楊卓軒李清群彭志元石 彬

(1.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,貴州 遵義 563000;2.遵義醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院,貴州 遵義 563000)

0 引言

SLE是一種伴有嚴重器官損害的具有異質(zhì)性的自身免疫性疾病,其引起多系統(tǒng)臟器受累的主要原因是自身抗原暴露、自身抗體產(chǎn)生、慢性炎癥和組織損傷相互作用引起的惡性循環(huán)[1]。SLE 發(fā)病機制復(fù)雜,一般認為是因機體的免疫調(diào)節(jié)功能受損和正常的自身免疫耐受被打破,導(dǎo)致多種自身抗原成為靶抗原,使得自身反應(yīng)性的B 細胞產(chǎn)生的多種自身抗體與自身抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物,進而引起多種器官和組織的損傷[2]。在疾病發(fā)展的不同階段,可以觀察到免疫系統(tǒng)各種組分的失調(diào),但B 細胞活動過度導(dǎo)致產(chǎn)生過量的多種自身抗體是SLE的主要免疫學(xué)標志之一[3],即B細胞活動過度是引起過量自身抗體產(chǎn)生的主要原因,是SLE疾病進展中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),進一步可形成免疫復(fù)合物。免疫復(fù)合物在器官如腎中的沉積通過激活補體系統(tǒng)和炎性細胞聚集導(dǎo)致機體產(chǎn)生隨后的炎癥,也就是說,自身抗體的存在是狼瘡性腎炎(lupus nephritis,LN)發(fā)展的絕對先決條件[4],其中主要的致病性自身抗體由器官局部的漿細胞產(chǎn)生,這種細胞寄居于SLE患者的腎臟[5],因此,B細胞和及其衍生細胞(漿細胞)被認為是參與SLE 發(fā)病的主要細胞,并且有學(xué)者觀察到SLE患者血液中漿細胞前體的高頻率存在,這可支持此種觀點[6]。同時,Choi JY 等人[7]的研究也表明SLE患者中循環(huán)漿細胞的增加與疾病活動相關(guān)。T 細胞在SLE發(fā)病機制中也起到了重要作用,可通過分泌促炎細胞因子來放大炎癥,輔助B細胞產(chǎn)生自身抗體,并促進疾病的記憶T 細胞的積累[8]。T 細胞表達和功能的許多畸變已被發(fā)現(xiàn)與SLE 患者體內(nèi)異常T 細胞活化有關(guān)[9],這導(dǎo)致T 細胞受體(T cell Receptor,TCR)活化閾值降低和外周耐受性降低。

此外,SLE是一種高度異質(zhì)性的疾病,其遺傳性危險因子具有高度多樣性。因此,即使患者臨床表現(xiàn)相似,但其在病理生理學(xué)方面也存在顯著的區(qū)別。正是這些差異導(dǎo)致目前很多生物技術(shù)藥物的臨床試驗無法到達終點。SLE的傳統(tǒng)激素治療、免疫抑制劑治療和免疫吸附治療存在的缺點是不能識別機體的正常細胞和自身反應(yīng)性細胞,因此導(dǎo)致了很多不良反應(yīng),使其在臨床治療中的應(yīng)用需慎重。而免疫細胞靶向治療為臨床工作提供了新的思路,而且目前在臨床診療中得到了廣泛的應(yīng)用,且取得了一定的成效。但是,因其在治療過程中存在用藥劑量大、費用高、療效不穩(wěn)定、感染率高等缺陷,目前免疫靶向藥物在臨床中的使用也受到了限制。

在過去的40年里SLE的預(yù)后得到了明顯改善,但對疾病致病機制的更加深入的理解仍然是開發(fā)更有效的特異性靶向治療的關(guān)鍵。免疫細胞靶向藥物的出現(xiàn),引導(dǎo)今后的研究方向可以轉(zhuǎn)向精準治療。新一代的自身免疫性疾病的治療策略應(yīng)更精準,更具有靶向性,在阻斷疾病進展、防止疾病爆發(fā)及減少并發(fā)癥的同時,還能夠維持機體正常的免疫應(yīng)答,并且減少對于其他非病變累及器官的損傷以及維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。

1 目前應(yīng)用于臨床的免疫細胞靶向治療

近年來,隨著對SLE發(fā)病機制的深入研究,靶向治療藥物作為治療SLE 的新型藥物,在臨床應(yīng)用展示出良好的前景。SLE的傳統(tǒng)治療(包括非甾體抗炎藥、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、細胞毒藥物和免疫吸附療法)都是非特異性的,當(dāng)藥物在機體內(nèi)發(fā)揮作用的時候無法區(qū)分正常的細胞和自身反應(yīng)性細胞,導(dǎo)致對機體造成嚴重的不良反應(yīng)。相比之下,靶向治療藥物在SLE治療中具有較好的安全性及臨床療效。目前靶向治療的主要靶點有特異性自身免疫抗體、異常激活的T、B 淋巴細胞、漿細胞、干擾素等(圖1)。

圖1 目前B細胞、漿細胞、T 細胞以及干擾素靶向治療藥物及其靶點

1.1 B細胞靶向治療

隨著對于疾病的深入研究,B細胞在SLE發(fā)病機制中的核心作用得到了突出重視,這是因為B 細胞的抗體依賴(產(chǎn)生的自身抗體并通過多種機制參與自身免疫)和非依賴機制(抗原提呈、T 細胞激活和極化、以及樹突狀細胞的調(diào)節(jié))在SLE致病中均發(fā)揮了重要作用[10]。目前針對B細胞的生物療法中較為有效的是B細胞耗竭療法。B細胞耗竭療法是指消除大多數(shù)B 細胞或僅消除部分B 細胞群[11]。這些藥物主要通過兩種機制實現(xiàn)B細胞耗竭:第一,通過針對B細胞表面分子CD19,CD20(利妥昔單抗(Rituximab)和奧伐木單抗(Ofatumumab)靶點)和CD22(埃普拉圖珠單抗(Epratuzumab)靶點)的單克隆抗體直接殺傷B 細胞;第二,抑制B淋巴細胞刺激因子BlyS(貝利木單抗(Belimumab)靶點)和APRIL(阿塞西普(Atacicept)靶點)造成的破壞[12]。最廣泛殺死B細胞的抗B 細胞藥物是抗CD20抗體,它會引起廣泛的B 細胞耗竭。Rituximab就是一種針對CD20人-鼠嵌合單克隆抗體,可以特異性地耗盡B細胞,并且能降低疾病活動性和血清自身抗體[13]。盡管Rituximab在LN 和非LN 臨床試驗中均尚未達到終點[14,15],但是一些研究表明Rituximab對于治療難治性SLE 是有效[16-18]。歐洲風(fēng)濕病聯(lián)盟(European League Against Rheumatism,EULAR)提出,Rituximab可用于治療造成器官損傷的難治性狼瘡[19]。因此,Rituximab在臨床中的具體應(yīng)用尚需大量實驗來驗證,目前尚不能武斷做出結(jié)論其對于治療SLE 是否有效。Belimumab則可通過抑制BlyS活性而顯著降低B細胞活性[20,21]。作為第一種批準用于治療非腎性SLE 的生物制劑,Belimumab可能能夠更有效地誘導(dǎo)低疾病活動和臨床緩解[22,23]。其安全性和有效性已在許多臨床試驗中得到證實[24-26]。最近,一項雙盲對照試驗評估了Belimumab在活動性SLE 患兒中的療效和安全性[27]。目前正在進行的兩項大型臨床試驗,BLISS-FERED[28]和BEAT[29]正在評估Rituximab和Belimumab聯(lián)合應(yīng)用的療效。進行這兩項臨床試驗的依據(jù)是研究人員在臨床實驗中發(fā)現(xiàn)Rituximab治療后患者體內(nèi)的BlyS水平增加,其可能有助于自身反應(yīng)性B細胞的存活和反彈以及隨后的疾病爆發(fā);而Belimumab作為一種重組IgG1λ人類單克隆抗體,可結(jié)合并拮抗可溶性BlyS的生物活性;因此,專家們認為當(dāng)二者一起使用時,可通過互補機制導(dǎo)致循環(huán)和組織中殘留的自身反應(yīng)性B淋巴細胞的進一步耗竭[28]。

Epratuzumab可降低外周血靶細胞中B細胞的活性和B細胞的數(shù)量,其可能會成為SLE臨床治療的突破口[30]。最近,一種新的BAFF(B細胞活化因子)抑制劑Blisibimod已經(jīng)進行了Ⅲ期臨床試驗,結(jié)果顯示使用Blisibimod的SLE患者的自身抗體和B細胞數(shù)量減少,補體C3和C4增加,同時患者在后期治療中使用的糖皮質(zhì)激素的劑量有所減少[31]。然而,Epratuzumab和Blisibimod均未能在臨床試驗中達到其主要終點[31,32]。同時,Belimumab以外的其他B細胞靶向藥物的安全性和有效性存在爭議,需要在未來的實驗中得到證實。

目前,B細胞耗竭相關(guān)靶向藥物主要用于重癥患者,但是在使用過程中,仍需要臨床醫(yī)師們根據(jù)患者的種族,器官的損傷程度等條件來進行個體化治療。并且由于該療法用藥量大、費用高、療效不穩(wěn)定、感染率高等缺陷其在臨床使用中仍受到限制。

1.2 漿細胞靶向治療

SLE相關(guān)的自身抗體由漿細胞分泌,有效地消耗自身反應(yīng)性漿細胞(Antibody secreting cells,ASCs)可能是治療該疾病的關(guān)鍵。漿細胞的種類有兩類,包括新產(chǎn)生的增殖漿細胞(proliferating plasma blasts PBs)和不能增殖的長壽漿細胞(non-proliferating long-lived plasma cells,PCs),其中PCs有助于自身抗體的產(chǎn)生,這就是漿細胞能引起SLE的關(guān)鍵所在[33,34]。由于PCs對常規(guī)免疫抑制或以B細胞為靶點的治療耐受[35],現(xiàn)有的治療致病性PCs的方法(如蛋白酶抑制劑和抗胸腺細胞球蛋白,及針對靶向生存因子、細胞歸巢或表面分子等的新型療法)致力于耗盡整個儲存池的細胞,然而,在耗竭的細胞中也包括對正常漿細胞和分泌保護性抗體的漿細胞的殺傷[36]。其中,蛋白酶抑制劑(硼替佐米)是一種很有效的藥物,其通過免疫球蛋白鏈積聚,導(dǎo)致壓倒性的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力和末端展開的蛋白質(zhì)反應(yīng),致使細胞凋亡[35],這有望提高血漿細胞耗竭的效率。研究者們在小鼠自身免疫模型中發(fā)現(xiàn),蛋白酶體抑制劑使小鼠體內(nèi)的漿細胞幾乎完全耗竭,且阻止了狼瘡腎等器官的進一步損傷,然而在人體內(nèi)蛋白酶體抑制劑對漿細胞的耗竭作用卻遠不如小鼠[36]。在Alexander S等[37]的研究中,硼替佐米(Bortezomib)可以治療性的引起SLE患者體內(nèi)的PBs和PCs的消耗。同時發(fā)現(xiàn)在與B細胞靶向治療藥物(如Rituximab)聯(lián)合應(yīng)用時,還可以防止PBs和PCs的再生。目前,Bortezomib在治療難治性SLE的安全性和有效性均已在臨床試驗中得到證實[38,39]。此外,在van Dam LS等人[40]的研究中,Rituximab及Belimumab的聯(lián)合應(yīng)用可以顯著降低抗C1q抗體(其與疾病活動性有關(guān))。CD38分子在漿細胞表面高表達[41],這可以抑制促炎癥細胞因子的合成,從而調(diào)控SLE的發(fā)病[42]。因此,目前其他有希望的治療策略集中在對漿細胞表面高表達的CD38分子的表達進行干預(yù),對有助于漿細胞歸巢的因素進行誘導(dǎo)以及調(diào)控外周血漿細胞存活的基因[36]。

漿細胞治療目前存在的最明顯的缺陷就是缺乏選擇特異性,這是導(dǎo)致治療疾病時產(chǎn)生較大不良反應(yīng)的主要原因。此外,由于SLE患者在B細胞和漿細胞穩(wěn)態(tài)方面表現(xiàn)出顯著的異質(zhì)性,B 細胞的生物耗竭療法對B細胞和漿細胞治療的影響有待研究人員們通過大量的基礎(chǔ)及臨床實驗來確定。

1.3 T細胞靶向治療

T 細胞在SLE的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用,濾泡輔助性T 細胞(T-follicular helper cells Tfh)可通過調(diào)節(jié)B細胞的克隆選擇,為B細胞提供免疫球蛋白產(chǎn)生、同型轉(zhuǎn)換和細胞超突變的信號,從而起到激活和分化B細胞的關(guān)鍵作用[3]。即活化后的Th細胞表達CD40配體,與B細胞表面CD40相互作用,向B細胞傳達重要的第二活化信息,在第一、第二活化信號和Th細胞產(chǎn)生的細胞因子作用下,B淋巴細胞活化、增生與分化產(chǎn)生特異性抗體。已有研究發(fā)現(xiàn)在SLE 患者外周血中Tfh細胞的明顯增加[43,44],且在小鼠模型中發(fā)現(xiàn)Tfh細胞失調(diào)與SLE的發(fā)展相關(guān)聯(lián)[45]。研究發(fā)現(xiàn),自身反應(yīng)性T 細胞[46]、CD4＋T 輔助細胞和CD3＋CD4－CD8-T 細胞在SLE患者體內(nèi)T 細胞中所占的比例均升高,它們均有助于自身抗體的產(chǎn)生[47]。目前針對T 細胞信號途徑的藥物,如CTLA4-Ig融合蛋白阿巴西普(Abatacept),其通過抑制T 細胞共刺激因子來抑制T 細胞活化[48]。在對LN 炎患者進行Ⅱ/Ⅲ期臨床實驗時,接受過Abatacept治療的患者的抗雙鏈DNA(抗dsDNA)抗體、補體C3和補體C4等指標的好轉(zhuǎn)情況要優(yōu)于對照組,但在不良反應(yīng)及其嚴重程度等方面與對照組治療后的結(jié)果相當(dāng)[48]。

Toll-7樣受體(toll like receptor 7,TLR7)激動劑咪喹莫特能夠通過抑制Tfh細胞的分化來阻止MRL/lpr小鼠SLE的進展[49]。此外,Chu.Y 等人[50]發(fā)現(xiàn)單獨使用雷帕霉素或與全反式維甲酸聯(lián)合使用可降低SLE患者的疾病活動,且可以降低臨床治療中對糖皮質(zhì)激素的需求,這可能是Th17/Treg細胞平衡調(diào)節(jié)的結(jié)果。

Jang SG 等人[51]在最新的研究中發(fā)現(xiàn)抗蠕蟲藥物氯硝柳胺可以通過抑制STAT3信號通路來抑制Th細胞和漿細胞。這說明部分抗寄生蟲類藥物亦可用于SLE的治療,但是否存在可靠的治療效果還需要更多的動物實驗及臨床研究來驗證。

1.4 干擾素靶向治療

針對調(diào)節(jié)T 細胞的細胞因子治療有很多種,目前臨床應(yīng)用較為廣泛的藥物就是干擾素抑制劑。IFN-α是I型干擾素家族成員之一,其可通過抗原提呈細胞打破免疫耐受,能促進各種免疫細胞的刺激和分化(包括自身反應(yīng)性B細胞向漿細胞的分化),能調(diào)節(jié)T 細胞共刺激分子的上調(diào)和導(dǎo)致調(diào)節(jié)性T 細胞(Tregs)的失活[52-55]。目前已經(jīng)有大量數(shù)據(jù)表明IFN-α參與了SLE的發(fā)病機制[56]。有研究表明I型IFN 在外周血中的含量與SLE患者的SLE疾病活動指數(shù)(SLEDAI)評分和外周血中抗dsDNA 濃度呈正相關(guān)[57]。此外,I型干擾素驅(qū)動的基因信號(Ifngs)的表達與疾病活動有關(guān)[58]。其主要代表藥物阿斯利康(Anifrolumab)是一種全人IgG 1κ單克隆抗體,可結(jié)合并中和IFN-α受體,從而阻斷I型IFN 依賴性細胞信號傳導(dǎo)[58]。目前此種藥物的Ⅱ期臨床試驗療效顯示:部分SLE 患者皮疹、脫發(fā)和關(guān)節(jié)等癥狀較對照組明顯改善[59]。Chatham WW 等人[60]在研究中同樣發(fā)現(xiàn),阿夫土珠單抗治療效果和安全性與疾病活動性相關(guān)。也有文章報道,應(yīng)用糖皮質(zhì)激素的基礎(chǔ)上聯(lián)合注射INF-γ或INF-α均可對T 細胞的功能以及表達CD3和CD4的細胞數(shù)量產(chǎn)生影響[61]。目前的研究主要集中在INF-α,對于其他干擾素的研究較少,是否其對于治療SLE 是否有效仍有待進一步探究。

在T 細胞及其細胞因子的治療正在臨床研究過程中,實驗結(jié)果表明使用這些藥物確實能使患者的癥狀得到改善,但是不良反應(yīng)較對照組相比并沒有什么優(yōu)勢,甚至比對照組更嚴重[62],因此,對于T 細胞靶向治療藥物的探究還需要投入更多的時間和經(jīng)濟成本,才有可能找到對SLE 治療有顯著效果且不良反應(yīng)的藥物。

2 潛在的精準治療靶點

近幾年,雖然SLE在基礎(chǔ)和臨床等方面的研究均有重大突破,但至今仍缺乏疾病特異性及無不良反應(yīng)的治療藥物[2,63-65]。SLE的高度異質(zhì)性致使針對SLE傳統(tǒng)療法及藥物無法適用于每一個患者。因此,發(fā)展個性化靶向藥物或補充治療藥物在突破傳統(tǒng)SLE 治療方案中具有相當(dāng)大的潛力。而當(dāng)前最大的難題是尚未找到有效的治療靶標、確定常見的致病途徑以及異常細胞活性與疾病活動相關(guān)的生物標志物(圖2)。

圖2 B細胞和Th細胞群的SLE潛在治療靶點

2.1 B細胞和漿細胞

B細胞不僅產(chǎn)生致病性自身抗體,而且可通過產(chǎn)生細胞因子和趨化因子來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答,以此來表明B細胞的功能和信號傳遞的異常[66]。有研究發(fā)現(xiàn),BLK、BANK1和LYN 基因變異可能通過改變B細胞受體信號而增加SLE的易感性[67-70]。還有研究發(fā)現(xiàn),IRF8、ETS1、IKZF1、AFF1、RasGRP3、PRDM1、FcγRIIB、PRKCB和NCF2等不僅是B細胞發(fā)育、分化、增殖和活化的主要分子,而且還含有與SLE 易感性相關(guān)的多態(tài)性基因[67,68,71-73]。HLA-DR2&DR3基因(具有改變產(chǎn)生抗體的能力)、IL-10(抑制T 細胞和抗原提呈細胞,增強B細胞的存活和活性)和IL-21(促進抗體類轉(zhuǎn)換和維持自身抗體的產(chǎn)生)也含有與SLE相關(guān)的多態(tài)性基因[67,68]。在該領(lǐng)域通過對B細胞遺傳基因研究的開展,幫助臨床確定那些最嚴重形式的SLE 遺傳以及起協(xié)同作用的基因組、表觀遺傳,也可以幫助為高危風(fēng)險個體的靶向治療提供最適當(dāng)?shù)闹委熗緩胶鸵娊?。ARID3a,最初被發(fā)現(xiàn)是作為一種免疫球蛋白(Ig)重鏈轉(zhuǎn)錄的B 細胞調(diào)節(jié)因子,即能促進Ig重鏈的轉(zhuǎn)錄,并與內(nèi)含子重鏈增強子結(jié)合,其表達與B 細胞自身抗體的產(chǎn)生相關(guān)[74]。另外,Bhamidipati K 等人[75]提出,SLE患者B細胞上CD52表達的增加可以抑制B細胞功能亢進。綜上所述,ARID3a和CD52也可作為治療SLE的潛在靶點。

漿細胞在正常生理情況下負責(zé)產(chǎn)生具有抗感染等作用的保護性抗體,但它們也在自身免疫性疾病如SLE等疾病中產(chǎn)生致病性抗體。自身反應(yīng)性漿細胞具有記憶的特性,但是在目前治療中沒有受到人們足夠的重視。在制定新的治療策略時應(yīng)考慮到這一問題。傳統(tǒng)上認為,高親和力的IgG 自身抗體是通過生發(fā)中心(germinal center,GC)產(chǎn)生的,然而,發(fā)生在濾泡外的體細胞高突變和類別轉(zhuǎn)換可能也與SLE 的致病有關(guān)。雖然濾泡外(extrafollicular,EF)和GC途徑都能導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生,但Malkiel S等[76]認為遺傳因素可能會導(dǎo)致這兩種途徑在個體患者中表現(xiàn)出不同的優(yōu)勢。目前研究發(fā)現(xiàn)大約有100個風(fēng)險位點與SLE 相關(guān),并且這些位點內(nèi)的基因已廣泛地分為涉及DNA 降解和凋亡細胞碎片清除、先天免疫(包括TLR 和IFN信號傳導(dǎo))和獲得性免疫等方面[77],大多數(shù)變異體位于非編碼區(qū)域,這些區(qū)域可能通過改變表達水平,從而確定細胞譜系和階段特異性表達方式的反應(yīng)程度。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的幾種風(fēng)險基因(包括LYN,BLK,BANK1,PTPN22,TNFAIP3,TNIP1,CSK 和FCGR2B)可以改變B 細胞選擇、活化、分化和(或)存活[78,79],雖然這些風(fēng)險基因改變了B細胞信號,但是尚未發(fā)現(xiàn)它們對漿細胞分化的影響。此外,這些風(fēng)險基因的功能尚未確定,這就需要進一步的了解每條疾病相關(guān)信號通路以及具有遺傳風(fēng)險的等位基因是如何優(yōu)先靶向這些途徑中的一條,這將成為今后研究工作的重點。

提高對漿細胞生物學(xué)和促進漿細胞存活機制的了解將有助于進一步識別候選靶點。Hiepe F等[36]正在研發(fā)一種方法,以自身抗原特異性的方式耗盡致病性漿細胞,同時保留保護性免疫的完整性,并且考慮了靶向前體B細胞以防止自身反應(yīng)性漿細胞記憶的補充。這種自身反應(yīng)性漿細胞記憶的有效缺失可能是治療各種自身免疫性疾病(包括自身抗體介導(dǎo)的腎臟疾病)的關(guān)鍵。

2.2 補體

補體系統(tǒng)在人體免疫過程中也起著重要作用。例如,當(dāng)復(fù)合受體(complex receptor,CR)2與其C3活化片段衍生配體C3d結(jié)合時,它可以協(xié)同擴增B細胞上CD19的BCR 信號。Kulik L等人[80]研制出了一種高特異性的小鼠抗小鼠C3d單克隆抗體,其可以阻止與CR2的相互作用。在SLE的MRL/LPR 模型中,僅阻斷關(guān)鍵的C3d-CR2配體-受體結(jié)合步驟就能顯著改善自身免疫性損傷和腎臟疾病[81]。此外,NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)介導(dǎo)腫瘤壞死因子家族成員(如BAFF、TWEEK、CD40和OX40)下游的非規(guī)范NF-κB 信號傳導(dǎo),這些都與SLE的發(fā)病機制有關(guān)。Brightbill HD 等人[81]也發(fā)現(xiàn)了抑制NIK 可以改善預(yù)后生存,減輕腎臟病理,降低蛋白尿評分。

2.3 T細胞靶標

T 細胞可以調(diào)節(jié)自身免疫反應(yīng),并且能夠改變自身免疫功能,這與SLE 的多種表現(xiàn)和治療反應(yīng)密切相關(guān)。其中Th細胞是輔助B細胞分化及活化的T 細胞群體,且是一個異質(zhì)性較大的T 細胞群體,因此將其作為靶標將有助于SLE的個體特異性治療。近年來,人們將研究方向轉(zhuǎn)向Th細胞,其中研究最多的主要有Treg、Th1、Th2、Th17和Tfh。

2.3.1 Treg。Treg細胞是一類具有免疫抑制作用Th細胞,可通過抑制自身反應(yīng)性淋巴細胞維持自身免疫耐受。在體外和體內(nèi),Treg細胞均可以通過促進B細胞失活來抑制狼瘡小鼠B細胞中自身抗體的產(chǎn)生。目前研究發(fā)現(xiàn),SLE患者的Treg缺乏與IL-2缺乏相關(guān),許多研究者嘗試通過IL-2治療來恢復(fù)Treg活性[82]?？梢宰C明這一觀點的是研究人員在實驗中發(fā)現(xiàn),隨著病情的發(fā)展,狼瘡小鼠體內(nèi)的Treg數(shù)量逐漸減少,而且,在這些小鼠中觀察到的Treg數(shù)量的逐漸減少可以通過低劑量rIL-2預(yù)防,這也可以改善疾病預(yù)后[83]。此外,研究發(fā)現(xiàn),活動性SLE 患者與健康對照組及穩(wěn)定期SLE 患者相比,外周循環(huán)中Treg細胞在CD4＋T細胞中的比例顯著減少,減少的數(shù)量與SLE嚴重程度相關(guān)[84]。Rose A 等[85]通過實驗發(fā)現(xiàn),腎內(nèi)Treg細胞表現(xiàn)出與腎內(nèi)常規(guī)CD4＋T 細胞(T con)進行性亢進并行的IL-2缺乏的表型體征,經(jīng)過IL-2短期治療的LN 小鼠腎內(nèi)的Treg數(shù)量增加,而經(jīng)過IL-2長期治療后可降低腎內(nèi)T con的活性和增殖,并伴有LN 的臨床和組織學(xué)的改善。因此,這為找尋SLE治療的新靶點提供了另一種思路。且有人提出,SLE 的缺陷抑制可能是由于Treg對SLE環(huán)境中Fas介導(dǎo)的細胞凋亡的高敏感性所致[86],或是由于降低了效應(yīng)細胞對Treg抑制的敏感性所致[87]。還有研究表明,SLE抗原呈遞細胞產(chǎn)生IFN-α可能是改變Treg功能的原因[88]。在許多研究中均已發(fā)現(xiàn)Treg細胞的數(shù)量減少可能有助于SLE發(fā)病[86,89-91]。Scalapino KJ等[92]給狼瘡鼠模型補充Treg細胞后發(fā)現(xiàn)其可以延緩疾病的發(fā)生、發(fā)展,降低病死率,這進一步證明了Treg缺陷或缺乏可引起SLE發(fā)病。

2.3.2 Th1和Th2。Th1細胞主要分泌IL-2和INF-γ等細胞因子,介導(dǎo)細胞免疫和遲發(fā)性超敏反應(yīng);而Th2細胞主要分泌的IL-4、IL-5和IL-6主要作用于B細胞,刺激B細胞活化及分泌免疫球蛋白來介導(dǎo)體液免疫。目前,Th1/Th2平衡與SLE發(fā)病之間的關(guān)聯(lián)仍存在爭議。早期研究已證明,在人和狼瘡鼠模型中,Th1細胞的功能增強,分泌IFN-γ水平均增高,其可促進疾病發(fā)展及組織損傷,而Th2 細胞功能反而減弱[93]。Amel-kashipaz MR 等[94]發(fā)現(xiàn)SLE患者外周血中Th2細胞比率顯著高于正常人,他們認為SLE 發(fā)病與Th2優(yōu)勢有關(guān)。Park SH 等[95]則發(fā)現(xiàn)SLE患者血清Th1、Th2型細胞因子水平均升高,并推測Th1可能主要參與誘導(dǎo)SLE發(fā)病,而Th2在炎癥過程中發(fā)揮作用。IL-2是Tfh分化的重要負性調(diào)節(jié)因子,通過誘導(dǎo)STAT5依賴性Blimp1(一種Bcl-6阻遏蛋白)的表達[96-98]從而降低Tfh分化。此外,Th1細胞產(chǎn)生的大量的IL-2可誘導(dǎo)T-bet,也可以抑制Bcl-6的表達和Tfh的分化[99]。除此之外,有研究證實uhrf1下調(diào)可通過增加Bcl-6的表達促進Tfh細胞的分化[100]。因此,對患者體內(nèi)的Bcl-6進行干預(yù)將成為SLE 的一種新的治療策略。

2.3.3 Th17。Th17細胞主要通過分泌IL-17、IL-21 和IL-22等細胞因子參與自身免疫性疾病和超敏反應(yīng)等的發(fā)生。Th17細胞和細胞因子IL-17與SLE疾病有關(guān),特別是LN[8,101]。Ma KY 等人[102]證實了IL-17在狼瘡發(fā)病機制中通過p38介導(dǎo)的BCL-XL轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定來提高漿細胞存活率以產(chǎn)生自身抗體的新功能。Reiner SL等[103,104]均認為Th17和Th1之間的平衡對維持正常免疫功能至關(guān)重要,這種不平衡將導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展。關(guān)于IL-21R 和IL-21基因多態(tài)性的進展引起了人們的廣泛關(guān)注,且有數(shù)據(jù)表明它們可能具有導(dǎo)致SLE的風(fēng)險[105-107]。有研究發(fā)現(xiàn),狼瘡易感小鼠激活的CD4＋T 細胞分泌的IL-21是對照組小鼠的10倍[108],IL-21R 的缺乏將導(dǎo)致Tfh細胞數(shù)量的減少[109]。并且,在小鼠狼瘡模型的研究中,IL-21及其mRNA 的血清水平顯著升高,這表明IL-21的過度表達與疾病的發(fā)展有關(guān)[110]。還有研究表明IL-15和IL-21在體外可顯著增加IFN-γ的產(chǎn)生,促進幼稚和記憶性CD8＋T 細胞的產(chǎn)生,IL-21增強了CD8＋效應(yīng)T 細胞的增殖、IFN-γ的分泌和同種異體混合淋巴細胞反應(yīng)的細胞毒性[111]。上述實驗結(jié)果為IL-21成為SLE治療靶點提供了理論基礎(chǔ)和實踐依據(jù)。此外,有研究發(fā)現(xiàn)抑制IL-23/IL-23受體信號可改善狼瘡易感小鼠的疾病[112]。Lee SY 等人[113]發(fā)現(xiàn),抑制IL-7可以通過抑制B 細胞向GCs的分化來改善SLE。對于IL-7的抑制從而產(chǎn)生的治療效果,同樣為SLE新型治療提供了另一方向。

了解結(jié)合自身抗原后的SLE相關(guān)T 細胞發(fā)生的分子事件是解決其異常功能的關(guān)鍵。通過糾正異常信號分子來糾正相應(yīng)的T 細胞功能,從而限制導(dǎo)致臨床表現(xiàn)的后續(xù)病理的產(chǎn)生及進展[9],這是對于避免SLE免疫細胞異常激活后引起并發(fā)癥方面取得的重大突破。此外,Th17細胞中P2X7R 表達的增加與SLE 患者的疾病活動和某些炎癥介質(zhì)呈正相關(guān),這可能有助于SLE的新治療策略的研究[114]。

2.3.4 Tfh。Tfh細胞主要表達CXCR5、PD-1和ICOS,被認為是輔助B 淋巴細胞增殖和產(chǎn)生抗體的主要Th細胞群,Tfh主要存在于次級淋巴器官的GC,而人外周血中鑒定出CD4＋CXCR5＋T 細胞被稱為循環(huán)Tfh。目前認為,循環(huán)Tfh可能為GC Tfh的靜息狀態(tài)或前體[115]。研究表明,SLE 患者外周血中Tfh的數(shù)量異常增多,提示循環(huán)Tfh可能參與了SLE的發(fā)病[116]。Xu H 等[43]發(fā)現(xiàn)SLE患者循環(huán)Tfh數(shù)量與自身抗體產(chǎn)量相關(guān),而通過抗CD40L可以降低自身抗體的產(chǎn)生。CD40/CD40L 通路在Tfh和B細胞活化的初始階段起著關(guān)鍵作用[117-119],部分實驗證明CD40在SLE患者的T 細胞(也包括B細胞和單核細胞)上呈異常高水平的表達[120,121]。此外,高表達CD40L m RNA 的女性SLE患者體內(nèi)的CD4＋T 細胞能夠促進自體B細胞的刺激和自身抗體的產(chǎn)生[122]。這些研究提示,循環(huán)Tfh在SLE 致病中起到了重要作用。最近的研究表明以CD40為靶點的KPL-404抗體在抑制B細胞反應(yīng)方面具有治療潛力[119]。CD40作為治療SLE 的靶點具有極大潛力。

另外,一些研究人員認為IL-12/IL-23信號可能干擾Th細胞分化,并直接抑制促炎細胞因子的分泌。Gao Y 等人[123]通過小鼠實驗證實了上述觀點,并發(fā)現(xiàn)抗IL12/23 P40抗體對LN 有治療作用,并聲稱其治療效果是通過抑制小鼠Tfh細胞介導(dǎo)。迄今為止,尚不清楚該信號通路是否能在不影響Tfh細胞保護功能的情況下選擇性限制SLE的致病性反應(yīng)。而Faliti CE等人[124]觀察到P2X7活性的恢復(fù)可以選擇性地限制SLE患者致病性自身抗體的進行性擴增,從而加重疾病。除此之外,根據(jù)Sheng YJ等人[125]發(fā)現(xiàn),Bach2的過表達可以通過抑制IRF4的表達來抑制Th9細胞分化。上述兩項研究為亦探尋SLE 致病反應(yīng)信號通路提供了思路。

研究發(fā)現(xiàn),T 細胞數(shù)百個基因的轉(zhuǎn)錄在SLE 患者體內(nèi)發(fā)生改變,這其中包含有線粒體、核苷酸代謝和DNA 復(fù)制相關(guān)通路等因素的影響,但是其中個別基因減少了m RNA 的轉(zhuǎn)錄,這與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、剪接和轉(zhuǎn)錄活性有關(guān),同時也與dsDNA 抗體存在、低水平的補體和腎炎的嚴重情況有關(guān)[126]。這就證明了SLE 患者疾病相關(guān)性克隆的改變,可以致使疾病的進展及復(fù)發(fā)。研究者們還發(fā)現(xiàn)SLE 患者體內(nèi)的T 細胞表現(xiàn)出較低TCR 活化閾值、脂質(zhì)筏聚集、活化后鈣通量增加、炎性細胞因子過度生成以及基因表達的改變等一系列變化[9]。關(guān)于T 細胞亞群參與SLE發(fā)病機制的證據(jù)越來越多,上文對SLE 相關(guān)性的關(guān)鍵細胞及細胞因子的異常表達和功能進行了概述,并強調(diào)了它們作為治療靶點的潛力。

2.4 其他潛在治療靶點

雖然靶向T、B淋巴細胞等新的生物制劑為自身免疫性疾病的防治帶來了新的曙光,但經(jīng)過臨床驗證的特異性靶標療法依然顯著缺乏[127]。目前針對自身免疫性疾病中的自身抗體又提出一新的觀點,即采用特異性封閉分子精準靶向自身抗原和自身抗體,這不僅能防治自身免疫性疾病,而且還能夠避免影響機體正常的免疫應(yīng)答,有望為自身免疫性疾病的防治提供新的策略。該方法是采用封閉分子競爭性的結(jié)合自身抗原或抗體,阻斷其形成致病性免疫復(fù)合物,進而避免后續(xù)的炎癥反應(yīng)和器官組織損傷。Gaynor B等[128]研制的一種小分子肽類似物可作為靶向封閉分子中的抗原競爭性結(jié)合抗DNA 抗體,阻止其與DNA 結(jié)合,并可阻止DNA 激活TLR9。既往的SLE防治,主要是針對自身抗體的產(chǎn)生及其致病環(huán)節(jié),極少有針對自身抗原環(huán)節(jié)的防治策略。靶向封閉暴露的自身抗原,阻斷其被免疫系統(tǒng)識別可能藥物治療SLE 的另一突破性進展。有望成為靶向封閉分子的抗體有IgG4、Ig M,其中IgG4在SLE 患者體內(nèi)主要起負性調(diào)控的作用,可從源頭封閉自身抗原阻斷自身抗原的暴露。而Ig M 抗體可以和SLE相關(guān)的雙鏈DNA 結(jié)合以阻斷dsDNA 與IgG形成致病性免疫復(fù)合物,降低LN 的發(fā)生率。這兩者均可抑制致病性免疫復(fù)合物的形成,進而阻斷其介導(dǎo)的補體活化和炎癥反應(yīng)。采用特異性封閉分子精準靶向自身抗原和自身抗體可針對性地緩解自身免疫性炎癥,同時不影響機體正常的免疫應(yīng)答,為自身免疫性疾病的防治提供新的策略,也將引領(lǐng)該領(lǐng)域新藥研發(fā)的潮流。

除此之外,一些研究表明,MAP4K3(GLK)的過度表達誘導(dǎo)RORγt-AhR 復(fù)合物特異性地控制T 細胞中白細胞介素-17A(IL-17A)的產(chǎn)生,從而導(dǎo)致自身免疫反應(yīng)。2020年,Sandling KJ等人[129]通過以基因為中心的DNA 測序發(fā)現(xiàn)了SLE患者中與白細胞介素-17(IL-17)相關(guān)的兩條途徑。Chuang HC 等人[130]發(fā)現(xiàn)DUSP基因家族也參與人類自身免疫性疾病(dusp2、dusp7、dusp10 和dusp12)或T 細胞激活(DUSP1、dusp5和dusp14)。因此,上述細胞因子及基因也可以被視為治療SLE的潛在靶點。在最近的研究中,研究人員提出,SLE患者的B220＋細胞中Hspa13m RNA 增加,而Hspa13 c KO 導(dǎo)致小鼠自身抗體和蛋白尿減少[131]。這一研究表明熱休克蛋白也可能成為治療SLE 的一個突破口。在最新的研究中,脆弱類桿菌可通過Est-1途徑促進B細胞中CD1d的表達,同時通過SHP-2途徑抑制CD86的表達,從而修復(fù)MRL/Lpr小鼠中B細胞的免疫反應(yīng)[132]。這一發(fā)現(xiàn)提示可否從微生物治療方面著手找尋治療自身免疫性疾病的新方案。

當(dāng)自身抗原暴露于免疫系統(tǒng)時,表達CD138且具有中央記憶表型的T 細胞(Tcm)可通過快速激活自身反應(yīng)性B細胞來促進SLE 的疾病進展[133]。而來自Ikaros鋅指家族(IKZF)的IKZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)可調(diào)節(jié)TLR7下游的B細胞活化和分化,因此可作為SLE 治療的潛在靶點[134]。Song S和他的團隊已經(jīng)開發(fā)出一種與非活性IRF5單體結(jié)合的抑制劑,這種抑制劑可以逆轉(zhuǎn)SLE 免疫細胞中IRF5的基本活性,證實IRF5是治療自身免疫性和炎癥性疾病的一個特別有價值的雙重功能治療靶點[135]。Lu X 等人[136]今年構(gòu)建了一個大規(guī)模平行報告分析(MPRA)文庫,該文庫強調(diào)了SLE 等位基因的共同和獨特轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。這為探索SLE和其他自身免疫性疾病的潛在轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制提供了一種新的方法。

3 免疫組庫分析在尋找靶點中的應(yīng)用

近年來,來自國內(nèi)外的多個實驗室正在迅猛地開展免疫組庫的基礎(chǔ)及應(yīng)用研究,其應(yīng)用已涉及疫苗和醫(yī)藥的研發(fā)、生物標志物的發(fā)現(xiàn)、微小殘留病檢測以及移植后監(jiān)測等領(lǐng)域。而SLE 作為一種經(jīng)典的自身免疫疾病,卻鮮有免疫組庫相關(guān)文獻報道及應(yīng)用轉(zhuǎn)化。2015年,Zhou L[137]等首次報道了不同年齡階段的MRL/lpr狼瘡模型小鼠胸腺和脾臟TCRβCDR3受體庫的組成和特征,為研究SLE 的疾病進展提供了一個新思路。隨后不久,Sui W 等[138]分析了SLE患者外周血TCRβCDR3庫的組成和特征,并篩選出了SLE 患者的3條公共CDR3氨基酸序列。這些研究主要是分析了SLE 模型小鼠或患者的TCRβCDR3 庫組成和特征,尚未關(guān)注到SLE發(fā)病和靶標篩選。根據(jù)Bradley SJ等[126]的研究發(fā)現(xiàn),通過高通量測序分析了m RNA,確定了與T 細胞功能障礙相關(guān)的新基因,并確認了干擾素相關(guān)基因(ISG)的誘導(dǎo),發(fā)現(xiàn)T 細胞功能障礙的分子基礎(chǔ),認定T 細胞表達改變的程度與疾病的嚴重程度相關(guān)。

在近期的實驗中,我們課題組同時分析了兩例LN 患者在大劑量糖皮質(zhì)激素治療后外周血TCRβCDR3庫和BCR-H CDR3庫,結(jié)果顯示T 細胞受體庫多樣性顯著低于B細胞庫,且獨特性TCR CDR3數(shù)量較少,最高頻CDR3克隆數(shù)達到2萬以上[139]。Dharma R 等[140]在實驗中發(fā)現(xiàn),SLE 患者外周血中T 細胞庫多樣性較健康人減少了一倍,而T 細胞儲備的多樣性并沒有發(fā)生變化。所以根據(jù)以上的研究,目前我們課題組正在采用高通量測序技術(shù)篩選出SLE患者Th1,Th2,Th17、Treg及Tfh的TCRβCDR3組庫的特征,從而較為精準地確定T 細胞的精準靶向治療的T 細胞克隆。這些通過高通量測序技術(shù)來篩選鑒定致病性免疫細胞為今后研究SLE的精準靶標提供了基礎(chǔ)。

高通量測序技術(shù)和單細胞基因組學(xué)(SCS)(圖3)的應(yīng)用,使人類在免疫細胞學(xué)方面的研究發(fā)生了革命性的變化。通過高通量測序技術(shù),可以從不同的個體中找尋到公共的BCR/TCR 序列,但是對于分析各個B/T 細胞亞群及其與傳統(tǒng)B/T 細胞的關(guān)系,甚至是了解各細胞亞群在不同疾病中發(fā)揮的作用這些層面,高通量測序就明顯失去了它的優(yōu)勢。另一種技術(shù),SCS 就補充了這些方面的缺失,例如單細胞RNA-seq(sc RNA-seq)的最新進展就可以將復(fù)雜的組織和宿主間隔分解成若干細胞類型,以此來研究它們與健康和疾病的相關(guān)性[141]。

圖3 SLE的傳統(tǒng)治療方法及單細胞測序技術(shù)的流程

Bossel Ben-Moshe N[141]等應(yīng)用高通量單細胞測序建立了一個在表型、基因序列和功能水平上對小鼠TCR 譜系進行多角度描述的平臺,其中所有可用的細胞都可以進行分類和分析(例如自淋巴結(jié)的濾泡性Tfh細胞),這為研究參與SLE致病的特異性TCR 的提供了一種新的方法學(xué)。Martini E 等[142]應(yīng)用單細胞測序?qū)毫Τ摵尚牧λソ咝∈筮M行研究,發(fā)現(xiàn)部分關(guān)鍵亞群特異性分子的上調(diào),這可能能夠解釋抗PD-1癌癥免疫治療期間的心臟毒性等臨床表現(xiàn)的成因,以及成為診斷或治療心力衰竭的有用靶點。下一步的研究是否也可以建立相應(yīng)的動物模型,應(yīng)用單細胞測序技術(shù)對模型進行全方位的研究,以進一步明確相應(yīng)的治療靶點。

單細胞測序技術(shù)方法的最新進展能夠測量形成腫瘤微環(huán)境的混合細胞類型和特定細胞類型狀態(tài)的比例[143]。是否可以大膽猜測,在SLE患者體內(nèi),也存在著這樣一種環(huán)境,其有利于特異性細胞發(fā)揮致病作用,推進SLE的進展。

最近的研究結(jié)果證明了癌癥單細胞突變分析的前景,它將提供有關(guān)腫瘤克隆異質(zhì)性的信息,而不僅僅是整體分析所提供的信息,這是邁向精確醫(yī)學(xué)的重要一步[144]。最近的SCS分析成果發(fā)現(xiàn)了膠質(zhì)母細胞瘤CSCs中差異表達的基因亞集的基因特征與腫瘤分級相關(guān)并可預(yù)估患者的生存[145],揭示了CCR8和LAYN(作為負調(diào)控因子)是肝癌相關(guān)的Treg標記基因以及它在CD8＋T 細胞(與不良預(yù)后相關(guān))和Tregs中的誘導(dǎo)作用[146],并且可以為乳腺癌、骨髓增殖性腫瘤、腎癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和急性髓系白血病的克隆結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)發(fā)生樹和突變獲取的動態(tài)提供新的見解[144]。目前已有部分研究表明,SLE 患者中Treg細胞不僅在數(shù)量上減少,而且其免疫抑制功能也降低[89],上述研究為進一步找尋SLE 相關(guān)Treg標記基因、數(shù)量減少以及免疫抑制功能降低的原因,分析SLE的克隆與亞克隆,甚至找尋到出SLE表現(xiàn)出高度異質(zhì)性的原因。

Nehar-Belaid D 等人[147]發(fā)現(xiàn),新發(fā)現(xiàn)的細胞亞群在兒童SLE疾病活動性高的患者中擴增,在成人SLE患者中復(fù)制,這個細胞亞群可能成為治療的新靶點細胞。我們可以進一步通過單細胞測序技術(shù)對其進行分析,以便在在未來SLE的治療中對其進行干預(yù)以達到治療目的。

盡管scRNA-seq分析可以得到豐富的細胞-細胞通信基因信息,但其中缺乏空間信息,換言之,這限制了其在具有空間結(jié)構(gòu)的組織中研究細胞-細胞通信的應(yīng)用[148]。此時,空間轉(zhuǎn)錄組分析就很好的彌補了這一缺陷,其最新成果高分辨率的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué),將幫助實現(xiàn)整合單細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)和空間數(shù)據(jù)的階躍變化,以提供對SLE病理的更深層次的理解。

目前單細胞表觀遺傳學(xué)、基因組學(xué)以及轉(zhuǎn)錄組學(xué)并未在SLE 的研究中進行大范圍的應(yīng)用,但其在基礎(chǔ)實驗、腫瘤學(xué)等方面的重大突破,為后續(xù)SLE的研究提供了新思路。對于個體差異的進一步了解,有助于人們對于疾病的病因產(chǎn)生新的見解以及幫助找尋新的治療靶點,這將有助于新的個體化治療方案的開展,尤其是對于SLE這類致病機制尚不明確、臨床表型復(fù)雜、療效不理想、副作用大的疾病。同時,建立在此基礎(chǔ)上的各種技術(shù)的相互結(jié)合(如基因組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)、表觀基因組學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)與靶向蛋白質(zhì)組學(xué)),通過研究分析多個基因組層,進而捕捉到關(guān)于每個細胞的更加完整的信息集,為更好地反映負責(zé)細胞功能的復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)提供了良好的技術(shù)基礎(chǔ),即單細胞多重組學(xué)可能更為高效[149]。

4 總結(jié)和展望

近年來,隨著對SLE 發(fā)病機制的深入研究,靶向治療藥物作為治療SLE的新型藥物相較于傳統(tǒng)療法表現(xiàn)出更好的臨床前景。在前人的基礎(chǔ)上進行的各項關(guān)于SLE靶向治療的研究,大多是針對B細胞、漿細胞、T 細胞、干擾素以及部分細胞因子。但是在對于B細胞或B細胞受體的SLE 致病相關(guān)基因的研究、漿細胞的存活機制、各型T 細胞及其細胞因子在SLE 的致病和進展中起到作用、干擾素抑制劑的改良以及特異性封閉分子的找尋等方面的研究許多缺陷。這就需要在今后的研究中,找尋治療SLE 的特異性靶點,只有這樣才能從根本上解決上述不足,找到根治SLE的方法。這不僅僅是治療SLE 這一種疾病的進展,更可能成為攻克自身免疫性疾病的預(yù)防及治療的一大突破口。針對以上,目前最需要突破的SLE靶向治療的難題就是尚未找到有效的治療靶標、無法確定常見的致病途徑以及找尋到異常細胞活性與疾病活動相關(guān)的生物標志物。這就需要加深對于疾病發(fā)展進程中各種免疫細胞所發(fā)揮的作用,特異性細胞所依賴的微環(huán)境,各種細胞間的相互溝通情況,以及其中所特有的基因和細胞通路的了解。

新興的下一代單細胞基因組方法能夠同時記錄和整合來自同一細胞的互補類型的細胞和分子信息[150]。目前單細胞基因組學(xué)已經(jīng)影響到癌癥研究的許多領(lǐng)域,在腫瘤內(nèi)異質(zhì)性、癌前病變的發(fā)展、腫瘤微環(huán)境、轉(zhuǎn)移和治療耐藥性等多個方面都有卓著成果[151]。因此,空間SCS和多組學(xué)方法在內(nèi)的新興技術(shù)將在未來幾年進一步擴大SCS方法的能力,為研究SLE的發(fā)病機制及致病靶點提供強有力的技術(shù)保障。

因此,隨著下一代測序技術(shù)的發(fā)展,有望在高通量測序、單細胞測序等技術(shù)的支持下進行轉(zhuǎn)錄組、靶向蛋白質(zhì)組、基因組、表觀基因組、空間組等多組學(xué)的分析,進而對當(dāng)前的靶向治療進行改良,找尋更加精準的治療靶點,在規(guī)避SLE 并發(fā)癥的發(fā)生、降低SLE 的復(fù)發(fā)等方面取得突破性進展,也為新型藥物的研發(fā)提供基礎(chǔ)。在未來的臨床治療中,臨床醫(yī)生可以通過抽取SLE患者外周血或是采集局部病理組織對患者的基因進行測序及多組學(xué)的分析,針對患者自身基因的特點選擇相應(yīng)的靶向藥物,制定個體化的治療方案。精準醫(yī)學(xué)已經(jīng)成為疾病防治的共識,這些方法為自身免疫性疾病的防治提供新的策略,這也將引領(lǐng)該領(lǐng)域新藥研發(fā)的潮流。