高盼盼， 李 天， 郝 磊， 趙 鑫， 張辰露,3*

(1.陜西理工大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院， 陜西 漢中 723000；2.西安嘉運(yùn)實(shí)業(yè)有限公司， 陜西 西安 710000；3.陜南秦巴山區(qū)生物資源綜合開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心， 陜西 漢中 723000)

隨著現(xiàn)代社會(huì)健康需求的轉(zhuǎn)變，中醫(yī)藥健康產(chǎn)品因其具有健康維護(hù)、預(yù)防疾病、增強(qiáng)免疫力等獨(dú)特作用越來越受到民眾青睞。袋泡茶制備工藝簡單、清潔衛(wèi)生、用量標(biāo)準(zhǔn)、有效成分易被人體吸收，適應(yīng)現(xiàn)代人的快節(jié)奏生活[1]。目前，袋泡茶已成為全球茶葉消費(fèi)的重要產(chǎn)品類型，形成了較為完整的產(chǎn)業(yè)鏈。茶葉與中藥材的藥用保健價(jià)值也已明確，開發(fā)新型復(fù)配袋泡茶可滿足不同人群的日常健康需求。

三七為五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.) F.H.Chen的干燥根和根莖[2]，含有豐富的皂苷類、黃酮類等化學(xué)成分，具有祛瘀止血等作用[3]。丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根莖[2]，主要成分為酚酸類水溶性成分和二萜類脂溶性成分，具有活血化瘀、抗腫瘤、抗纖維化等作用[4-5]。張學(xué)文采用丹參與三七配伍治療臨床常見病，作為活血藥中的代表性藥物，其中丹參活血側(cè)重通，三七活血側(cè)重補(bǔ)，一通一補(bǔ)[6]。目前，已上市的同時(shí)含丹參和三七的復(fù)方制劑種類繁多，如復(fù)方丹參片、復(fù)方丹參滴丸、丹參益心膠囊、芪參膠囊等[7-8]。民間亦常見將兩者打粉共服，丹參-三七配伍用藥已廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病的治療與日常保健中。紅茶味甘、微苦澀、性溫，具有抗氧化、抗疲勞、抗癌、降血糖、降血脂等功效，由于其在加工過程中經(jīng)過深度發(fā)酵，多種茶多酚酶催化茶多酚代謝，使茶黃素、茶紅素等成分含量明顯增加[9]。本文對以丹參、三七及紅茶為原料的復(fù)配茶的組成配方及沖泡方法進(jìn)行研究，研制出一款丹參-三七-紅茶復(fù)合袋泡茶，能同時(shí)發(fā)揮多種保健養(yǎng)生功效，豐富茶飲品種類。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 藥材

丹參(陜西漢中)、三七(云南文山)、紅茶(漢中寧強(qiáng)千山茶業(yè)有限公司)。

1.1.2 主要試劑

三七皂苷R1(批號(hào)：G09D10Y104881，純度≥98%)，人參皂苷Rg1(批號(hào)：G30N10Y104330，純度≥98%)，人參皂苷Rb1(批號(hào)：P19S10U98130，純度≥98%)，丹酚酸B(批號(hào)：P20J10F93457，純度≥98%)，丹參素(批號(hào)：G24J10L91371，純度≥98%)，咖啡酸(批號(hào)：W16O10B100366，純度≥98%)，迷迭香酸(批號(hào)：Y06A9K67402，純度≥98%)，以上對照品均購于上海源葉生物科技有限公司；乙腈(美國TEDIA公司)、甲醇(美國TEDIA公司)為色譜級(jí)，其他試劑如硫酸亞鐵(天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司)、磷酸二氫鉀(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司)、酒石酸鈉鉀(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司)、磷酸二氫鈉(成都市科龍化工試劑廠)、磷酸(成都市科龍化工試劑廠)等為分析級(jí)，水為飲用純凈水。

1.1.3 儀器與設(shè)備

FS-100手提式塑料薄膜封口機(jī)(永康市特力包裝機(jī)械有限公司)、Thermo Fisber Ultimate 3000高效液相色譜儀(賽默飛世爾科技有限公司)、DE-100g萬能高速粉碎機(jī)(浙江紅景天工貿(mào)有限公司)、DHG-9145A電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)、WT10002電子天平(杭州萬特衡器有限公司)、KQ-300DB數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、070907100c01可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)、HH-2恒溫水浴鍋(常州潤華電器有限公司)、KSW-12D-10箱式電阻爐(沈陽市節(jié)能電爐廠)等。

1.2 袋泡茶研制流程

原料粉碎、過篩→篩選配方用量→優(yōu)化沖泡方法→主要活性成分含量檢測→結(jié)果分析及論證→產(chǎn)品質(zhì)量對照國標(biāo)檢驗(yàn)認(rèn)定。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 篩選配方

將丹參、三七和紅茶粉碎，過3號(hào)篩，密封備用。將丹參粉、三七粉和紅茶粉按照不同配比裝入一次性茶葉袋(5 cm×7 cm)中熱封后沖泡。

通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定了丹參、三七和紅茶的用量范圍，再進(jìn)行L9(33)正交試驗(yàn)(見表1)，選出最優(yōu)配方。依據(jù)《GB/T 14487—2017茶葉感官審評(píng)術(shù)語》[10]評(píng)定丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶的感官特性。在沖泡溫度90 ℃、加水量200 mL、沖泡時(shí)間15 min條件下制得茶湯樣品溶液，由20名食品質(zhì)量與安全專業(yè)的師生組成感官評(píng)定小組，依據(jù)表2的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分別對不同配比的茶湯樣品的湯色(20%)、香氣(40%)、滋味(40%)共3項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分，求平均值。

表1 配方用量正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.2 沖泡方法優(yōu)化

沖泡溫度、沖泡時(shí)間和加水量是影響茶湯口感與活性成分溶出度的重要因素，各因素之間存在交互影響，采用L9(33)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，見表3。復(fù)配袋泡茶以紅茶為主，丹參和三七用量相對較少，用水沖泡方式溶出其活性成分是有限的。采用HPLC法檢測茶湯中丹參、三七中幾種水溶性有效成分時(shí)，發(fā)現(xiàn)各個(gè)處理之間的中藥材活性成分含量差異較小。因此，就沖泡方法而言，綜合考慮選用原料紅茶中茶多酚含量作為沖泡正交試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)。茶多酚含量參照《GB/T 21733—2008茶飲料中茶多酚的檢測方法》[11]進(jìn)行檢測。

表2 袋泡茶感官評(píng)定方法

表3 沖泡參數(shù)正交試驗(yàn)因素水平表

1.3.3 不同原料組合的主要活性成分對比

采用HPLC法和分光光度法分別對丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶、丹參-紅茶、三七-紅茶、丹參、三七、紅茶共6組樣品的主要活性成分進(jìn)行含量檢測。

1.3.3.1 HPLC法檢測樣品中丹參的主要活性成分含量

(1)供試品制備：樣品加飲用純凈水200 mL，在90 ℃恒溫水浴鍋上回流浸提1 h得到浸提液，冷卻恒重，吸取5 mL浸提液置于小燒杯中，在90 ℃恒溫水浴鍋上加熱蒸干，待冷卻后加入25 mL體積分?jǐn)?shù)70%甲醇充分溶解，然后用0.22 μm濾膜過濾，取濾液，作為供試品溶液，備用。

(2)對照品溶液的制備：精密稱取丹參素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B對照品，用體積分?jǐn)?shù)75%的甲醇溶解，配置成質(zhì)量濃度分別為1.09、1.04、1.13、0.86 mg/mL的對照品儲(chǔ)備液。

(3)色譜條件：色譜柱：Waters Symmery?C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，B為0.02%磷酸溶液，梯度洗脫(0～10 min，體積分?jǐn)?shù)5%～20%A；10～15min，體積分?jǐn)?shù)20%～25%A；15～20 min，體積分?jǐn)?shù)20%～25%A；20～35 min，體積分?jǐn)?shù)25%～32%A；35～45 min，體積分?jǐn)?shù)32～55%A；45～50 min，體積分?jǐn)?shù)55%～49%A；50～70 min，體積分?jǐn)?shù)49%～52%A；70～87 min，體積分?jǐn)?shù)65%～100%A；87～95 min，體積分?jǐn)?shù)100%～5%A)；流速為1 mL/min，檢測波長為288 nm，柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL[12]。

(4)線性關(guān)系考察：分別精密吸取儲(chǔ)備液適量，配置成丹參素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B混合液，濃度分別是10.90、0.76、22.60、344 μg/mL，進(jìn)樣體積依次為5、10、20、30 μL，注入高效液相色譜中，測定峰面積。以對照品質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)，標(biāo)品峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程，見表4。

表4 丹參4種成分含量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.3.2 HPLC法檢測樣品中三七的主要活性成分含量

(1)供試品制備：同1.3.3.1中供試品制備。

(2)對照品溶液的制備：精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品，用甲醇溶解，配置成質(zhì)量濃度分別為1.09、1.00、1.00 mg/mL的對照品儲(chǔ)備液。

(3)色譜條件：色譜柱：Waters Symmery?C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，B為0.05%磷酸溶液，梯度洗脫(0～12 min，體積分?jǐn)?shù)19%A；12～60 min，體積分?jǐn)?shù)19%～36%A；60～65 min，體積分?jǐn)?shù)36%～19%A)；流速為1 mL/min，檢測波長為203 nm，柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL[13]。

(4)線性關(guān)系考察：分別精密吸取上述儲(chǔ)備液，進(jìn)樣體積依次為4、6、8、10、12 μL，注入高校液相色譜中，測定峰面積。以對照品質(zhì)量(μg)為橫坐標(biāo)，標(biāo)品峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得線性回歸方程，見表5。

表5 三七3種活性成分含量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.3.4 理化檢測

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)《GB/T 8304—2013茶 水分測定》[14]、《GB/T 8306—2013茶 總灰分測定》[15]、《GB/T 8305—2013茶 水浸出物測定》[16]標(biāo)準(zhǔn)方法，檢測丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶中水分、總灰分和水浸出物含量。

1.3.5 數(shù)據(jù)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)的平均值，采用IBM SPSS Statistics 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和相關(guān)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 配方用量優(yōu)選結(jié)果

丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶配方優(yōu)選試驗(yàn)的正交試驗(yàn)結(jié)果見表6，顯著性差異分析結(jié)果見表7。

表6 袋泡茶配方正交試驗(yàn)結(jié)果

表7 袋泡茶配方正交試驗(yàn)顯著性差異分析(α=0.05)

由表6和表7分析可知，極差越大對復(fù)配茶感官評(píng)價(jià)的影響程度越高，影響丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶感官品質(zhì)的因素大小依次為三七(B)>紅茶(C)>丹參(A)。由方差分析可知，各因素對感官評(píng)分的影響未達(dá)到顯著水平，根據(jù)k值大小可知，丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶的最優(yōu)配方用量為：A2B1C3，即最佳用量比例為丹參∶三七∶紅茶=1∶1.2∶2.4，袋泡茶總量為4.6 g。經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)，按此配方的丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶的茶湯氣味醇香，澀味輕，苦味淡，口感清爽順滑，色澤金黃透亮。

2.2 沖泡方法優(yōu)選結(jié)果

丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶的沖泡方法正交試驗(yàn)結(jié)果見表8，顯著性差異分析結(jié)果見表9。

表8 袋泡茶沖泡方法正交試驗(yàn)結(jié)果

表9 袋泡茶沖泡試驗(yàn)顯著性差異分析(α=0.05)

由表8和表9分析可知，對比3個(gè)因素的極差數(shù)值，加水量(C)對丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶茶多酚含量的影響顯著，其次為沖泡溫度(A)和沖泡時(shí)間(B)。根據(jù)k值分析可知，丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶最佳沖泡方法為A3B1C2，即水溫90 ℃，沖泡時(shí)間10 min，加水量為200 mL。

2.3 復(fù)配茶中原料配對組合的活性成分檢測結(jié)果

采用HPLC法檢測了三七中3種水溶性物質(zhì)(三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1)的含量，丹參中4種水溶性物質(zhì)(丹酚酸B、丹參素、咖啡酸、迷迭香酸)的含量，并采用分光光度法檢測茶多酚含量。

2.3.1 三七活性成分檢測結(jié)果

丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶、三七-紅茶、三七的HPLC法含量檢測及顯著性差異分析結(jié)果見表10。分析可知，三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中三七皂苷R1含量分別為等量原料三七的0.902倍和0.970倍；三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中人參皂苷Rg1含量分別為等量原料三七的0.908倍和0.984倍；三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中人參皂苷Rb1含量分別為等量原料三七的1.288倍和1.023倍。根據(jù)顯著性差異分析可知，F(xiàn)0.05，說明各個(gè)樣品之間的差異性不顯著，即三七與丹參、紅茶配伍對三七中主要活性成分的溶出度無顯著影響。

表10 三七活性成分含量及顯著性差異分析(α=0.05)

2.3.2 丹參中活性成分檢測結(jié)果

丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶、丹參-紅茶、丹參的4種活性成分檢測結(jié)果及顯著性差異分析見表11。分析可知，三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中丹參素含量分別為等量原料丹參的0.935倍、0.937倍；三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中咖啡酸含量分別為等量原料丹參的0.639倍、0.722倍；三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中迷迭香酸含量分別為等量原料丹參的1.033倍、1.024倍；三七-紅茶、丹參-三七-紅茶中丹酚酸B含量分別為等量原料丹參的0.987倍、0.981倍。根據(jù)顯著性差異分析可知F0.05，說明各個(gè)樣品間的差異性不顯著，即丹參與三七、紅茶配伍對丹參主要活性成分的溶出度無顯著影響。

表11 丹參活性成分含量及顯著性差異分析(α=0.05)

2.3.3 茶多酚含量的檢測結(jié)果

丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶、三七-紅茶、丹參-紅茶、紅茶的茶多酚含量檢測及顯著性差異分析見表12。分析可知，丹參-紅茶、三七-紅茶和丹參-三七-紅茶中茶多酚含量分別為等量原料紅茶的0.994倍、0.995倍和0.997倍。根據(jù)顯著性差異分析可知F0.05，說明各個(gè)樣品間的差異性不顯著，即紅茶與丹參、三七配伍對茶多酚的溶出度無顯著差異。

表12 茶多酚含量及顯著性差異分析(α=0.05)

2.4 復(fù)配茶的理化檢測結(jié)果

對上述試驗(yàn)獲得的最優(yōu)配方復(fù)配茶進(jìn)行理化指標(biāo)水分、灰分、水浸出物的檢測，結(jié)果見表13。分析可知，丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶的水分、灰分、水浸出物分別為4.15%、4.25%、33.10%，均滿足《GB/T 24690—2018袋泡茶》[17]中對袋泡茶的理化指標(biāo)要求，說明丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶符合國家袋泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

表13 復(fù)配茶理化指標(biāo)檢測結(jié)果

3 結(jié)論與討論

本文以丹參、三七和紅茶為原料，研發(fā)了一款丹參-三七-紅茶復(fù)配袋泡茶，最佳用料質(zhì)量配比為丹參∶三七∶紅茶=1∶1.2∶2.4，袋泡茶總量為4.6 g，質(zhì)量符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。袋泡茶最佳沖泡方法為水溫90℃，時(shí)間10 min，加水量200 mL。本款袋泡茶研發(fā)過程科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，產(chǎn)品不含任何食品添加劑，沖泡方便，迎合了現(xiàn)代社會(huì)大健康消費(fèi)需求，具有較高應(yīng)用價(jià)值。袋泡茶的茶湯氣味醇香、澀味輕、苦味淡、口感清爽順滑、色澤金黃透亮。不同原料配伍組合對茶湯中丹參酚酸類成分、三七皂苷類成分及茶多酚的溶出率無顯著性影響。丹參與三七是中醫(yī)常用藥對，三七、紅茶均性溫，而丹參性涼，三者搭配則性味調(diào)和，與單一紅茶相比，提升了茶飲品的保健價(jià)值。

2020年版《中華民共和國藥典》關(guān)于丹參的日用量范圍為10～15 g，三七的日用量范圍為3～9 g；張惠云等[18]建議三七常規(guī)沖服用量為0.5～11.25 g；潘韋韋等[19]綜合歷代經(jīng)典方劑及現(xiàn)代名家經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出丹參日用量范圍為10～37.3 g。本款袋泡茶中丹參與三七的用量分別為1.0 g和1.2 g，對于喜愛該產(chǎn)品的健康成人，建議每天飲用不超過7袋，但需注意經(jīng)期女性、孕婦、低血壓、低血脂、低血糖等人群不宜飲用。