武夢麗 ， 王新峰 ， 丁 艷 ， 王 虹 ， 羅 燕 ， 連科迅 ， 谷新利

(石河子大學(xué)動物科技學(xué)院 ， 新疆 石河子 832003)

甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)是一種可食用和藥用的植物，距今已有2 000多年的歷史，它具有良好的藥用價值，是中藥中應(yīng)用最為廣泛的藥用植物之一。甘草多糖 (Glycyrrhiza polysaccharide，GP)是甘草的主要有效成分之一，具有調(diào)節(jié)免疫、抗病毒、降血脂、降血糖等功能[1]。硒是動物必需的微量元素，在機體生長、免疫等方面發(fā)揮重要作用。自然界中硒的存在形式主要分為無機硒和有機硒，與無機硒相比有機硒毒性低，更容易被機體吸收。硒化多糖主要通過化學(xué)修飾的方法將多糖與無機硒結(jié)合成有機化合物，研究表明，經(jīng)過硒化修飾后的多糖免疫調(diào)節(jié)能力和抗凝血活性均顯著增強[2]，雛雞注射1 mL(2 mg/mL)硒化甘草多糖可以提高疫苗免疫后的抗體效價[3]。本試驗旨在探討硒化修飾后的硒化甘草多糖對雛雞血液指標(biāo)的影響，同時探究其是否能提高多糖的活性，為硒化多糖在臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 甘草多糖和硒化甘草多糖，均由石河子大學(xué)動物科技學(xué)院中獸醫(yī)實驗室制備,含糖量為86%,試驗時分別稀釋成2 mg/mL；黃芪多糖，由上海源葉生物科技有限公司提供，試驗時稀釋成2 mg/mL；飼糧，購自新疆泰昆集團股份有限公司。

1.2 儀器 獸用全自動血細(xì)胞分析儀PE-6800VET，深圳市普康電子有限公司；全自動生化分析儀V1，天津維納芯科技有限公司。

1.3 試驗動物與飼養(yǎng)管理 1日齡的京紅1號雛雞，購自新疆中盛?？谇輼I(yè)有限公司；試驗各組在同一棟雞舍進行常規(guī)飼養(yǎng)。雛雞入舍前用甲醛對雞舍進行熏蒸消毒。7日齡時用雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗滴鼻免疫，同時頸部皮下免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感三聯(lián)滅活疫苗；14日齡時進行雞傳染性法氏囊滴口免疫；21日齡時進行新城疫飲水免疫；28日齡時進行法氏囊飲水免疫。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗設(shè)計 選取300只1日齡的京紅1號雛雞，隨機分為4組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)14只雞，其中I組為空白組，Ⅱ組為黃芪多糖組，Ⅲ組為甘草多糖組、Ⅳ組為硒化甘草多糖組。各組雛雞先進行7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)，第8天開始第I組肌內(nèi)注射與試驗組等容量的生理鹽水、Ⅱ～Ⅳ組分別肌內(nèi)注射1 mL黃芪多糖、甘草多糖和硒化甘草多糖，連續(xù)注射7 d，試驗周期45 d。

1.5 指標(biāo)測定與方法

1.5.1 血液常規(guī)指標(biāo) 試驗期間的第15、22、29、36天和第43天，采樣前禁食12 h，保證飲水，每組隨機選取體重相近的10只雞(每個重復(fù)選取2只)，采集血液于EDTA采血管中，用獸用全自動血細(xì)胞分析儀進行雛雞血液常規(guī)指標(biāo)的測定。

1.5.2 血液生化指標(biāo) 試驗期間的第15、22、29、36天和第43天，采樣前禁食12 h，保證飲水，每組隨機選取體重相近的10只雞(每個重復(fù)選取2只)，采集血液于肝素鋰采血管中，用全自動血液生化分析儀和試劑盒進行白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、總膽紅素(TB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GLT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、葡萄糖(GLU)、鈣(Ca)、無機磷(PHOS)等生化指標(biāo)的測定。

1.6 統(tǒng)計分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，試驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 硒化甘草多糖對雛雞血液白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞比率和淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響 由表1可知，整個試驗周期中Ⅱ～Ⅳ組雛雞血液中的白細(xì)胞數(shù)(WBC)較空白組增多，第15、22天和第36天經(jīng)過硒化處理過的甘草多糖組與空白組相比差異顯著(P<0.05)。第15天和第43天時，各組雛雞血液中淋巴細(xì)胞比率(LYM%)差異不顯著(P>0.05)；第22、29天和第36天時，Ⅳ組與空白組比較可顯著提高淋巴細(xì)胞比率(LYM%)(P<0.05)。第36天和第43天時，Ⅳ組淋巴細(xì)胞數(shù)量(LYM)顯著高于空白組(P<0.05)；第43天時，Ⅳ組淋巴細(xì)胞數(shù)量(LYM)顯著高于其他各組(P<0.05)。

表1 雛雞血液白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞比率和淋巴細(xì)胞數(shù)Table 1 Total white blood cell count,lymphocyte ratio and lymphocyte count in chicken blood

2.2 硒化甘草多糖對雛雞肝功能指標(biāo)的影響 由表2可知，整個試驗周期中各組雛雞血液中白蛋白(ALB)的含量呈上升趨勢，Ⅱ～Ⅳ組白蛋白(ALB)的含量高于空白組；第15天和第22天時Ⅳ組與空白組相比差異顯著(P<0.05)。第22、29天和第36天時，Ⅳ組中總蛋白(TP)的含量高于其他各組，且與空白組比較差異顯著(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ組球蛋白(GLB)的含量高于空白組，第22天和第29天時Ⅳ組顯著高于空白組(P<0.05)。第15天和第29天時，Ⅳ組總膽紅素(TB)含量顯著高于空白組(P<0.05)。各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GLT)的含量差異不顯著(P>0.05)。雛雞血液中堿性磷酸酶(ALP)的含量在不同階段，Ⅱ～Ⅳ組均高于空白組；第29、36天和第43天時，Ⅳ組中堿性磷酸酶(ALP)含量顯著高于空白組(P<0.05)。

表2 雛雞肝功能指標(biāo)檢測結(jié)果Table 2 Detection results of chicken liver function indexes

2.3 硒化甘草多糖對雛雞腎功能及血脂的影響 由表3可知，整個試驗過程中各組雛雞血液中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量差異不顯著(P>0.05)。Ⅱ～Ⅳ組中葡萄糖(GLU)的含量高于空白組，尤其在第15天Ⅳ組中葡萄糖(GLU)的含量顯著高于其他組(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ組中膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的含量低于空白組；第29天和第43天時Ⅳ組雛雞血液中膽固醇(CHOL)的含量顯著低于空白組(P<0.05)。整個試驗過程中Ⅳ組血液中甘油三酯(TG)的含量低于其他各組，第36天時顯著低于空白組(P<0.05)。

表3 雛雞腎功能及血脂檢測結(jié)果Table 3 Renal function and blood lipid detection results of chickens

2.4 硒化甘草多糖對雛雞血液中鈣、無機磷和免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，第15、29天和第43天時，Ⅳ組中鈣(Ca)的含量與空白組比較差異顯著(P<0.05)；第15天和第36天時，Ⅳ組血液中無機磷(PHOS)的水平顯著高于空白組(P<0.05)。試驗過程中，Ⅱ～Ⅳ組血液中溶菌酶(LZM)的含量高于空白組；第29天時，Ⅳ組溶菌酶(LZM)的含量顯著高于空白組(P<0.05)。整個試驗過程中各組雛雞血液中α-酸性糖蛋白(AAG)的含量之間差異不顯著(P>0.05)。

表4 雛雞血液中鈣、無機磷和免疫指標(biāo)檢測結(jié)果Table 4 Detection results of blood calcium,inorganic phosphorus and immune indexes of chickens

3 討論

3.1 硒化甘草多糖對雛雞血液生理指標(biāo)的影響 白細(xì)胞是機體抵御病原微生物等異物入侵的主要防線，具有參與細(xì)胞免疫、吞噬、產(chǎn)生抗體、傳遞免疫信息等功能[4]。白細(xì)胞的總數(shù)直接反映機體的免疫狀態(tài)，本試驗結(jié)果表明，Ⅱ～Ⅳ組雛雞血液中白細(xì)胞的數(shù)量高于空白組，試驗第15、22天和第36天時硒化甘草多糖組血液中白細(xì)胞的數(shù)量較空白組顯著提高，這與劉師旗等[5]研究發(fā)現(xiàn)車前草多糖可刺激早期雞白細(xì)胞增長的結(jié)果一致。淋巴細(xì)胞數(shù)量也是機體免疫應(yīng)對功能的重要組成部分，其數(shù)量的增加代表動物機體抵抗力的增強，整個試驗過程中注射多糖的試驗組血液中淋巴細(xì)胞數(shù)量高于空白組，第36天和第43天時硒化甘草多糖組的淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于空白組，表明硒化甘草多糖能提高動物機體的免疫力且效果要優(yōu)于甘草多糖。

3.2 硒化甘草多糖對雛雞血液生化指標(biāo)的影響 白蛋白由肝臟合成，用于組織修補和能量的供給；球蛋白由漿細(xì)胞分泌形成，反應(yīng)機體的抵抗力；總蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，在一定程度上反映了動物對蛋白質(zhì)的消化吸收程度。研究發(fā)現(xiàn)，總蛋白的含量升高表明動物對日糧中蛋白質(zhì)的消化吸收能力增強[6]，從而促進組織蛋白質(zhì)的合成，利于提高生長速度和飼料轉(zhuǎn)化率。本試驗結(jié)果表明，雛雞注射多糖類藥物可以提高雛雞血液中總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量，經(jīng)過硒化處理過的硒化甘草多糖組，提升血液中總蛋白、白蛋白和球蛋白的能力高于其他各處理組，結(jié)果表明硒化多糖活性明顯優(yōu)于多糖，這與于紹帥等[7]的研究結(jié)果相一致。

肝臟功能的變化影響酶的代謝，當(dāng)肝功能受到影響時，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性會發(fā)生變化。本試驗中各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性差異不顯著，說明給雛雞注射多糖以及硒化甘草多糖類藥物并不會對雛雞的肝臟產(chǎn)生損害，這為硒化甘草多糖在臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

堿性磷酸酶廣泛分布于機體肝臟、骨骼、腎等組織，可用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病的診斷，同時也是機體消化代謝的關(guān)鍵酶類，參與脂肪的代謝，它的高低反應(yīng)動物機體的代謝強度和生產(chǎn)性能[8]，堿性磷酸酶能提高物質(zhì)攝取和轉(zhuǎn)運的速度[6]。研究發(fā)現(xiàn)給雛雞注射多糖類藥物糖能通過提升堿性磷酸酶來促使體內(nèi)鈣動力增強，從而促進骨骼生長，滿足雛雞快速生長的需要[9]。本試驗結(jié)果表明，經(jīng)過硒化處理過的甘草多糖提升血液中堿性磷酸酶含量的效果更佳，經(jīng)過硒化處理過的甘草多糖增強雛雞生長的能力高于未經(jīng)硒化處理過的多糖組。

有研究認(rèn)為，血清尿素氮含量與蛋白質(zhì)的利用率之間存在顯著的負(fù)相關(guān)，當(dāng)肝臟中蛋白質(zhì)代謝和腎臟排泄功能正常時，其在血清中的含量通常維持在一定范圍內(nèi)[10]，肌酐是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球濾過排出體外，血清尿素氮和肌酐是臨床上評價腎功能的重要指標(biāo)，當(dāng)血清中尿素氮和肌酐濃度升高時，則表明腎功能可能出現(xiàn)異常[11]。本試驗結(jié)果顯示，各組雛雞血液中尿素氮和肌酐的含量較空白組均無顯著差異，表明多糖類藥物并不會對動物機體產(chǎn)生不利影響。

血糖是機體供能和合成蛋白質(zhì)的重要底物，被機體吸收后可轉(zhuǎn)化為動物生長所需的能量[12]，血糖水平的高低直接關(guān)系著其生長速度。研究發(fā)現(xiàn)試驗中添加400 mg/(kg·bw)黃芪多糖可以提高血糖濃度[12]。黃小流等[13]研究發(fā)現(xiàn)，馬齒莧多糖能顯著提高斷奶大鼠血清中葡萄糖的含量。本試驗結(jié)果表明，硒化甘草多糖組血糖質(zhì)量濃度較空白組有所提高，說明硒化甘草多糖在一定程度上能夠促進血糖濃度增加，有利于營養(yǎng)物質(zhì)吸收。

張利娟等[14]試驗發(fā)現(xiàn)，日糧中添加黃芪多糖對蛋雞血脂水平有一定的調(diào)節(jié)作用，可以降低血清中甘油三酯和膽固醇的含量。劉會娟等[15]的試驗發(fā)現(xiàn)，飲水中加入米糠多糖，可以降低雛雞血液中甘油三酯和膽固醇水平。這與本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)硒化甘草多糖可以降低雛雞血液中膽固醇、甘油三酯含量的研究結(jié)果一致。

溶菌酶能水解細(xì)胞壁中黏肽的乙酰氨基多糖并使之裂解被釋放出來從而破壞和消除侵入體內(nèi)的異物，實現(xiàn)機體防御功能[16]，能部分反映細(xì)胞免疫功能和機體抗感染能力?？梢酝ㄟ^血清中溶菌酶的含量來評價機體的非特異性免疫功能，研究發(fā)現(xiàn)，0．15%和0．20%濃度的馬尾藻多糖能顯著增強奧尼羅非魚溶菌酶的含量[17]。本試驗結(jié)果表明，多糖類藥物可以提高雛雞血液中溶菌酶的含量，從而提高了雛雞的免疫功能。

α-酸性糖蛋白為急性時相反應(yīng)物之一，在急性炎癥時含量增高，與免疫防御功能有關(guān)。本試驗發(fā)現(xiàn)，各組雛雞血液中α-酸性糖蛋白無顯著差異，表明注射多糖類藥物不會對雛雞的健康產(chǎn)生危害。

綜上所述，硒化甘草多糖能提高雛雞血液中與機體免疫有關(guān)的各項指標(biāo)，如白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、溶菌酶等的含量，同時對肝臟、腎臟無不良影響，還具有一定的降血脂作用，表明經(jīng)過硒化處理過的甘草多糖可以改善雛雞的血液指標(biāo)，提高機體的抵抗力且效果優(yōu)于未經(jīng)處理過的甘草多糖。