丙型肝炎病毒抗原抗體聯(lián)合檢測方法研究進(jìn)展

黃麗琴

摘要：丙型肝炎病毒（HCV）是一種屬于黃病毒科肝炎病毒屬的RNA病毒，當(dāng)人體感染丙型肝炎病毒后即可引起丙型肝炎，可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死、纖維化等病變，嚴(yán)重時(shí)甚至使肝硬化、肝細(xì)胞癌等發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加，對機(jī)體健康及生命安全造成較為嚴(yán)重的影響。丙型肝炎是一種全球性傳染性疾病，可通過性行為、血液、母嬰等途徑傳播，同時(shí)還有很大一部分患者感染及傳播途徑未明確，因此選擇合適的檢驗(yàn)途徑，及時(shí)檢測丙型肝炎病毒，積極預(yù)防及給予對癥措施對減少丙型肝炎感染及傳播具有重要意義。目前臨床主要采用抗原抗體檢測丙型肝炎病毒，主要包括抗-HCV檢測、HCV核心抗原檢測及HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測，在確診HCV感染、選擇治療方案及評價(jià)抗HCV治療效果方面具有重要價(jià)值。雖然目前丙型肝炎病毒感染率通過上述檢測方式已有效降低，但由于HCV感染后至抗HCV抗體產(chǎn)生之間還具有較長一段時(shí)間，因此仍有較高感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)。隨著檢驗(yàn)技術(shù)不斷進(jìn)步，臨床逐漸將抗原抗體聯(lián)合檢測應(yīng)用至丙型肝炎病毒檢驗(yàn)中，具有誤診、漏診率低、準(zhǔn)確率高的優(yōu)點(diǎn)。本文現(xiàn)針對丙型肝炎病毒抗原抗體聯(lián)合檢測方法研究進(jìn)展進(jìn)行分析，旨在為臨床丙型肝炎病毒提供良好的檢測方式，減少感染率。

關(guān)鍵詞：丙型肝炎病毒;抗-HCV檢測;抗原抗體聯(lián)合檢測;HCV核心抗原檢測

【中圖分類號】R512.6+3 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號】1673-9026（2022）06--01

丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）具有較高的傳染性，可通過血液、性行為及母嬰等途徑進(jìn)行傳播，且還可通過部分臨床尚未明確的途徑進(jìn)行傳播，對社會(huì)人民健康造成嚴(yán)重威脅，如何預(yù)防及減少HCV感染一直是臨床研究重難點(diǎn)之一[1]。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示[2]，全球HCV感染率約為3%，感染數(shù)量接近1.8億人，而我國HCV感染率約為3.2%，感染數(shù)量接近4100萬人。HCV感染后可引起丙型肝炎，造成肝臟慢性炎癥壞死、纖維化等病變，隨著病情不斷進(jìn)展，可發(fā)展為肝硬化、肝細(xì)胞癌等疾病，同時(shí)還可與乙型肝炎重疊感染，加重病情，目前臨床僅有20%的丙型肝炎患者經(jīng)過抗HCV治療后可痊愈，剩下的80%患者處于持續(xù)感染狀態(tài)[3]。隨著近幾年來HCV感染率不斷提高，丙型肝炎患病數(shù)量也不斷增加，每年約增加315萬人，對社會(huì)造成了嚴(yán)重影響，因此控制HCV感染、阻斷傳播途徑是丙型肝炎防控的重中之重，但臨床尚未研制出有效疫苗，早期診斷則成為了防止HCV傳播的有效手段。本文現(xiàn)針對丙型肝炎病毒抗原抗體聯(lián)合檢測方法研究進(jìn)展進(jìn)行分析，綜述內(nèi)容如下。

1.HCV的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及傳播途徑

1.1 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

HCV是一種單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科肝炎病毒屬，主要由非編碼區(qū)UTRs及開放閱讀框構(gòu)成，表面分布了膜蛋白，開放閱讀框內(nèi)編碼了10余種結(jié)構(gòu)及非結(jié)構(gòu)蛋白，非編碼區(qū)UTRs包括NS2、NS3、NS4及NS5，其中NS3蛋白是一種多功能蛋白，其氨基端具有蛋白酶活性，羥基端具有螺旋酶和三磷酸核昔酶活性，NS5基因上的蛋白為核糖核酸（Ribonucleic Acid，RNA）依賴的RNA聚合酶，是HCV復(fù)制必需的及臨床抗病毒治療的重要靶位[4-5]。

1.2 傳播途徑

HCV主要傳播途徑主要包括血液、性行為及母嬰。①血液傳播：是臨床公認(rèn)的HCV主要傳播途徑，臨床大多數(shù)HCV感染者均是通過輸血、血制品、破損的皮膚及粘膜等途徑感染HCV。②性行為傳播：通過該途徑感染的患者通常性伴侶為HCV感染者，若同時(shí)伴有其他性行為傳播疾病，可使HCV感染危險(xiǎn)性提高。③母嬰傳播：當(dāng)母親為HCV感染者時(shí)，在分娩時(shí)即有可能造成HCV傳播[6-7]。臨床研究發(fā)現(xiàn)[8]，抗-HCV陽性的母親將HCV傳播給新生兒的危險(xiǎn)性為2%，若母親在分娩時(shí)HCV-RNA陽性則危險(xiǎn)性可增加至4%～7%，若母嬰同時(shí)合并HIV感染，危險(xiǎn)性可高達(dá)20%。

2.檢測方法

2.1 抗-HCV檢測

抗-HCV檢測是臨床最早應(yīng)用于HCV感染檢測中的方式，通過檢測抗-HCV抗體來對感染情況進(jìn)行分析，主要采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）進(jìn)行檢測，具有操作簡單、成本較低、檢測結(jié)果較為準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)[9]。臨床根據(jù)檢測過程中所應(yīng)用的抗原類型及時(shí)間將抗-HCV檢測分成以下四代：①第一代：以病毒基因組非結(jié)構(gòu)區(qū)獲取IgG試劑盒所需抗原，應(yīng)用抗原為C-1003，是HCV非結(jié)構(gòu)基因與人超氧化物歧化酶基因嵌合后表達(dá)的融合蛋白，將其廣泛應(yīng)用于HCV檢測中后，其輸血感染率有效降低，但仍存在檢測時(shí)間長、假陽性率高及靈敏度較低，非特異性反應(yīng)較高的缺點(diǎn)[10]。②第二代：以第一代為基礎(chǔ)，在C-1003的基礎(chǔ)上增加了HCV核心區(qū)多肽C22-3、非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原C33C、抗-C33C及抗-C22-3，當(dāng)患者感染HCV后，感染早期體內(nèi)可出現(xiàn)抗-C22-3及C33C抗體，使檢測靈敏度及特異度有效提高，但仍無法排除重組融合蛋白帶來的少數(shù)假陽性及極少數(shù)的漏檢情況[11]。③第三代：第三代中加入了重組NSS多肽成分，使核心區(qū)抗原比例降低，非結(jié)構(gòu)區(qū)NSS區(qū)C33C比例提高，從而具有較高的檢測靈敏度及特異度[12]。④第四代：采用雙抗原夾心ELISA技術(shù)進(jìn)行血清抗-HCV檢測，相較于第三代，靈敏度及特異度得到了進(jìn)一步提升[13]。

2.2 HCV核心抗原檢測

HCV核心蛋白約含190aa，其氨基酸序列十分保守，在病毒增殖及發(fā)病機(jī)制中起到重要作用，是HCV感染的重要標(biāo)志，其檢測原理為將基因工程制備的核心抗原免疫小鼠后，以所獲得的純化抗HCV核心抗原單克隆抗體作為固相包被物，并用辣根過氧化物酶標(biāo)記含有與固相包被物不同抗原決定簇的抗HCV核心抗原單克隆抗體作為標(biāo)記物，將待檢血清與其發(fā)生抗原抗體反應(yīng)來檢測HCV核心抗原[14]。臨床研究表明[15]，相較于抗-HCV檢測，HCV核心抗原檢測檢出時(shí)間提早23～46d，具有檢測所需時(shí)間較短、操作簡單的優(yōu)點(diǎn)。

2.3 HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測

由于HCV感染后至抗體轉(zhuǎn)陽性之間具有一個(gè)較長的窗口期，在此階段內(nèi)采用上述檢測方法無法獲得準(zhǔn)確結(jié)果，因此仍有感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)。通過分析相關(guān)調(diào)查顯示[16]，一例抗-HCV陰性器官捐獻(xiàn)者所捐獻(xiàn)的器官對接受移植者造成了HCV急性感染。臨床學(xué)者對血站的抗-HCV陰性血漿調(diào)查發(fā)現(xiàn)[17]，其中2%的血漿為HCV-RNA陽性。HCV-RNA是HCV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)，HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測原理為采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，對樣本進(jìn)行裂解、純化、提取樣本中HCV-RNA作為擴(kuò)增的模板，采用RT-PCR技術(shù)對提取的HCV-RNA進(jìn)行擴(kuò)增，采用凝膠電泳和PCR-ELISA或TMA檢測技術(shù)來檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，因此HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測具有特異性強(qiáng)、靈敏度高及檢測快速的優(yōu)點(diǎn)，臨床主要將其分為定性HCV-RNA檢測及定量HCV-RNA檢測兩種，定性HCV-RNA檢測多見于急慢性丙型肝炎診斷，可通過采用單份樣本或多樣本集合的方式來降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)度，但對操作技術(shù)及設(shè)備具有較高要求，因此在臨床應(yīng)用范圍具有一定局限性;定量HCV-RNA檢測主要作為抗病毒治療效果的判斷指標(biāo)及HCV基因型的檢查方式，通過檢測HCV-RNA的量化來獲得診斷結(jié)果，相較于定性HCV-RNA檢測具有較高的準(zhǔn)確性。

2.4 抗原抗體聯(lián)合檢測

抗原抗體聯(lián)合檢測是隨著臨床檢驗(yàn)技術(shù)不斷提高逐漸被廣泛應(yīng)用的一種檢測方式，能夠有效提高HCV感染窗口期檢出率，控制HCV感染。HCV核心抗原的出現(xiàn)時(shí)早期HCV感染的標(biāo)志，而其幾乎與HCV-RNA同時(shí)出現(xiàn)，因此抗原抗體聯(lián)合檢測可有效彌補(bǔ)上述檢測方式的不足之處，在HCV感染窗口期獲得較為準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，從而使臨床HCV感染率有效下降。臨床學(xué)者采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光血清分析系統(tǒng)同時(shí)檢測HCV抗原及抗體[18]，結(jié)果顯示，在檢測HCV-RNA陽性、抗-HCV陰性方面準(zhǔn)確率可達(dá)89%;而檢測HCV-RNA及抗-HCV陽性的患者時(shí)，靈敏度可高達(dá)100%;針對抗-HCV陰性患者，檢測特異性高達(dá)99%。

3.小結(jié)

HCV感染可對全球人民機(jī)體健康及生命安全造成較為嚴(yán)重的影響，隨著國家提倡無償獻(xiàn)血，獻(xiàn)血人數(shù)的增加導(dǎo)致HCV感染率呈現(xiàn)不斷上升趨勢，由于感染后至抗體轉(zhuǎn)陽性之間具有一個(gè)較長的窗口期，因此大多數(shù)抗-HCV陰性的患者仍存在感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)，為有效降低HCV感染率，需在早期采取合適的檢測方式。目前臨床常見的幾種方式為抗-HCV檢測、HCV核心抗原檢測及HCV-RNA核酸擴(kuò)增檢測，雖具有較高的檢測效果，但在HCV感染窗口期無法獲得良好檢測意義，因此臨床逐漸將抗原抗體聯(lián)合檢測應(yīng)用于HCV感染檢測中，為臨床疾病診斷及療效分析提供了有力依據(jù)。

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