張宇柔，陳玉珂，于夢(mèng)楠，雷新雨，王嘉婧，高永生，王秋舉，MAHMOUD M. Elsadek，張東鳴,3

( 1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130118； 2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院/動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，動(dòng)物生產(chǎn)及產(chǎn)品質(zhì)量安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，吉林 長(zhǎng)春 130118；3.通化師范學(xué)院，吉林 通化 134000 )

隨著我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的產(chǎn)量已達(dá)到世界總產(chǎn)量的3/4[1]。而隨著魚類產(chǎn)量的提高，魚類疾病成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的一個(gè)嚴(yán)峻的問(wèn)題[2]。過(guò)去很長(zhǎng)一段時(shí)間，抗生素等藥物一直是預(yù)防魚類疾病的有效選擇，但抗生素的大量使用也導(dǎo)致了藥物殘留和耐藥性細(xì)菌的出現(xiàn)[3]，同時(shí)也損害魚類的免疫系統(tǒng)，并對(duì)魚類的消化道菌群產(chǎn)生不利影響[4-6]。魚類的腸道環(huán)境是機(jī)體抵抗疾病發(fā)生的重要生理屏障，吞噬細(xì)胞對(duì)抗原攝取和處理主要發(fā)生在魚類腸道的黏膜表面，黏膜屏障與病原微生物之間的動(dòng)態(tài)相互作用可以誘發(fā)炎癥反應(yīng)以及改變腸道的屏障功能[7]。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌可通過(guò)調(diào)節(jié)魚類腸道黏膜屏障功能防止病原菌定殖，其在魚類黏膜免疫中發(fā)揮重要作用[8]。因此，近年來(lái)益生菌作為抗生素的安全替代品之一，以飼料添加劑形式廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中[9]。與乳酸桿菌(Lactobacillus)等相比，芽孢桿菌(Bacillus)可形成保護(hù)其免受環(huán)境影響的內(nèi)生孢子，在魚類疾病的預(yù)防上更加具有優(yōu)勢(shì)。益生芽孢桿菌可作為飼料添加劑促進(jìn)生長(zhǎng)、促進(jìn)消化、抑制病原菌和增強(qiáng)魚類免疫，同時(shí)調(diào)節(jié)魚類腸道微生物區(qū)系，對(duì)魚類的健康養(yǎng)殖具有重要意義。筆者概述了益生芽孢桿菌的種類、特征及作用機(jī)理，綜述了其在魚類養(yǎng)殖過(guò)程中對(duì)魚類的生長(zhǎng)性能、免疫功能以及抗病力的影響，為魚類的疾病防控和健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 益生芽孢桿菌的概述

1.1 益生芽孢桿菌的種類和特征

芽孢桿菌屬為革蘭氏陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性，桿狀(2.5～10.0 μm)，無(wú)莢膜，是需氧或兼性厭氧菌，具有豐富的鞭毛用于運(yùn)動(dòng)[10]。在非選擇性培養(yǎng)基上，芽孢桿菌通常呈現(xiàn)大而扁平的菌落形態(tài)[11]。芽孢桿菌與其他益生菌的顯著區(qū)別在于在其培養(yǎng)的最后階段會(huì)在細(xì)胞內(nèi)形成厚壁芽孢，也稱內(nèi)生孢子，具有耐高溫、高pH、高鹽、干燥和抗氧化等特點(diǎn)，可保護(hù)芽孢桿菌免受不良環(huán)境的影響[12-14]，從而保持良好的生物活性，可在魚類的消化道中持續(xù)生存。同時(shí)，芽孢桿菌具有可產(chǎn)生纖維素酶、植酸酶、單寧酶、幾丁質(zhì)酶、木聚糖酶、蛋白酶和脂肪酶的能力[15-20]。大部分用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的益生芽孢桿菌是從魚類自身腸道、池塘底泥、土壤、堆肥或水環(huán)境中分離出來(lái)的，研究表明，芽孢桿菌是魚類本身細(xì)菌群落的一部分[21-22]。由于益生菌菌株與病原菌在魚體內(nèi)共享相同的生態(tài)位[23]，因此在水產(chǎn)養(yǎng)殖中可能更傾向于使用魚源細(xì)菌，以避免對(duì)宿主自身的微生物區(qū)系產(chǎn)生不良影響。而且這些魚類內(nèi)源性芽孢桿菌由于能適應(yīng)相同的環(huán)境從而免受競(jìng)爭(zhēng)性排斥作用，更具潛力[24-26]。

目前常用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的益生芽孢桿菌有地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)、凝結(jié)芽孢桿菌(B.coagulans)、蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、納豆芽孢桿菌(B.natto)、解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、短小芽孢桿菌(B.pumilus)、巨大芽孢桿菌(B.megaterium)、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(B.firmus)等40種以上[27]。其中，地衣芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌經(jīng)過(guò)嚴(yán)苛試驗(yàn)及安全評(píng)估被許可收錄進(jìn)2013年我國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的微生物飼料添加劑品種目錄中。

1.2 益生芽孢桿菌在魚體內(nèi)的作用機(jī)理

魚類胃、腸道及腸道微生物區(qū)系的有效功能對(duì)其自身健康起著至關(guān)重要的作用[28-30]。如果沒有腸道菌群的保護(hù)，魚類正常的免疫功能受損，降低抵抗致病菌感染的能力，同時(shí)損害腸道健康，致使腸道菌群失調(diào)，增加宿主感染的風(fēng)險(xiǎn)[31-36]。在魚類腸道中，魚類的消化功能直接影響魚類的腸道健康，而腸道黏膜和共生微生物區(qū)系則是影響魚類消化功能的重要因素。其中，腸道微生物區(qū)系又分為腸道內(nèi)微生物和黏附在黏膜表面的微生物，它們對(duì)宿主病原菌置換、抗菌因子的產(chǎn)生等具有促進(jìn)作用[37-38]。

益生芽孢桿菌可通過(guò)調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡來(lái)促進(jìn)宿主生長(zhǎng)和預(yù)防疾病，是水產(chǎn)養(yǎng)殖的熱門飼料添加劑之一。目前，有關(guān)其在魚體內(nèi)的作用機(jī)理主要有以下3種：(1)益生芽孢桿菌進(jìn)入魚類的腸道后，在腸道內(nèi)大量繁殖迅速形成優(yōu)勢(shì)菌群，同時(shí)消耗腸道內(nèi)的氧氣創(chuàng)造了一種有利于厭氧益生菌生長(zhǎng)的環(huán)境，抑制大腸桿菌(Escherichiacoli)、氣單胞菌(Aeromonas)、葡萄球菌(Staphylococcus)等有害菌群的生長(zhǎng)，創(chuàng)造有益微生態(tài)環(huán)境[39]。(2)益生芽孢桿菌黏附在腸道或其他組織上，與黏膜上皮緊密結(jié)合并形成致密菌膜，與病原微生物競(jìng)爭(zhēng)黏附位點(diǎn)，抑制病原微生物在腸道黏膜上的黏附，阻止其定殖。黏附過(guò)程可以通過(guò)物理化學(xué)因素等非特異性方式實(shí)現(xiàn)，也可以通過(guò)細(xì)菌表面的黏附素分子與上皮細(xì)胞上的受體分子結(jié)合等特異性方式實(shí)現(xiàn)[40-41]。(3)益生芽孢桿菌自身可以直接抑制病原微生物的生長(zhǎng)和代謝毒物的產(chǎn)生，分解腸道內(nèi)殘餌和代謝廢物，促進(jìn)宿主腸道蠕動(dòng)，維持腸道黏膜屏障完整，使腸道微生態(tài)系統(tǒng)中的能量流、物質(zhì)流和基因流可以正常運(yùn)轉(zhuǎn)[42]。這3種理論雖然機(jī)制有所不同，但功效一致，均為抑制病原菌，調(diào)節(jié)宿主微生態(tài)平衡，利于宿主生長(zhǎng)。

2 益生芽孢桿菌在魚類養(yǎng)殖中的研究進(jìn)展

2.1 益生芽孢桿菌對(duì)魚類生長(zhǎng)性能的影響

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖的集約化程度越來(lái)越高，提高魚類的生長(zhǎng)性能和水產(chǎn)品品質(zhì)一直是水產(chǎn)研究的熱點(diǎn)和目的。益生芽孢桿菌作為飼料添加劑能夠促進(jìn)魚類生長(zhǎng)主要有兩方面的原因：一方面，是通過(guò)為魚類提供營(yíng)養(yǎng)同時(shí)影響消化酶活性從而提高消化率或飼料利用率來(lái)促進(jìn)魚類生長(zhǎng)[43]。淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶是益生芽孢桿菌在宿主體內(nèi)調(diào)節(jié)的主要消化酶，它們能夠消化腸道內(nèi)的脂類、蛋白質(zhì)和碳水化合物。魚類消化酶活性直接反映了宿主對(duì)飼料的消化吸收能力，間接反映了魚類的生長(zhǎng)性能。而益生芽孢桿菌對(duì)魚類消化酶活性具有促進(jìn)作用，其原因可能是益生芽孢桿菌能分泌外源酶，對(duì)宿主的內(nèi)源性酶進(jìn)行一定的補(bǔ)充，亦或是益生芽孢桿菌能夠促進(jìn)魚類內(nèi)源酶的產(chǎn)生[44]。另一方面，益生芽孢桿菌通過(guò)產(chǎn)生維生素、有機(jī)酸等增加魚類食欲，降解腸道中難以消化的成分，改善腸道形態(tài)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收來(lái)促進(jìn)魚類生長(zhǎng)[45]。Adeoye等[46]以尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)為研究對(duì)象，對(duì)其投喂添加外源酶和3種益生芽孢桿菌的飼料，發(fā)現(xiàn)添加外源酶和益生芽孢桿菌組合可使羅非魚腸道的杯狀細(xì)胞豐度、微絨毛直徑和腸上皮細(xì)胞總吸收面積均高于對(duì)照組，改善羅非魚的生長(zhǎng)性能。Kuebutornye等[47]也在尼羅羅非魚上證實(shí)了相似的結(jié)果。益生芽孢桿菌對(duì)草魚(Ctenopharyngodonidella)、鰻鱺(Anguillajaponica)、金頭鯛(Sparusaurata)的腸道形態(tài)參數(shù)也有積極影響[48-50]。

益生芽孢桿菌對(duì)魚類產(chǎn)生影響的一個(gè)必要前提是在魚腸道內(nèi)定殖，因此其黏附性是益生芽孢桿菌篩選的標(biāo)準(zhǔn)之一。Zhao等[51]將從草魚腸道分離的副地衣芽孢桿菌(B.paralicheniformis)添加到飼料中后飼喂草魚2周，在停止飼喂后的220 d內(nèi)使用免疫熒光法標(biāo)記副地衣芽孢桿菌在草魚腸道內(nèi)的動(dòng)態(tài)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其熒光信號(hào)在第40天到第60天間趨于平穩(wěn)，第80天依然在草魚腸道中保持可見，在第220天仍能從腸道內(nèi)容物中重新分離到副地衣芽孢桿菌。說(shuō)明副地衣芽孢桿菌可在草魚腸道內(nèi)黏附并定殖。現(xiàn)有的研究成果(表1)表明，飼喂效果好的益生芽孢桿菌大部分分離自魚類自身腸道，其原因可能是這些魚類內(nèi)源性芽孢桿菌能適應(yīng)相同的環(huán)境從而免受競(jìng)爭(zhēng)性排斥作用，且這些內(nèi)源性芽孢桿菌在宿主腸道的黏附作用具有特異性，因此在魚類飼料應(yīng)用方面更具有潛力。

表1 飼料中添加益生芽孢桿菌對(duì)魚類的生長(zhǎng)性能、消化酶活性和腸道菌群的影響Tab.1 Effects of dietary probiotic Bacillus on growth performance, digestive enzyme activities and intestinal microflora in fish

益生芽孢桿菌對(duì)多種魚類的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，并在魚類腸道中定殖且形成優(yōu)勢(shì)菌群。不同魚類對(duì)益生芽孢桿菌的最適需求量也不同。然而也有部分證據(jù)表明，飼料中添加益生芽孢桿菌對(duì)達(dá)氏鱘和大菱鲆的生長(zhǎng)性能和消化酶活性無(wú)顯著影響[64]。原因可能是益生芽孢桿菌的添加量和飼喂方法不同，也可能是養(yǎng)殖條件不同，如水的理化參數(shù)、放養(yǎng)密度、攝食率以及魚的規(guī)格等因素均會(huì)對(duì)魚類的性能產(chǎn)生影響。目前益生芽孢桿菌添加量與魚體規(guī)格間還沒有具體的規(guī)定，但總體來(lái)說(shuō)，大規(guī)格魚需要添加較多劑量的益生芽孢桿菌，小規(guī)格魚需要益生芽孢桿菌的劑量較少。當(dāng)益生芽孢桿菌作用于魚類時(shí)，益生芽孢桿菌單獨(dú)或組合使用，多會(huì)提高宿主的生長(zhǎng)性能和飼料利用率，且不同益生芽孢桿菌對(duì)同種魚類的作用效果不同，同種益生芽孢桿菌的劑量不同對(duì)宿主的作用效果也不同。

2.2 益生芽孢桿菌對(duì)魚類免疫和抗氧化功能的影響

益生芽孢桿菌已成為抗生素的安全替代品，可作為飼料添加劑增強(qiáng)魚類免疫力而減少疾病的產(chǎn)生。在抑制疾病方面，魚類的非特異性免疫比特異性免疫更為重要[67]，其中體液免疫因子作為魚類非特異性免疫應(yīng)答的效應(yīng)分子，對(duì)病原微生物具有直接的防御作用。益生芽孢桿菌可通過(guò)調(diào)節(jié)魚類的體液免疫因子和免疫基因的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)魚類的非特異性免疫[44]。研究發(fā)現(xiàn)，酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、過(guò)氧化物酶、溶菌酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和超氧化物歧化酶等血清免疫因子對(duì)病原微生物具有殺滅作用[12,48,68-69]。目前報(bào)道較多的還有補(bǔ)體C3、干擾素、免疫球蛋白、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子α以及其他頭腎免疫相關(guān)基因mRNA的表達(dá)。以上免疫指標(biāo)活性的增加均能證明魚類免疫應(yīng)答的增強(qiáng)[70-73]。有研究表明，貝萊斯芽孢桿菌(B.velezensis)和植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)單獨(dú)或共同作為添加劑均可通過(guò)調(diào)節(jié)血清免疫和黏膜免疫增強(qiáng)尼羅羅非魚的免疫應(yīng)答[73]；地衣芽孢桿菌對(duì)草魚也具有同樣的效果[48]。Li等[74]研究表明，貝萊斯芽孢桿菌可通過(guò)調(diào)節(jié)雜交石斑魚(E.lanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、補(bǔ)體C3的活性及同時(shí)調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素8、免疫球蛋白、CC趨化因子、Toll樣受體(TLR-3、TLR-5)等相關(guān)免疫基因來(lái)增強(qiáng)其免疫功能。另外，益生芽孢桿菌也對(duì)魚類腸道黏膜免疫活性起作用[75-76]。魚類的腸黏膜上皮為單柱狀細(xì)胞，包括腸上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和散在的纖毛細(xì)胞。其中杯狀細(xì)胞能分泌具有殺菌作用的黏液，在腸道內(nèi)形成保護(hù)性黏液層，可防止病原體進(jìn)入腸道，同時(shí)維持腸上皮的完整性。Elsabagh等[68]研究發(fā)現(xiàn)，投喂益生芽孢桿菌的尼羅羅非魚腸道內(nèi)PAS陽(yáng)性杯狀細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比明顯增多，證實(shí)隨著腸道黏膜免疫活性的增強(qiáng)，黏液分泌的增加與魚類服用益生芽孢桿菌有關(guān)。

益生芽孢桿菌對(duì)魚類的抗氧化能力也有一定影響。當(dāng)魚類因生存的水環(huán)境發(fā)生變化而受到刺激時(shí)，組織或細(xì)胞內(nèi)的自由基增加會(huì)導(dǎo)致氧化劑如活性氧的產(chǎn)生，當(dāng)氧化劑的蓄積超過(guò)組織或細(xì)胞的抗氧化能力時(shí)，魚類就會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)。這種損傷可通過(guò)抗氧化酶活性的增強(qiáng)來(lái)抵消。Hindu等[77]研究發(fā)現(xiàn)，益生芽孢桿菌在魚體內(nèi)產(chǎn)生的超氧化物歧化酶可有效的消除自由基來(lái)調(diào)節(jié)魚類的抗氧化能力；Qin等[48]也發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌可通過(guò)提高草魚血清中超氧化物歧化酶活性和降低丙二醛水平來(lái)增加其抗氧化能力。

2.3 益生芽孢桿菌對(duì)魚類抗病力的影響

細(xì)菌感染是魚類養(yǎng)殖過(guò)程致病的主要原因，氣單胞菌、無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)、哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)、鄰單胞菌(Plesiomonas)、愛德華氏菌(Edwardsiella)等均會(huì)造成魚類的細(xì)菌性疾病。多項(xiàng)證據(jù)表明，益生芽孢桿菌添加在水產(chǎn)飼料中可抑制魚類細(xì)菌性疾病的發(fā)生[78-81]。益生芽孢桿菌的抑菌活性表現(xiàn)在其產(chǎn)生的活性物質(zhì)可對(duì)多種魚類病原微生物產(chǎn)生抗菌作用。一方面，益生芽孢桿菌通過(guò)對(duì)病原菌直接的拮抗作用提高宿主的抗病力。拮抗作用在維持魚類潛在益生菌與病原菌的平衡上不可或缺[82]，益生菌對(duì)病原菌的生長(zhǎng)抑制作用可能是通過(guò)單獨(dú)或與其他益生菌或益生元聯(lián)合作用產(chǎn)生細(xì)菌素、溶菌酶、蛋白酶、鐵載體等抗菌代謝物，或通過(guò)產(chǎn)生的有機(jī)酸改變腸道內(nèi)的pH，或與病原菌競(jìng)爭(zhēng)必需營(yíng)養(yǎng)素等方式實(shí)現(xiàn)的[40]。另一方面，益生芽孢桿菌可調(diào)節(jié)魚類腸道微生物菌群的平衡，使腸道內(nèi)優(yōu)勢(shì)菌群及細(xì)菌呈上升趨勢(shì)，與病原菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)空間，使有益菌數(shù)量增加，有害菌數(shù)量減少，增強(qiáng)魚類免疫系統(tǒng)功能，從而抑制病原微生物對(duì)魚類的致病性[83]。也有研究者發(fā)現(xiàn)[44]，益生芽孢桿菌可通過(guò)降低谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性防止魚類肝組織損傷，而益生芽孢桿菌用于防止魚類免受病毒性疾病的研究在魚類養(yǎng)殖上鮮有報(bào)道。由表2可知，枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、貝萊斯芽孢桿菌等可與多種魚類病原菌產(chǎn)生拮抗作用并增強(qiáng)魚類抗感染能力，但也有研究表明，在飼料中添加20 g/kg的芽孢桿菌對(duì)金頭鯛病原菌的血清殺菌效果不顯著。其原因可能是益生芽孢桿菌劑量或飼喂時(shí)間未達(dá)到對(duì)病原菌致死的效果，但金頭鯛血清中免疫球蛋白M水平顯著提高，這說(shuō)明益生芽孢桿菌對(duì)其免疫功能具有促進(jìn)作用[78]。有研究表明，在從鯉腸道中分離出的枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌中，只有解淀粉芽孢桿菌對(duì)嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)和不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)這兩種魚類病原菌顯示出抑菌活性[84]。多項(xiàng)研究(表2)表明，添加不同劑量的益生芽孢桿菌對(duì)魚類病原菌的抑制效果不同，在處于安全劑量的前提下，通常，細(xì)菌劑量高時(shí)抑制病原菌和增強(qiáng)魚類免疫力效果更加顯著。

表2 飼料中添加益生芽孢桿菌對(duì)魚類抗細(xì)菌性疾病能力的作用效果Tab.2 Effect of dietary probiotic Bacillus on anti-bacterial diseases in fish

3 結(jié)語(yǔ)與展望

益生芽孢桿菌，因其具有可抵抗不良環(huán)境影響而穩(wěn)定存在的優(yōu)勢(shì)，在魚類養(yǎng)殖上應(yīng)用前景良好，且由于它對(duì)魚類無(wú)毒害和無(wú)不良副作用，還可對(duì)魚類機(jī)體內(nèi)外微生態(tài)環(huán)境同時(shí)進(jìn)行調(diào)節(jié)[91]，已成為國(guó)內(nèi)外抗生素替代研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。多項(xiàng)研究證明，益生芽孢桿菌作為綠色微生態(tài)制劑在魚類養(yǎng)殖上具有顯著的功效，但在其生產(chǎn)和應(yīng)用中仍然存在不足：(1)目前投入生產(chǎn)的魚源菌種依然較少；(2)益生芽孢桿菌在培養(yǎng)和傳代過(guò)程中益生功效逐漸降低；(3)益生芽孢桿菌作為水產(chǎn)飼料添加劑其益生功能未得到充分挖掘；(4)益生芽孢桿菌制劑在制作和使用過(guò)程中容易失活等。同樣，關(guān)于益生芽孢桿菌作用機(jī)制的研究中有些問(wèn)題也未得到解答：(1)益生芽孢桿菌在魚體內(nèi)的具體黏附機(jī)制是什么？(2)益生芽孢桿菌在魚體內(nèi)抑制病原菌的具體作用方式是什么？(3)益生芽孢桿菌對(duì)魚類的病毒感染是否同樣具有抑制作用？針對(duì)以上問(wèn)題，建議今后加強(qiáng)以下方面的研究：(1)繼續(xù)篩選和驗(yàn)證魚源益生芽孢桿菌，擴(kuò)大魚源益生芽孢桿菌在實(shí)際生產(chǎn)上的種類；(2)可利用基因組學(xué)[92]技術(shù)獲得益生效果更好、穩(wěn)定性更高的魚源益生芽孢桿菌，使其益生效果在水產(chǎn)飼料應(yīng)用中充分發(fā)揮；(3)繼續(xù)探究益生芽孢桿菌添加到飼料中的方式，如微膠囊包埋技術(shù)、凍干添加以及熱滅活添加等，也可通過(guò)改良制作工藝如冷制粒機(jī)的應(yīng)用，以確保益生芽孢桿菌在添加和使用過(guò)程中的活性；(4)可利用代謝組學(xué)等技術(shù)探究腸道微生物及其代謝產(chǎn)物與宿主之間的作用機(jī)制，也可探究其抑制病原菌的免疫方式，代謝組學(xué)目前在家畜上應(yīng)用較為廣泛[93]，但其在魚類養(yǎng)殖上的應(yīng)用還需進(jìn)一步開發(fā)。這些問(wèn)題的解決可為益生芽孢桿菌在魚類養(yǎng)殖上的科學(xué)利用提供更加詳盡的數(shù)據(jù)支持和參考。