湯環(huán)宇 ，翟偉 ，朱鑫海 ，周一凡 ，唐建清 ，張曉君

（1.揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；2.江蘇省淡水研究所，江蘇 南京 210017）

本研究采用紙片擴(kuò)散法（K－B 法）測定了分離自羅氏沼蝦、克氏原螯蝦和青蝦的3 株維氏氣單胞菌對(duì)37 種抗菌類藥物的敏感性，同時(shí)采用試管稀釋法測定了5 種抗菌藥物對(duì)這3 株病原維氏氣單胞菌的最小抑菌濃度（MIC） 和最小殺菌濃度（MBC），研究結(jié)果可為水產(chǎn)養(yǎng)殖中維氏氣單胞菌引起的水生動(dòng)物疾病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

維氏氣單胞菌JDM2020 分離自揚(yáng)州高郵市某養(yǎng)殖場患病羅氏沼蝦，維氏氣單胞菌CPA2020 分離自江蘇省泗洪縣某養(yǎng)殖場患病克氏原螯蝦，維氏氣單胞菌GJL2020 分離自揚(yáng)州市某養(yǎng)殖場患病青蝦。3 株維氏氣單胞菌均保存于實(shí)驗(yàn)室備用。

1.2 試驗(yàn)藥品

表1 5 種抗菌藥藥品信息

1.3 病原菌藥物敏感性測定

病原菌對(duì)37 種抗菌類藥物的敏感性測定采用常規(guī)瓊脂擴(kuò)散法。將菌JDM2020、CPA2020和GXL2020 分別接種于普通營養(yǎng)肉湯，在28 ℃，180 r/min 的搖床中培養(yǎng) 24 h 后，取 100 L 菌液均勻涂布于普通營養(yǎng)瓊脂平板上。待自然干后，用經(jīng)滅菌的鑷子取藥敏紙片依次平貼于涂布細(xì)菌的培養(yǎng)基表面，每個(gè)平板貼6 張藥敏紙片，重復(fù)3 次。置28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后測量抑菌圈直徑，并根據(jù)藥敏紙片使用說明書判定敏感性。

1.4 病原菌對(duì)5 種常見藥物的MIC 和MBC 測定

將菌株 JDM2020、CPA2020 和 GXL2020 分別接種于普通營養(yǎng)肉湯中，在28 ℃，180 r/min 的搖床中培養(yǎng)24 h 后，將菌液濃度稀釋至10CFU/mL。5 種藥物各設(shè) 14 個(gè)濃度梯度試驗(yàn)組（30，25，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3，2 和 1 mg/L）和 1 個(gè)空白對(duì)照組。各試驗(yàn)組分別加入0.1 mL 上述菌液，空白對(duì)照組不加菌液。每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3 個(gè)重復(fù)。振蕩使被測菌與藥液充分混勻，置28 ℃恒溫培養(yǎng)24 h 后，肉眼觀察呈現(xiàn)澄清且搖動(dòng)后仍澄清者，則表示無細(xì)菌生長（被抑制）；若呈混濁狀態(tài)則表示有細(xì)菌生長（無抑制）。無細(xì)菌生長的最大稀釋度的藥液，即為該藥物的MIC。從澄清的試管中吸取0.1 mL，涂布于普通營養(yǎng)瓊脂平板，于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，仍無細(xì)菌生長的最低藥物濃度為供試藥物對(duì)細(xì)菌的MBC。

2 結(jié)果與分析

2.1 3 株不同來源維氏氣單胞菌對(duì)37 種抗菌類藥物的敏感性

通過紙片擴(kuò)散法測定羅氏沼蝦源維氏氣單胞菌JDM2020、克氏原螯蝦源維氏氣單胞菌CPA2020、青蝦源維氏氣單胞菌GXL2020 對(duì)供試37 種抗菌類藥物敏感性見表2。結(jié)果顯示，羅氏沼蝦源維氏氣單胞菌JDM2020 對(duì)頭孢呋辛、氧氟沙星和左氟沙星等9 種藥物敏感，對(duì)氟苯尼考、慶大霉素、頭孢唑林、氨曲南等14 種藥物中介，對(duì)恩諾沙星、諾氟沙星、卡那霉素等14 種藥物耐藥?？耸显r源維氏氣單胞菌CPA2020 對(duì)氯霉素、頭孢呋辛、左氟沙星等13 種藥物敏感，對(duì)恩諾沙星、氟苯尼考、卡那霉素等10 種藥物中介，對(duì)復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、氨芐西林等14 種藥物耐藥。青蝦源維氏氣單胞菌GXL2020 對(duì)氟苯尼考、妥布霉素、頭孢呋辛等10 種藥物敏感，對(duì)恩諾沙星、卡那霉素、慶大霉素等17 種藥物中介，對(duì)四環(huán)素、青霉素G、環(huán)丙沙星等10 種藥物耐藥。

表2 3 株不同來源維氏氣單胞菌對(duì)37 種抗菌藥物的敏感性①

續(xù)表

2.2 5 種抗菌藥物對(duì)3 株不同來源維氏氣單胞菌的MIC

表3 5 種抗菌藥對(duì)3 株維氏氣單胞菌MIC①

2.3 5 種抗菌藥物對(duì)3 株不同來源維氏氣單胞菌的MBC

表4 5 種抗菌藥對(duì)3 株不同來源維氏氣單胞菌的MBC①

3 討論

為指導(dǎo)對(duì)維氏氣單胞菌引起的水生動(dòng)物疾病的精準(zhǔn)用藥，研究開展了不同來源的維氏氣單胞菌對(duì)常見抗菌藥物的敏感性測定，并采用試管稀釋法測定了養(yǎng)殖生產(chǎn)中常用的5 種抗菌藥物對(duì)不同來源的維氏氣單胞菌的MIC 和MBC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)氟苯尼考、恩諾沙星對(duì)維氏氣單胞菌的殺菌效果最好，可用較低濃度殺滅不同來源的維氏氣單胞菌。氟苯尼考可以通過抑制轉(zhuǎn)肽酶，使肽酶的增長受阻，抑制細(xì)菌內(nèi)肽鏈的形成，從而阻止蛋白質(zhì)的合成，達(dá)到抗菌目的，亦具有廣譜抗菌作用。恩諾沙星屬第三代氟喹諾酮新藥，具有良好的抗菌活性，而且殺菌力強(qiáng)，吸收快，被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。

隨著抗菌藥物長期且大量使用，使得致病菌的耐藥性逐漸凸顯出來。因此，在預(yù)防與治療水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性病害中，要避免盲目用藥，嚴(yán)格控制用量，高效殺滅細(xì)菌的同時(shí)做到準(zhǔn)確用藥和減量用藥，以保障水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。