李燁榮，張菁菁，呂娟

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬婦產(chǎn)醫(yī)院(南京市婦幼保健院)婦產(chǎn)科，南京210004)

脊髓性肌萎縮癥(spinal muscular atrophy，SMA)是一種常染色體隱性遺傳病，其發(fā)病率為1/5 000～1/10 000，居致死性常染色體隱性遺傳病的第2位，在人群中的攜帶率約為1/35～1/85[1]。SMA臨床上主要表現(xiàn)為進行性、對稱性近端肌無力和肌萎縮，根據(jù)發(fā)病年齡和病程的不同，將其分為Ⅰ～Ⅳ型，嚴(yán)重程度與分型相關(guān)，Ⅰ型最重，Ⅳ型最輕，而SMA的有效治療藥物諾西那生鈉價格高昂。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)約95%的SMA由SMN1基因的缺失突變所致，約5%是由于SMN1基因點突變導(dǎo)致。SMA臨床表現(xiàn)嚴(yán)重，人群中的攜帶率較高，且致病基因明確，2008年美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(American College of Medical Genetics，ACMG)[2]建議無論地域種族，應(yīng)該對所有育齡人群進行SMA攜帶者篩查。2017年，美國婦產(chǎn)科學(xué)會(American College of Obstetricians and Gynecologists，ACOG)[3]也建議，孕前和產(chǎn)前都應(yīng)進行SMA攜帶者篩查。目前已報道的SMA攜帶者篩查技術(shù)眾多，根據(jù)SMA致病基因的特點，對SMN1基因外顯子7、8缺失進行檢測，已經(jīng)成為SMA攜帶者篩查的首選方法。但不同方法的敏感性、特異性及經(jīng)濟性不同，其中臨床上使用最多的方法是多重連接依賴性探針擴增(MLPA)技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù)，但MLPA技術(shù)試劑耗材貴、操作繁瑣，而熒光定量PCR無標(biāo)準(zhǔn)化方法，其穩(wěn)定性有待改進。近年來隨著技術(shù)的進步與發(fā)展，可用于SMA檢測的一些舊方法也不斷得到更新，在其基礎(chǔ)上發(fā)展了更為簡單、準(zhǔn)確的方法；兩種及兩種以上方法的聯(lián)合應(yīng)用也可為SMA的大規(guī)模篩查提供更準(zhǔn)確的篩查結(jié)果；數(shù)字PCR技術(shù)的逐漸成熟，為大規(guī)模篩查SMA攜帶者提供了基礎(chǔ)。未來選擇可以應(yīng)用于人群中大規(guī)模篩查的敏感性好、特異性高和耗時短的檢測方法非常重要。

1 SMA臨床特征

SMA是由脊髓前角運動神經(jīng)元變性導(dǎo)致患兒肢體近端進行性、對稱性肌無力和肌萎縮等臨床癥狀的一組疾病。根據(jù)發(fā)病年齡及病情嚴(yán)重程度分為4型[4]：Ⅰ型(Werdning-Hoffmann病)，又稱嚴(yán)重型，患兒通常在出生后6個月內(nèi)發(fā)病，表現(xiàn)為肢體及軀干嚴(yán)重肌無力及肌萎縮，肌張力低，肌腱反射消失，無法坐立，通常在2歲前死于呼吸衰竭；Ⅱ型，又稱中間型，起病稍晚，于出生后6～18個月發(fā)病，患兒表現(xiàn)為能坐但無法站立和行走，生存期取決于呼吸肌麻痹程度，一般超過2歲；Ⅲ型(Kugelburg-Welander病)，亦稱青少年型，出生18個月后發(fā)病，患兒能夠獨立行走，但表現(xiàn)為近端肢體無力，病程進展緩慢，可生存至成年；Ⅳ型，成年型，發(fā)病一般在成年期，病情進展隱匿，可出現(xiàn)行走困難，生存時間與正常人無明顯差別[5]。

2 SMA分子機理

SMA的致病基因是運動神經(jīng)元存活(survival motor neuron，SMN)基因，定位于染色體5q11.2-5q13.3區(qū)域(圖1)。SMN基因在每條染色體上有2個拷貝，分別是位于端粒側(cè)的SMN1和位于著絲粒側(cè)的SMN2，兩者高度同源，僅有5個堿基的差別(內(nèi)含子6及外顯子7、8各1個，內(nèi)含子7為2個)，二者都可編碼SMN蛋白，但由于外顯子7編碼區(qū)域的差異堿基(c.840C>T)影響了基因的剪接模式[6]，從而導(dǎo)致2個基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物不同。因此SMN1基因表達功能完整的全長SMN蛋白，而SMN2基因只產(chǎn)生約10%～20%有功能的SMN蛋白[7]。SMA的發(fā)生是由于SMN1基因的缺失或突變,而SMN2基因的拷貝數(shù)則影響SMA的嚴(yán)重程度。有研究表明[8]，Ⅰ～Ⅲ型SMA患者大約95%～98%是由于SMN1基因純合缺失導(dǎo)致的，其中大部分是同時缺失外顯子7、8，少部分只缺失外顯子7。

圖1 SMN1和SMN2基因的常見突變形式和重要功能區(qū)

3 SMA攜帶者篩查技術(shù)

目前，比較成熟的SMA攜帶者篩查方法是通過對SMN1拷貝數(shù)進行分析，以區(qū)分正常人和SMA攜帶者。現(xiàn)對目前文獻中報道的幾種常見SMN基因拷貝數(shù)分析技術(shù)方法的原理、特點和價值進行歸納，以及總結(jié)其最新的研究進展。不同方法的特點及優(yōu)缺點如表1。

表1 PCR-RFLP、DHPLC、MLPA、qPCR、dPCR和NGS在SMN基因拷貝數(shù)變異分析中的比較

3.1聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP) PCR-RFLP是利用限制性內(nèi)切酶識別特異序列，對其進行切割，形成一定大小的DNA片段，通過設(shè)計對應(yīng)的引物進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物在電泳、變性、雜交等過程后進行分析結(jié)果。PCR-RFLP是SMA的常用診斷試驗，根據(jù)SMN1和SMN2基因第7、8外顯子之間堿基差異所形成的限制性內(nèi)切酶位點不同檢測出SMN1是否存在缺失。在1995年van der Steege等[9]首次提出用限制性內(nèi)切酶切割PCR產(chǎn)物，并得到其凝膠圖譜，分析SMN1外顯子7的缺失，創(chuàng)建了一種簡單、快速的方法。之后McAndrew等[10]通過引入內(nèi)標(biāo)序列，可以準(zhǔn)確的測出SMN1和SMN2的拷貝數(shù)，但由于無法檢出SMN1基因的雜合缺失，因而不能應(yīng)用于人群中進行SMA致病基因攜帶者的篩查[11]。許多學(xué)者不斷的對PCR-RFLP進行改進，近年來，Niba等[12]建立了一種新系統(tǒng)，利用實時改良的競爭性寡核苷酸引物-PCR(modified competitive oligonucleotide priming-PCR，mCOP-PCR)和PCR-RFLP的結(jié)合來篩查SMN1缺失，該方法用PCR-RFLP的引物進行預(yù)擴增，實時mCOP-PCR快速準(zhǔn)確地證明SMN1和SMN2是否缺失，結(jié)果通過第2次PCR-RFLP進行驗證，這一新系統(tǒng)用于SMA的篩查很有潛力。

3.2變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography，DHPLC) DHPLC技術(shù)是一種快速方便、靈敏度好、特異度高的基因檢測技術(shù)。其原理是在部分變性的溫度條件下，根據(jù)不同樣品的核苷酸長度和堿基序列不同，樣品在色譜柱中停留的時間不同而達到分離的目的。其本質(zhì)是離子對反相高效液相色譜法(ion-pair reversed phase high performance liquid chromatography，IP-RP-HPLC)進行DNA的分離和分析，由于純合雙鏈和雜合雙鏈在同一溫度下解鏈程度的不同，導(dǎo)致其在色譜柱中滯留的時間不同，在最適部分變性和洗脫溫度下，會呈現(xiàn)出異源和同源雙鏈混合物的峰型，根據(jù)DHPLC形成的洗脫峰型，可以判斷是否有變異的存在。但在實踐應(yīng)用中DHPLC存在穩(wěn)定性欠佳等問題[13]，通常需要與其他方法聯(lián)合診斷。肖雪[14]等用DHPLC技術(shù)聯(lián)合雙重PCR技術(shù)對臨床明確診斷的15例SMA及其雙親進行SMN1拷貝數(shù)檢測以及分析，結(jié)果與臨床診斷相比，DHPLC技術(shù)診斷SMA的敏感性為93.3%，特異性為100%。2011年，臺灣地區(qū)采用DHPLC聯(lián)合MLPA的方法，對該地區(qū)10 7611名孕婦進行了SMA篩查，共確認(rèn)了2 262名SMA攜帶者，DHPLC聯(lián)合MLPA的陰性預(yù)測值為99.87%[15]，此外對于SMA高風(fēng)險患兒，DHPLC與MLPA的聯(lián)合可以有效地用于產(chǎn)前診斷[16]。上海[17]、廣西[18]及陜西[19]等地采用PCR聯(lián)合DHPLC技術(shù)對其地區(qū)的孕婦進行SMA篩查與診斷，并分析SMNl和SMN2拷貝數(shù)，檢測出SMA人群攜帶率分別為1∶52、1∶81及1∶54。綜上，用DHPLC與其他方法的聯(lián)合診斷SMA患者，特異性、敏感性高，可用于攜帶者篩查。

3.3多重連接依賴性探針擴增(multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA) MLPA技術(shù)是一種高效、特異的基因檢測技術(shù)，不僅可對基因的缺失定性檢測，還具有對待測靶點拷貝數(shù)進行半定量分析的能力。其基本原理是DNA變性，特異性探針與DNA靶序列雜交、連接，PCR擴增連接后產(chǎn)物進行毛細(xì)管電泳分離，最后通過軟件分析得出結(jié)論。MLPA的每一個探針都包含2個寡核苷酸片段，分別為一段引物序列和一段特異性序列，這2個寡核苷酸片段與DNA靶序列雜交，通過軟件分析擴增峰的降低、升高來判斷靶序列的拷貝數(shù)缺失和重復(fù)。自2002年荷蘭學(xué)者[20]首次報道該技術(shù)后，MLPA技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于檢測染色體數(shù)目異常、基因缺失與重復(fù)以及基因甲基化等方面。目前針對SMA致病基因的拷貝數(shù)檢測，MLPA已有商品化試劑盒，是當(dāng)前臨床較常用的SMN基因缺失分析方法。Huang等[21]用MLPA方法對SMN1和SMN2拷貝數(shù)進行檢測，共測出不同拷貝數(shù)組合的21種基因型，其中第1組310名無肌萎縮史的研究對象中測得16種基因型，第2組18名SMA患者和45名SMA攜帶者檢出有5種基因型。此方法在一次反應(yīng)中檢測到SMN1和SMN2各自外顯子7和8的獨特序列，以及SMN1和SMN2的共同的外顯子1、4、6和8的序列，從而利用共同外顯子加以驗證，由此可以準(zhǔn)確的確定SMN1和SMN2拷貝數(shù)。陳紅苓等[22]對30例臨床疑似SMA患者分別采用MLPA和PCR-RFLP方法進行對比檢測，結(jié)果顯示MLPA檢測出25例SMA患者、2例SMA攜帶者及3例SMA“2+0”型攜帶者，比PCR-RFLP更加準(zhǔn)確、高效。因此MLPA不僅能檢出SMA患者，還可以用于攜帶者的篩查，現(xiàn)已成為SMA診斷的主流技術(shù)。國內(nèi)大樣本量篩查中，云南地區(qū)就采用MLPA法對3 049名育齡人群進行SMA攜帶者篩查，攜帶率為1∶49[23]。在MLPA技術(shù)中，包含SMN區(qū)域和其他染色體上的許多對照探針，可以用于SMN基因的總拷貝數(shù)參考或系統(tǒng)質(zhì)量控制，因此用MLPA分析SMN基因拷貝數(shù)比其他方法更準(zhǔn)確、更有效[21]，雖然該技術(shù)具有敏感性高、自動化程度高和高通量等特點，非常適合大樣本的篩查，但MLPA因試劑非國產(chǎn)化，其耗材貴、操作步驟較復(fù)雜和檢測時間長，且對于人群中少見的“2+0”型攜帶者及點突變患者無法檢出等缺點限制其在大規(guī)模攜帶者篩查中的應(yīng)用。近年，廠商推出包含g.27134T>G和g.27706-27707delAT多態(tài)位點的試劑盒，利用這2個多態(tài)位點構(gòu)成的單倍型僅存在于攜帶SMN1重復(fù)等位基因的個體(即SMN1拷貝數(shù)大于等于3)的原理，期望能提高人群中少見的“2+0”型攜帶者的檢出率，但研究表明這2個多態(tài)位點在猶太人群、非洲人群中的比例遠高于東亞人群，目前該方法還不適于中國人群的樣本檢測，鑒于我國為多民族國家，需要尋找適合中國人群的特異性的多態(tài)位點[24]。

3.4實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR) qPCR技術(shù)現(xiàn)已成為分子診斷領(lǐng)域的重要技術(shù)，其操作簡單、快速經(jīng)濟、靈敏度高、高通量等優(yōu)勢，在SMN基因拷貝數(shù)檢測中愈加受到重視[25]。實時熒光定量PCR根據(jù)采用不同的熒光技術(shù)分為兩類：TaqMan系統(tǒng)和SYBR Green系統(tǒng)。

3.4.1TaqMan系統(tǒng) 除普通PCR加入的一對普通引物外，還加入一條熒光標(biāo)記的特異性探針，探針的5′端為熒光報告基團，3′端為淬滅基團，當(dāng)探針保持完整時，淬滅基團抑制報告基團，檢測不到熒光信號；在PCR反應(yīng)中，Taq耐熱DNA聚合酶的外切酶活性將探針切斷，淬滅基團不能發(fā)揮抑制作用，報告基團的熒光信號隨著PCR的擴增而積累，根據(jù)熒光信號的強度與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比進行定量分析，從而算出產(chǎn)物的量。在紐約州采用多重TaqMan實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(TaqMan real-time PCR)的方法對3 826名新生兒進行SMA篩查，結(jié)果為SMN1外顯子7缺失攜帶者的頻率約為1/65(1.5%)，qPCR沒有發(fā)現(xiàn)任何技術(shù)問題，用于檢測SMN1的拷貝數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確可靠[26]。

3.4.2SYBR Green系統(tǒng) 在PCR反應(yīng)中加入足量的SYBR Green Ⅰ核酸凝膠染液，其是一種DNA雙鏈親和性熒光素，能夠特異地與DNA雙鏈的小溝結(jié)合，發(fā)出熒光信號，根據(jù)熒光信號的量與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比可進行定量分析。在2010年Weaver等[27]以拷貝數(shù)變異(CNV)為范式，評估qPCR的定量分辨率，建立了實時qPCR數(shù)據(jù)的誤差模型。此模型是利用qPCR高通量的優(yōu)勢以實現(xiàn)更高的定量分辨率，隨著重復(fù)次數(shù)的不同，qPCR可以區(qū)分1.25倍甚至1.1倍(11個拷貝中區(qū)分出10個拷貝)的基因表達差異，所以此模型同樣適用于基因表達的研究。此外，Soloviov等[28]采用2-△△Ct數(shù)據(jù)處理模式，參照引入的內(nèi)參基因ALB，計算SMN1的拷貝數(shù)。2-△△Ct數(shù)據(jù)處理模式可以將基因拷貝數(shù)僅為1倍的SMN1缺失標(biāo)本與未缺失標(biāo)本靈敏的檢測出。鄧?yán)x等[29]以人血清蛋白12號外顯子作為參比基因，定量檢測SMN1基因的拷貝數(shù)，熒光定量PCR結(jié)果與MLPA結(jié)果完全一致。研究表明，采用以RPP40為內(nèi)參基因的實時熒光定量PCR技術(shù)對孕中期羊水細(xì)胞進行SMN1基因缺失檢測，具有所需SMA羊水量少、快速且準(zhǔn)確性高的優(yōu)點[30]。2021年江蘇地區(qū)采用以RPP40為內(nèi)參基因的qPCR技術(shù)進行了大樣本量篩查，確定本地的SMA攜帶率為1∶58[31]。因此實時定量PCR技術(shù)可滿足SMA產(chǎn)前診斷以及攜帶者大規(guī)模篩查的要求，但因設(shè)備型號差異而無統(tǒng)一的操作技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，所以熒光定量PCR在臨床應(yīng)用的穩(wěn)定性還有待提高。

3.5數(shù)字PCR 數(shù)字PCR(digital polymerase chain reaction，dPCR)技術(shù)是qPCR技術(shù)的延伸，是終點qPCR。此前有研究對dPCR建立了一個誤差模型，此模型是建立在dPCR高通量的基礎(chǔ)上，把拷貝數(shù)變異測定的精度與反應(yīng)室的數(shù)量聯(lián)系起來，對各個反應(yīng)室內(nèi)DNA樣品的全有或全無計數(shù)，此模型通過量化測定的精度來實現(xiàn)更高的定量分辨率。dPCR獲得的測定結(jié)果不需要校準(zhǔn)樣品，分析數(shù)據(jù)簡單易行，減少了很多引入誤差的機會，因此大大提高了獲得準(zhǔn)確結(jié)果的可能性[27]。dPCR的基本反應(yīng)原理是在不同的微反應(yīng)區(qū)中擴增單個目標(biāo)DNA。目標(biāo)DNA稀釋后散布在微反應(yīng)區(qū)中，每個微反應(yīng)區(qū)中包含一個或零個目標(biāo)DNA分子，PCR擴增結(jié)果可以記錄為陽性或陰性，因為dPCR是基于分子數(shù)量的絕對測量，所以不需要將獲得的結(jié)果使用參照樣本或內(nèi)部控制來校準(zhǔn)，根據(jù)泊松統(tǒng)計分布原理，PCR陽性反應(yīng)的數(shù)量等于原始DNA模板分子的數(shù)量，則可以推算出目標(biāo)基因的濃度。近年來，多重滴狀dPCR(DdPCR)方法發(fā)展迅速，以測定特定的基因位點，有研究運用DdPCR檢測了12例SMA陽性患者，其特異性和靈敏性可達100%，非常適用于SMA攜帶者的篩查[32]。此外，用來分析dPCR結(jié)果的系統(tǒng)也在不斷的更新發(fā)展，其中Absolute Q(Absolute Q digital PCR系統(tǒng))具有工作流程步驟少，分析SMA基因拷貝數(shù)耗時少的優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用。第一個同時檢測SMN1和SMN2拷貝數(shù)的“高階”多重dPCR方法[33]，正是使用了Absolute Q系統(tǒng)，其測得的SMN1和SMN2拷貝數(shù)結(jié)果與Coriell細(xì)胞資料庫提供的一致。由此看來數(shù)字PCR準(zhǔn)確性高，操作簡單，新型高階多重dPCR方法的建立為今后SMA大規(guī)模的篩查提供了條件。

3.6二代測序技術(shù) 二代測序技術(shù)(next-generation sequencing，NGS)，相對于一代測序技術(shù)，有著更高數(shù)量級的測序通量，所以也稱之為高通量測序。其中包括：焦磷酸測序、連接法測序、合成法測序和離子半導(dǎo)體測序。目前主要是Illumina測序平臺和Ion Torrent測序平臺，其中又以Illumina測序平臺為主流，其基本原理采用的都是邊合成邊測序的方法，它的測序過程主要分為4步：文庫制備、簇生成、測序、數(shù)據(jù)分析。文庫構(gòu)建的目的是在目的DNA片段兩端都連接上Y型接頭，然后將文庫DNA在flow cell芯片的表面上進行橋式PCR，從而生成由數(shù)千條相同模板的單分子片段構(gòu)成的Cluster，之后加入熒光基團標(biāo)記的、3′端羥基被封閉的dNTP與目的基因互補配對，通過可逆性終止的邊合成邊測序(SBS)技術(shù)對待測的模板DNA進行測序。NGS作為大規(guī)模平行測序可同時對數(shù)百萬個DNA片段進行測序，現(xiàn)已成為單基因遺傳病基因診斷的首選技術(shù)。臨床上NGS可用于拷貝數(shù)變異(CNV)的檢測和篩查基因的微小變異，因SMN1和SMN2高度同源且兩者還會發(fā)生基因轉(zhuǎn)換，所以短讀NGS分析SMA的CNV時不容易被定位到其基因組，臨床上一般可以利用SMN1和SMN2存在的堿基差異位點來推測SMN1基因是否存在缺失，但無法確定SMN1基因缺失長度和SMN2基因拷貝數(shù)。2017年Feng等[34]發(fā)展了一種新的基于短讀NGS數(shù)據(jù)的SMA攜帶者檢測方法(PGCNARS)，采用該方法檢測了6 738個臨床樣本，通過PCR和MLPA方法進行驗證，該方法檢測SMA攜帶者的敏感性為100%，特異性為99.6%，其檢測結(jié)果表明NGS可同時檢測SMN1基因拷貝數(shù)和篩查SMN基因微小變異，但檢測的微小變異定位不明確。2019年Chen等[35]用短讀NGS數(shù)據(jù)獨立解析SMN1和SMN2的拷貝數(shù)變異的方法，檢測了12 747個樣本中的SMN1和SMN2，經(jīng)過MLPA的驗證，結(jié)果顯示SMN1和SMN2的符合率分別為99.8%和99.7%，此方法相對于Feng等[34]的方法更全面地分析了靶向區(qū)域，以及更準(zhǔn)確地檢測微小變異檢測，包括與SMA的“2+0”攜帶者相關(guān)的g.27134T>G單核苷酸多態(tài)性(SNP)。由此可見NGS在檢測SMN拷貝數(shù)的技術(shù)將逐漸成熟和準(zhǔn)確。2020年Zhao等[36]開展了基于NGS的方法對中國10 585對夫婦進行SMA攜帶者篩查的泛種族研究，該方法與qPCR檢測SMA攜帶者和患者的符合率達100%，該方法分析了不同民族間攜帶者頻率的差異，還揭示了SMN1：SMN2基因型的分布。以上研究結(jié)果表明NGS方法是一種很有前景的SMA攜帶者篩查方法，可為今后的臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持和參考。

3.7其他方法 除以上介紹的5種SMA攜帶者篩查技術(shù)外，還有一些其他方法，如單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)[37]、等位基因特異性PCR[38]、高分辨率熔融分析(HRMA)[39]、液體微珠陣列[40]等方法。這些方法各有優(yōu)缺點，其中SSCP是一個非常耗時的過程；等位基因特異性PCR需要在凝膠或其他基質(zhì)上分離PCR產(chǎn)物，增加了污染的風(fēng)險；HRMA發(fā)展迅速，已經(jīng)做到了對9種SMN拷貝數(shù)組合的區(qū)分，但需進一步研究以準(zhǔn)確區(qū)分更多的拷貝數(shù)組合；雖然液體微珠陣列有靈敏、高通量等優(yōu)點，但其成本可能會阻礙其在許多實驗室的應(yīng)用。

4 總結(jié)

SMA是一種常見的兒童致死性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具有臨床癥狀嚴(yán)重，致死率高，人群中攜帶率高的特點。現(xiàn)有的實驗技術(shù)可以篩查出SMA攜帶者，對于夫妻雙方均為攜帶者的高危夫婦建議行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷，而高風(fēng)險胎兒應(yīng)進行SMN1基因檢測，評估后代患病風(fēng)險，避免SMA患兒的出生，降低SMA的發(fā)病率。目前存在多種SMA篩查技術(shù)，不同方法的可靠性、檢出率以及經(jīng)濟性等不盡相同。目前臨床上常用的技術(shù)是MLPA和熒光定量PCR，但因他們各自的缺點限制了其在大規(guī)模篩查的應(yīng)用。已有大量的研究數(shù)據(jù)表明NGS可以直接計算SMN1拷貝數(shù)，但篩查或診斷SMN1微小變異仍存在很大困難，目前在我國，NGS尚未成為SMA的常規(guī)檢測方法。數(shù)字PCR法、高分辨率熔融分析法等新興技術(shù)方法在臨床SMA攜帶者篩查中具有巨大的潛力。但由于dPCR方法不能檢測出SMN1基因內(nèi)點突變以及沉默的SMA攜帶者(2+0)，未來需要研究開發(fā)可以檢測單核苷酸變化的dPCR技術(shù)，以適用于大規(guī)模的篩查。隨著國內(nèi)逐漸完善標(biāo)準(zhǔn)化的SMA篩查流程，以及發(fā)展改進新型的篩查技術(shù)，中國人群的SMA發(fā)病率將會有效降低，從而有助于減輕家庭和社會的負(fù)擔(dān)，提高我國人口素質(zhì)。