M1型巨噬細(xì)胞水平與冠心病疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性分析

刁中極 雷銳 殷實(shí) 劉鴻玲 劉擎

【摘要】 目的：探討M1型巨噬細(xì)胞水平與冠心病疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性。方法：選取佳木斯市中心醫(yī)院2018年12月-2019年12月收治的65例冠心病患者作為研究對象，依照患者的病情嚴(yán)重程度，將其分為不穩(wěn)定型心絞痛組（n=21）、急性心肌梗死組（n=18）和穩(wěn)定型心絞痛組（n=26），另取30例健康者作為對照組，對比四組M1型巨噬細(xì)胞比例、可溶性超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）以及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的表達(dá)水平，并分析各項指標(biāo)與冠心病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。對所有患者隨訪1年，將發(fā)生心血管不良事件的21例患者設(shè)為預(yù)后不良組，將無心血管不良事件的44例患者設(shè)為預(yù)后良好組，對比兩組患者臨床各指標(biāo)，并分析M1型巨噬細(xì)胞水平對冠心病的預(yù)后預(yù)測價值。結(jié)果：四組M1型巨噬細(xì)胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達(dá)水平對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，M1型巨噬細(xì)胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）;預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者性別、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、TGF-β1和TNF-α表達(dá)水平對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細(xì)胞比例以及hs-CRP水平對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%為冠心病的預(yù)后不良獨(dú)立因素（P<0.05）。結(jié)論：M1型巨噬細(xì)胞與冠心病的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性，且年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細(xì)胞比例以及hs-CRP水平均為冠心病預(yù)后不良的相關(guān)因素，M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%對冠心病的預(yù)后具有獨(dú)立預(yù)測價值，為冠心病不良心血管事件發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測因子。

【關(guān)鍵詞】 M1型巨噬細(xì)胞 冠心病 不穩(wěn)定型心絞痛 心肌梗死 疾病嚴(yán)重程度

Correlation between M1 Macrophage Level and Severity and Prognosis of Coronary Heart Disease/DIAO Zhongji， LEI Rui， YIN Shi， LIU Hongling， LIU Qing. //Medical Innovation of China， 2022， 19（04）： -165

[Abstract] Objective： To investigate the correlation between M1 macrophage level and severity and prognosis of coronary heart disease. Method： A total of 65 patients with coronary heart disease in Jiamusi Central Hospital from December 2018 to December 2019 were selected as the research objects. According to the severity of the disease， they were divided into unstable angina pectoris group （n=21）， acute myocardial infarction group （n=18）and stable angina pectoris group （n=26）. Another 30 healthy people were selected as the control group. The proportion of M1 macrophages， hs-CRP， TGF-β1 and TNF-α in the four groups were compared. The correlation between each index and the severity of coronary heart disease was analyzed. All patients were followed up for 1 year， 21 patients with cardiovascular adverse events were selected as poor prognosis group， and 44 patients without cardiovascular adverse events were selected as good prognosis group. The clinical indexes of the two groups were compared， and the predictive value of M1 macrophage level for coronary heart disease was analyzed. Result： There were significant differences in the proportion of M1 macrophages， hs-CRP ， TGF-β1 and TNF-α in the four groups （P<0.05）. Spearman correlation analysis showed that M1 macrophages， hs-CRP， TNF-α were positively correlated with the severity of coronary heart disease （P<0.05）， TGF-β1 was negatively correlated with the severity of coronary heart disease （P<0.05）; there were no significant differences in gender， body mass index （BMI）， TGF-β1 and TNF-α in patients between the good prognosis group and the poor prognosis group （P>0.05）. There were significant differences in age， smoking， type 2 diabetes mellitus， the proportion of M1 macrophages and hs-CRP level between the good prognosis group and the poor prognosis group （P<0.05）. The proportion of M1 macrophages ≥63.04% was an independent factor for poor prognosis of coronary heart disease （P<0.05）. Conclusion： M1 macrophages are related to the severity of coronary heart disease. Age， smoking， type 2 diabetes， the proportion of M1 macrophages and the level of hs-CRP are all related factors for the poor prognosis of coronary heart disease. The proportion of M1 macrophages ≥63.04% has independent predictive value for the prognosis of coronary heart disease and is an independent predictor of adverse cardiovascular events of coronary heart disease.

[Key words] M1 macrophage Coronary heart disease Unstable angina pectoris Miocardial infarction Disease severity

First-author’s address： Jiamusi Central Hospital， Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.04.038

冠狀動脈粥樣硬化心臟病，簡稱冠心病，是一種常見的缺血性心臟病，主要由于供血不足或冠狀動脈狹窄所導(dǎo)致的器質(zhì)性病變或心肌功能障礙?；颊吲R床上多表現(xiàn)為胸痛、胸悶等，嚴(yán)重者會出現(xiàn)心肌梗死。隨著社會老齡化進(jìn)程加深，每年冠心病死亡人數(shù)高達(dá)100萬左右[1-2]。當(dāng)前擇期經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）是治療冠心病的主要手段，但術(shù)后患者可能會出現(xiàn)惡性心律失常、血栓形成等不良事件，導(dǎo)致患者再次入院。據(jù)報道顯示，盡管冠心病治療和防治手段不斷改進(jìn)，但是冠心病等心血管疾病依然是造成死亡的主要原因[3-4]。巨噬細(xì)胞分為M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細(xì)胞在心肌梗死恢復(fù)期具有重要的作用，而且與患者的疾病嚴(yán)重程度具有明顯關(guān)系[5]。但是當(dāng)前針對M1型巨噬細(xì)胞與冠心病嚴(yán)重程度及預(yù)后相關(guān)性的研究尚無明確定論。有研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞M1與多種疾病，如病毒、腫瘤導(dǎo)致的腎病、肥胖和腦損傷具有一定關(guān)系[6-7]。因此，為了提升冠心病的治療效果，降低不良心血管事件發(fā)生率與死亡率，本研究選取佳木斯市中心醫(yī)院2018年12月-2019年12月共收治的65例冠心病患者作為研究對象，探討M1型巨噬細(xì)胞水平與冠心病疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取佳木斯市中心醫(yī)院2018年

12月-2019年12月收治的65例冠心病患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者通過冠狀動脈造影、心電圖等檢查符合不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗死或者穩(wěn)定型心絞痛的診斷標(biāo)準(zhǔn);符合經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)治療指征。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，精神病患者;意識模糊、語言表達(dá)不清者;無法進(jìn)行交流者。依照患者的病情嚴(yán)重程度，將其分為不穩(wěn)定型心絞痛組（n=21）、急性心肌梗死組（n=18）和穩(wěn)定型心絞痛組（n=26）。另取佳木斯市中心醫(yī)院2018年12月-2019年12月30例健康者作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：與冠心病患者在性別、年齡、民族、生活地域等基本匹配的健康者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并精神病者;心理障礙、情緒障礙者;不配合、依從性差者。所有患者對本研究知情并簽署同意書;本研究經(jīng)本院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有試驗對象在入院之后分別記錄性別、年齡、體重、身高、血壓、疾病史、吸煙史等?；颊呷朐汉蟮?天清晨空腹采取靜脈血，對照組患者在門診采取空腹靜脈血，均采3管肘靜脈血液標(biāo)本，其中2管分離血清處理，1管EDTA抗凝，用于流式細(xì)胞分析。應(yīng)用流式細(xì)胞檢測法檢測M1型巨噬細(xì)胞比例，在FC500流式細(xì)胞儀內(nèi)加入50 μL全血，隨后加入抗人CD68-FITC、抗人CD86-APC和抗人CD163-PE各5 μL，充分混合后，在暗處放置20 min，加入1 mL溶血劑，搖勻后在暗處放置10 min，經(jīng)過離心處理后洗滌3次，加入2% 400 μL多聚甲醛，采用CD68/SSC設(shè)門的方法，確定巨噬細(xì)胞群體，進(jìn)一步進(jìn)行巨噬細(xì)胞亞群分析[8]。血清TGF-β1和TNF-α應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法，具體步驟按照TGF-β1和TNF-α試劑盒說明進(jìn)行。分離另一管血清，立即使用貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分析儀分析患者血清hs-CRP表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 本研究數(shù)據(jù)采取統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 23.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[例（%）]表示，進(jìn)行字2檢驗;計量資料符合正態(tài)分布則用（x±s）表示，多組間比較采用F檢驗;采用Spearman相關(guān)性分析方法分析M1型巨噬細(xì)胞與冠心病嚴(yán)重程度的相關(guān)性;患者預(yù)后的影響因素采用logistic回歸分析;以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組一般資料比較 四組一般資料對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見表1。

2.2 四組M1型巨噬細(xì)胞比例、hs-CRP、TGF-β1及TNF-α表達(dá)水平對比 四組患者M(jìn)1型巨噬細(xì)胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達(dá)水平對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 M1型巨噬細(xì)胞、hs-CRP、TGF-β1及TNF-α表達(dá)與冠心病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示：M1型巨噬細(xì)胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見表3。

2.4 預(yù)后良好組與預(yù)后不良組各指標(biāo)水平對比 對所有患者隨訪1年，將發(fā)生心血管不良事件的21例患者設(shè)為預(yù)后不良組，將無心血管不良事件的44例患者設(shè)為預(yù)后良好組。預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者性別、體重指數(shù)（BMI）、TGF-β1和TNF-α表達(dá)水平對比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細(xì)胞比例以及hs-CRP水平對比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表4。

2.5 不同因素對冠心病的預(yù)后預(yù)測價值 對單因素分析具有統(tǒng)計學(xué)差異指標(biāo)進(jìn)行賦值：年齡≥62歲=1，<62歲=0;吸煙=1，不吸煙=0;合并2型糖尿病=1，無2型糖尿病=0;M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%=1，<63.04%=0;hs-CRP≥5.23 mg/dL=1，<5.23 mg/dL=0。M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%為冠心病的預(yù)后不良獨(dú)立因素（P<0.05），見表5。

3 討論

冠心病是以冠狀動脈管腔狹窄和冠狀動脈粥樣硬化為基本特征的嚴(yán)重心臟病類型，而準(zhǔn)確評估病情與預(yù)后情況，對指導(dǎo)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病臨床治療具有重要價值[9]。研究發(fā)現(xiàn)，冠心病患者出現(xiàn)血栓形成、斑塊破裂或侵蝕以及急性閉塞或狹窄是冠心病致殘致死的主要原因。而免疫和炎癥影響冠脈斑塊的形成成為當(dāng)前廣泛接受的理論[10-11]。積累的證據(jù)強(qiáng)調(diào)不同炎癥和免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞在動脈粥樣硬化病變的病理生理學(xué)中的關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞是機(jī)體所有組織中第一道防線的重要組成部分[12]。除了免疫學(xué)作用，巨噬細(xì)胞在維持組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)方面也有著重要的意義。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，在心臟中發(fā)現(xiàn)了兩種類型的巨噬細(xì)胞，其中一種是入心臟后由循環(huán)單核細(xì)胞分化來的巨噬細(xì)胞，另外一種是來自胎兒肝臟中卵黃囊駐留的巨噬細(xì)胞，依照基因表達(dá)譜和表面標(biāo)志，通常將巨噬細(xì)胞分為替代活化的M2型和經(jīng)典活化的M1型[13-15]。因此，本研究主要針對M1型巨噬細(xì)胞水平與冠心病疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后相關(guān)性展開分析，希望能夠為冠心病病情與預(yù)后的評估提供參考價值。

本研究結(jié)果表明，四組M1型巨噬細(xì)胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達(dá)水平對比差異顯著（P<0.05），這是因為，促炎M1型巨噬細(xì)胞主要分泌機(jī)制金屬蛋白酶、生長因子、趨化因子和細(xì)胞因子，而且M1型巨噬細(xì)胞的長期存在會導(dǎo)致腦梗死面積擴(kuò)大，阻礙瘢痕形成與炎癥消退。有研究發(fā)現(xiàn)，M1型巨噬細(xì)胞水平與TNF-α呈明顯正相關(guān)[16]。而M1巨噬細(xì)胞表面有CD86、CD11c、膠原樣結(jié)構(gòu)巨噬細(xì)胞受體等特異性受體，有著低表達(dá)IL-10，高表達(dá)IL-23和IL-12的表型特征，能夠產(chǎn)生活性氧，并誘導(dǎo)一氧化氮合酶和炎癥因子，如腫瘤壞死因子和IL-6等，與本研究結(jié)果相符;本研究Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示：M1型巨噬細(xì)胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），有研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、hs-CRP等炎癥因子與冠心病的發(fā)展具有明顯相關(guān)性，而且表達(dá)水平高于健康者[17]。這是因為炎癥因子誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷，導(dǎo)致局部心肌氧化和心肌結(jié)構(gòu)出現(xiàn)病理改變，誘導(dǎo)心律失常。有研究發(fā)現(xiàn)，2型巨噬細(xì)胞的經(jīng)典蛋白各自發(fā)揮作用，并從不同的途徑參與炎癥消退和心肌損傷的修復(fù)，對心肌梗死后心臟功能的恢復(fù)有重要作用[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)M1型巨噬細(xì)胞和M2型正相反，比例升高會導(dǎo)致患者體內(nèi)炎癥水平升高，與以往研究具有一定差異;預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者性別、BMI、TGF-β1和TNF-α表達(dá)水平對比無明顯差異（P>0.05），預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細(xì)胞比例以及hs-CRP水平對比差異顯著（P<0.05），提示，冠心病患者心血管事件的發(fā)生可能與患者的年齡、吸煙史、合并2型糖尿病以及M1型巨噬細(xì)胞和hs-CRP水平升高具有一定關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，C反應(yīng)蛋白等炎癥因子參與動脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)過程，而hs-CRP對冠心病的預(yù)測價值高于CRP[20]。還有研究發(fā)現(xiàn)，吸煙和2型糖尿病均是冠心病預(yù)后不良的相關(guān)因素[21]，與本研究結(jié)果相似;本研究結(jié)果顯示，M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%為冠心病的預(yù)后不良獨(dú)立因素（P<0.05），提示，M1型巨噬細(xì)胞可以作為冠心病預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，M1型細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子TNF-α具有促炎作用[22]。因此，M1型細(xì)胞比例越高可能表示冠心病患者不良心血管事件發(fā)生率越高。

綜上所述，M1型巨噬細(xì)胞與冠心病的嚴(yán)重程度具有相關(guān)性，且年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細(xì)胞比例以及hs-CRP水平均為冠心病預(yù)后不良的相關(guān)因素，M1型巨噬細(xì)胞比例≥63.04%對冠心病的預(yù)后具有獨(dú)立預(yù)測價值，為冠心病不良心血管事件發(fā)生的獨(dú)立預(yù)測因子。

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（收稿日期：2021-06-18） （本文編輯：占匯娟）