唐 霞 代 艷 楊效竹

糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是糖尿病最常見且嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，也是老年人視力受損的主要原因之一[1-2]。目前對DR的治療包括視網(wǎng)膜激光光凝術(shù)和玻璃體切割術(shù)，但這些只能緩解癥狀，不能從根本上阻止疾病的進(jìn)展。因此，確定DR的機制并探索治療DR患者的新方法非常重要。Müller細(xì)胞是視網(wǎng)膜中最常見的膠質(zhì)細(xì)胞類型，跨越整個神經(jīng)視網(wǎng)膜層，在維持視網(wǎng)膜的生理功能方面發(fā)揮著重要作用[1,3-4]。近年來，人們逐漸認(rèn)識到Müller細(xì)胞的變性和凋亡與DR的發(fā)病機制有關(guān)，然而，具體機制尚不完全清楚。慢性高血糖可誘導(dǎo)Müller細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致谷氨酸循環(huán)異常和視網(wǎng)膜微環(huán)境改變，加速神經(jīng)元凋亡，導(dǎo)致DR視力下降，抑制Müller細(xì)胞凋亡可能是預(yù)防DR病理變化的一種治療策略[5]。有研究表明，丹酚酸B可通過抗脂質(zhì)過氧化、抗氧自由基產(chǎn)生、提高細(xì)胞耐缺氧能力等預(yù)防糖尿病誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變[6-8]。本研究旨在探究丹酚酸B對高糖誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞凋亡、自噬及AMPK信號通路的影響，從AMPK-自噬-凋亡角度解析丹酚酸B防治DR的潛在機制。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑AMR-100型多功能酶標(biāo)儀(杭州奧盛儀器有限公司)；6010可見-紫外分光光度計(美國安捷倫上海分析儀器廠)；ABI 7500型Real-time PCR系統(tǒng)(美國Applied Bio-Systems Instruments公司)；丹酚酸B(上海禾午生物科技有限公司)；成骨分化培養(yǎng)基(Cyagen Bioscience公司)；MTT(Sigma-Aldrich美國公司)；胎牛血清、10 g·L-1苯基甲烷磺酰氟、Hoechst 33258染色(Beyotime 公司)；兔抗大鼠Bax、AMPK、Bcl-2、p-AMPK單克隆抗體(武漢博士德公司)；兔抗鼠GS抗體(美國Abcam公司)；山羊抗兔IgG抗體(Bioker公司)；RIPA組織裂解液(南京碧云天生物制劑公司)；Trizol試劑(美國Invitrogen公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實時定量PCR反應(yīng)體系試劑盒(美國Promega公司)。AMPK抑制劑Dorsomorphin (DS;亦名Compound C或 BML-275)、AMPK激活劑AICAR(美國Selleck公司)。

1.2 Müller細(xì)胞提取、培養(yǎng)及鑒定取出生4～7 d的SD大鼠5只(體重25～45 g，購自北京維通利華生物科技有限公司)，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后取出眼球，在碘伏及含100 U·mL-1青、鏈霉素混合液的D-Hank液中各浸泡10 min，D-Hank液沖洗，去除眼球外筋膜組織，沿角膜緣后1 mm剪開眼球壁，去除眼前節(jié)及玻璃體，分離視網(wǎng)膜，將視網(wǎng)膜剪成小碎片，2.5 g·L-1胰蛋白酶-EDTA消化液消化20 min，吸管吹打，用含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清、10 g·L-1青、鏈霉素混合液的RPMI-1640培養(yǎng)液終止消化，銅網(wǎng)過濾，將過濾液離心，棄上清液，沉淀物加細(xì)胞培養(yǎng)液吹打稀釋，接種于塑料培養(yǎng)瓶中，置于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3 d換液1次，去除懸浮細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁達(dá)到80%融合后按12傳代。

取第2代細(xì)胞接種于放置經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片的六孔板內(nèi)，細(xì)胞貼壁后棄培養(yǎng)液，PBS液清洗；40 g·L-1多聚甲醛固定10 min，PBS液清洗；體積分?jǐn)?shù)0.5% Triton穿孔15 min，PBS液清洗；體積分?jǐn)?shù)5%山羊血清封閉30 min，加Müller細(xì)胞特異性標(biāo)志物谷氨酰胺合成酶一抗(1200) 4 ℃過夜，PBS液漂洗；加山羊抗兔IgG二抗( 1500) 37 ℃雜交1 h，PBS液漂洗；加DAPI染核，PBS液漂洗，甘油封片，光鏡和熒光顯微鏡下觀察計數(shù)。

1.3 實驗分組取第3代或第4代Müller細(xì)胞隨機分為對照組、高糖組、高糖+丹酚酸B組、高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組。對照組細(xì)胞給予5 mmol·L-1低濃度葡萄糖孵育；高糖組細(xì)胞給予35 mmol·L-1高濃度葡萄糖孵育；高糖+丹酚酸B組細(xì)胞在35 mmol·L-1葡萄糖基礎(chǔ)上同時給予40 μmol·L-1丹酚酸B孵育；高糖+DS組細(xì)胞在35 mmol·L-1葡萄糖基礎(chǔ)上同時給予10 μmol·L-1DS孵育；高糖+DS+丹酚酸B組細(xì)胞在35 mmol·L-1葡萄糖基礎(chǔ)上同時給予40 μmol·L-1丹酚酸B和10 μmol·L-1DS孵育；高糖+AICAR組細(xì)胞在35 mmol·L-1葡萄糖基礎(chǔ)上同時給予1 mmol·L-1AICAR孵育；高糖+AICAR+丹酚酸B組細(xì)胞在35 mmol·L-1葡萄糖基礎(chǔ)上同時給予1 mmol·L-1AICAR和40 μmol·L-1丹酚酸B孵育。

1.4 檢測指標(biāo)與檢測方法

1.4.1 MTT法檢測細(xì)胞活力細(xì)胞分組處理后48 h，分別加入1 g·L-1MTT于37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2中孵育5 h，去除MTT后，繼續(xù)孵育1 h，加入1 mL異丙醇，于570 nm波長下測量各組細(xì)胞光密度。

1.4.2 Hoechst 33258染色觀察細(xì)胞形態(tài)各組細(xì)胞以每孔5×104個接種于24孔板，培養(yǎng)24 h后，在40 g·L-1多聚甲醛中固定30 min，PBS液輕輕沖洗細(xì)胞3次，每孔加入1 mL Hoechst 33258于37 ℃ 染色45 min，PBS緩沖液輕輕沖洗細(xì)胞3次，熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞凋亡情況。

1.4.3 Western blot檢測蛋白表達(dá)各組細(xì)胞培養(yǎng)7 d后，采用1 mL預(yù)冷RIPA組織裂解液裂解細(xì)胞，添加10 g·L-1苯基甲烷磺酰氟蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑制備細(xì)胞總蛋白。用BCA法測定蛋白濃度。20 μg蛋白在100 g·L-1SDS-PAGE凝膠上電泳，然后轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜上。在TBS-Tween 20中用50 g·L-1脫脂牛奶封閉后，4 ℃一抗(兔抗大鼠Beclin1、LC3-I、LC3-II、p-AMPK、AMPK、Bax和Bcl-2單克隆抗體，稀釋度均為11000)孵膜。然后用TBS-Tween 20洗滌3次，每次15 min，再與二抗山羊抗兔IgG抗體(1500)室溫孵育2 h，利用Image Lab軟件對各組蛋白灰度值進(jìn)行檢測和量化。實驗重復(fù)3次。

1.4.4 qRT-PCR檢測自噬相關(guān)基因Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)各組細(xì)胞培養(yǎng)18 d后，Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，6010可見-紫外分光光度計檢測各組細(xì)胞RNA含量及質(zhì)量，使用高效cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒制備cDNA，qRT-PCR檢測Beclin1、LC3-II mRNA表達(dá)，并使用2-ΔΔCt方法計算各組細(xì)胞mRNA相對表達(dá)量。引物序列：Beclin1上游引物為3’-GATCCACTGAGCACCGA-5’，下游引物為3’-CTCACCTGGTGGCATTGTG-5’；LC3-II上游引物為3’-CCAAGCGGAGACAGAAAC-5’，下游引物為3’-CCCAGGTCAGGGGATCTT-5’；β-actin上游引物為3’-ACGGTCAGGCATCACTATC-5’，下游引物為3’-TGCCACAGGATCCATACC-5’。實驗重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組樣本均數(shù)間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗。 檢驗水準(zhǔn):α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Müller細(xì)胞的鑒定光鏡下可見，細(xì)胞形態(tài)呈不規(guī)則梭形；熒光顯微鏡下可見，Müller細(xì)胞特異性標(biāo)志物谷氨酰胺合成酶被標(biāo)記為紅色，細(xì)胞核被標(biāo)記為藍(lán)色，確定所獲得的細(xì)胞為Müller細(xì)胞，滿足研究需求(圖1)。

A：光鏡下觀察；B：熒光顯微鏡下觀察。圖1 Müller細(xì)胞鑒定結(jié)果

2.2 MTT法檢測結(jié)果MTT法檢測結(jié)果顯示，對照組、高糖組、高糖+丹酚酸B組、高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞活力分別為(100±22)%、(59±33)%、(98±2)%、(62±2)%、(63±3)%、(89±4)%和(91±5)% 。與對照組比較，高糖組Müller細(xì)胞的活力明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.914,P<0.01)。與高糖組比較，高糖+DS組和高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞活力無顯著變化(t=0.194、0.404,均為P>0.05)，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞活力均顯著增加(t=8.114、7.004、5.144,均為P<0.01)。與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞活力顯著降低(t=7.404,P<0.01)，高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞活力無明顯變化(t=0.124,P>0.05)。

2.3 Hoechst 33258染色結(jié)果Hoechst 33258染色結(jié)果顯示，與對照組比較，高糖組Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化顯著增加；與高糖組比較，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化顯著減少，高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化無顯著變化；與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化顯著增加，高糖+AICAR +丹酚酸B組Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化無顯著變化(圖2)。

A：對照組；B：高糖組；C：高糖+丹酚酸B組；D：高糖+DS組；E：高糖+DS+丹酚酸B組；F：高糖+AICAR組；G：高糖+AICAR+丹酚酸B組。白色箭頭示發(fā)生細(xì)胞核濃縮和DNA片段化的Müller細(xì)胞。圖2 Hoechst 33258染色檢測各組細(xì)胞凋亡情況

2.4 各組細(xì)胞Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)情況Western blot檢測結(jié)果顯示，與對照組比較，高糖組、高糖+DS組和高糖+DS+丹酚酸B組Müller 細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)均顯著減少，而Bax蛋白表達(dá)均顯著增加(均為P<0.01)，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller 細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)。與高糖組比較，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組、高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)均顯著增加，而Bax蛋白表達(dá)均顯著減少(均為P<0.01)，高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)。與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著減少，而Bax蛋白表達(dá)顯著增加(均為P<0.05)，高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)(圖3)。

1：對照組；2：高糖組；3：高糖+丹酚酸B組；4：高糖+DS組；5：高糖+DS+丹酚酸B組；6：高糖+AICAR組；7：高糖+AICAR+丹酚酸B組。與對照組比較，**P<0.01；與高糖組比較，##P<0.01；與高糖+丹酚酸B組比較，△P<0.05。圖3 Western blot檢測各組細(xì)胞中Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)情況

2.5 各組細(xì)胞Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)情況與對照組比較，高糖組、高糖+DS組和高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均顯著減少(均為P<0.01)，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖組比較，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組、高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均顯著增加(均為P<0.05)，高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均顯著減少(均為P<0.05)，高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)(表1)。

表1 各組細(xì)胞Beclin1和LC3-II mRNA表達(dá)情況

2.6 各組細(xì)胞Beclin1及LC3蛋白表達(dá)情況與對照組比較，高糖組、高糖+DS組和高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II 蛋白表達(dá)均顯著減少(均為P<0.01)，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖組比較，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組、高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II 蛋白表達(dá)均顯著增加(均為P<0.05)，高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II蛋白表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II蛋白表達(dá)均顯著減少(均為P<0.05)，高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II 蛋白表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)。各組細(xì)胞間LC3-I蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)(圖4)。

2.7 各組細(xì)胞AMPK及p-AMPK蛋白表達(dá)情況與對照組比較，高糖組、高糖+DS組和高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中p-AMPK蛋白表達(dá)均顯著減少(均為P<0.01)，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組和高糖+AICAR+丹酚酸B組均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖組比較，高糖+丹酚酸B組、高糖+AICAR組、高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中p-AMPK蛋白表達(dá)均顯著增加(均為P<0.01)，高糖+DS組、高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中p-AMPK蛋白表達(dá)均無顯著變化(均為P>0.05)。與高糖+丹酚酸B組比較，高糖+DS+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中p-AMPK蛋白表達(dá)均顯著減少(均為P<0.05)，高糖+AICAR+丹酚酸B組Müller細(xì)胞中p-AMPK蛋白表達(dá)無顯著變化(P>0.05)。各組細(xì)胞間AMPK蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)(圖5)。

1：對照組；2：高糖組；3：高糖+丹酚酸B組；4：高糖+DS組；5：高糖+DS+丹酚酸B組；6：高糖+AICAR組；7：高糖+AICAR+丹酚酸B組。與對照組比較，**P<0.01；與高糖組比較，#P<0.05，##P<0.01；與高糖+丹酚酸組比較，△P<0.05。圖4 Western blot檢測各組細(xì)胞中Beclin1和LC3蛋白表達(dá)情況

1：對照組;2：高糖組;3：高糖+丹酚酸B組;4：高糖+DS組;5：高糖+DS+丹酚酸B組;6：高糖+AICAR組;7：高糖+AICAR+丹酚酸B組。與對照組比較，**P<0.01；與高糖組比較，##P<0.01；與高糖+丹酚酸B組比較，△P<0.05。圖5 Western blot檢測各組細(xì)胞中AMPK和p-AMPK蛋白表達(dá)情況

3 討論

DR是一種嚴(yán)重的糖尿病微血管并發(fā)癥，約占所有失明致病因素的5%，高血糖會增加視網(wǎng)膜及其毛細(xì)血管中的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和氧化應(yīng)激紊亂等[5,9-10]。有研究表明，從中藥丹參提取的丹酚酸B化合物可通過增加細(xì)胞自噬水平來減少細(xì)胞凋亡從而防治糖尿病并發(fā)癥，如糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病腎病、糖尿病心臟病和糖尿病腦病等[6]。AMPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)主要由絲氨酸/蘇氨酸激酶介導(dǎo)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化及能量代謝平衡等諸多方面。本研究結(jié)果亦表明，丹酚酸B調(diào)節(jié)Müller細(xì)胞自噬及抗Müller細(xì)胞凋亡的機制可能是通過激活A(yù)MPK信號通路來實現(xiàn)的，為靶向AMPK信號通路開發(fā)治療DR新藥提供依據(jù)[11]。本研究結(jié)果表明，AMPK信號通路與高血糖誘導(dǎo)的Müller細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，此外，增強AMPK活性可起到抗細(xì)胞凋亡作用。當(dāng)AMPK被磷酸化時，它可以靶向激活下游許多分子通路的活性。Kubota等[11]研究證實，DR小鼠視網(wǎng)膜中p-AMPK的表達(dá)下調(diào)，激活A(yù)MPK通路，可能是DR一種有前景的治療策略。本研究結(jié)果表明，高血糖抑制了p-AMPK蛋白表達(dá)，丹酚酸B干預(yù)后促進(jìn)了p-AMPK蛋白表達(dá)，丹酚酸B對AMPK通路的活化作用進(jìn)一步被AMPK激動劑(AICAR)和AMPK抑制劑(DS)證實。

Müller細(xì)胞凋亡的特點是細(xì)胞變圓、膜起泡、細(xì)胞骨架塌陷、細(xì)胞質(zhì)濃縮和碎裂、核固縮、染色質(zhì)濃縮和碎裂以及凋亡小體的形成，這些細(xì)胞碎片會被巨噬細(xì)胞或鄰近細(xì)胞迅速吞噬[12-13]。高血糖顯著增加了Müller細(xì)胞的細(xì)胞核濃縮和DNA片段化，促進(jìn)了Müller細(xì)胞的細(xì)胞凋亡，經(jīng)過丹酚酸B處理后，Müller細(xì)胞的凋亡被顯著抑制，凋亡細(xì)胞的數(shù)量顯著減少，抑制AMPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)顯著增加了核凝聚并降低了丹酚酸B的抗凋亡作用，激活A(yù)MPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)減少了凋亡細(xì)胞的數(shù)量并促進(jìn)了丹酚酸B的抗凋亡作用。高血糖抑制Müller細(xì)胞Bcl-2表達(dá)，促進(jìn)Bax表達(dá)，誘導(dǎo)Müller細(xì)胞凋亡，丹酚酸B處理抑制了Bax表達(dá)，促進(jìn)了Bcl-2表達(dá)，從而抑制了Müller細(xì)胞的凋亡。抑制AMPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)顯著增加了Bax表達(dá)，而抑制了Bcl-2表達(dá)，降低了丹酚酸B的抗凋亡作用，提示丹酚酸B抗細(xì)胞凋亡作用是由AMPK信號通路介導(dǎo)的。Müller細(xì)胞自噬和凋亡異常在DR的發(fā)病機制和/或病程進(jìn)展中起著關(guān)鍵作用。自噬是一種細(xì)胞內(nèi)自我降解過程，負(fù)責(zé)去除、降解和回收細(xì)胞質(zhì)蛋白和細(xì)胞器，它涉及一系列連續(xù)的事件，包括雙膜形成、伸長、囊泡成熟和最終將目標(biāo)物質(zhì)輸送到溶酶體[1,3,14-16]。本研究結(jié)果表明，與對照組比較，高糖組Müller細(xì)胞中Beclin1和LC3-II 蛋白表達(dá)顯著減少，提示高血糖抑制Müller細(xì)胞自噬；丹酚酸B可通過激活自噬保護Müller細(xì)胞避免其凋亡。相關(guān)研究表明，自噬激動劑雷帕霉素(mTOR蛋白特異性抑制劑)可以抑制DR引起的氧化應(yīng)激紊亂，改善代謝異常，激活細(xì)胞的自噬，可能在DR發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮保護作用[3-4]。本研究中我們探討了丹酚酸B是否可以保護培養(yǎng)的原代大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞免受高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并探討其調(diào)控AMPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞自噬潛在的分子機制，為中醫(yī)藥干預(yù)DR提供依據(jù)[17-18]。

綜上，本研究結(jié)果表明，高血糖通過抑制AMPK信號通路抑制細(xì)胞自噬而誘導(dǎo)Müller細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致DR發(fā)生發(fā)展。丹酚酸B可通過激活A(yù)MPK信號通路增強細(xì)胞自噬而抑制Müller細(xì)胞凋亡，維持細(xì)胞活力，促使細(xì)胞存活，從而對DR起到積極治療作用。本研究結(jié)果為臨床防治DR提供了參考和依據(jù)。