蒼術(shù)-厚樸藥對與其單味藥中有效成分比較分析*

王培輝 于 強(qiáng) 姜 黎 李偉銘 趙 森

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院藥劑科，遼寧 大連116001）

藥對配伍是介于中藥學(xué)和方劑學(xué)之間的一門學(xué)科，即中醫(yī)臨床上常用的相對固定的2 味中藥材配伍組合，具有一定的規(guī)律性，兩藥藥性在某種程度上相同或制約[1]，如相須藥對、相反藥對、相使藥對、相畏藥對等[2]。蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC或北蒼術(shù)Aatractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖，辛、苦、溫，具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目的作用[3]。厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.Var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，苦、辛、溫，具有燥濕化痰、下氣除滿的作用[2]。蒼術(shù)燥濕為主，厚樸行氣為輔，協(xié)同相助，可升脾氣，降胃氣，化濕濁，健脾胃[4]。用于治療濕困脾陽，首重如裹，胸膈痞悶，脘腹脹滿等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，蒼術(shù)-厚樸藥對配伍的中藥方劑有190 余首之多，最具代表性的方劑為平胃散，以此藥對作君臣之用，為臨床常用配伍藥對。研究藥對配伍規(guī)律可作為研究復(fù)方配伍規(guī)律的重要切入點(diǎn)之一，從而揭示其配伍規(guī)律及科學(xué)內(nèi)涵，深入挖掘和提高中藥復(fù)方的配伍理論，為復(fù)方的配伍機(jī)制研究提供線索和依據(jù)[5]。蒼術(shù)素為蒼術(shù)的主要有效成分之一，厚樸酚與和厚樸酚為厚樸中的有效成分，《中華人民共和國藥典》2020 版一部分別以其作為蒼術(shù)和厚樸的質(zhì)量控制指標(biāo)[6]。目前，對蒼術(shù)、厚樸單味藥的研究報(bào)道較多，而對兩藥配伍研究的報(bào)道較少。為探討藥對配伍使用時(shí)對蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚的溶出率是否有影響，我們進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，為蒼術(shù)-厚樸藥對的進(jìn)一步深入研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent-1260 型高效液相色譜儀（安捷倫有限公司）；JA5003B 型電子分析天平（上海精科有限公司）；METTLER MS105DJ 型十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 試藥 蒼術(shù)素對照品（111924-201102）、厚樸酚對照品（110729-200412）、和厚樸酚對照品（110730-201011），均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純；蒼術(shù)、厚樸藥材均購自安徽賀林中藥飲片有限公司，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李峰教授檢定菊科植物北蒼術(shù)（Atractylodes chinensis（DC.）Koidz）的干燥根莖和木蘭科植物凹葉厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.war.blioba Rehd.et Wils.）的干燥枝皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB-C18 色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（70∶30）進(jìn)行等度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：294 nm；柱溫：25 ℃。在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)以蒼術(shù)素計(jì)不低于30000，分離度＞1.5[7]。

2.2 對照品溶液制備 分別精密稱取蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚適量，以甲醇配成各單一成分的溶液，即得蒼術(shù)素0.4548 mg·mL-1、厚樸酚0.2125 mg·mL-1、和厚樸酚0.1820 mg·mL-1的對照品儲備液。

2.3 供試品溶液制備

2.3.1 蒼術(shù)醇提液 取蒼術(shù)飲片5 g，粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加70%乙醇50 mL 回流提取30 min，濾過，置量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，得到蒼術(shù)醇提取液。

2.3.2 厚樸醇提液 取厚樸飲片5 g，粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加70%乙醇50 mL 回流提取30 min，濾過，置量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，得到厚樸醇提取液。

2.3.3 蒼術(shù)水提液 取蒼術(shù)飲片5 g，粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水50 mL 煎煮30 min，濾過，置量瓶中，加水稀釋至刻度，得到蒼術(shù)水提取液。

2.3.4 厚樸水提液 取厚樸飲片5 g，粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水50 mL 煎煮30 min，濾過，置量瓶中，加水稀釋至刻度，得到厚樸水提取液。

2.3.5 蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液 取厚樸、蒼術(shù)各5 g 粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加70%乙醇50 mL 回流提取30 min，濾過，置量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，得到蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液[8]。

2.3.6 蒼術(shù)-厚樸藥對水提液 取厚樸、蒼術(shù)各5 g 粉碎，過4 號篩，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水50 mL煎煮30 min，濾過，置量瓶中，加水稀釋至刻度，得到蒼術(shù)-厚樸藥對水提液[9]。

2.4 蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚混合對照品溶液的制備 精密吸取“2.2”項(xiàng)下的蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚的對照品儲備液2、3、1.5 mL。置同一10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 線性范圍考察 分別精密吸取混合對照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5 μL，在上述色譜條件下分別進(jìn)行進(jìn)樣測定，以進(jìn)樣量（X，μ g）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，蒼術(shù)素Y=1.6981 ×103X+196，r=0.9993，表明進(jìn)樣量在0.0683～0.4775μg線性關(guān)系良好。厚樸酚Y=2.0904×102X+36.7140，r=0.9991，表明進(jìn)樣量在0.2274～1.5918 μg 線性關(guān)系良好。和厚樸酚Y=7.4129×102X-3.2857，r=0.9991，表明進(jìn)樣量在0.1594～1.1156 μg線性關(guān)系良好。

2.6 精密度考察 精密吸取蒼術(shù)-厚樸和提液樣品的供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次，測得蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚的RSD 值分別為1.3%、1.6%、1.0%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 精密吸取蒼術(shù)-厚樸和提液樣品的供試品溶液，分別在0、2、4、8、12 h 進(jìn)樣10 μL，測得蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD 分別為1.2%，1.3%，1.2%，結(jié)果表明供試品溶液中上述3 個(gè)成分在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，符合規(guī)定。

2.8 重復(fù)性考察 精密吸取蒼術(shù)-厚樸和提液樣品的供試品溶液5 份，每份蒼術(shù)、厚樸各約5 g，精密稱定，按“2.3.5”項(xiàng)下方法平行制備5 份供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL 進(jìn)行測定。結(jié)果蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚含量平均值分別為0.5650、0.6409、0.27648 mg·g-1，RSD分別為1.1%、1.5%、1.4%。

2.9 加樣回收率考察 取已知含量（蒼術(shù)素1.8486 mg·g-1，厚樸酚1.0876 mg·g-1，和厚樸酚0.4840 mg·g-1）的蒼術(shù)-厚樸醇提液樣品，取5 份，每份蒼術(shù)、厚樸各約2.5 g，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，精密加入蒼術(shù)素4.9970 mg，厚樸酚2.6091 mg，和厚樸酚1.2054 mg 按“2.3.5”項(xiàng)下的方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)行測定后計(jì)算回收率，蒼術(shù)素回收率（98.8±2.4）%、厚樸酚回收率（98.6±1.9）%、和厚樸酚回收率（98.4±1.2）%。本方法回收率良好。

2.10 樣品的含量測定 取蒼術(shù)、厚樸藥材，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下的操作方法操作，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定并計(jì)算樣品中指標(biāo)性成分的含量。見表1。

表1 含量測定結(jié)果 （mg·g-1）

3 討論

3.1 蒼術(shù)-厚樸配伍歷史沿革 宋代《太平惠民和劑局方》中，平胃散分別以蒼術(shù)、厚樸為君藥和臣藥，取其化濕濁，健脾胃，調(diào)氣機(jī)之功效，以求降胃氣之故[10]。蒼術(shù)性燥主升，善除濕運(yùn)脾；厚樸性燥主降，善溫中化濕，下氣除滿。蒼術(shù)-厚樸藥對配伍，臨床用于濕困脾陽，胸膈痞塞，脘腹脹滿，嘔吐惡心，不思飲食，口淡無味，苔白厚膩[11]。

3.2 色譜條件檢測波長分析 根據(jù)《中華人民共和國藥典》2020 版第一部記載，蒼術(shù)的最佳檢測波長為340 nm，厚樸的最佳檢測波長為294 nm。在340 nm 和294 nm 處分別對樣品進(jìn)行分離，發(fā)現(xiàn)在340 nm 處厚樸酚與和厚樸酚沒有吸收峰，于是選擇294 nm 為檢測波長[12]。

3.3 提取溶媒分析 蒼術(shù)-厚樸藥對水提液，蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液中蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚含量明顯高于單味藥材中該3 種成分的含量，其中蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液中3 種成分含量最高，分別為1.8486、1.0876、0.4840 mg·g-1。在一定程度上證明了，蒼術(shù)、厚樸在體外配伍后能促進(jìn)有效成分的溶出。但二藥配伍比例的變化以及乙醇的濃度、提取時(shí)間對幾種有效成分的溶出率是否有影響，還需在今后的試驗(yàn)中進(jìn)一步深入討論研究。

3.4 水提取液和醇提取液含量差異的分析 水提取作為中藥傳統(tǒng)煎藥方法，但蒼術(shù)-厚樸藥對水提液中3 個(gè)有效成分的含量均低于蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液，尤其對于厚樸酚更為明顯。經(jīng)過分析可能是由于本文中測定的3種有效成分均為脂溶性，所以在乙醇中提取率高于在水中提取率。

3.5 提取方法分析 從結(jié)果中可以看出，蒼術(shù)、厚樸在體外配伍后更能促進(jìn)有效成分的溶出。但是水提取為我國中藥傳統(tǒng)煎藥方法[13]，雖然經(jīng)過測定在其中3種有效成分的含量并沒有醇提取混合液中高，但它進(jìn)入體內(nèi)后所產(chǎn)生的藥理作用是否強(qiáng)于醇提取混合液進(jìn)入體內(nèi)后所產(chǎn)生的藥理作用，這是一個(gè)很值得進(jìn)一步探討的問題。

本實(shí)驗(yàn)通過高效液相色譜法對蒼術(shù)-厚樸藥對水提液，蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液及其單味藥材中蒼術(shù)素、厚樸酚、和厚樸酚含量進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)醇提取混合液和水提取混合液中檢測出，3 種有效成分的含量均高于單味藥材，其中蒼術(shù)-厚樸藥對醇提液中含量最高，藥對配伍可促進(jìn)有效成分溶出，為藥對的中藥復(fù)方配制和臨床應(yīng)用研究提供依據(jù)。