球孢白僵菌Bb09侵染美國(guó)白蛾的掃描電鏡觀察及其致病性

楊苗，李英，郭建剛，任海潮，許子怡，李會(huì)平，3

(1 河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，河北 保定 071000；2 河北霧靈山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理中心，河北 承德 067300；3 河北省城市森林健康技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 保定 071000)

美國(guó)白蛾(Hyphantriacunea)屬鱗翅目燈蛾科，又稱秋幕毛蟲(chóng)、網(wǎng)幕毛蟲(chóng)等，原產(chǎn)于北美洲，是一種外來(lái)入侵有害生物，因具有食性雜、繁殖量大、危害嚴(yán)重等特點(diǎn)，被列為重大林業(yè)有害生物[1]。自1979年美國(guó)白蛾在我國(guó)遼寧省首次發(fā)現(xiàn)，到2020年已危及到我國(guó)13個(gè)省級(jí)，598個(gè)縣級(jí)行政區(qū)[2]。目前防治美國(guó)白蛾的方法主要有化學(xué)防治、生物防治、生態(tài)防治、人工防治等[3-6]。研究表明農(nóng)藥制劑0.5% 藜蘆堿 WP 對(duì)美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)具有良好的致死效果，濃度為10 mg/L藜蘆堿 WP 在施用3 d后美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)達(dá)到死亡高峰期[7]。劉子歡等研究了蘇云金桿菌對(duì)美國(guó)白蛾的生長(zhǎng)發(fā)育影響[8]。李建等試驗(yàn)12種殺蟲(chóng)劑對(duì)美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的室內(nèi)毒力測(cè)定[9]。但長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥易導(dǎo)致害蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性，生物防治能有效控制美國(guó)白蛾種群數(shù)量，同時(shí)對(duì)環(huán)境安全，是一種維持生態(tài)平衡和實(shí)現(xiàn)可持續(xù)控制美國(guó)白蛾的無(wú)公害防治措施，因而越來(lái)越得到公眾的認(rèn)可和重視[10-11]。

白僵菌屬是目前研究和應(yīng)用于害蟲(chóng)生物防治最廣泛的一類昆蟲(chóng)病原真菌，其殺蟲(chóng)范圍達(dá)700多種，具有致病性強(qiáng)，應(yīng)用范圍廣，對(duì)環(huán)境無(wú)明顯污染等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)廣泛運(yùn)用于二斑葉螨、煙粉虱和薊馬等農(nóng)林害蟲(chóng)防治[12-15]。在適宜的條件下，白僵菌分生孢子萌發(fā)后能通過(guò)表皮進(jìn)入寄主體腔，產(chǎn)生有毒代謝物導(dǎo)致寄主死亡最終侵入寄主器官，穿出體壁重新產(chǎn)生孢子[16]。目前對(duì)利用寄生菌防治美國(guó)白蛾已有不少報(bào)道，如劉永清等篩選出對(duì)美國(guó)白蛾致病力達(dá)94.2 %(孢子濃度為1×109孢子/mL)的高致病性球孢白僵菌Bb11，覃豐全等從22株球孢白僵菌菌株中篩選出高致病力的球孢白僵菌菌株FD，并進(jìn)行初步野外防治試驗(yàn)，取得良好防治效果[17-18]。李會(huì)平等測(cè)定來(lái)自不同寄主和生境的白僵菌對(duì)美國(guó)白蛾的致病力，研究了應(yīng)用白僵菌防治美國(guó)白蛾的潛力[19]。但白僵菌侵染美國(guó)白蛾的掃描電鏡觀察及其對(duì)美國(guó)白蛾卵和不同齡期幼蟲(chóng)致病性的系統(tǒng)研究還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以球孢白僵菌Bb09菌株為研究對(duì)象，采用掃描電鏡觀察其對(duì)美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致病過(guò)程，利用噴霧法研究其對(duì)美國(guó)白蛾卵及不同齡期幼蟲(chóng)的毒力效果，為今后利用球孢白僵菌防治美國(guó)白蛾提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

球孢白僵菌Bb09菌株分離自染病柞蠶僵體，并用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)培養(yǎng)和純化，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院林木病理實(shí)驗(yàn)室提供。

供試美國(guó)白蛾卵塊采自唐山市灤南縣國(guó)有林場(chǎng)，將卵塊置于Φ 9 cm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至孵化幼蟲(chóng)(培養(yǎng)皿中放置濕棉球，以保證卵發(fā)育時(shí)所需濕度)，將孵化出的幼蟲(chóng)置于500 mL燒杯中，用新鮮毛白楊葉片進(jìn)行喂養(yǎng)至不同齡級(jí)。

1.2 方法

1.2.1 球孢白僵菌Bb09孢子懸浮液的制備 將分離得到的球孢白僵菌Bb09接種于PDA平板上，于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行產(chǎn)孢培養(yǎng)至分生孢子成熟，用0.5‰ 吐溫-80無(wú)菌水在無(wú)菌條件下將培養(yǎng)成熟的球孢白僵菌分生孢子沖洗到無(wú)菌燒杯中，置于磁力攪拌器上均勻打散，配成球孢白僵菌Bb09孢子懸浮液。之后用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，根據(jù)現(xiàn)有濃度，用0.5‰ 吐溫-80溶液稀釋成1×104孢子/mL、1×105孢子/mL、1×106孢子/mL、1×107孢子/mL、1×108孢子/mL以備用。

1.2.2 球孢白僵菌Bb09侵染美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的電鏡觀察 挑取45頭3齡幼蟲(chóng)，用滅菌小毛筆蘸取無(wú)菌水輕輕掃拭幼蟲(chóng)表面后，用手持小噴壺將濃度為1×108孢子/mL的孢子懸浮液均勻噴于幼蟲(chóng)表面。將處理后的美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)置于250 mL燒杯中于室溫條件下用新鮮毛白楊葉片進(jìn)行喂養(yǎng)。分別于接種后6 h、12 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h、130 h、192 h進(jìn)行取樣處理，以備掃描電鏡觀察使用。

樣品經(jīng)2.5%戊二醛進(jìn)行48 h固定處理，磷酸緩沖液沖洗4次，10 min/次，以保證固定液沖洗完全。1%鋨酸固定2 h，后用30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%酒精進(jìn)行逐級(jí)脫水，每級(jí)30 min，以乙酸異戊酯置換酒精，30 min/次，共2次。臨界點(diǎn)干燥(臨界點(diǎn)干燥儀型號(hào)：LEICA EM CPD 030)，銀膠黏銅臺(tái)噴金(離子濺射儀型號(hào)：MCIOOO Ion Sputter)，置于掃描電子顯微境 (SU8010)下進(jìn)行觀察、拍照。

1.2.3 球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾的致病性 用手持小噴壺將不同濃度(1×104～1×108孢子/mL)的孢子懸浮液分別均勻接種美國(guó)白蛾卵、1、2、3、4、5、6齡幼蟲(chóng)，接種后卵及幼蟲(chóng)分別置于室溫條件下進(jìn)行保濕培養(yǎng)，并以新鮮毛白楊葉片飼喂各齡幼蟲(chóng)，逐日觀察，計(jì)算卵的孵化率及各齡幼蟲(chóng)的死亡率。將死亡各齡幼蟲(chóng)置于干凈載玻片上，放于培養(yǎng)皿中于25 ℃培養(yǎng)箱進(jìn)行保濕培養(yǎng)，觀察蟲(chóng)體上是否有球孢白僵菌長(zhǎng)出，并作為判斷是否由球孢白僵菌侵染致死的依據(jù)。以0.5‰ 吐溫-80無(wú)菌水作對(duì)照。每個(gè)處理重復(fù)3次。對(duì)卵的致病力測(cè)定，每個(gè)處理接種100粒卵，對(duì)各齡幼蟲(chóng)的致病力測(cè)定，每個(gè)處理接種30頭幼蟲(chóng)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 根據(jù)生物測(cè)定數(shù)據(jù)，分別計(jì)算不同處理卵的孵化率和幼蟲(chóng)的死亡率，并以Abbott公式進(jìn)行校正，即：

(1)

(2)

(3)

采用SPSS 19.0 軟件對(duì)卵和不同齡期幼蟲(chóng)的致病力進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)運(yùn)用DPS軟件中時(shí)間—?jiǎng)┝俊劳雎誓Ｐ?TDM)對(duì)1～3齡幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率進(jìn)行進(jìn)一步分析(注：當(dāng)對(duì)照死亡率<5%時(shí)可忽略不計(jì))。

2 結(jié)果與分析

2.1 球孢白僵菌Bb09侵染美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的電鏡觀察

將處理后不同時(shí)間的美國(guó)白蛾3齡幼蟲(chóng)置于掃描電鏡下(SU8010)觀察。結(jié)果如圖1所示。

圖1 球孢白僵菌在美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)體表的生長(zhǎng)過(guò)程Figure 1 Growth process of B. bassiana on the surface of H.cunea larvae

由圖1可知，6 h后，白僵菌孢子成功附著在美國(guó)白蛾蟲(chóng)體表面，主要以蟲(chóng)體表面節(jié)間褶皺(a)、棘狀突起(b)及剛毛基部側(cè)面氣孔部位(c)為主，而美國(guó)白蛾頭部(d)及剛毛部位附著孢子較少(e)；接種18 h后，孢子開(kāi)始萌發(fā)，長(zhǎng)出芽狀突起(f，g)；24 h后，隨著時(shí)間的增加，萌發(fā)的孢子數(shù)量不斷增加(h)；接種36 h后，有些芽管指向表皮生長(zhǎng)，末端表現(xiàn)出侵入趨勢(shì)(i)，有些則直接侵入(j)；分生孢子在接種后的48～72 h內(nèi)進(jìn)入萌發(fā)生長(zhǎng)活躍期，在侵入體壁之前，部分芽管會(huì)在體表平行生長(zhǎng)，遇到合適侵入點(diǎn)便進(jìn)行入侵，也有部分孢子萌發(fā)形成菌絲后再由合適侵入點(diǎn)侵入(k，l)；130 h后，蟲(chóng)體表面布滿白色菌絲(m)；192 h體表菌絲形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，并長(zhǎng)出新的分生孢子束(n，o)。

(a) 卵

(b) 1齡幼蟲(chóng)

(c) 2齡幼蟲(chóng)

(d) 3齡幼蟲(chóng)

(e) 4齡幼蟲(chóng)

(f) 5齡幼蟲(chóng)

(g) 6齡幼蟲(chóng)圖2 不同濃度球孢白僵菌Bb09孢子懸浮液下美國(guó)白蛾卵及幼蟲(chóng)逐日累計(jì)死亡率Figure 2 The daily accumulative mortality of the eggs and larvae of H.cunea after treatment with different spore suspension of B.Bassiana Bb09

2.2 球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾的致病性

2.2.1 球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾卵及不同齡期幼蟲(chóng)致病力 美國(guó)白蛾卵的孵化情況及不同齡期幼蟲(chóng)死亡情況見(jiàn)圖2。

由圖2可知，球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾卵的致病力極差，接種7 d后，各濃度下美國(guó)白蛾卵的累計(jì)孵化率均達(dá)到了90%以上。但球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾不同齡期幼蟲(chóng)均表現(xiàn)出不同的致病力。同一濃度下，其致病力隨著蟲(chóng)齡的增加而減??；同一齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的死亡率隨著孢子濃度的減小而減小。如3齡幼蟲(chóng)在濃度為1×108孢子/mL、1×107孢子/mL、1×106孢子/mL、1×105孢子/mL、1×104孢子/mL孢子懸浮液下第7天的累計(jì)死亡率分別達(dá)到 87.78%、70.00%、62.22%、42.22%、26.67%。綜合分析表明白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1、2、3齡幼蟲(chóng)的致病力較好，4齡次之，齡期越小，白僵菌孢子懸浮液的致病力越大且各個(gè)濃度下的累計(jì)死亡率差異越大。

2.2.2 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致死中濃度 美國(guó)白蛾各齡幼蟲(chóng)的致死中濃度對(duì)數(shù)值見(jiàn)表1。由于5齡幼蟲(chóng)和6齡幼蟲(chóng)多數(shù)死亡率未達(dá)到50%，所以未對(duì)5齡，6齡幼蟲(chóng)進(jìn)行LD50計(jì)算。

表1 球孢白僵菌Bb09對(duì)各齡美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致死中濃度對(duì)數(shù)值Table 1 Logarithmic value of the median lethal dose of B.Bassiana Bb09 on different larvae of H.cunea

由表1可知，同齡期幼蟲(chóng)在接種不同天數(shù)后的LD50對(duì)數(shù)值隨著時(shí)間的增加而不斷減少，毒力作用不斷增加；在同一作用天數(shù)下隨著幼蟲(chóng)齡期的增加LD50對(duì)數(shù)值逐漸增加。接種后第2天、第3天只有1、2齡幼蟲(chóng)實(shí)際算出LD50，而對(duì)3、4齡幼蟲(chóng)的致死劑量效應(yīng)值LD50理論上可計(jì)算，但會(huì)高于1、2齡幼蟲(chóng)的實(shí)際致死對(duì)數(shù)值，實(shí)際應(yīng)用意義不大。

2.2.3 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致死中時(shí) 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致死時(shí)間效應(yīng)見(jiàn)表2。由于1×104孢子/mL孢子懸浮液濃度下各齡期幼蟲(chóng)死亡率均未達(dá)到50%，1×105孢子/mL 除1齡幼蟲(chóng)外其他齡期幼蟲(chóng)的死亡率均未達(dá)到50%，所以對(duì)濃度為1×105孢子/mL、1×104孢子/mL的孢子懸浮下各齡期幼蟲(chóng)LT50未進(jìn)行計(jì)算。

表2 同一孢子懸浮液濃度下球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的致死中時(shí)Table2 The median lethal time of the same spore suspension of B.Bassiana Bb09 on larvae of H.cunea

由表2可知，隨著孢子懸浮液濃度的增大，同齡幼蟲(chóng)的致死中時(shí)(LT50)縮短。在1×104～1×108孢子/mL范圍內(nèi)，1齡幼蟲(chóng)的LT50值由3.93下降到1.32。在相同濃度下，隨著幼蟲(chóng)齡期的增加其LT50值也逐漸升高，1×108孢子/mL下，5齡幼蟲(chóng)的LT50為6.29，而1齡幼蟲(chóng)僅為1.32。球孢白僵菌Bb09對(duì)5齡、6齡幼蟲(chóng)的致病力較差。

2.2.4 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)TDM模型分析 以上結(jié)果表明球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)表現(xiàn)出良好致病力。為探討劑量效應(yīng)與時(shí)間效應(yīng)之間的相互關(guān)系，用TDM (時(shí)間—?jiǎng)┝俊劳雎?模型對(duì)測(cè)得的球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的毒力測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行下一步分析,更好反映菌株應(yīng)用潛力。測(cè)定的TDM模型各參數(shù)估計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的TDM模型模擬與參數(shù)估計(jì)Table 3 Parameters estimated by fitting the time-dose-mortality (TDM)model to assay data of B.Bassiana Bb09 against the 1～3 instars larvae of H.cunea

由從表3可知，根據(jù)美國(guó)白蛾1、2、3齡幼蟲(chóng)劑量效應(yīng)的斜率β來(lái)看，2齡幼蟲(chóng)對(duì)孢子懸浮液濃度的變化最為敏感，β值為0.515 9。不同蟲(chóng)齡下τj值隨作用時(shí)間的增加而增加，試驗(yàn)后期增加幅度減小，說(shuō)明幼蟲(chóng)的累計(jì)死亡率受到劑量與時(shí)間雙重因素的影響，在試驗(yàn)后期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的死亡率呈逐漸上升趨勢(shì)并趨于穩(wěn)定。各處理劑量與時(shí)間效應(yīng)參數(shù)的t測(cè)驗(yàn)值均達(dá)到極顯著水平(P<0.000 1),說(shuō)明供試球孢白僵菌Bb09菌株的劑量效應(yīng)與時(shí)間效應(yīng)極顯著。在條件死亡概率模型中，γi最大值出現(xiàn)的天數(shù)與試驗(yàn)中所觀察到的死亡高峰期相吻合。

各齡期所建TDM模型均通過(guò)Hosmer-Lemeshow擬合異質(zhì)性檢驗(yàn)，所建各處理模型均不存在異質(zhì)性,能夠無(wú)偏描述各濃度下球孢白僵菌孢子懸浮液與美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)死亡率的相互作用關(guān)系。

2.2.5 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)致死作用的劑量效應(yīng) 關(guān)于白僵菌Ba09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的致死劑量對(duì)數(shù)值見(jiàn)圖3。

(a)1齡幼蟲(chóng)

(b)2齡幼蟲(chóng)

(c)3齡幼蟲(chóng)

由圖3可知，根據(jù)TDM模型估計(jì)出球孢白僵菌Bb09侵染不同齡期幼蟲(chóng)不同時(shí)間的劑量效應(yīng)。隨著試驗(yàn)后接種天數(shù)的增加，LD50、LD90的劑量對(duì)數(shù)值不斷減少，劑量效應(yīng)不斷增強(qiáng)。球孢白僵菌Bb09對(duì)1、2、3齡幼蟲(chóng)的劑量效應(yīng)在試驗(yàn)接種后的前4 d變化較明顯，說(shuō)明這期間各齡期幼蟲(chóng)的死亡率變化較大，之后趨于平穩(wěn)。由于3齡幼蟲(chóng)在接種3 d時(shí)未出現(xiàn)大量死亡，累積死亡未達(dá)到90%，所以模型估計(jì)的LD50，LD90偏大。

2.2.6 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)致死時(shí)間效應(yīng) 球孢白僵菌Bb09對(duì)不同齡期美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)致死作用的時(shí)間效應(yīng)見(jiàn)表4。

表4 球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的LT50和LT90Table 4 The values of LT50 and LT90 for B.Bassian Bb09 against the 1～3 instars larvae of H.cuneaa

由表4可知，1、2、3齡幼蟲(chóng)的LT50值與孢子懸浮液濃度呈反比，即隨著孢子懸浮液濃度的增加，各齡期LT50值減少。LT90值只有1、2齡幼蟲(chóng)在1×108孢子/ mL高濃度孢子懸浮液下才能達(dá)到，分別為3.97 d、4.88 d。以上結(jié)果表明1齡幼蟲(chóng)致死所需時(shí)間最短。

3 討論與結(jié)論

通過(guò)觀察被球孢白僵菌Bb09侵染的美國(guó)白蛾體表特征，并詳細(xì)分析其致病性，利用TDM模型分析時(shí)間與劑量之間的相互作用，為防治美國(guó)白蛾提供依據(jù)。本研究在觀察球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾侵入過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，分生孢子在美國(guó)白蛾體表的附著、萌發(fā)、侵入等過(guò)程存在時(shí)間和狀態(tài)上的不同。有的孢子在表面萌發(fā)較快，有的較慢，有的孢子萌發(fā)后即可侵入，有的則在體表進(jìn)行平行生長(zhǎng)遇到合適的侵入點(diǎn)再侵入，出現(xiàn)這些現(xiàn)象的原因可能與美國(guó)白蛾體表結(jié)構(gòu)、特殊部位的物質(zhì)含量有關(guān)。這和前人的研究有很大的相似性，王音等發(fā)現(xiàn)綠僵菌孢子侵染小菜蛾前的生長(zhǎng)狀態(tài)與小菜蛾體表形狀存在著關(guān)系[20]；本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌分生孢子以芽管或菌絲形式入侵美國(guó)白蛾表皮，這和前人研究結(jié)果稍有不同。這可能和美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)體表營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)，當(dāng)寄主表皮分泌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利于孢子生長(zhǎng)時(shí)，孢子便可萌發(fā)形成芽管或生長(zhǎng)為菌絲。

真菌侵染宿主卵的研究報(bào)道相對(duì)較少，在已有少數(shù)研究報(bào)道中發(fā)現(xiàn)，真菌對(duì)卵侵染力大小也存著較大差異性。如彭軍測(cè)定了球孢白僵菌對(duì)朱砂葉螨卵的侵染率達(dá)到50%[21]；Shi等研究發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌對(duì)害螨卵的侵染毒力則達(dá)67.4%[22]；本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾卵無(wú)致病力。分析原因可能是因?yàn)楦采w在蟲(chóng)卵表面的雌蛾鱗片阻礙了芽管的穿透；也可能是蟲(chóng)卵表面所特有的保護(hù)結(jié)構(gòu)或分泌物質(zhì)阻礙或抑制了孢子的萌發(fā)、侵染。但試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)菌液侵染卵雖未大量死亡，遺留于卵體表或培養(yǎng)皿上的白僵菌孢子對(duì)剛孵化幼蟲(chóng)仍具有侵染致病力，這就為林間實(shí)際應(yīng)用提供了參考，可在卵孵化后期進(jìn)行防治，這對(duì)控制美國(guó)白蛾幼蟲(chóng)的后期繁殖數(shù)量意義重大。

通過(guò)致病性測(cè)定發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的毒力較好，在1×108孢子/mL高濃度下， 1～3齡幼蟲(chóng)累計(jì)死亡率均高達(dá)90%左右。通過(guò)TDM模型分析球孢白僵菌Bb09對(duì)美國(guó)白蛾1～3齡幼蟲(chóng)的毒力，2齡幼蟲(chóng)對(duì)球孢白僵菌Bb09孢子懸浮液濃度變化的敏感度最高。模型分析同時(shí)考慮了時(shí)間和劑量之間的相互效應(yīng)，體現(xiàn)生物特定的完整性和客觀性。雖然室內(nèi)測(cè)定表明球孢白僵菌對(duì)美國(guó)白蛾具有很好的防治效果，但為更好的在實(shí)際中應(yīng)用，可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶镩g試驗(yàn)，并可嘗試和一些植物源農(nóng)藥進(jìn)行相容性研究，為今后防治美國(guó)白蛾提供更好更環(huán)保的方法。