姚 春， 張廣發(fā)， 樂瀅玉， 毛德文， 張榮臻， 劉 茵

1 廣西中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院， 南寧 530222； 2 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 肝病一區(qū)， 南寧 530023

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是與癌癥相關(guān)死亡的第4大常見原因，也是最常見的原發(fā)性肝癌，占所有病例的85%～90%[1]。HCC的病因病機(jī)尚未完全明晰，但多與肝炎病毒感染、肝硬化、代謝相關(guān)脂肪性肝病、酒精性肝病、糖尿病以及各類致癌物質(zhì)等密切相關(guān)，其中肝硬化以及未經(jīng)抗病毒治療的慢性乙型肝炎是我國(guó)HCC發(fā)病的主要病因。肝硬化是HCC發(fā)生過程中最重要的環(huán)節(jié)，85%～95%的HCC具有肝硬化背景，而慢性HBV相關(guān)肝硬化是我國(guó)HCC的首要病因[2]。該病具有起病隱匿、發(fā)病迅猛、預(yù)后極差、惡性率及轉(zhuǎn)移率高等特點(diǎn)，并且早期缺乏典型的癥狀和特異性的檢測(cè)指標(biāo)，這給疾病的早期診斷及治療帶來困難，也給患者的經(jīng)濟(jì)及社會(huì)醫(yī)療帶來沉重負(fù)擔(dān)，儼然已成為威脅全球公共衛(wèi)生健康的難題。因此，進(jìn)一步深入研究HCC的發(fā)病機(jī)制，尋找新的潛在診斷標(biāo)志物以及療效確切的治療藥物顯得尤為重要。

鞘脂(sphingolipids,SL)是一類以鞘氨醇為基本骨架的生物膜結(jié)構(gòu)組分，在動(dòng)植物及微生物中廣泛存在。SL種類繁多，其中神經(jīng)酰胺 (ceramide,Cer)和1-磷酸鞘氨醇是處在鞘脂類代謝網(wǎng)絡(luò)中核心位置的脂質(zhì)生物調(diào)控分子，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生物學(xué)功能的重要作用，參與基因表達(dá)、細(xì)胞增殖分化及凋亡等多種生物學(xué)過程。Cer可由絲氨酸和棕櫚酰輔酶A在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中重新合成或由鞘磷脂酶(sphingomyelinases,SMase)水解鞘磷脂 (sphingomyelin,SM)等不同途徑產(chǎn)生[3]。Cer作為誘導(dǎo)性刺激過程中起關(guān)鍵性作用的第二信使, 在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用，其通過參與和介導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡過程而抑制肝癌的生長(zhǎng)；相反，1-磷酸鞘氨醇則能拮抗Cer的促凋亡作用, 并可通過刺激血管的生長(zhǎng)而促使腫瘤的形成[4]。SMase是調(diào)節(jié)鞘磷脂類信號(hào)通路及其相關(guān)產(chǎn)物代謝的主要酶類，參與了SM復(fù)雜代謝過程中的關(guān)鍵步驟。近年來，許多研究表明SMase與HCC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，SMase可通過調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的凋亡和增殖來促進(jìn)肝臟腫瘤的發(fā)展。本文就SMase在HCC發(fā)生發(fā)展中的確切作用進(jìn)行歸納和探討，以期為其臨床治療提供新的思路和參考。

1 SMase的分類和生物學(xué)特性

根據(jù)酶促反應(yīng)的最佳pH值和亞細(xì)胞定位，SMase包含3個(gè)類型：酸性鞘磷脂酶(acid sphingomyelinase,ASMase)、中性鞘磷脂酶(neutral sphingomyelinase,NSMase)和堿性鞘磷脂酶(Alkaline sphingomyelinase,Alk-SMase)[5]。ASMase是由Smpd1基因編碼的鞘磷脂類代謝的溶酶體酶，其酶促活性最佳pH值為4.5～5.0，在各種類型的細(xì)胞中廣泛表達(dá)[6]。根據(jù)前體蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的不同，將ASMase分為細(xì)胞內(nèi)溶酶體型和細(xì)胞外分泌型2種形式[7]。溶酶體型ASMase主要通過溶酶體途徑水解產(chǎn)生，分泌型ASMase主要通過高爾基體分泌途徑運(yùn)輸而產(chǎn)生；ASMase的產(chǎn)生所涉及的機(jī)制尚未完全明晰，但多與Zn2+有關(guān)，溶酶體型ASMase 需移位至質(zhì)膜上與細(xì)胞外Zn2+結(jié)合才能被激活，分泌型ASMase在胞內(nèi)與外源性Zn2+結(jié)合完成酶促活化[8]。ASMase的主要作用是催化SM轉(zhuǎn)化為Cer和磷酸膽堿，參與細(xì)胞增殖分化、存活和通透性等多種信號(hào)傳導(dǎo)過程，并在介導(dǎo)衰老、凋亡和自噬方面也發(fā)揮著關(guān)鍵作用[9-10]。

NSMase是神經(jīng)鞘磷脂水解酶家族的重要成員，生理值(pH=7.4)是其激活的最適環(huán)境，同時(shí)鈣、錳、鎂陽(yáng)離子在調(diào)節(jié)NSMase生物學(xué)活性中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究[11-13]發(fā)現(xiàn)，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在3種亞型NSMase，分別是由Smpd2、Smpd3和Smpd4基因編碼的NSMase-1、NSMase-2和NSMase-3，NSMase-1主要存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體中，NSMase-3主要存在于骨骼肌和心肌細(xì)胞中而在肝臟中則不存在，而NSMase-2廣泛存在于質(zhì)膜的胞質(zhì)面，在質(zhì)膜的胞質(zhì)面、多層體和核膜上通過特異性水解SM的磷酸膽堿頭基從而調(diào)控胞內(nèi)第二信使Cer水平。此外，NSMase-2受TNFα和IL-1β細(xì)胞因子調(diào)控，參與介導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激和炎癥反應(yīng)[14]。

Alk-SMase是一種在腸道黏膜中表達(dá)(人體肝臟中也有表達(dá))的細(xì)胞外酶，主要存在于胃腸道和人體膽汁中，具有組織表達(dá)特異性、膽汁鹽依賴性和胰酶消化抵抗性等特點(diǎn)。研究[15-16]表明，Alk-Smase通過水解SM產(chǎn)生凋亡分子Cer，具有抗炎、抗癌和調(diào)控細(xì)胞增生凋亡等作用，并可作為肝膽疾病早期診斷的標(biāo)志物。

2 SMase的信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)控機(jī)制

SMase的酶活性可導(dǎo)致Cer在特定的離散胞內(nèi)位點(diǎn)快速而短暫的釋放，但NSMase和ASMase作用的機(jī)制與信號(hào)通路途徑有所不同。NSMase和ASMase位于不同的雙膜層中，它們分別在質(zhì)膜和溶酶體中水解特定的SM。NSMase誘導(dǎo)的Cer在質(zhì)膜附近生成，主要激活蛋白激酶C δ亞型、Ras激酶抑制因子或c-Jun氨基末端激酶等特定靶點(diǎn)，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡和癌癥等生物學(xué)過程。ASMase激活產(chǎn)生的Cer已被證明能夠靶向MAT1A基因和組織蛋白酶D以及c-Jun氨基末端激酶，并參與調(diào)節(jié)自噬、肝纖維化和溶酶體膜通透性。分泌型ASMase在水解質(zhì)膜外葉處的SM過程中，產(chǎn)生的Cer會(huì)誘發(fā)細(xì)胞凋亡抑制因子CD95和脂肪酸合成酶配體結(jié)合，從而進(jìn)一步介導(dǎo)脂肪酸合成酶誘導(dǎo)肝損傷和衰竭。

2.1 中性鞘磷脂酶(NSMase) NSMase 的不同亞型之間的同源性較低，參與鎂結(jié)合和催化活性的關(guān)鍵殘基(“催化核心”殘基)均高度保守，因此幾乎所有亞型的NSMase的催化活性都強(qiáng)烈依賴于鎂或錳等陽(yáng)離子。NSMase-1是一種具有423個(gè)氨基酸的完整膜蛋白質(zhì)，分子量為 47.6 kDa，在氨基酸序列上與肌醇磷酸鞘脂酶C顯示出顯著的同源性，而在C端具有兩個(gè)假定的跨膜結(jié)構(gòu)域。研究[17]表明，NSMase-1 對(duì)于應(yīng)激反應(yīng)中的Cer生成起重要作用。在T淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞中，通過反義RNA特異性抑制NSMase-1可減少T淋巴細(xì)胞受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，降低T淋巴細(xì)胞受體應(yīng)答過程中的Cer水平、IL-2的產(chǎn)生和促分裂原活化蛋白激酶的激活。因此，NSMase-1衍生的Cer可能是T淋巴細(xì)胞受體信號(hào)機(jī)制的重要組成部分。此外，在斑馬魚胚胎細(xì)胞中，通過反義寡核苷酸抑制NSMase-1抑制了Cer的生成、caspase-3的活化和熱應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[18]。NSMase-2是一種具有655個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，分子量為71 kDa，具有C端催化結(jié)構(gòu)域、兩個(gè) N 端疏水片段，兩者之間有200個(gè)殘留的膠原樣三螺旋。NSMase-2作為一種磷蛋白，其活性除了對(duì)中性pH和二價(jià)陽(yáng)離子有特殊要求之外，還受磷酸化、脂質(zhì)結(jié)合及信號(hào)蛋白結(jié)合等多種途徑調(diào)控，并參與細(xì)胞凋亡、生長(zhǎng)抑制、炎癥反應(yīng)等多種生理病理學(xué)過程[19]。在MCF-7細(xì)胞中，柔紅霉素可特異性上調(diào)NSMase-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，NSMase-2啟動(dòng)子區(qū)域中的某些Sp1基序在柔紅霉素的轉(zhuǎn)錄以及細(xì)胞死亡誘導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，而對(duì)NSMase-1和NSMase-3沒有任何影響[20]。此外，NSMase-2還與細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。研究[21]表明，細(xì)胞融合通過視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的低磷酸化和細(xì)胞周期抑制因子p21的誘導(dǎo)，過表達(dá)NSMase-2的細(xì)胞在指數(shù)期后期表現(xiàn)出較慢的細(xì)胞生長(zhǎng)，證實(shí)了NSMase-2在細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控中的作用。NSMase-2 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平的上調(diào)導(dǎo)致G0/G1期細(xì)胞周期阻滯，抑制了細(xì)胞周期的進(jìn)展。此外，Cer水平增加，特別是在極長(zhǎng)鏈C(24∶1)和C(24∶0)的Cer水平[21]。因此， NSMase-2是調(diào)節(jié)炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡等生物學(xué)過程的潛在靶點(diǎn)，在癌癥發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色。

2.2 酸性鞘磷脂酶(ASMase) ASMase介導(dǎo)的Cer生成調(diào)控多種信號(hào)通路，在細(xì)胞代謝、Ca2+調(diào)節(jié)、自噬和溶酶體穩(wěn)態(tài)等方面起著重要作用。因此，ASMase是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過程的重要信號(hào)分子。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是蛋白質(zhì)合成、折疊、成熟和分泌的重要細(xì)胞器。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic retieulum stress，ERS)是指內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中錯(cuò)誤折疊蛋白的積累從而觸發(fā)非折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPR)。UPR是一個(gè)復(fù)雜的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，旨在通過減少蛋白質(zhì)合成和增加蛋白質(zhì)折疊來恢復(fù)蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)[22]。此外，細(xì)胞還可以通過UPR激活一系列信號(hào)通路來維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)。UPR的激活是通過轉(zhuǎn)錄因子6a、蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶 (PERK) 、肌醇需求酶1α (IRE1α) 3種跨膜受體信號(hào)蛋白和主要調(diào)節(jié)因子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 (GRP78)介導(dǎo)的[23-24]。在生理?xiàng)l件下，GRP78與 IRE1α、PERK 和 ATF6結(jié)合并阻止其激活, 然而錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)積累后GRP78被釋放，轉(zhuǎn)錄因子6a、PERK、IRE1α啟動(dòng)UPR。經(jīng)外源性 ASMase 處理的肝細(xì)胞可通過Cer的產(chǎn)生和對(duì) Ca2+信號(hào)的影響以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+穩(wěn)態(tài)的失衡，Ca2+由Cer觸發(fā)釋放到細(xì)胞質(zhì)中會(huì)抑制GRP78與UPR傳感器的結(jié)合能力，從而導(dǎo)致ERS[25]。

自噬是一個(gè)高度調(diào)控和復(fù)雜的分解代謝過程，通過自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體，參與功能失調(diào)細(xì)胞成分的降解，如線粒體及過氧小體細(xì)胞器、蛋白質(zhì)聚集體或炎癥小體[26]。自噬介導(dǎo)了許多肝臟疾病的進(jìn)展，其中自噬缺陷可促進(jìn)脂肪變性和纖維化發(fā)展進(jìn)程[27]。ASMase在自噬介導(dǎo)的肝損傷中發(fā)揮作用，來自ASMase-/-小鼠的肝細(xì)胞表現(xiàn)出自噬通量的受損，具體表現(xiàn)為線粒體功能失調(diào)的積累和對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性的抵抗[28]。

溶酶體是專門的膜結(jié)合細(xì)胞器，含有多種水解酶，其在細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，其中溶酶體膜通透性和溶酶體內(nèi)容物的泄漏足以引發(fā)細(xì)胞凋亡[29]。ASMase 缺乏會(huì)導(dǎo)致原代小鼠肝細(xì)胞對(duì)棕櫚酸 (palmitic acid, PA)誘導(dǎo)的脂毒性產(chǎn)生耐藥性。與對(duì)PA介導(dǎo)的脂肪毒性的抵抗一致，來自ASMase-/-小鼠的肝細(xì)胞也對(duì)兩親性溶酶促洗劑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡產(chǎn)生了抵抗。ASMase缺乏時(shí)溶酶體中膽固醇水平的增加參與了這種保護(hù)，因?yàn)榻档腿苊阁w膽固醇含量會(huì)逆轉(zhuǎn)ASMase-/-肝細(xì)胞對(duì)兩親性溶酶促洗劑和PA誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的耐藥性[28]。因此，ASMase的缺乏會(huì)上調(diào)溶酶體膽固醇，從而導(dǎo)致溶酶體膜通透性的減少和對(duì)PA誘導(dǎo)的脂肪毒性的抵抗。

3 SMase與HCC

HCC早期癥狀不明顯，確診時(shí)多數(shù)患者已處于晚期而錯(cuò)過手術(shù)治療的最佳時(shí)機(jī)。目前，有效的非手術(shù)治療手段有限且效果欠佳，而且晚期 HCC 會(huì)對(duì)化療產(chǎn)生耐藥性，故早期診斷對(duì)HCC患者提高生存率至關(guān)重要[30-31]。肝細(xì)胞凋亡抵抗和代償性增殖是HCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素，也是治療失敗的主要原因。因此，尋找促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制 HCC 生長(zhǎng)的分子靶點(diǎn)顯得極為迫切，而SMase在HCC的發(fā)生發(fā)展及診療中具有重要潛在生物學(xué)價(jià)值。

3.1 NSMase在HCC中的作用 SL因參與調(diào)節(jié)癌細(xì)胞增殖和凋亡以及對(duì)化療藥物的反應(yīng)而受到認(rèn)可，Cer是SL代謝的核心分子，參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、衰老和炎癥等生物學(xué)過程。因此，參與 Cer 合成分解代謝的相關(guān)基因、酶和脂質(zhì)也在癌癥進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。SL可以通過介導(dǎo)細(xì)胞凋亡途徑，靶向調(diào)控Cer水平，從而抑制HCC的進(jìn)展。研究[32]表明，與非腫瘤組織相比，HCC組織中的Cer水平顯著降低而SM表達(dá)水平較高。因此，SMase活性受損可能是其潛在機(jī)制之一。此外，塞來昔布通過介導(dǎo)ERS激活誘導(dǎo)Cer從頭合成，從而增強(qiáng)肝癌HepG2細(xì)胞的凋亡，抑制肝癌的進(jìn)展[33]。研究[34]表明 ，NSMase-1在 HCC 中下調(diào)并與 HCC 患者的預(yù)后密切相關(guān)，與高 NSMase-1 患者相比，低 NSMase-1 表達(dá)的 HCC 患者的生存時(shí)間更短。外泌體 NSMase-1通過外泌體分泌降低體外SM/Cer 比率從而抑制HCC細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表明NSMase-1 在抗 HCC 藥物研發(fā)應(yīng)用方面具有巨大的潛力，并可作為 HCC 患者的潛在預(yù)后生物標(biāo)志物。NSMase-2為HCC的腫瘤抑制因子，NSMase-2 的過表達(dá)使 HCC 細(xì)胞系中的細(xì)胞增殖降低50%；相反，敲低NSMase-2 可促進(jìn)體外細(xì)胞侵襲和遷移，并增加體內(nèi)腫瘤形成[35-36]。此外，NSMase-2表達(dá)下調(diào)會(huì)抑制 TNFα介導(dǎo)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，減少IL-1β、單核細(xì)胞趨化因子等炎性細(xì)胞因子的分泌[37-38]，并參與多種炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展。

3.2 ASMase在HCC中的作用 ASMase受紫外線照射、腫瘤壞死因子、氧化應(yīng)激和抗癌藥物等多種外源性刺激能迅速活化[39-40]，并由細(xì)胞內(nèi)移位到胞膜上水解膜上SM生成Cer和磷酰膽堿。研究[41-42]表明，缺乏ASMase的細(xì)胞或小鼠能夠抵抗抗腫瘤刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，而過表達(dá) ASMase 會(huì)增加癌細(xì)胞對(duì)化療和放療的敏感性，表明ASMase是抗癌治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。

SL和 SMases通過哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路和自噬的相互作用介導(dǎo)參與HCC 的發(fā)病機(jī)制。mTOR是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、代謝和生存的必要復(fù)合物之一，其組裝成兩個(gè)不同的復(fù)合物：mTORC1和mTORC2[43]。Xu等[44]研究表明，mTORC2/Akt1(蛋白激酶1) 級(jí)聯(lián)反應(yīng)在原癌基因 c-Myc 誘導(dǎo)小鼠和人類HCC發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要， mTORC2通路的表達(dá)上調(diào)可以通過刺激脂肪酸和脂類的從頭合成途徑，從而誘導(dǎo)脂肪變性和HCC的發(fā)生發(fā)展。雖然自噬是一種為能量生成提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以維持關(guān)鍵細(xì)胞功能的機(jī)制，但自噬在HCC中似乎起著自相矛盾的作用。已有研究[45]證明，自噬可以保護(hù)癌細(xì)胞免受受損細(xì)胞器和蛋白質(zhì)聚集的堆積，防止細(xì)胞死亡和癌癥治療的毒性。此外，通過藥物或腺病毒小干擾RNA介導(dǎo)的自噬抑制可使HCC細(xì)胞對(duì)多激酶抑制劑 Linifanib 敏感[46]。然而，自噬標(biāo)志物的減少與更具侵襲性的HCC的發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展相關(guān)，Beclin-1和Bax在HCC組織中的表達(dá)可能對(duì)抑制 HCC 增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和血管生成提供協(xié)同作用[47]。研究[48]表明，在影響自噬的藥物中，伏立諾他和索拉非尼可通過ASMase/Cer依賴途徑增加ERS與自噬來促進(jìn)HCC癌細(xì)胞凋亡。此外，重組人ASMase作為索拉非尼治療 HCC 的潛在輔助治療制劑，重組人ASMase聯(lián)合索拉非尼在減少Huh7異種移植物中的腫瘤體積、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞壞死以及降低血管密度方面表現(xiàn)出協(xié)同作用，并且其安全性和耐受性良好[49]。因此，ASMase具有作為HCC潛在療法的靶向性。

4 小結(jié)與展望

綜上所述，SMase作為一種新型的潛在治療靶點(diǎn)，其在細(xì)胞凋亡和增殖、細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞遷移和炎癥等生物學(xué)過程中的確切作用已得以闡述，并與HCC的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。但仍存在以下不足之處：(1)SMase在HCC中的具體分子機(jī)制仍未完全明晰且大多研究仍停留于實(shí)驗(yàn)研究階段，距離疾病的臨床評(píng)估和藥物開發(fā)等實(shí)際應(yīng)用還有一定的差距；(2)目前，SMase在HCC中研究多集中于NSMase 和 ASMase，而Alk-SMase對(duì)HCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)研究鮮有報(bào)道；(3)SMase對(duì)HCC非癌細(xì)胞的影響尚不明確。因此，未來急需進(jìn)一步深化基礎(chǔ)研究，尤其是Alk-SMase對(duì)HCC發(fā)生機(jī)制的確切作用，并開展臨床應(yīng)用驗(yàn)證，更加細(xì)化的深入探索SMase在HCC不同階段、不同細(xì)胞中的作用和機(jī)制。相信隨著SMase對(duì)HCC研究和認(rèn)識(shí)的深入，SMase有望成為HCC新型的預(yù)測(cè)因子和藥物治療靶標(biāo)，為HCC的早期診斷、靶向治療及預(yù)后評(píng)估等方面提供新策略。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：姚春、張廣發(fā)負(fù)責(zé)擬定寫作思路，撰寫文章；毛德文負(fù)責(zé)研究選題，指導(dǎo)文章撰寫和修改；張榮臻、劉茵負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)論文框架；樂瀅玉負(fù)責(zé)起草論文。