孫偉 孫旻 李智

【摘要】 目的：探討與分析血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶（serum/glucocorticoid regulated kinases，SGK）1基因多態(tài)性與冠心病患者疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性及預(yù)后分析。方法：選擇2018年8月-2021年1月在大連市第三人民醫(yī)院診治的冠心病患者78例作為冠心病組，選擇同期健康體檢人群78例作為對(duì)照組，檢測(cè)兩組血清SGK1含量與SGK1基因表達(dá)水平，同時(shí)進(jìn)行血清SGK1基因多態(tài)性分析，調(diào)查冠心病患者的疾病嚴(yán)重程度、預(yù)后并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對(duì)表達(dá)水平均低于對(duì)照組（P<0.05）。冠心病組SGK1基因 rs2267018位點(diǎn)GG基因型頻率高于對(duì)照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對(duì)照組（P<0.05）。在冠心病組中，平均Gensini評(píng)分為（46.28±6.11）分。隨訪到2021年3月，出現(xiàn)主要心血管不良事件21例，發(fā)生率為26.9%。相關(guān)分析顯示，Gensini評(píng)分與SGK1基因rs2267018位點(diǎn)GG基因型、等位基因G、血清SGK1含量、SGK1基因表達(dá)水平均呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：冠心病患者多伴隨血清SGK1表達(dá)水平降低，多由于SGK1基因 rs2267018位點(diǎn)基因多態(tài)性造成，GG基因型、等位基因G是影響患者疾病嚴(yán)重程度的重要危險(xiǎn)因素。

【關(guān)鍵詞】 冠心病 血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶 基因多態(tài)性 疾病嚴(yán)重程度 預(yù)后 相關(guān)性

[Abstract] Objective： To investigate and analyze the correlation between serum/glucocorticoid regulated kinases （SGK）1 polymorphism and disease severity and prognosis in patients with coronary heart disease. Method： From August 2018 to January 2021， 78 cases of patients with coronary heart disease who were diagnosed and treated in the Third People’s Hospital of Dalian were selected as the coronary heart disease group. At the same time， 78 cases of healthy patients were selected as the control group， and the serum SGK1 content and SGK1 gene expression level of the two groups were detected. At the same time， the serum SGK1 gene polymorphism were analyzed， the disease severity and prognosis were investigated， and correlation was analyzed. Result： The serum SGK1 content and the relative expression level of SGK1 gene in the coronary heart disease group were lower than those in the control group （P<0.05）. The frequency of GG genotype at rs2267018 locus of SGK1 gene in coronary heart disease group was higher than that of control group （P<0.05）， and the frequency of allele G was higher than that of control group （P<0.05）. In the coronary heart disease group， the average Gensini score were （46.28±6.11） points. Followed-up until March 2021， there were 21 cases of major adverse cardiovascular events occurred， with the incidence rate of 26.9%. Correlation analysis showed that Gensini score were positively correlated with SGK1 gene rs2267018 locus GG genotype， allele G， serum SGK1 content and SGK1 gene expression level （P<0.05）. Conclusion： Patients with coronary heart disease are mostly accompanied by decreased serum SGK1 expression levels， which are mostly caused by the polymorphism of SGK1 gene rs2267018 locus， GG genotype and allele G are important risk factors that affect the severity of the disease and prognosis.

[Key words] Coronary heart disease Serum/glucocorticoid-regulated kinase Gene polymorphism Disease severity Prognosis Correlation

First-author’s address： The Third People’s Hospital of Dalian， Liaoning Province， Dalian 116033， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.03.040

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦且环N嚴(yán)重危害人類健康的復(fù)雜性疾病[1]。臨床上95%以上為原發(fā)性高血壓冠心病，但是具體的發(fā)生機(jī)制還不明確，其涉及的發(fā)病病因有炎癥損傷反應(yīng)假說(shuō)、脂肪浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、受體假說(shuō)、脂質(zhì)浸潤(rùn)假說(shuō)、血流動(dòng)力學(xué)假說(shuō)等[2]。高血壓是冠心病的風(fēng)險(xiǎn)因子，其本身又是多基因多因素疾病，有明顯的遺傳易感性，研究顯示，高血壓的遺傳易感性在40%左右，已經(jīng)鑒定出了一些血壓相關(guān)基因位點(diǎn)[3]。血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶（serum/glucocorticoid regulated kinases，SGK）家族基因具有調(diào)節(jié)腎臟鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)的功能，也是醛固酮的下游調(diào)節(jié)因子，在機(jī)體鈉含量平衡、血壓調(diào)節(jié)、血容量的補(bǔ)充過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[4-5]。SGK基因家族可參與到Th1和Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，并與多種免疫性疾病相關(guān)。人類SGK基因家族有SGK1、SGK3、SGK4三個(gè)亞型，其中SGK1可調(diào)節(jié)多種炎癥因子與干擾素的產(chǎn)生，能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力，進(jìn)而維持體內(nèi)的平衡[6]。并且其也高表達(dá)于巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，與其配體相結(jié)合，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖和活化[7]。SGK1基因存在多種單核苷酸變異位點(diǎn)，常見(jiàn)的研究主要集中rs2267018（A>G）基因多態(tài)性位點(diǎn)，基因序列中的A突變?yōu)镚，導(dǎo)致Taq酶切識(shí)別位點(diǎn)的消失，造成其SGK1基因表達(dá)水平下降[8]。本研究具體探討了血清SGK1基因多態(tài)性與冠心病患者疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性，以明確SGK1基因多態(tài)性的價(jià)值。現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年8月-2021年1月在大連市第三人民醫(yī)院診治的冠心病患者78例作為冠心病組，選擇同期健康體檢人群78例作為對(duì)照組。冠心病組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：因精神、語(yǔ)言等因素造成調(diào)查資料缺乏者;合并嚴(yán)重瓣膜性心臟病、惡性心律失常反復(fù)發(fā)作者;合并嚴(yán)重肝腎功能不全、造血功能障礙者;合并惡性腫瘤的患者。對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：身體各系統(tǒng)未發(fā)現(xiàn)重大疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：有心腦血管疾病家族史的患者;因精神、語(yǔ)言等因素造成調(diào)查資料缺乏者。本研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)與所有入選者的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血清SGK1基因多態(tài)性檢測(cè) 抽取兩組外周空腹靜脈血2～3 mL，不抗凝，放置4 ℃冰箱1 h，1 000 r/min離心10 min，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清SGK1含量。同時(shí)取血清學(xué)樣本，采用QIAGEN試劑盒提取血清中RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。從NCBI中GENBANK上獲取目的基因SGK1的堿基序列，以GAPDH為內(nèi)參，進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。檢測(cè)序列特征見(jiàn)表1。PCR循環(huán)：95 ℃ 5 s、55 ℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)，采用2-ΔΔCT公式進(jìn)行SGK1基因相對(duì)表達(dá)水平計(jì)算。SGK1基因rs2267018（A>G）多態(tài)性分型檢測(cè)由北京博奧生物公司完成，在Agena平臺(tái)上嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程完成。

1.2.2 調(diào)查資料 調(diào)查所有入選者的一般資料，包括人口學(xué)信息、血脂[總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density 1ipoproteincholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（1ow-density lipo proteincholesterol，LDL-C）]等。重點(diǎn)記錄與隨訪冠心病患者疾病的嚴(yán)重程度及預(yù)后情況。其中疾病嚴(yán)重程度以冠脈Gensini評(píng)分作為判定標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)每支冠脈血管病變狹窄程度進(jìn)行定量評(píng)定，總分為152分，分?jǐn)?shù)越高表示疾病嚴(yán)重。隨訪到2021年3月，以患者出現(xiàn)主要心血管不良事件作為標(biāo)準(zhǔn)，包括心源性死亡、心肌梗死、血栓形成、靶血管重建等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用EpiData軟件構(gòu)建信息數(shù)據(jù)庫(kù)，雙人平行錄入信息，使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，采用Pearson及Spearmen相關(guān)性分析。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料對(duì)比 兩組性別、年齡、體重指數(shù)、TC、TG、LDL-C、HDL-C對(duì)比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見(jiàn)表2。

2.2 兩組血清SGK1含量與SGK1基因表達(dá)水平對(duì)比 冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對(duì)表達(dá)水平均低于對(duì)照組（P<0.05），見(jiàn)表3。

2.3 兩組SGK1基因多態(tài)性對(duì)比 冠心病組SGK1基因rs2267018位點(diǎn)GG基因型頻率高于對(duì)照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對(duì)照組（P<0.05），見(jiàn)表4。

2.4 疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后 在冠心病組中，平均Gensini評(píng)分為（46.28±6.11）分。隨訪到2021年3月，出現(xiàn)主要心血管不良事件21例，發(fā)生率為26.9%。

2.5 相關(guān)性分析 在冠心病組中，Pearson相關(guān)性分析顯示Gensini評(píng)分與血清SGK1含量呈正相關(guān)（r=0.496，P=0.010），與SGK1基因表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.512，P=0.007）;Spearman相關(guān)分析顯示，Gensini評(píng)分與SGK1基因rs2267018位點(diǎn)GG基因型呈正相關(guān)（rs=0.583，P=0.000），與等位基因G呈正相關(guān)（rs=0.672，P=0.000）。

3 討論

目前心血管疾病成為全球?qū)е滤劳龅闹饕?，其?0%以上為冠心病，其特點(diǎn)是脂質(zhì)聚集和炎癥過(guò)程引起的管壁增厚、管腔狹窄等。目前冠心病的具體發(fā)病機(jī)制還不明確，但是固有免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)發(fā)揮重要作用，基因因素與環(huán)境因素可參與冠心病的發(fā)病[9]。近年來(lái)有關(guān)冠心病易感基因的研究較多，并發(fā)現(xiàn)了一系列冠心病相關(guān)的易感基因[10]。本研究顯示，冠心病組血清SGK1含量與SGK1基因相對(duì)表達(dá)水平均低于對(duì)照組（P<0.05）。從機(jī)制上分析，SGK1是多條信號(hào)通路中的關(guān)鍵激酶，可參與多種細(xì)胞過(guò)程，如增殖、轉(zhuǎn)錄、發(fā)育、分化等。而腦缺血再灌注損傷模型機(jī)體中SGK1呈現(xiàn)低表達(dá)狀況，且與神經(jīng)功能缺損和病理?yè)p傷存在相關(guān)性。SGK1也可表達(dá)于巨噬細(xì)胞，且巨噬細(xì)胞又是冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的主要參與者，為此其可能參與冠心病的發(fā)生[11]。腎臟鈉排泄障礙在高血壓形成發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，SGK1可以通過(guò)抑制泛素連接酶的表達(dá)，使腎集合管上皮細(xì)胞鈉通道表達(dá)上調(diào)，還能抑制腎臟一氧化氮的生成，進(jìn)而促進(jìn)鈉的重吸收和鉀的排泄，從而發(fā)揮降低血壓的作用。SGK1表達(dá)水平下降，可導(dǎo)致上述調(diào)控機(jī)制失衡，從而導(dǎo)致高血壓的發(fā)生[12]。

本研究顯示，冠心病組SGK1基因 rs2267018位點(diǎn)GG基因型頻率高于對(duì)照組（P<0.05），等位基因G頻率高于對(duì)照組（P<0.05），表明rs2267018（A>G）突變可影響SGK1的表達(dá)，從而影響高血壓的發(fā)生與發(fā)展。從機(jī)制上分析，SGK1表達(dá)下降可加重動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，使得機(jī)體內(nèi)醛固酮水平被抑制，從而可誘發(fā)相關(guān)心血管疾病的發(fā)生[13-14]。同時(shí)A>G造成SGK1基因Taq酶切識(shí)別位點(diǎn)的消失，使得腎臟鈉排泄障礙，從而可能參與鹽敏感性高血壓的形成[15-16]。

本研究相關(guān)性分析顯示，Gensini評(píng)分與SGK1基因 rs2267018位點(diǎn)GG基因型、等位基因G、血清SGK1含量、SGK1基因表達(dá)水平均呈正相關(guān)（P<0.05）。從機(jī)制上分析，SGK1是醛固酮的下游調(diào)節(jié)因子，該基因的表達(dá)可促進(jìn)心臟的正常代謝和功能，抑制其表達(dá)可導(dǎo)致長(zhǎng)期慢性炎癥反應(yīng)，引發(fā)全身多器官和系統(tǒng)的損害[17-18]，并且其高表達(dá)也促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程，導(dǎo)致冠心病的病情惡化，也不利于患者的預(yù)后改善[19-21]。本研究也存在一定的不足，納入分析的指標(biāo)較少，針對(duì)的也是某一區(qū)域的特定人群，將在后續(xù)研究中擴(kuò)大樣本分析。

總之，冠心病患者多伴隨血清SGK1表達(dá)水平降低，多由于SGK1基因 rs2267018位點(diǎn)基因多態(tài)性造成，GG基因型、等位基因G是影響患者疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。

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（收稿日期：2021-04-30） （本文編輯：占匯娟）