jìn)行分析。平均回收率為97%～116%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于0.3%。復(fù)方制劑厄貝沙坦氫氯噻嗪片可以治療原發(fā)性高血壓，ZHAO[25]等利用高效液相色譜方法進(jìn)行測(cè)定，以磷酸二氫鉀作為緩沖液，結(jié)果表明精密度和重復(fù)性均小于5.0%。

2.2 中藥

桂花根可以治療筋骨疼痛，LIAO[26]等通過高效液相色譜法，測(cè)定桂花根中提取物的化學(xué)成分，在高效液相色譜法的基礎(chǔ)上，加以定性與定量分析，提高靈敏度，并首次發(fā)現(xiàn)了根中32種成分。文大麻湯是一種傳統(tǒng)草藥處方，SEO[27]等采用高效液相色譜法對(duì)其8種主要成分進(jìn)行分析，對(duì)精密度與精度進(jìn)行驗(yàn)證，是一種評(píng)價(jià)大麻湯藥質(zhì)量有效的測(cè)評(píng)方法。金銀花是眾多草本植物之一，其中含有抗氧化成分。CHO[28]等對(duì)金銀花熱水提取物中的多酚類成分進(jìn)行高效液相色譜研究，結(jié)果證明4種成分被證實(shí)是多酚葡萄糖醛酸結(jié)合物，此方法還可以用于多酚偶聯(lián)物相關(guān)代謝過程的監(jiān)測(cè)。靈龍感冒藥的成分已被知曉，但含量還未測(cè)定，TAN[29]等利用高效液相色譜法并洗脫測(cè)定其中含量，樣品回收率均在97%以上，證明該方法可以對(duì)靈龍感冒膠囊中9種成分進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。益氣逐瘀利水方可以治療腰間盤突出，CHEN[30]等通過高效液相色譜法檢測(cè)其成分，證明此方法穩(wěn)定性強(qiáng)。

3 毛細(xì)管電泳法

3.1 西藥

ANSAR[31]等分離藥物通過紫外-可見檢測(cè)的毛細(xì)管電泳法，證明阿霉素極限定量為0.5 μmol·L-1，也可以從脂質(zhì)體中量化未封裝的藥物。糖尿病是最常見的慢性病之一，需要采用多種藥物共同治療，AMIRA[32]等通過毛細(xì)管電泳方法測(cè)定藥物中二甲雙胍、沙格列汀等藥物，結(jié)果證明r＞0.999 3，降低實(shí)驗(yàn)成本。阿霉素是一種抗腫瘤藥物，ARRIAGA[33]等利用毛細(xì)管電泳結(jié)合熒光檢測(cè)方法，測(cè)定單核中阿霉素含量，證明該種方法可以避免細(xì)胞環(huán)境對(duì)阿霉素影響，是一種有效的測(cè)定分析方式。神經(jīng)霉素是一種陣痛藥物，但若注射高劑量則會(huì)引發(fā)呼吸抑制，因此Li[34]等采用毛細(xì)管電泳結(jié)合熒光分析測(cè)定其含量，證明該方法重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高。

3.2 中藥

復(fù)方甘草片對(duì)于治療咳嗽有所作用，GONG[35]等對(duì)7種主要成分進(jìn)行定量分析，其中Mor含量在0.37~0.44 mg范圍內(nèi)，證明是一種既環(huán)保又可以分離良好的技術(shù)。鼠尾草是一種治療多種疾病的中草藥，VESELINA[36]等通過毛細(xì)管電泳法收集其中迷迭香酸與焦石酸含量，二者的相關(guān)系數(shù)均為0.998，并發(fā)現(xiàn)與丹參樣品有相關(guān)性，為后期鼠尾草作為草藥以及功能性食品提供了依據(jù)。山梨醇是腎衰竭病人常用的利尿劑，XIAO[37]等證明在電泳運(yùn)行中，加入的硼酸鹽緩沖溶液可以促進(jìn)復(fù)合物形成，是一種對(duì)糖醇定量分析的方法。麻黃堿可以預(yù)防支氣管哮喘，DENG[38]等采用毛細(xì)管電泳法分離麻黃草中的兩種生物堿，在低電導(dǎo)率的條件下，結(jié)果證明檢測(cè)靈敏度約擴(kuò)大了1 000倍。

4 結(jié) 論

本文總結(jié)了多種現(xiàn)代技術(shù)在藥物分析中應(yīng)用，其中包括氣相色譜、高效液相色譜、毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管電泳-熒光檢測(cè)方法。對(duì)最近發(fā)表的文章回顧表明，氣相色譜與高效液相色譜在中藥、西藥分析中在保證樣品有效性安全性的條件下，具有簡(jiǎn)單、快速、敏感的優(yōu)點(diǎn)，毛細(xì)管電泳等方法可以提高靈敏度，也具有廣闊的應(yīng)用前景。