太白銀蓮花地上部分中皂苷類成分的提取和鑒定

王嘯洋 李慧 陸云陽 徐健 張艷華 湯海峰

毛茛科(Ranuneulaeeae)銀蓮花屬(Anemone)植物在全世界各大洲均有分布，中國約產(chǎn)52種，多數(shù)分布于東北、西南和西北等地的高山地區(qū)，其中部分品種可供藥用、觀賞、農(nóng)藥等用途[1-2]。該屬在中國民間作為藥用的約有15種，其中多被銀蓮花的根莖為《中國藥典》收錄的傳統(tǒng)中藥兩頭尖，其它常見藥用品種有九節(jié)菖蒲(阿爾泰銀蓮花根莖)、蜈蚣三七(林蔭銀蓮花根莖)、破牛膝(小花草玉梅根莖)、銅骨七(西南銀蓮花根莖)等，具有祛風除濕、解毒止痛、舒筋活血等功效，主治風濕痹痛、癰疽、跌打損傷等[3-5]?，F(xiàn)代藥學研究表明，本屬植物含有三萜皂苷、黃酮、香豆素、氨基酸等化學成分，其中三萜皂苷為主要活性成分，具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌等藥理作用[6-7]。太白銀蓮花(Anemonetaipaiensis)是陜西省特有銀蓮花屬植物，主要分布于秦嶺東西太白山和佛坪大澗溝區(qū)域[8]。課題組前期已對該植物根莖進行了較為系統(tǒng)的化學成分研究，從中分離得到一系列三萜皂苷類化合物，其中部分化合物顯示出良好的生物活性，值得進一步的深入研究[9-14]。對該植物地上部分也開展了研究，以期為該植物下一步的開發(fā)與利用提供更多實驗依據(jù)。在前期研究基礎上[15-16]，本文繼續(xù)報道對該植物地上部分乙醇提取物正丁醇萃取部位化學成分的研究工作，為該植物的進一步開發(fā)研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液相色譜儀為Dionex P680型 (美國Dionex公司)，配YMC-Pack R&D ODS-A半制備液相色譜柱(20 × 250 mm，5 μm，日本YMC公司)；質(zhì)譜儀為Micromass Quattro(美國Waters公司)；氣相色譜儀為Finnigan Voyager(美國Finnigan公司)，配L-Chirasil-Val氣相色譜柱(25 m×0.32 mm，0.25 μm，美國Agilent公司)；旋光儀為Perkin-Elmer 341型 (美國Perkin-Elmer公司)；核磁共振(nuclear magnetic resonance，NMR)儀為Bruker AVANCE-500型 (瑞士Bruker公司)。柱色譜與薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)，反相柱色譜硅膠(ODS-A，日本YMC公司)，Sephadex LH-20凝膠柱色譜填料(瑞典GE公司)，色譜純甲醇(天津科密歐化學試劑公司)，其他分析純試劑(天津富宇精細化工公司)，水為純凈水。

太白銀蓮花于2013年8月采自陜西省秦嶺太白山區(qū)域，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學藥學院生藥教研室王繼濤教授鑒定為毛茛科銀蓮花屬太白銀蓮花Anemonetaipaiensis的地上部分，標本(130812)存于陜西中醫(yī)藥大學藥學院中藥標本室。

1.2 提取與分離

取太白銀蓮花干燥地上部分5.5 kg，粉碎為粗粉，加入5倍量70%乙醇加熱回流提取3次(分別為2小時，2小時和1.5小時)，提取液減壓濃縮得1.1 kg浸膏，浸膏用5.5 L水分散，依次用等體積石油醚和水飽和正丁醇分別萃取3次，得正丁醇萃取物397.2 g。取正丁醇萃取物100 g，用硅膠柱色譜進行分離，三氯甲烷—甲醇—水(20∶1∶0～6∶4∶0.7)梯度洗脫，得到Fr.1～Fr.8八個流份。

Fr.4(3 g)用硅膠柱色譜分離，三氯甲烷—甲醇—水(9∶1∶0.02～8∶2∶0.08)梯度洗脫，得Fr.4.1～Fr.4.4，F(xiàn)r.4.3經(jīng)反相ODS柱色譜分離，甲醇—水(2∶8～10∶0)梯度洗脫得Fr.4.3.1～Fr.4.3.4，F(xiàn)r.4.3.3用半制備高效液相色譜(semi-preparative high performance liquid chromatography，Semi-Prep HPLC)純化(甲醇—水=80∶20)得化合物1 (16 mg,tR=13.7分鐘)。

Fr.5(2.5 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜(三氯甲烷—甲醇=1∶1)除去水溶性雜質(zhì)后，再經(jīng)反相ODS柱色譜分離，洗脫液為甲醇—水(2∶8～10∶0)梯度洗脫，得Fr.5.1～Fr.5.5，F(xiàn)r.5.3經(jīng)Semi-PrepHPLC純化(甲醇—水=80∶20)得化合物2(6 mg，tR=14.5分鐘)。

Fr.7(5 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜(三氯甲烷—甲醇=1∶1)除去水溶性雜質(zhì)后，用反相ODS柱色譜分離，甲醇—水(3∶7～10∶0)梯度洗脫，得Fr.7.1～Fr.7.4，F(xiàn)r.7.3經(jīng)Semi-Prep HPLC純化(甲醇—水=65∶35)得化合物3 (9 mg，tR=19.6分鐘)；Fr.7.2再次用反相ODS柱色譜分離，甲醇—水(3∶7～10∶0)梯度洗脫，得Fr.7.2.1～Fr.7.2.4，F(xiàn)r.7.2.2經(jīng)Semi-PrepHPLC純化(甲醇—水=55∶45)得化合物4 (12 mg，tR=15.5分鐘)和化合物5(12 mg，tR=18.4分鐘)。

Fr.8(19 g)用硅膠柱色譜分離，三氯甲烷—甲醇—水(9∶1∶0.02～6∶4∶0.5)梯度洗脫，得到Fr.8.1～Fr.8.5，F(xiàn)r.8.4用Sephadex LH-20凝膠柱色譜(三氯甲烷—甲醇=1∶1)除去水溶性雜質(zhì)后，用反相ODS柱色譜分離，甲醇—水(2∶8～10∶0)梯度洗脫，得Fr.8.4.1～Fr.8.4.4，F(xiàn)r.8.4.2經(jīng)Semi-PrepHPLC純化(甲醇—水=55∶45)得化合物6(9 mg，tR=12.3分鐘)和化合物7(31 mg，tR=16.5分鐘)；Fr.8.4.3經(jīng)Semi-PrepHPLC純化(甲醇—水=58∶42)得化合物8(150 mg，tR=10.3分鐘)和化合物9(36 mg，tR=13.8分鐘)。

1.3 酸水解和糖基的衍生分析

稱取待測化合物2 mg，加入5 mL三氟乙酸溶液(2 mol/L)，密閉，反應8小時 (110 ℃)；反應完畢后靜置放冷，加入20 mL 純凈水，用等體積乙酸乙酯萃取3次，合并水層濃縮蒸干，將殘余物與2 mgL-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽溶于2 mL吡啶，60 ℃水浴反應1小時，氮氣吹干；向殘余物中加入0.2 mLN-(三甲基硅基)咪唑和2 mL吡啶，60 ℃水浴反應1小時后，氮氣吹干；將殘余物用水分散并用等體積環(huán)己烷萃取3次，蒸干得糖基的三甲基硅醚化衍生物。

對衍生物進行氣相色譜(gas chromatography，GC)分析，載氣：氮氣；進樣量：1 μL；檢測器溫度：280 ℃；氣化溫度：250 ℃；程序升溫：初始柱溫為140 ℃，保持5分鐘，以2 ℃/分鐘的速度升溫到180 ℃，保持5分鐘，再以10 ℃/分鐘的速升溫到320 ℃，保持10分鐘。標準糖用上述同樣方法衍生并進行分析，根據(jù)樣品保留時間和峰面積可確定化合物中的糖基種類和含量比例。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

按照1.2所述方法步驟，從太白銀蓮花地上部分乙醇提取物的正丁醇萃取部位共分離鑒定了8個齊墩果烷型三萜皂苷，化合物1～8 (圖1)，所有化合物均為首次從該植物地上部分中分離得到。

2.2 化合物1

1H-NMR給出給出7個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.85 (3H，s，H-25)，0.87 (3H，s，H-30)，0.88 (3H，s，H-29)，1.02 (3H，s，H-26)，1.07 (3H，s，H-24)，1.18 (3H，s，H-27)和1.21 (3H，s，H-23)；5個糖端基質(zhì)子信號：δH4.91 (1H，d，J=6.3 Hz，Ara H-1)，4.93 (1H，d，J=7.9 Hz，Glc II H-1)，5.84 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.26 (1H，d，J= 8.2 Hz，Glc I H-1)和6.32 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.68 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.67 (3H，d，J=6.1 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.14 (1H，dd，J=3.8，13.9 Hz，H-18)和5.42 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.7 (C-1)，26.4 (C-2)，88.5 (C-3)，39.5 (C-4)，55.8

圖1 從太白銀蓮花中分離到的化合物1～8的化學結(jié)構(gòu)

(C-5)，18.4 (C-6)，33.0 (C-7)，39.7 (C-8)，48.0 (C-9)，37.1 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.2 (C-13)，42.1 (C-14)，28.1 (C-15)，23.2 (C-16)，47.1 (C-17)，41.5 (C-18)，46.1 (C-19)，30.7 (C-20)，33.8 (C-21)，32.6 (C-22)，28.0 (C-23)，17.0 (C-24)，15.4 (C-25)，17.3 (C-26)，26.1 (C-27)，176.4 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.8，75.9，74.0，68.1，64.7)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.5，71.9，72.9，74.1，68.8，18.4)，Glc I C-1～C-6 (95.5，73.8，78.7，70.7，77.8，69.2)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.2，77.1，61.1)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.6，72.4，72.6，73.9，70.2，18.4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[19]，故鑒定該化合物為hederasaponin B。

2.3 化合物2

1H-NMR給出給出7個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.85 (3H，s，H-25)，0.87 (6H，s，H-29和H-30)，1.06(3H，s，H-26)，1.14 (3H，s，H-24)，1.24 (3H，s，H-27)和1.27 (3H，s，H-23)；6個糖端基質(zhì)子信號：δH4.84 (1H，d，J=7.0 Hz，Ara H-1)，4.98 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.34 (1H，d，J=7.8 Hz，Xyl H-1)，5.83 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.21 (1H，d，J= 8.2 Hz，Glc I H-1)和6.38 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.52 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.67 (3H，d，J=6.1 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.14 (1H，dd，J=3.8，13.2 Hz，H-18)，3.25 (1H，dd，J=4.2，11.7 Hz，H-3)和5.38 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.8(C-1)，26.5(C-2)，88.5(C-3)，39.6(C-4)，55.8 (C-5)，18.5 (C-6)，33.1 (C-7)，39.7 (C-8)，48.1 (C-9)，37.1 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.0 (C-13)，42.2 (C-14)，28.4 (C-15)，23.8 (C-16)，47.2 (C-17)，41.5 (C-18)，46.3 (C-19)，30.8 (C-20)，34.0 (C-21)，32.4 (C-22)，28.3 (C-23)，17.3 (C-24)，15.7 (C-25)，17.5 (C-26)，26.0 (C-27)，176.3 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (105.1，75.1，74.7，69.5，65.6)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.4，72.0，82.6，73，69.8，18.6)，Xyl C-1～C-5 (107.6，75.6，78.5，71.2，67.2)，Glc I C-1～C-6 (95.6，73.7，78.6，70.7，78.1，69.2)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.3，77.2，61.1)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.6，72.5，72.6，74.1，70.3，18.4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[20]，故鑒定該化合物為sieboldianoside B。

2.4 化合物3

1H-NMR給出給出6個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.84 (3H，s，H-29)，0.85 (3H，s，H-30)，0.96 (3H，s，H-25)，1.07 (3H，s，H-26)，1.13 (3H，s，H-24)和1.15 (3H，s，H-27)；5個糖端基質(zhì)子信號：δH4.98 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.34 (1H，d，J=7.8 Hz，Xyl H-1)，5.85 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.22 (1H，d，J= 8.2 Hz，Glc I H-1)和6.35 (1H，s，3-O-Rha H-1)，Ara H-1與其他信號有重疊；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.51 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.67 (3H，d，J=6.1 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.12 (1H，dd，J=3.6，13.2 Hz，H-18)和5.37 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.9( C-1)，26.4 (C-2)，81.1 (C-3)，43.5 (C-4)，47.6 (C-5)，18.2 (C-6)，33.0 (C-7)，39.7 (C-8)，48.0 (C-9)，37.0 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.2 (C-13)，42.1 (C-14)，28.1 (C-15)，23.2 (C-16)，47.1 (C-17)，41.5 (C-18)，46.1 (C-19)，30.7 (C-20)，33.8 (C-21)，32.6 (C-22)，63.8 (C-23)，13.9 (C-24)，16.1 (C-25)，17.3 (C-26)，26.1 (C-27)，176.4 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.5，75.5，75.0，69.5，66.2)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.4，71.9，82.8，73.1，69.8，18.5)，Xyl C-1～C-5 (107.4，75.5，78.4，71.2，67.3)，Glc I C-1～C-6 (95.4，73.9，78.6，71.0，78.2，69.2)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.3，77.2，61.2)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.8，72.5，72.7，73.8，70.2，18.6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，故鑒定該化合物為sieboldnoside A。

2.5 化合物4

1H-NMR給出給出6個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.83 (3H，s，H-29)，0.86 (3H，s，H-30)，0.96 (3H，s，H-25)，1.04 (3H，s，H-26)，1.11 (3H，s，H-24)和1.15 (3H，s，H-27)；5個糖端基質(zhì)子信號：δH4.98 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.10 (1H，d，J=6.4 Hz，Ara H-1)，5.85 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.21 (1H，d，J= 8.2 Hz，Glc I H-1)和6.24 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.61 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.69 (3H，d，J=6.1 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.15 (1H，dd，J=3.6，13.6 Hz，H-18)和5.38 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.8 (C-1)，26.2 (C-2)，81.1 (C-3)，43.6 (C-4)，47.5 (C-5)，18.1 (C-6)，32.6 (C-7)，39.7 (C-8)，48.1 (C-9)，37.0 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.0 (C-13)，42.2 (C-14)，28.4 (C-15)，23.8 (C-16)，47.2 (C-17)，41.5 (C-18)，46.3 (C-19)，30.8 (C-20)，34.0 (C-21)，32.4 (C-22)，63.8 (C-23)，13.8 (C-24)，15.9 (C-25)，17.5 (C-26)，26.0 (C-27)，176.3 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.5，75.4，74.7，69.5，65.6)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.4，72.1，72.5，74.1，69.8，18.6)，Glc I C-1～C-6 (95.6，73.7，78.6，70.7，78.1，69.1)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.3，77.2，61.2)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.6，72.5，72.6，74.1，70.3，18.4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[23]，故鑒定該化合物為刺楸皂苷 B。

2.6 化合物5

1H-NMR給出給出6個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.84 (3H，s，H-29)，0.86 (3H，s，H-30)，0.95 (3H，s，H-25)，1.09 (3H，s，H-26)，1.15 (3H，s，H-24)和1.17 (3H，s，H-27)；8個糖端基質(zhì)子信號：δH4.92 (1H，d，J=7.8 Hz，Ara H-1)，4.97 (1H，d，J=8.1 Hz，Glc Ⅱ H-1)，5.03 (1H，d，J= 8.0 Hz，Glc Ⅲ H-1)，5.15 (1H，d，J= 7.8 Hz，Glc IV H-1)，5.35 (1H，d，J=7.7 Hz，Xyl H-1)，5.84 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.23 (1H，d，J= 8.1 Hz，Glc I H-1)和6.35 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.56 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.68 (3H，d，J=6.2 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.14 (1H，dd，J=3.8，13.5 Hz，H-18)和5.38 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.9 (C-1)，26.4 (C-2)，81.1 (C-3)，43.5 (C-4)，47.6 (C-5)，18.2 (C-6)，33.0 (C-7)，39.7 (C-8)，48.0 (C-9)，37.0 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.2 (C-13)，42.1 (C-14)，28.1 (C-15)，23.2 (C-16)，47.1 (C-17)，41.5 (C-18)，46.1 (C-19)，30.7 (C-20)，33.8 (C-21)，32.6 (C-22)，63.8 (C-23)，13.9 (C-24)，16.1 (C-25)，17.3 (C-26)，26.1 (C-27)，176.4 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.5，75.2，75.5，81.1，65.8)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.3，71.8，82.7，73.1，69.5，18.4)，Xyl C-1～C-5 (107.8，75.6，78.6，71.2，67.4)，Glc I C-1～C-6 (95.5，73.8，78.7，70.9，78.1，69.1)，Glc Ⅱ C-1～C-6 (104.8，75.4，76.4，78.1，77.3，61.3)，Glc Ⅲ C-1～C-6 (106.4，74.8，76.8，81.2，76.8，61.9)，Glc Ⅳ C-1～C-6 (105.2，74.8，78.2，71.5，78.5，62.6)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.8，72.8，72.6，74.0，70.2，18.6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12]，故鑒定該化合物為3β-O-β-D-吡喃木糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

2.7 化合物6

1H-NMR給出給出7個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.85 (3H，s，H-25)，0.87 (6H，s，H-29和H-30)，1.06 (3H，s，H-26)，1.16 (3H，s，H-24)，1.23 (3H，s，H-27)和1.29 (3H，s，H-23)；7個糖端基質(zhì)子信號：δH4.71 (1H，d，J=7.0 Hz，Ara H-1)，4.97 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.10 (1H，d，J=7.9 Hz，Glc III H-1)，5.34 (1H，d，J=7.6 Hz，Xyl H-1)，5.84 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.23 (1H，d，J= 8.2Hz，Glc I H-1)和6.29 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.54 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.68 (3H，d，J=6.2 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.16 (1H，dd，J=3.7，13.4 Hz，H-18)，3.23 (1H，dd，J=4.0，11.6 Hz，H-3)和5.34 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.8 (C-1)，26.5 (C-2)，88.5 (C-3)，39.6 (C-4)，55.9 (C-5)，18.5 (C-6)，33.1 (C-7)，40.0 (C-8)，48.2 (C-9)，37.1 (C-10)，23.8 (C-11)，122.9 (C-12)，144.2 (C-13)，42.2 (C-14)，28.2 (C-15)，23.4 (C-16)，47.1 (C-17)，41.4 (C-18)，46.3 (C-19)，30.8 (C-20)，34.1 (C-21)，32.4 (C-22)，28.2 (C-23)，17.3 (C-24)，15.7 (C-25)，17.5 (C-26)，26.0 (C-27)，176.4 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (105.1，75.4，74.8，80.2，65.4)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.2，71.7，82.8，73.0，69.6，18.4)，Xyl C-1～C-5 (107.8，75.6，78.5，71.1，67.3)，Glc I C-1～C-6 (95.5，73.7，78.5，70.8，78.1，69.1)，Glc II C-1～C-6 (104.8，75.4，76.3，78.0，77.2，61.3)，Glc III C-1～C-6 (106.7，75.4，78.5，71.2，78.8，62.5)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.7，72.7，72.5，74.1，70.1，18.5)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[12，故鑒定該化合物為3β-O-β-D-吡喃木糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-齊墩果酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

2.8 化合物7

1H-NMR給出給出6個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.84 (3H，s，H-29)，0.86 (3H，s，H-30)，0.95 (3H，s，H-25)，1.09 (3H，s，H-26)，1.10 (3H，s，H-24)和1.15 (3H，s，H-27)；7個糖端基質(zhì)子信號：δH4.91 (1H，d，J=7.4 Hz，Ara H-1)，4.97 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.05 (1H，d，J= 8.0 Hz，Glc III H-1)，5.15 (1H，d，J= 7.9 Hz，Glc IV H-1)，5.84 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.23 (1H，d，J= 8.1 Hz，Glc I H-1)和6.27 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.64 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.69 (3H，d，J=6.2 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.16 (1H，dd，J=3.8，13.3 Hz，H-18)和5.38 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.9 (C-1)，26.4 (C-2)，81.1 (C-3)，43.5 (C-4)，47.6 (C-5)，18.2 (C-6)，33.0 (C-7)，39.7 (C-8)，48.0 (C-9)，37.0 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.2 (C-13)，42.1 (C-14)，28.1 (C-15)，23.2 (C-16)，47.1 (C-17)，41.5 (C-18)，46.1 (C-19)，30.7 (C-20)，33.8 (C-21)，32.6 (C-22)，63.8 (C-23)，13.9 (C-24)，16.1 (C-25)，17.3 (C-26)，26.1 (C-27)，176.4 (C-28)，33.0 (C-29)，23.5 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.6，76.1，75.3，81.6，65.4)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.6，72.1，72.3，74.1，69.6，18.6)，Glc I C-1～C-6 (95.6，73.7，78.6，70.7，78.1，69.1)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.3，77.2，61.2)，Glc III C-1～C-6 (106.3，75.0，76.7，81.2，76.6，61.7)，Glc IV C-1～C-6 (105.2，74.8，78.2，71.5，78.3，62.4)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.6，72.5，72.6，74.1，70.3，18.4)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定該化合物為3β-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

2.9 化合物8

1H-NMR給出給出6個苷元甲基質(zhì)子信號：δH0.84 (3H，s，H-29)，0.86 (3H，s，H-30)，0.95 (3H，s，H-25)，1.09 (3H，s，H-26)，1.10 (3H，s，H-24)和1.17 (3H，s，H-27)；7個糖端基質(zhì)子信號：δH4.91 (1H，d，J=7.2 Hz，Ara H-1)，4.97 (1H，d，J=7.8 Hz，Glc II H-1)，5.08 (1H，d，J= 7.9 Hz，Glc III H-1)，5.35 (1H，d，J=7.7 Hz，Xyl H-1)，5.84 (1H，s，28-O-Rha H-1)，6.23 (1H，d，J= 8.1 Hz，Glc I H-1)和6.34 (1H，s，3-O-Rha H-1)；3-O-Rha和28-O-Rha上的甲基質(zhì)子信號分別為：δH1.55 (3H，d，J=6.2 Hz)和1.68 (3H，d，J=6.2 Hz)；苷元特征質(zhì)子信號：δH3.14 (1H，dd，J=3.6，13.6 Hz，H-18)和5.37 (1H，br s，H-12)。

13C-NMR (125 MHz，C5D5N)給出δC：38.9 (C-1)，26.4 (C-2)，81.1 (C-3)，43.5 (C-4)，47.6 (C-5)，18.2 (C-6)，32.9 (C-7)，39.7 (C-8)，48.0 (C-9)，37.0 (C-10)，23.6 (C-11)，122.7 (C-12)，144.2 (C-13)，42.1 (C-14)，28.1 (C-15)，23.2 (C-16)，47.1 (C-17)，41.5 (C-18)，46.1 (C-19)，30.7 (C-20)，33.8 (C-21)，32.6 (C-22)，63.8 (C-23)，14.0 (C-24)，16.1 (C-25)，17.3 (C-26)，26.1 (C-27)，176.4 (C-28)，33.2 (C-29)，23.7 (C-30)，Ara C-1～C-5 (104.5，75.5，75.3，80.6，65.8)，3-O-Rha C-1～C-6 (101.1，71.9，82.8，73.1，69.8，18.5)，Xyl C-1～C-5 (107.5，75.5，78.4，71.2，67.3)，Glc I C-1～C-6 (95.4，73.9，78.6，71.0，78.2，69.2)，Glc II C-1～C-6 (104.7，75.2，76.4，78.3，77.2，61.2)，Glc III C-1～C-6 (106.8，75.5，78.5，71.1，78.8，62.3)，28-O-Rha C-1～C-6 (102.8，72.5，72.7，73.8，70.2，18.6)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定該化合物為3β-O-β-D-吡喃木糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖-常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖酯苷。

3 討論

本研究在前期工作基礎上，運用多種色譜手段從太白銀蓮花地上部分分離得到8個化合物，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)鑒定了它們的化學結(jié)構(gòu)，均為齊墩果烷型三萜皂苷，基于2種苷元(齊墩果酸和常春藤皂苷元)和4種單糖(L-Ara、L-Rha、D-Xyl和D-Glc)組成，且均為苷元C-3和C-28位都連接寡糖基的雙糖鏈結(jié)構(gòu)。由于基本母核相同，化合物的分子結(jié)構(gòu)差異主要體現(xiàn)在母核C-23位是否連有羥基和糖鏈組成上，造成化合物間的極性和性質(zhì)相似，給分離工作帶來一定的困難。本研究在分離過程中較多的運用了硅膠分配柱層析，即使用含水的溶劑系統(tǒng)(CHCl3-MeOH-H2O)作為流動相，并結(jié)合反相ODS柱色譜及制備型HPLC，分離得到了純度較高的單體化合物。根據(jù)課題組以往獲得的此類化合物抗腫瘤構(gòu)效關系結(jié)論[13,24]，雙糖鏈皂苷抗腫瘤活性較弱，因此在本研究中未對上述皂苷開展抗腫瘤活性篩選實驗。雖然它們不能直接作為抗腫瘤候選化合物，但可通過堿水解等化學手段獲得C-28位為游離羧基的活性單糖鏈皂苷[12]，可為后期體外、體內(nèi)抗腫瘤活性研究提供更多的化合物來源。本研究豐富了太白銀蓮花地上部分的化學成分庫，為該植物的進一步開發(fā)利用提供了實驗依據(jù)。