杓唇石斛化學(xué)成分研究

楊宗玉張瑜楊進(jìn) 羅婉麗 張茂生王剛 孫成新 董敏健 肖世基

（遵義醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 貴州 遵義563000）

石斛為“藥食同源”的常用名貴中藥材之一，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有增強(qiáng)脾胃、活津止渴、清熱等功能，在我國(guó)擁有2 000 多年的用藥歷史，民間廣泛應(yīng)用于治療熱病津傷、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。石斛所含化學(xué)成分復(fù)雜，石斛屬植物富含糖類、生物堿類、聯(lián)芐類、菲類、香豆素類、茐酮類、甾體皂苷、二萜類等化學(xué)成分［1］。杓唇石斛Dendrobium moschatum（Buch.?Ham.）Sw.通常被用作園藝觀賞植物，主要分布于中國(guó)云南省南部到西部地區(qū)，并生長(zhǎng)在海拔1 300 m 的樹干上。杓唇石斛新鮮花序和葉片富含精油［2?3］。從杓唇石斛中分離出的聯(lián)芐衍生物杓唇石斛素，具有抗腫瘤［4?7］、抑制血管新生［8］、抗炎［9］等功能，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，藥理活性廣，具有廣闊的開發(fā)前景。但現(xiàn)今對(duì)該植物化學(xué)成分的研究報(bào)道很少，本文以杓唇石斛全株為研究對(duì)象，運(yùn)用各種色譜分離技術(shù)對(duì)其甲醇提取部分的化學(xué)成分進(jìn)行分離，利用波譜技術(shù)對(duì)化合物進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定。

1 材料

LC?3000 型半制備型高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；分析型高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司）；Sepacore 型中壓制備系統(tǒng)（瑞士Buchi 公司）；RE?2000A 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮儀器生化儀器廠）；ZF?7 型暗箱三用紫外線分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）；KQ?500DE 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SHB?ⅢA 循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；半制備C18柱（日本YMC 公司）；Finnigan LCQDECA型質(zhì)譜儀（德國(guó)Bruker 公司）；分析C18柱、Agilent DD2400?MR 型核磁共振儀（美國(guó)Agilent 公司）；FA2004N 電子天平（上海菁海儀器有限公司）；硅膠（青島鼎康硅膠有限公司）。甲醇、乙腈（色譜純，成都市科龍化工試劑廠）。

杓唇石斛全草，采摘于云南保山，經(jīng)由遵義醫(yī)科大學(xué)吳發(fā)明教授鑒定為蘭科植物杓唇石斛Dendrobium moschatum（Buch.?Ham.）Sw.，保 存于遵義醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。

2 提取與分離

將22.0 kg 新鮮的杓唇石斛切段，陽(yáng)光下曝曬后粉碎，干粉重4.5 kg，室溫下用10 倍體積的90%甲醇超聲提取30 min，共提3次，合并提取液，用濾紙過(guò)濾，濾液經(jīng)MCI柱，甲醇?水（90∶10）洗脫，除掉葉綠素，減壓濃縮得甲醇浸膏213.8 g；將甲醇浸膏轉(zhuǎn)移至燒杯中，加入蒸餾水使其分散，分別用乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，減壓濃縮，得到乙酸乙酯浸膏30.0 g、正丁醇浸膏50.0 g。

將正丁醇部分浸膏經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚?乙酸乙酯?甲醇（1∶1∶0～0∶1∶1）梯度洗脫，得3個(gè)組分，分別將這3 個(gè)組分減壓濃縮，得到乙酸乙酯?石油醚（1∶1）浸膏2.1 g、乙酸乙酯浸膏1.9 g、乙酸乙酯?甲醇（1∶1）浸膏25.7 g；經(jīng)分析型高效液相色譜儀分析由正丁醇部分得到的這3個(gè)部分的浸膏，與乙酸乙酯浸膏對(duì)比分析后發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯浸膏（正丁醇部分）、石油醚?乙酸乙酯（1∶1）浸膏（正丁醇部分）與乙酸乙酯浸膏有較多相似的成分，將這3 部分合并，得到浸膏（34.0 g）。將浸膏（34.0 g）經(jīng)中壓硅膠柱色譜，石油醚?乙酸乙酯（20∶1～0∶1）梯度洗脫及TLC檢測(cè)分析合并后，共得到Fr.1～Fr.11。

Fr.7 經(jīng)梯度洗脫，經(jīng)TLC 檢測(cè)后合并，減壓濃縮后，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌樣經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（30∶70～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，減壓濃縮，TLC 檢測(cè)分析后合并得到Fr.7.1～Fr.7.21。Fr.7.10 經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（61∶39）洗脫得到化合物2（12.0 mg）；Fr.7.14 經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（74∶26）洗脫得到化合物4（11.0 mg）；Fr.7.19 經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（85∶15）洗脫得到化合物5（7.8 mg）。

Fr.5 梯度洗脫合并，減壓濃縮，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌樣經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（10∶90～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，減壓濃縮，TLC 檢測(cè)分析后合并得到Fr.5.1～Fr.5.14，溶劑揮發(fā)后，F(xiàn)r.5.3 呈白色結(jié)晶狀，反復(fù)重結(jié)晶后得到化合物1（14.5 mg）。Fr.5.7 經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（86∶14）洗脫得到化合物6（2.0 mg）；取Fr.5.4 經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（86∶14）洗脫得到化合物9（18.6 mg）。

Fr.9 梯度洗脫合并，減壓濃縮，加入甲醇溶解，加入MCI 填料拌樣經(jīng)經(jīng)反相制備HPLC，甲醇?水（30∶70～100∶0）進(jìn)行梯度洗脫，TLC 檢測(cè)觀察分析后合并得到Fr.9.1～Fr.9.15，溶劑揮發(fā)后，樣品Fr.9.10 呈磚紅色粉末狀，加甲醇多次潤(rùn)洗后得到化合物3（35.6 mg）。Fr.9.7 經(jīng)反相制備HPLC，乙腈?水（39∶61）洗脫得到化合物7（35.0 mg）、化合物8（5.0 mg）、化合物10（7.0 mg）。Fr.9.1 經(jīng)反相制備HPLC，乙腈?水（39∶61）洗脫得到化合物11（16.4 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色片晶體。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.65（1H，d，J＝9.5 Hz，H?3），7.51～7.39（2H，m，H?7，8），7.30～7.18（2H，m，H?5，6），6.35（1H，d，J＝7.1 Hz，H?4）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［10］ 對(duì)照鑒定化合物1 為香豆素。

化合物2：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式C15H14O3，ESI?MSm／z：241.1 ［M?H］－。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.05（1H，t，J＝7.7 Hz，H?7），6.81（2H，d，J＝7.7 Hz，H?6，8），6.54（1H，d，J＝2.1 Hz，H?3），6.49（1H，d，J＝2.1 Hz，H?1），3.93（3H，s，4?OCH3），2.62（4H，d，J＝6.2 Hz，H?9，10）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：157.5（s，C?2），155.4（s，C?4），153.0（s，C?5），143.2（s，C?10a），140.4（s，C?8a），126.9（s，C?7），120.6（m，C?4b），119.2（s，C?8），116.8（s，C?6），113.6（s，C?4a），108.6（s，C?1），98.7（s，C?3），56.1（s，4?OCH3），30.9（s，C?9），30.6（s，C?10）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［11］ 對(duì)照鑒定化合物2 為2，5?二羥基?4?甲氧基?9，10?二氫菲。

化合物3：無(wú)色針狀結(jié)晶。1H?NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：9.51（1H，s，OH?5），8.96（1H，s，OH?2），7.61（1H，t，J＝9.1 Hz，H?9），7.50（1H，d，J＝8.8 Hz，H?10），7.43（1H，q，J＝3.7 Hz，H?7），7.40（1H，dd，J＝7.8，2.2 Hz，H?8），7.11（1H，dd，J＝7.0，2.2 Hz，H?6），7.07（1H，d，J＝2.5 Hz，H?1），6.99（1H，d，J＝2.5 Hz，H?3），4.14（3H，s，4?OCH3）；13C?NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：156.4（s，C?2），155.5（s，C?4），154.3（s，C?5），136.2（s，C?8a），134.1（s，C?10a），128.9（s，C?9），126.6（s，C?7），126.1（s，C?10），120.2（s，C?8），118.9（s，C?4b），116.1（s，C?6），113.0（s，C?4a），106.9（s，C?1），101.5（s，C?3），57.6（s，4?OCH3）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［12］ 對(duì)照鑒定化合物3 為4?甲氧基菲?2，5?二醇。

化合物4：淺黃色固體。1H?NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：6.31（1H，s，H?12 ），6.29（1H，s，H?14），5.10（1H，td，J＝6.4，3.1 Hz，H?3），3.73（3H，s，13?OCH3），2.86（1H，s，H?10a），2.71～2.62（1H，m，H?10b），2.43（1H，dd，J＝6.4，3.1 Hz，H?4a），1.89（1H，dd，J＝9.1，6.4 Hz，H?5a），1.59（4H，d，J＝5.6 Hz，H?4b，5b，6a，9a），1.39（3H，s，H?17），1.25（4H，d，J＝6.4 Hz，H?7，8），1.21～1.13（2H，m，H?6b，9b）；13C?NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：168.7（s，C?1），160.0（s，C?15），158.9（s，C?13），143.3（s，C?11），118.1（s，C?16），108.8（s，C?12），97.4（s，C?14），72.0（s，C?3），56.1（s，13?OCH3），33.2（s，C?4），31.0（s，C?10），30.6（s，C?9），27.5（s，C?8），25.9（s，C?7），25.3（s，C?6），21.6（s，C?5），19.9（s，C?17）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［13］ 對(duì)照化合物鑒定化合物4 為ozoroalide。

化合物5：淺黃色油狀物，分子式C18H32O3，ESI?MSm／z：295.2 ［M?H］－。1H?NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：6.50（1H，dd，J＝15.0，11.3 Hz，H?11），5.96（1H，t，J＝11.0 Hz，H?10），5.65（1H，dd，J＝15.1，6.3 Hz，H?12），5.36（1H，dd，J＝18.4，7.9 Hz，H?9），4.12～4.05（1H，m，H?13），2.25（2H，t，J＝7.2 Hz，H?2），2.16（2H，dd，J＝13.7，6.8 Hz，H?8），1.63～1.15（18H，m，H?3，7，14～17），0.85（3H，t，J＝6.4 Hz，H?18）；13C?NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：174.9（s，C?1），138.6（s，C?12），132.0（s，C?9），129.4（s，C?11），125.2（s，C?10），72.4（s，C?13），38.5（s，C?14），34.3（s，C?2），32.7（s，C?16），30.4（s，C?7），29.9（s，C?6），29.8（s，C?5），28.3（s，C?4），28.1（s，C?8），26.0（s，C?15），25.7（s，C?3），23.4（s，C?17），14.4（s，C?18）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［14］ 對(duì)照鑒定化合物5 為（9Z，11E）?13?羥基?9，11?十八碳二烯酸。

化合物6：白色塊狀結(jié)晶。1H?NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：7.26（4H，ddd，J＝16.2，7.9，4.1 Hz，H?11，12，13，14），7.19～7.15（1H，m，H?10），6.33（1H，d，J＝1.6 Hz，H?6），6.31（1H，d，J＝1.9 Hz，H?2），6.24（1H，t，J＝2.2 Hz，H?4），3.71（3H，s，3?OCH3），2.89（2H，dd，J＝9.8，6.1 Hz，H?8），2.80（2H，dd，J＝9.8，6.1 Hz，H?7）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［15］ 對(duì)照鑒定化合物6 為5?羥基3?甲氧基聯(lián)芐。

化合物7：紅色膠狀物，分子式C17H20O5，ESI?MSm／z：303.1 ［M?H］－。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.83（1H，d，J＝8.0 Hz，H?5′），6.67（1H，dd，J＝8.0，1.9 Hz，H?6′），6.60（1H，d，J＝1.8 Hz，H?2′），6.35（2H，s，H?2，6），3.82（6H，s，3，5?OCH3），3.82（3H，s，3′?OCH3），2.80（4H，s，H?α，α′）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［16］ 對(duì)照鑒定化合物7 為4，4′?二羥基?3，3′，5?三甲氧基聯(lián)芐。

化合物8：白色粉末。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.12（1H，t，J＝7.7 Hz，H?5′），6.73（1H，d，J＝7.5 Hz，H?6′），6.66（1H，d，J＝2.4 Hz，H?4′），6.63（1H，d，J＝3.3 Hz，H?2′），6.30（1H，s，H?6），6.24（2H，d，J＝1.5 Hz，H?2，4），3.72（3H，s，5?OCH3），2.83～2.75（4H，m，?CH2CH2?）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［17］ 對(duì)照鑒定化合物8 為山藥素Ⅲ。

化合物9：白色粉末。1H?NMR（400 MHz，CD3COCD3）δ：8.32（1H，s，OH?2），7.09（1H，d，J＝7.4 Hz，H?5），7.04～6.98（1H，m，H?3），6.81（1H，d，J＝8.0 Hz，H?6），6.73（1H，t，J＝7.4 Hz，H?4），3.59（3H，s，3′?OCH3），2.88（2H，t，J＝7.7 Hz，H?1′），2.58（2H，t，J＝7.7 Hz，H?2′）；13C?NMR（100 MHz，CD3COCD3）δ：173.0（s，C?3′），155.0（s，C?2），130.0（s，C?1），127.3（s，C?5），126.9（s，C?3），119.5（s，C?6），115.0（s，C?4），50.6（s，3′?OCH3′），33.5（s，C?1′），25.7（s，C?2′）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［18］ 對(duì)照鑒定化合物9 為鄰羥基苯丙酸甲酯。

化合物10：黃褐色固體。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.10（1H，d，J＝7.5 Hz，H?5），7.01（1H，tt，J＝6.8，3.4 Hz，H?3），6.81（1H，d，J＝8.0 Hz，H?6），6.74（1H，t，J＝7.4 Hz，H?4），4.06（2H，q，J＝7.1 Hz，H?4′），2.90～2.84（2H，m，H?1′），2.58（2H，dd，J＝9.3，6.1 Hz，H?2′），1.17（3H，t，J＝7.1 Hz，H?5′）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［19］ 對(duì)照鑒定化合物10 為鄰羥基苯丙酸乙酯。

化合物11：黃色油狀。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.10～ 7.00（2H，m，H?3，4），6.87～6.76（2H，m，H?5，6），3.65（3H，s，3′?OCH3），2.89（2H，t，J＝7.0 Hz，H?1′），2.67（2H，t，J＝7.0 Hz，H?2′），1.98（3H，s，2?OCOCH3）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：175.6（s，C?3′），173.4（s，2?OCOCH3），154.8（s，C?2），130.5（s，C?6），128.0（s，C?4），127.3（s，C?5），120.5（s，C?1），116.6（s，C?3），52.2（s，3′?OCH3），34.8（s，C?2′），25.4（s，C?1′），22.8（s，2?OCOCH3）。經(jīng)波譜數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)［20］ 對(duì)照鑒定化合物11 為2?乙酰氧基苯丙酸甲酯。

4 結(jié)論

從蘭科石斛屬植物杓唇石斛中分離鑒定出11個(gè)化合物，化合物類型包括聯(lián)芐、大環(huán)內(nèi)酯、苯丙素、脂肪酸、菲、香豆素類等，其中聯(lián)芐類、菲類、香豆素類為石斛屬植物的主要化學(xué)成分。此次分離得到的化合物2～11 為首次從杓唇石斛中分離得到，其中化合物4、5、9、10 為首次從蘭科植物中分離得到，化合物11 為新的天然產(chǎn)物。本實(shí)驗(yàn)提供該植物豐富的化學(xué)信息，揭示杓唇石斛與其它種石斛藥效物質(zhì)基礎(chǔ)上存在一定的區(qū)別，為更好的開發(fā)利用該植物提供一定的理論數(shù)據(jù)。