王 龍金世宇

(1.中國(guó)科學(xué)院微生物研究所真菌學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100101;2.北京市京西林場(chǎng),北京 102300)

0 引言

籃狀菌屬(TalaromycesC.R.Benj.)于1955年建立[1],是發(fā)菌科(Trichocomaceae)的一個(gè)物種較多的屬。籃狀菌的產(chǎn)分生孢子結(jié)構(gòu)一般為對(duì)稱雙輪帚狀枝(symmetrical biverticillate penicillus),有些種會(huì)產(chǎn)生裸囊殼型子囊果的有性繁殖結(jié)構(gòu)。

基于β-微管蛋白基因(β-tubulin gene,Ben A)、鈣調(diào)蛋白基因(calmodulin gene,Ca M)、RNA 多聚酶Ⅱ第二大亞基基因(DNA-dependent RNA polymerase II second largest subunit gene,Rpb2)和r DNA ITS1-5.8S-ITS2(ITS)的分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)(molecular phylogenetics)研究顯示籃狀菌屬目前可分8個(gè)組(section)約175種[2-5]。籃狀菌組(sect.Talaromyces)是籃狀菌屬已發(fā)現(xiàn)物種最多的組,在本論文完成時(shí)世界范圍內(nèi)該組共發(fā)現(xiàn)76種,中國(guó)已發(fā)現(xiàn)42種[3-17]。本文報(bào)道從我國(guó)貴州麻江縣、山東青島沿海灘涂土壤樣品中分離得到的兩個(gè)新記錄種,即安妮索菲籃狀菌(T.annesophieaeHoubraken)和土壤籃狀菌(T.soliJurjevi &S.W.Peterson)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和分離

土壤樣品采自我國(guó)貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣杏山鎮(zhèn)、山東青島沿海灘涂和湖北隨州大洪山。樣品分離采用改進(jìn)的倍比稀釋涂布平皿法[18-20],菌株保在我國(guó)權(quán)威菌種保藏機(jī)構(gòu)CGMCC(AS1-1 ＝AS3.16070,QD4-1 ＝AS3.16071,SZ1-1 ＝AS3.16072)。

1.2 傳統(tǒng)分類學(xué)研究

菌株培養(yǎng)性狀的觀測(cè)采用查氏酵母精瓊脂(Czapek yeast autolysate agar,CYA)分別在25、37、5 ℃和麥芽精瓊脂(5% malt extract agar,MEA)在25 ℃培養(yǎng)1周后觀測(cè),分生孢子和菌絲及滲出液和可溶性色素顏色的名稱采用Ridgway的名稱[21-23]。顯微性狀的描述選取MEA 25 ℃培養(yǎng)1周的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)做普通光學(xué)顯微鏡載片觀測(cè)[2]。

1.3 PCR擴(kuò)增和測(cè)序

基因組DNA 的提取方法及PCR 擴(kuò)增條件和參數(shù)參考Wang and Zhuang[24],Ben A的擴(kuò)增引物為bt 2a和bt 2b[25],Rpb2引物為T1和E2[13],ITS引物為ITS5和ITS4[26]。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)純化后由諾賽生物技術(shù)有限公司進(jìn)行正向和反向測(cè)序。

1.4 分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析

測(cè)序得到序列使用Bioedit 7.0.9[27]校對(duì),然后后提交到GenBank(AS1-1＝AS3.16070:Ben A＝MW988086,Rpb2＝MW988088,ITS＝MW965793;QD4-1＝AS3.16071:Ben A＝OK104790,Rpb2＝OK104793,ITS＝OK087306,SZ1-1＝AS3.16072:Ben A＝ MW988087,Rpb2＝ MW988089,ITS＝MW965794)。選擇籃狀菌組49個(gè)物種的模式菌株和本研究的三個(gè)菌株進(jìn)行分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析,以糙刺孢籃狀菌組(Sect.Trachyspermi)的艾斯尤特藍(lán)狀菌T.assiutensisSamson&Abdel-Fattah作為外群。這些菌株的Ben A-Rpb2-ITS組合序列用MEGA 6[28]進(jìn)行最大似然法(Maximum Likelihood,ML)做系統(tǒng)樹,同時(shí)進(jìn)行自展法(bootstrap)1000次重復(fù)評(píng)估各分支的可靠性(圖1),序列矩陣的“gaps”處理為“partial deletion”[29]。

2 結(jié)果

Ben A-Rpb2-ITS組合序列矩陣共1948個(gè)位點(diǎn)(site),ML分析的最適替代模型為K2 ＋GI。根據(jù)該序列矩陣的分子系統(tǒng)學(xué)研究顯示菌株AS3.16070與安妮索菲籃狀菌的模式菌株CBS 142939聚在一起,bootstrap支持率為100%;菌株AS3.16071和與土壤籃狀菌的模式菌株NRRL 62165同在一個(gè)分支,bootstrap支持率為99%,菌株AS3.16072 和與T.veerkampii的模式菌株CBS 500.78 聚在一起,bootstrap 值為98%。依據(jù)多相分類學(xué)分析支持這些菌株的鑒定,經(jīng)過查詢中國(guó)已發(fā)表的籃狀菌物種,確定安妮索菲籃狀菌和土壤籃狀菌為我國(guó)新記錄種(圖1～圖3)。

圖1 根據(jù)Ben A-Rpb 2-ITS的ML系統(tǒng)發(fā)育樹

圖3 土壤籃狀菌AS3.16071的形態(tài)特征。

安妮索菲籃狀菌(圖2)

圖2 安妮索菲籃狀菌AS3.16070的形態(tài)特征

Talaromyces annesophieaeHoubraken,Persoonia 39:461,2017[30]。

在CYA 上25℃培養(yǎng)7 d,形成直徑25～26 mm 的菌落,較厚,表面具少量輻射狀皺紋;邊緣于培養(yǎng)基表面,整齊;菌落絨狀;大量產(chǎn)孢,呈水芹綠色Cress Green to Dark Cress Green(R.Pl.XXXI);菌絲硫黃色Sulphur Yellow(R.Pl.V);滲出液稀少,呈無(wú)色微滴狀;可溶性色素?zé)o;背面呈天皇棕色Mikado Brown(R.Pl.XXIX)。

長(zhǎng)期以來(lái)，我國(guó)的傳統(tǒng)金融業(yè)無(wú)法滿足居民的投資需求。股票市場(chǎng)波動(dòng)較大風(fēng)險(xiǎn)高，銀行存款收益率低，收益率和風(fēng)險(xiǎn)無(wú)法同時(shí)滿足投資者的需求。個(gè)人理財(cái)產(chǎn)品的出現(xiàn)很好的解決了這一矛盾，雖然存在一定風(fēng)險(xiǎn)，但是相比于股市，個(gè)人理財(cái)產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)要小很多，與此同時(shí)個(gè)人理財(cái)產(chǎn)品的收益有遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于銀行的固定存款。因此在很大程度上滿足了市場(chǎng)上大部分風(fēng)險(xiǎn)厭惡型的投資者。

在MEA 上25 ℃培養(yǎng)7 d,形成直徑33～35 mm 的菌落,較薄,表面平坦,邊緣完整;菌落絨狀;大量產(chǎn)孢,呈豆綠色至艾蒿綠色(Pea Green to Artemisia Green,R.Pl.XXXII);菌絲淡綠黃色Light Viridine Green(R.Pl.VI);滲出液無(wú);可溶性色素?zé)o;背面呈摩洛哥紅色Morocco Red(R.Pl.VI)。

在查氏酵母精瓊脂(CYA)上37 ℃培養(yǎng)7 d,不萌發(fā)。

在查氏酵母精瓊脂(CYA)上5 ℃培養(yǎng)7 d,不萌發(fā)。

產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)發(fā)生于表面菌絲,孢梗莖(80～)100～250×2～3μm,壁光滑;帚狀枝雙輪生兼不規(guī)則生;?；枯?～6個(gè),10～12×2～3μm;瓶梗披針形,4～6個(gè)/輪,10～12×2～3μm;孢子近球形至橢球形,2.5～3μm,有時(shí)較大可達(dá)4μm,壁粗糙。

主要特征:生長(zhǎng)適度,形成絨狀菌落,在CYA 上分生孢子呈水芹綠色,很像構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans(Eidam)G.Winter)的孢子顏色;帚狀枝雙輪生兼不規(guī)則生,菌絲硫黃色,分生孢子橢球形至近球形,壁粗糙。

分布和基物:貴州省黔東南苗族侗族自治州麻江縣杏山鎮(zhèn)土壤(AS1-1＝AS3.16070)。

土壤籃狀菌(圖3)

Talaromyces soli Jurjevic&S.W.Peterson,Fung.Biol.123(10):757,2019[31]。

在MEA 上25 ℃培養(yǎng)7 d,形成直徑35～38 mm 的菌落,較厚,平坦,邊緣整齊;菌落絮狀兼繩狀;適度產(chǎn)孢,呈豆綠色Pea Green(R.Pl.XLVII);菌絲淡綠黃色Pale Greenish Yellow(R.Pl.XV);滲出液少量,呈淺褐色;無(wú)可溶性色素;背面呈奶油色Cream Color(R.Pl.XVI)。

在CYA 上37 ℃培養(yǎng)7 d,菌落直徑25-28 mm,類似于CYA 上25 ℃、7 d。

在CYA 上5 ℃培養(yǎng)7 d,不萌發(fā)。

由氣生菌絲和繩狀菌絲產(chǎn)生產(chǎn)孢結(jié)構(gòu),孢梗莖(10～)100～200×2.5～3.5μm,壁光滑;帚狀枝雙輪生,偶見單輪生;?；枯?～10個(gè),8～13×2.5～3.5μm;瓶梗披針形,每輪4～10個(gè),9～12×2.5～3.5μm,分生孢子橢球形,3.5～4.5×3～3.5μm,壁光滑。

主要特征:生長(zhǎng)適中,形成菌絲繩,菌絲體呈綠黃色,分生孢子呈榆葉綠色;帚狀枝雙輪生,偶見單輪生;分生孢子橢球形,壁光滑。

分布和基物:山東青島灘涂土壤(QD4-1＝AS3.16071)。

3 討論

安妮索菲籃狀菌此前只在荷蘭發(fā)現(xiàn),GenBank目前只有其模式菌株CBS 142939的序列[30]。我國(guó)的菌株AS3.16070在菌落形態(tài)上與模式菌株幾乎完全相同,其帚狀枝及各個(gè)部分的形態(tài)和維度與模式菌株也非常接近,但我國(guó)菌株的分生孢子壁粗糙,而模式菌株的孢子壁光滑,另外我國(guó)菌株還產(chǎn)生一些較大的分生孢子,模式菌株則否。該菌株與模式菌株的Ben A序列無(wú)差別(MW988086 vs.MF590098),Rpb2序列只差1個(gè)堿基(MW988088 vs.MN969199),ITS 序列有2 個(gè)堿基的差異(MW965793 vs.MF574592)。Ben ARpb2-ITS組合序列的分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析顯示我國(guó)菌株與模式菌株同在一個(gè)分支且支持率顯著(圖1)。

土壤藍(lán)狀菌此前只發(fā)現(xiàn)于美國(guó)和尼加拉瓜[31]。我國(guó)菌株AS3.16071與模式菌株在CYA 菌落形態(tài)上無(wú)大差別,例如它們均形成絮狀和繩狀臟粉色及綠黃色菌絲體,但其分生孢子顏色略有差異,我國(guó)菌株的分生孢子呈榆葉綠色而模式菌株的分生孢子呈灰綠色。它們的顯微結(jié)構(gòu)幾乎無(wú)差別,比如他們均由繩狀菌絲和氣生菌絲產(chǎn)生產(chǎn)孢結(jié)構(gòu),帚狀枝雙輪生,偶見單輪生,孢子橢球形,但我國(guó)菌株的孢子壁光滑而模式菌株孢子壁稍粗糙。我國(guó)菌株與模式菌株的Ben A序列無(wú)差異(OK104790 vs.MH792947),Rpb2有2個(gè)堿基的差異(OK104793 vs.MH793138),ITS序列完全相同(OK087306 vs.MH793074)。組合序列的分子系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析顯示該菌株與模式菌株同在一個(gè)分支且具有顯著的支持率(圖1)。