張廣林，徐 龍，高云艷，李玲霞，尚佑軍，張 勇，曹小安，*，趙興緒，*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蘭州獸醫(yī)研究所，甘肅 蘭州 730000)

布魯氏菌是寄生于細(xì)胞內(nèi)能感染人和動物的革蘭氏陰性小桿菌，由布魯氏菌引起的布魯氏菌病是一種嚴(yán)重危害人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展的人畜共患傳染病，尤其在發(fā)展中國家發(fā)生率較高。近年來，布魯氏菌病在我國大范圍內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢，家畜感染后主要引起的流產(chǎn)或不孕，人感染后出現(xiàn)波狀熱、關(guān)節(jié)腫脹、疼痛等。布魯氏菌在細(xì)胞中有較強的復(fù)制能力和特異性，它可以逃避宿主的先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，據(jù)報道，布魯氏菌入侵機體后產(chǎn)生的許多蛋白能夠引起機體的一系列免疫反應(yīng)，其中L7/L12蛋白是公認(rèn)的T細(xì)胞免疫的優(yōu)勢抗原，而且編碼L7/L12蛋白的基因在各種間相對保守。因此，加強對核糖體蛋白L7/12的基礎(chǔ)研究尤為重要。樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)是機體免疫系統(tǒng)中重要的抗原遞呈細(xì)胞，沒有分化成熟的DCs主要發(fā)揮獲取和處理加工抗原并將其遞呈到T細(xì)胞引發(fā)免疫應(yīng)答。成熟DCs(mature DCs，mDCs)高表達CD80、CD86、CD40等共刺激分子，主要發(fā)揮刺激活化T細(xì)胞并引發(fā)相應(yīng)的免疫反應(yīng)?；罨蟮腄Cs分泌白細(xì)胞介素12(interleukin-12，IL-12)和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等細(xì)胞因子在先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答中起重要作用。本試驗將重組的核糖體蛋白L7/L12作用于體外分離誘導(dǎo)的小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞，通過DCs表面標(biāo)志物、細(xì)胞因子的檢測來判斷是否促進DCs細(xì)胞的分化和成熟，探討該蛋白對小鼠骨髓來源DCs成熟、功能的影響以及能否增強免疫功能。

1 材料與方法

1.1 材料及試劑

pET30a載體，大腸埃希菌感受態(tài)DH5α、BL21(DE3)菌株，質(zhì)粒小提試劑盒，DNA純化試劑盒，限制性內(nèi)切酶HⅠ、Ⅰ，T4 DNA Ligase，過硫酸銨，抗生素，還原性谷胱甘肽等。

1.2 引物設(shè)計

以NCBI發(fā)布的布魯氏菌編碼L7/L12蛋白的基因序列為母板設(shè)計引物，將設(shè)計好的基因引物送至生工公司進行合成。引物序列為L7/L12-F，5′-ATGGCTGATCTCGCAAAGATCG-3′；L7/L12-R，5′-CTTGAGTTCAACCTTGGCGCC-3′。引物為凍干粉，使用滅菌的超純水溶解并稀釋至10 μmol·L，-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 擴增L7/L12目的基因

將布魯氏菌S2疫苗株置于100 ℃的水浴鍋中煮沸15 min滅活后提取布魯氏菌的全基因組，并以此為模板擴增編碼L7/L12蛋白的基因，PCR擴增結(jié)束后，經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳并回收L7/L12基因條帶。

1.4 表達載體的構(gòu)建及鑒定

用HⅠ和Ⅰ雙酶切L7/L12基因和pET-30a載體并用膠回收試劑盒回收酶切產(chǎn)物，用T4快連酶室溫連接L7/L12基因與pET-30a載體15 min。連接結(jié)束后經(jīng)熱激法轉(zhuǎn)入DH5α中，將感受態(tài)細(xì)胞置于搖床中復(fù)蘇40 min后涂在含有Kan抗性的LB平板上，倒置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。10～14 h后選取單個菌落加入含Kan抗性的LB液體培養(yǎng)基中過夜搖菌，并以菌液為模板進行PCR擴增驗證，PCR擴增陽性的菌液提取質(zhì)粒并在37 ℃條件下進行雙酶切鑒定，將鑒定正確的質(zhì)粒送至擎科公司測序鑒定。

1.5 重組蛋白的表達

經(jīng)測序結(jié)果與L7/L12序列比對后，將正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入BL21中培養(yǎng)10～14 h。次日選單個菌落加入含Kan抗性的LB液體培養(yǎng)基中搖菌6～8 h。然后分別吸取2 mL菌液轉(zhuǎn)接于200 mL含Kan抗性的液體LB中擴菌培養(yǎng)，直到菌液值達到0.4～0.8時，分別加0.25、0.5、1 mmol·L的IPTG，之后分別設(shè)置搖床工作的條件為16 ℃ 12 h、28 ℃ 12 h、37 ℃ 5 h。待誘導(dǎo)結(jié)束后收集菌液，在4 ℃、9 000×的條件下離心25 min，用0.01 mol·L的PBS清洗管底沉淀，重復(fù)此操作以完全清洗掉菌體上所帶的培養(yǎng)基。用Lysis equilibration buffer(LE Buffer)懸起菌體后超聲破碎，設(shè)置破碎儀工作2 s、暫停5 s，超聲至菌液清亮、透明為宜，約需要1.5 h。破碎結(jié)束后以上述同等條件離心，分別用40 μL上清與沉淀混勻在5×SDS-PAGE蛋白緩沖液中并煮沸10 min，上樣10 μL至 SDS-PAGE蛋白凝膠，設(shè)置電泳儀的工作電壓為120 V，約工作90 min。電泳結(jié)束后用考馬斯亮藍染色液對蛋白膠室溫染色2～4 h，再用套裝脫色液脫色7～8 h，分析重組蛋白質(zhì)L7/12的表達水平。

1.6 重組蛋白的純化、濃縮

用LE Buffer平衡His-Tag Ni柱3～4次，將各個誘導(dǎo)條件下的可溶性重組蛋白加入Ni柱，重復(fù)掛柱3次以確保可溶性蛋白與Ni柱充分結(jié)合。分別用LE Buffer、50、70、85、100、160、250、300 mmol·L咪唑進行洗脫。LE Buffer、50、70、85、100 mmol·L咪唑清洗4個柱體積并收集最后流出的2 mL液體，160、250、300 mmol·L咪唑清洗并回收1個柱體積的清洗液，平衡、掛柱和清洗均采取每分鐘約20滴的流速。分別取流穿液、LE Buffer和各個濃度的咪唑清洗液，用1.5節(jié)的條件進行電泳分析重組蛋白的純化條件和純化后的純度。

將純化后的重組蛋白轉(zhuǎn)入經(jīng)EDTA-Na和EDTA煮沸處理過的透析袋中，將透析袋放置于0.01 mmol·L的PBS溶液中進行透析，PBS的體積約是重組蛋白體積的100倍，每隔12 h換1次透析液，透析2～3 d。透析完成后將其置于PEG8000中進行濃縮，使透析袋表面完全被PEG8000所包裹已有效地吸出重組蛋白中的水分。

1.7 布魯氏菌核L7/12重組蛋白的 Western-blot分析

取濃縮后的重組蛋白采用1.5節(jié)的處理方法和電泳條件煮沸處理并進行電泳，電泳結(jié)束后用半干轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)膜，在電壓為15 V的條件下約需要40 min，結(jié)束后將PVDF膜置于1×case封閉液中過夜封閉，次日棄封閉液用TBST清洗3～4次，每次清洗約15 min，用抗His標(biāo)簽的辣根過氧化物酶抗體室溫孵育2 h。孵育結(jié)束后用TBST清洗3～4次，洗掉未完全反應(yīng)的抗體，之后用ECL顯色液室溫孵育1 min后顯色曝光。

1.8 小鼠髓源樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)及刺激

在BALB/c雌性小鼠的后肢股中分取髓源樹突狀細(xì)胞的前體，用細(xì)胞計數(shù)器計量細(xì)胞數(shù)在10個以上鋪板。在含有青鏈霉素抗性的1640培養(yǎng)基中加入集落刺激因子rmGM-CSF、rmIL-4和胎牛血清配制成完全培養(yǎng)基，將骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)為未成熟DCs。第6天用槍輕輕吹打細(xì)胞板底部，清洗半貼壁的細(xì)胞將其離心濃縮后轉(zhuǎn)移至新的6孔板，取2 mL用PE-CD11C分子抗體檢測DCs細(xì)胞的活性。培養(yǎng)至第7天后用LPS、L7/L12刺激DCs細(xì)胞，調(diào)整L7/L12蛋白終濃度為100 μg·mL和LPS終濃度為100 ng·mL。未處理的DCs為陰性對照組，用LPS刺激作為陽性對照，刺激結(jié)束后收取細(xì)胞樣品和細(xì)胞上清，分別用于后期實驗。用含有5%胎牛血清的PBS懸浮細(xì)胞沉淀，經(jīng)抗體染色后用流式細(xì)胞儀檢測DCs表面分子，實驗分兩組：第一組PE-CD11C、APC-CD40、FITC-MHC-Ⅱ三染；第二組PE-CD11C、APC-CD80、FITC-CD86三染，同時設(shè)置空白對照和同型對照，抗體4 ℃避光孵育0.5 h，孵育結(jié)束后用PBS洗掉未完全反應(yīng)殘留的抗體，用 FACSC alibur流式細(xì)胞儀進行檢測，利用流式結(jié)果來分析DCs表面分子的相對表達量。

1.9 炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子的檢測

用Trizol法提取各組細(xì)胞的總RNA，測定濃度后用Qiagen Omniscript RT Kit反轉(zhuǎn)錄為 cDNA。以反轉(zhuǎn)錄所得的cDNA為模板，依照QuantiNovaSYBRGreen PCR Kit說明書配各體系和設(shè)置擴增條件，利用Ct值計算各個炎癥因子的相對表達量，并進行差異性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 L7/L12表達載體的構(gòu)建

PCR擴增獲得編碼L7/L12蛋白的DNA片段，約為375 bp共編碼125個氨基酸，大小與預(yù)期相符(圖1)。將該片段與pET30a載體酶切、連接后轉(zhuǎn)入克隆載體DH5α感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)12 h后挑取單克隆進行搖菌，12 h后進行菌液PCR驗證 (圖2)。用PCR驗證為陽性的菌液提質(zhì)粒并進行雙酶切 (圖3)，將酶切鑒定合適的質(zhì)粒送至西安擎科公司進行測序鑒定。最后將陽性克隆轉(zhuǎn)入表達載體大腸埃希菌 BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞。

M，標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量；1～5，PCR擴增樣品。M,DNA Marker;1-5,Product of PCR amplification.圖1 L7/L12基因表達片段PCR擴增的電泳Fig.1 Electrophoresis of expression fragment of L7/L12 gene by PCR amplification

M，標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量；1～3，單克隆菌液PCR擴增；4，陰性對照。M，DNA Marker;1-3，PCR amplification of monoclonal bacteria solution;4，Negative control.圖2 克隆載體菌液PCR鑒定Fig.2 Identification of clonal vector bacteria by PCR electrophoresis

M，標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量；1，雙酶切重組pET30a-L7/L12質(zhì)粒。M，DNA Marker;1，Recombinant PET30A-L7/L12 plasmid double enzyme digestion.圖3 重組pET30a-L7/L12質(zhì)粒雙酶切鑒定Fig.3 Identification of recombinant plasmid pET30a-L7/L12 by double enzyme digestion

2.2 重組蛋白L7/L12的最佳誘導(dǎo)條件的篩選

分別取破碎前的菌體和破碎后的沉淀與上清采用1.5節(jié)中的條件進行電泳，脫色結(jié)束后可見重組蛋白存在于上清中，大小約為18 ku(圖4)。分別在16、28、37 ℃的條件下用 0.25、0.5、1 mmol·LIPTG進行最佳表達條件的篩選，確定在16 ℃過夜誘導(dǎo)時，L7/L12蛋白表達量最大(圖5)。

M，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量；1，破碎前菌體；2，破碎后沉淀；3，破碎后上清。M，Standard protein marker;1，Whole bacterial protein;2，Lytic precipitation;3，Lytic supernatant.圖4 重組蛋白L7/L12誘導(dǎo)表達結(jié)果電泳Fig.4 Induced expression of recombinant protein L7/L12

M，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量；1～3，16 ℃條件下IPTG濃度分別為0.25、0.5、1 mmol·L-1；4～6，28 ℃條件下IPTG濃度分別為0.25、0.5、1 mmol·L-1；7～9，37 ℃條件下IPTG 濃度分別為0.25、0.5、1 mmol·L-1。M，Standard protein marker;1-3，At 16 ℃，0.25，0.5，1 mmol·L-1 IPTG respectively;4-6，At 28 ℃，0.25，0.5，1 mmol·L-1 IPTG respectively;7-9，At 37 ℃，0.25，0.5，1 mmol·L-1 IPTG respectively.圖5 L7/L12蛋白最佳誘導(dǎo)表達條件篩選電泳Fig.5 Selection of optimal inducible expression conditions of L7/L12 protein

2.3 重組蛋白的純化

SDS-PAGE電泳檢測流穿液和各個濃度梯度的咪唑洗脫液，結(jié)果顯示，流穿液中不含目的蛋白，說明目的蛋白與Ni柱完全結(jié)合，100 mmol·L咪唑LE Buffer中含有較多的雜蛋白，但160 mmol·L咪唑LE Buffer中幾乎沒有雜蛋白的存在，篩選出了100 mmol·L咪唑LE Buffer可以洗凈雜蛋白。最后用300 mmol·L的咪唑LE Buffer洗脫目的蛋白(圖6)。將純化后的蛋白轉(zhuǎn)入透析袋中用0.01 mol·L的PBS透析3 d，用PEG8000濃縮重組蛋白后，經(jīng)BCA試劑盒測定其濃度為1.196 5 mg·L。

M，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量；1，L7/L12流穿液；2，LE Buffer 清洗液；3，含50 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；4，含70 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；5，含85 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；6，含100 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；7，含160 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；8，含250 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果；9，含300 mmol·L-1咪唑LE Buffer清洗結(jié)果。M，Standard protein marker;1，L7/L12 flow-through solution;2，LE Buffer cleaning solution;3，LE Buffer containing 50 mmol·L-1 imidazole cleaning results;4，LE Buffer containing 70 mmol·L-1 imidazole cleaning results;5，LE Buffer 85 mmol·L-1 imidazole cleaning results;6，LE Buffer containing 100 mmol·L-1 imidazole cleaning results;7，LE Buffer containing 160 mmol·L-1 imidazoler cleaning results;8，LE Buffe containing 250 mmol·L-1 imidazole cleaning results;9，LE Buffer containing 300 mmol·L-1 imidazole cleaning results.圖6 L7/L12蛋白純化電泳檢測Fig.6 L7/L12 protein purification by electrophoresis

2.4 重組蛋白免疫原性

重組蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上進行免疫印跡反應(yīng)檢測，其結(jié)果顯示約18 ku處存在特異性條帶(圖7)。

M，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量；1～2，L7/L12 蛋白。M，Standard protein marker;1-2，Protein L7/L12.圖7 基于Western blot的L7/L12蛋白鑒定Fig.7 Identification of L7/L12 protein by Western blot

2.5 BM-DCs體外誘導(dǎo)培養(yǎng)及純度檢測

用倒置顯微鏡觀察六孔板中培養(yǎng)的DCs形態(tài)，剛分離的DCs細(xì)胞呈點狀漂浮在培養(yǎng)基內(nèi)，培養(yǎng)24 h后，細(xì)胞體積較小呈圓形，有部分貼壁，第2天可觀察到有少量聚集在一起，第5 天細(xì)胞體積明顯變大群落較多，多數(shù)細(xì)胞呈不規(guī)則圓形且邊緣分化出樹根樣突起，培養(yǎng)至第7天，大部分DCs細(xì)胞脫離群落，懸浮在培養(yǎng)基中(圖8)。

A，誘導(dǎo)培養(yǎng)第2天(×200)；B，誘導(dǎo)培養(yǎng)第3天(×200)；C，誘導(dǎo)培養(yǎng)第5天(×200)；D，誘導(dǎo)培養(yǎng)第5天(×400)；E，誘導(dǎo)培養(yǎng)第7天(×200)；F，誘導(dǎo)培養(yǎng)第7天(×400)。A，Induction culturing day 2 (×200);B，Induction culturing day 3 (×200);C，Induction culturing day 5 (×200);D，Induction culturing day 5 (×400);E，Induction culturing day 7 (×200);F，Induction culturing day 7 (×400).圖8 小鼠髓源樹突狀細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)Fig.8 Mouse myeloid dendritic cells cultured in vitro

第6天將懸浮于培養(yǎng)基中的細(xì)胞濃縮至新的六孔板中，并取2 mL用PE-CD11C抗體染色后用流式細(xì)胞儀檢測DCs活性，結(jié)果顯示：濃縮后的DCs活性可達到50%以上(圖9)。

圖9 DCs活性檢測Fig.9 Activity detection of dendritic cells

2.6 布魯氏菌核蛋白L7/L12對DCs成熟及細(xì)胞因子表達

經(jīng)rmGM-CSF、rmIL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)至第7天，分別用終濃度為100 ng·mL的LPS和100 μg·mL的L7/L12蛋白刺激 BM-DCs 24 h后，用流式分析DCs的表面分子(圖10)。與未刺激的陰性對照組(DC組)相比，陽性對照組(LPS組)的CD80、CD40、CD86等分子表達均相對增加，其中CD40和MHC-Ⅱ分子的表達增加比較明顯，經(jīng)L7/L12蛋白刺激的實驗組的CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ分子的表達量也相對增加，但是CD86和CD80的表達量增加不明顯。實驗組與陽性對照組相比較也均增加，其中CD40和MHC-Ⅱ分子均高表達(圖11)。

圖10 處理前后DCs表面共刺激分子的變化Fig.10 Changes of co-stimulating molecules on DCs surface

DC，未處理的DCs細(xì)胞(空白對照)；LPS，脂多糖(陽性對照)；L7/L12，L7/L12重組蛋白(實驗組)；***，P<0.01。下同。DC，Untreated DCs cells;LPS，Lipopolysaccharide(positive control);L7/L12，L7/L12 recombinant protein (experimental group);***，P<0.01.The same as below.圖11 DC細(xì)胞表面共刺激分子的表達差異Fig.11 Difference in expression of costimulatory molecules on the surface of DC cells

2.7 布魯氏菌核蛋白L7/L12對 DCs炎性因子分泌的影響

利用qPCR擴增的Ct值計算出實驗組和對照組的相對表達量，利用SPASS5.0進行差異性分析，結(jié)果顯示，qPCR檢測DCs炎性細(xì)胞因子的mRNA水平，與空白對照組(DC組)相比較，陽性對照(LPS組)和實驗組(L7/L12蛋白組)的IL-1β、IL-12、TNF等分子極顯著升高(<0.01)，其中IL-12的mRNA的表達量在陽性對照組和實驗組之間沒有明顯的差別，實驗組中TNF的mRNA的表達量明顯高于陽性對照組，但是IL-1β的mRNA的表達量卻與此相反，LPS組的表達量高于L7/L12蛋白組(圖12)。

IL-12，白介素12；TNF，腫瘤壞死因子；IL-1β，白介素1β。IL-12，Interleukin12;TNF，Tumor necrosis factor;IL-1β，Interleukin 1β..圖12 L7/L12蛋白和LPS處理后DCs炎性因子的表達Fig.12 Changes of expression of inflammatory factors in DCs treated with L7/L12 protein and LPS

3 討論

布魯氏菌的L7/12核蛋白屬于該菌的優(yōu)勢抗原，能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。Oliveira等證明重組形式的 L7/L12 蛋白可以誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化，刺激Th1淋巴輔助細(xì)胞釋放IFN-γ，并證明用L7/L12 蛋白制作的疫苗對牛布魯氏菌感染起保護作用。Kurar等證實經(jīng)L7/L12核酸疫苗免疫的小鼠對豬布魯氏菌的抵抗力有明顯的提高。最近還證實L7/L12核糖體蛋白能引發(fā)機體的遲緩型變態(tài)反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞是初始免疫應(yīng)答抗原提呈能力最強的細(xì)胞，發(fā)揮加工處理抗原功能的樹突狀細(xì)胞是沒有分化成熟的DCs，外來抗原經(jīng)APC攝入、蛋白酶溶解處理后部分抗原肽片段與MHC Ⅱ分子結(jié)合，通過淋巴、血液循環(huán)遷移至淋巴器官激發(fā)T細(xì)胞，可激發(fā)相應(yīng)CD4T細(xì)胞的增殖。受到抗原刺激的樹突狀細(xì)胞會分化、成熟，相應(yīng)地MHC分子、表面共刺激因子、黏附分子的表達顯著升高，成熟的DCs細(xì)胞為效應(yīng)性T細(xì)胞的生物學(xué)信號，但攝取加工抗原的能力顯著降低。CD86和CD80是為T細(xì)胞的增殖分化提供必要的共刺激信號，可活化并促進T淋巴細(xì)胞的增殖分化，增強機體的免疫效應(yīng)，在特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。與陰性對照組相比，經(jīng)LPS和L7/L12刺激后DCs表面共刺激分子CD80、CD86、CD40上調(diào)，說明該蛋白和LPS一樣有著刺激DCs細(xì)胞活化、成熟的作用，還表明在L7/L12蛋白的作用下DCs對T淋巴細(xì)胞的活化充當(dāng)著第二信號分子。而MHC Ⅱ類分子顯著升高，表明該蛋白促進DCs細(xì)胞表達MHC II分子來結(jié)合外源性抗原肽，將抗原遞呈給T細(xì)胞，從而發(fā)生細(xì)胞免疫應(yīng)答。成熟的 DCs 可分泌 IL-12、IL-10等細(xì)胞因子，細(xì)胞因子的種類決定后續(xù)免疫應(yīng)答的類型。qRT-PCR結(jié)果顯示，炎性因子IL-12顯著升高，表明樹突狀細(xì)胞經(jīng)L7/L12蛋白刺激后分泌的IL-12誘發(fā)TH1輔助細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)，與Oliveira等的結(jié)果相一致。炎性因子TNF-β、IL-1β高表達，表明被刺激活化的DCs能將抗原提呈給T淋巴細(xì)胞，使T淋巴細(xì)胞活化并分泌TNF-β，進而刺激產(chǎn)生IL-1β，同時刺激B淋巴細(xì)胞增值分化，促進抗體的生成，從而發(fā)揮炎癥反應(yīng)。

綜上所述，本實驗表達的L7/L12蛋白能夠刺激樹突狀細(xì)胞分化、成熟，促進DCs遞呈抗原至初始T淋巴細(xì)胞，刺激T淋巴細(xì)胞活化分泌TNF-β、IL-1β并且促使T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，證明L7/L12蛋白在炎癥反應(yīng)過程中發(fā)揮著重要作用。