李何杏 彭潔 洪建文

(廣東省藥品檢驗所，國家藥品監(jiān)督管理局藥品快速檢驗技術重點實驗室，廣州 510663)

鹽酸頭孢替安為第二代頭孢菌素類抗生素，通過阻礙細菌細胞壁的合成而產生抗菌作用，近年來成為醫(yī)院常用的β-內酰胺類抗生素之一[1]，其制劑為注射用鹽酸頭孢替安。該制劑有兩種原研品的處方，處方1為鹽酸頭孢替安-無水碳酸鈉(83:17)，原研廠家是日本富山化學工業(yè)株式會社；處方2為鹽酸頭孢替安-無水碳酸鈉-精氨酸(66:5:29)，原研廠家日本武田藥品株式會社。鹽酸頭孢替安pH值為1.2～1.7，而注射劑pH要求與血液相等或相近，一般控制pH值在4～9范圍內，制劑中加入堿性附加劑無水碳酸鈉或(和)精氨酸主要用以調節(jié)注射劑的pH值。本實驗室在2018年注射用鹽酸頭孢替安國家評價性抽驗的探索性研究中發(fā)現(xiàn)多批次樣品碳酸鈉含量不符合規(guī)定，抽驗結果也提示注射用鹽酸頭孢替安碳酸鈉含量的控制與溶液澄清度、制劑穩(wěn)定性及不良反應相關[2]，為控制藥品質量，保證用藥安全有效，應采用相應的方法測定注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉的含量，但是注射用鹽酸頭孢替安現(xiàn)行標準均為局頒標準或進口注冊標準[2]，碳酸鈉測定方法不統(tǒng)一，有電位滴定法、原子吸收分光光度單點法及原子吸收標準曲線法，甚至個別廠家未對碳酸鈉進行控制。為了更好地對注射用鹽酸頭孢替安中的碳酸鈉含量進行控制，本實驗采用原子吸收分光光度法，優(yōu)化建立了可同時適合兩種不同處方的碳酸鈉含量的質量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

原子吸收分光光度計(VARIAN AA240FS+Z；ThermoFisheriCE3500)；BP211D電子天平。

1.2 試劑與試藥

基準氯化鈉(天津市天新精細化工開發(fā)中心，20180305)、氯化鉀(分析純)、氯化銫(分析純)、硝酸(分析純)、純化水。

1.3 供試品

根據(jù)2018年國家評價性抽驗情況及市面生產使用的情況，征集到包含兩種處方的6個主流企業(yè)的供試品，見表1。

表1 供試品信息Tab.1 Test product information

2 方法

2.1 試驗條件的優(yōu)化

本品現(xiàn)行標準多采用原子吸收分光光度法測定碳酸鈉含量。測定方法中電離抑制劑的種類和硝酸的加入量不一致，電離抑制劑有氯化鉀和氯化銫，硝酸的加入量也不盡相同，甚至有些標準中未加入硝酸?？紤]電離抑制劑是為了在同一條件下加入比待測離子(鈉離子)更易電離的金屬離子來降低干擾，在堿金屬元素中，銫元素的電離電位(3.95 eV)與鉀元素的電離電位(4.316 eV)均比鈉元素的電離電位(5.12 eV)低，當三者共存時，銫與鉀先電離，使電離平衡向基態(tài)原子方向移動，從而抑制鈉的電離。同時，本品pH值偏中性，加入硝酸，保證在酸性的測定環(huán)境，更有利于金屬元素溶出。為篩選合適的電離抑制劑及確定硝酸的加入量，統(tǒng)一本品碳酸鈉測定的方法，取供試品各6份，照表2設計4種試驗方案，考察測定結果的重復性。結果顯示，加入氯化鉀的供試品測定結果更穩(wěn)定，且氯化鉀比氯化銫更容易獲得，因此選擇氯化鉀作為電離抑制劑。硝酸的加入量中，1 mL硝酸已能滿足結果測定的要求，因此，確定試驗條件按方案一(電離抑制劑為氯化鉀及硝酸加入量為1 mL)進行。

表2 供試品溶液配制方案Tab.2 Test solution preparation plan

2.2 實驗條件

光源：鈉空心陰極燈；原子化器：空氣-乙炔火焰原子化器；分析線：330.3 nm。

2.3 溶液制備

2.3.1 氯化鉀溶液

稱取氯化鉀19.07 g，加水溶解并稀釋至1000 mL。

2.3.2 對照品溶液

精密稱取經110℃干燥2 h的氯化鈉對照品適量，加水溶解并定量稀釋成每1 mL中約含2.5 mg的溶液。精密量取氯化鈉溶液1、3、5、7和10 mL，分別置100 mL量瓶中，加硝酸1 mL和氯化鉀溶液10 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(1)、(2)、(3)、(4)和(5)。

2.3.3 供試品溶液

精密稱取本品適量(約相當于含碳酸鈉60 mg)，置100 mL量瓶中，加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶，加硝酸0.5 mL和氯化鉀溶液5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻。

2.3.4 空白溶液

取硝酸1 mL和氯化鉀溶液10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。

2.4 方法學驗證

2.4.1 標準曲線繪制

按“2.3.2”項下制備，進樣分析，測定標準系列鈉離子的吸光度，以鈉離子濃度為橫坐標，吸光度A為縱坐標作圖，標準曲線方程為y=0.0038x+0.0093，相關系數(shù)r為0.9996。

2.4.2 重復性

取兩種處方供試品(處方1批號：1910214和處方2批號：19123201)各6份，照“2.3.3”項下制備，進樣分析，結果顯示處方1供試品(批號1910214)的平均含量為16.9%，RSD為1.2%(n=6)；處方2供試品(批號19123201)的平均含量為4.6%，RSD為2.1%(n=6)。該方法在兩種處方中的重復性均良好。

2.4.3 回收率

根據(jù)注射用鹽酸頭孢替安處方中碳酸鈉含量，用企業(yè)D提供的原料(批號：1912111)和相關輔料無水碳酸鈉、精氨酸按照處方的比例混合，每種處方各6份，照“2.3.3”項下制備，進樣分析，處方1平均回收率為98.7%，RSD為0.5%(n=6)；處方2平均回收率為98.3%，RSD為0.8%(n=6)。該方法在兩種處方中的回收率均良好。

2.4.4 中間精密度

使用兩種不同儀器(VARIAN/AA240FS+Z和ThermoFisher/iCE3500)，取不同廠家供試品，照“2.3.3”項下制備，進樣分析，兩臺儀器結果無明顯差異，結果見表3。該方法在兩種處方中的精密度均良好。

表3 中間精密度Tab.3 Intermediate precision

2.4.5 空白干擾實驗

(1)稱取鹽酸頭孢替安原料藥，按照處方1比例，照“2.3.3”項下制備，進樣分析，結果顯示基本無吸收，與空白溶液測定值基本相同。

(2)稱取鹽酸頭孢替安原料藥與精氨酸，按照處方2比例混合，照“2.3.3”項下制備，進樣分析，結果顯示基本無吸收，與空白溶液測定值基本相同。

2.5 樣品測定

采用擬定的方法對6個廠家供試品進行碳酸鈉的測定，并將結果與按法定質量檢驗方法測定的結果進行比較，結果顯示本方法測定結果與法定質量標準測定結果基本一致，見表4。實驗結果顯示，E企業(yè)產品中的碳酸鈉含量偏低，超出處方比例范圍(15.8%～19.2%)，其法定質量標準中未對產品中的碳酸鈉含量進行控制。

表4 碳酸鈉測定結果Tab.4 Sodium carbonate measurement result

3 討論

本文系統(tǒng)地優(yōu)化并建立了適合兩種不同處方的注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉含量測定方法，該方法準確、重復性好、操作簡便，易于推廣。方法應用于實際樣品檢測時發(fā)現(xiàn)，有企業(yè)產品存在碳酸鈉含量超出處方比例控制范圍的情況，亟須加強控制，保證藥品質量。

注射用鹽酸頭孢替安現(xiàn)行標準碳酸鈉的測定方法不統(tǒng)一，有電位滴定法和原子吸收分光光度法。電位滴定法不普及，需使用對溫度敏感、平衡時間較長鈉離子電極；原子吸收分光光度法多采用589.0 nm作為分析線，研究發(fā)現(xiàn)，由于鈉原子在自然界中非?；顫奫3]，當波長為589.0 nm時，檢測靈敏度過高，在火焰中電離而引起的干擾較大，影響檢測結果準確性。注射用鹽酸頭孢替安中碳酸鈉含量分別為17.5%和4.7%，含量相對較高，雖然波長為330.3 nm時，靈敏度約為589.0 nm的1%，但吸光度值適中，能有效減少實驗干擾，同時減少實驗操作步驟，降低實驗誤差，完全可滿足檢測分析要求。