葵肽清風(fēng)對高尿酸血癥動物模型的降尿酸作用

邊學(xué)峰，劉 玲，蘭 夢，吳 楠*，張 輝*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117；2.吉林省東北亞生物科技有限公司，長春 130117）

高尿酸血癥的特征是血液中尿酸水平異常升高，一般來說，女性的正常范圍上限為360 mol/L（6 mg/dL），男性為416 mol/L（7.0 mg/dL）[1]。高尿酸血癥已成為威脅人類健康的代謝性疾病[2-3]，可能與代謝綜合征、中風(fēng)發(fā)病率、慢性腎臟疾病和心血管疾病有關(guān)，被認(rèn)為是引發(fā)痛風(fēng)的重要因素之一。目前使用的抗高尿酸血癥的藥物主要包括：秋水仙堿、苯溴馬隆、別嘌呤醇、黃嘌呤氧化酶（XOD）抑制劑等[4]。但具有不良反應(yīng)，如秋水仙堿可導(dǎo)致腹瀉、嘔吐，別嘌呤醇可導(dǎo)致胃腸刺激，骨髓抑制，過敏綜合征，肝炎和惡化的腎功能[5]。尿酸氧化酶僅用于治療高尿酸血癥，未被廣泛應(yīng)用[6]?？垢吣蛩嵫Y藥物由于其嚴(yán)重的不良反應(yīng)而限制了其臨床應(yīng)用[7]。因此，尋找具有更安全的毒理學(xué)特征的替代抗高尿酸血癥藥物，特別是從傳統(tǒng)中醫(yī)藥尋找開發(fā)新型抗高尿酸血癥藥物具有重要的意義?？那屣L(fēng)是由葵花盤、薏苡仁、白茅根、淡竹葉、杜仲雄花、山楂為主要原料制成的代茶飲，具有增強(qiáng)免疫力、提高腎功能尿酸代謝的能力。

1 實驗材料

8 周齡雄性Wistar 大鼠，體質(zhì)量（180±10）g，實驗動物生產(chǎn)許可號：SCXK（吉）20180007，購于長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司?？那屣L(fēng)（吉林敖東健康科技有限公司），秋水仙堿片（云南望子隆藥業(yè)有限公司），苯溴馬隆膠囊（德國赫曼大藥廠），尿酸鈉晶體（sigma），腺嘌呤（浙江天瑞藥業(yè)有限公司），高酵母飼料（長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司），尿酸檢測試劑盒（磷鎢酸法）、黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒（比色法）（南京程健生物技術(shù)公司）。所有檢測都是根據(jù)制造商的說明進(jìn)行的?？那屣L(fēng)是一種由6 種成分組成的中藥混合物：葵花盤提取物、薏苡仁粉、白茅根粉、淡竹葉粉、杜仲雄花粉、山楂粉。每日最大食用量不超過30 g（每袋5 g）。在大鼠中，等效劑量分別約為人類劑量的6 倍[8]。根據(jù)對藥物安全性的臨床觀察，我們分別選擇了人體劑量的3倍、6 倍和9 倍作為低劑量、中劑量和高劑量。在本研究中，三劑葵肽清風(fēng)以1.5、3、4.5 g 懸浮在蒸餾水中并通過灌胃法給藥7 d。秋水仙堿和苯溴馬隆用作陽性對照，并在蒸餾水中相似地制備。

2 實驗方法

2.1 動物模型的建立 通過注射尿酸鈉晶體（MSU）建立大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型。于之前的研究類似，采用尿酸鈉晶體誘導(dǎo)的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠評估葵肽清風(fēng)對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用。第1～14 天給予高酵母飼料飼養(yǎng)，并給予腺嘌呤100 mg/（kg·d）灌胃，第15～21 天停止高酵母飼養(yǎng)及腺嘌呤灌胃，第18 天于造模組關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射尿酸鈉晶體溶液[9]，選擇右踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方作為穿刺點，針口斜面與脛骨成45°角向上前方穿入踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)[10]，以關(guān)節(jié)囊對側(cè)鼓起為注入標(biāo)準(zhǔn)，制備急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，繼續(xù)藥物干預(yù)72 h（3 d）后，于第21 天大鼠眼眶靜脈叢取血，留取標(biāo)本。

2.2 動物分組 Wistar大鼠共77只，分7組，每組11只。分別為正常對照組、模型組、秋水仙堿（0.48 g/kg）陽性對照組、苯溴馬?。?0 g/kg）陽性對照組及葵花盤低（1.5 g/kg）、中（3 g/kg）、高（4.5 g/kg）劑量組。正常對照組和模型組給予生理鹽水10 mL/kg。藥物劑量按照《中藥藥理研究方法學(xué)》中實驗動物和人體劑量的換算方法換算[11]。

2.3 腫脹度測量 通過游標(biāo)卡尺測量尿酸鈉晶體（MSU）注射后0、12、24、48 h 所有大鼠的右膝關(guān)節(jié)周長。腫脹度（%）=（Ct -C0）/C0。其中，Ct 表示不同時間的周長，C0 表示0 h 的周長。觀測大鼠血液和肝臟的尿酸（SUA）水平、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）水平。

2.4 樣品收集 最后一次給藥后1 h，各組大鼠眼眶靜脈叢取血，血漿靜置30 min 后，以3 000 r/min 的速度離心，取上清。置于-80 ℃保存[12]。

2.5 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計 采用SPSS 19.0 處理數(shù)據(jù)，用.E.M.表示結(jié)果，利用雙t-t 實驗檢驗顯著性[13]。

3 結(jié)果

3.1 葵肽清風(fēng)對大鼠肝臟中尿酸濃度的影響 按照尿酸試劑盒的檢測方法，對大鼠肝臟尿酸（SUA）含量進(jìn)行測定。如圖1 所示，與空白組相比，模型組肝臟尿酸含量顯著上升（P＜0.05），這表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能夠使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血癥模型[14]。結(jié)果顯示，與模型組相比，秋水仙堿（COL）組和苯溴馬?。˙en）組與葵肽清風(fēng)（KTQF）各組均能夠不同程度地使血尿酸含量下降。秋水仙堿組和苯溴馬隆組與模型組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果證明葵肽清風(fēng)有降低肝臟尿酸含量的效果能夠治療高尿酸血癥；并且在葵肽清風(fēng)各組中，葵肽清風(fēng)高劑量（KTQFG）組對于降低肝臟尿酸水平最有效[15]。

圖1 葵肽清風(fēng)對大鼠肝臟中尿酸含量的影響

3.2 葵肽清風(fēng)對大鼠血清中尿酸濃度的影響 按照尿酸試劑盒的檢測方法，對大鼠血尿酸（SUA）含量進(jìn)行測定。如圖2 所示，與空白組相比，模型組血清尿酸含量顯著上升（P＜0.05），這表明，利用腺嘌呤灌胃的方式，能夠使大鼠血尿酸升高，成功建立高尿酸血癥模型。結(jié)果顯示，與模型組相比，秋水仙堿和苯溴馬隆組與葵肽清風(fēng)各組均能夠不同程度地使血尿酸含量下降[16]。秋水仙堿組和苯溴馬隆組與模型組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果證明葵肽清風(fēng)有降低血尿酸含量的效果能夠治療高尿酸血癥；并且在葵肽清風(fēng)各組中，葵肽清風(fēng)高劑量組對于降低血尿酸最有效[17]。

圖2 葵肽清風(fēng)對大鼠血尿酸含量的影響

3.3 葵肽清風(fēng)對大鼠肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）活性的影響 根據(jù)血尿酸含量測定結(jié)果，分別對空白組、模型組、秋水仙堿、苯溴馬隆組以及葵肽清風(fēng)組的肝臟組織進(jìn)行測定。取大鼠肝臟，制備成勻漿[18]。按照肝臟黃嘌呤氧化酶試劑盒的測定方法進(jìn)行操作。如圖3 所示，與空白組相比，模型組大鼠肝臟勻漿中黃嘌呤氧化酶活性顯著上升（P＜0.05）；與模型組相比，秋水仙堿組、苯溴馬隆組使得黃嘌呤氧化酶活性顯著下降（P＜0.05），葵肽清風(fēng)高劑量組、葵肽清風(fēng)中劑量組（KTQFZ）、葵肽清風(fēng)低劑量組（KTQFD）使得肝臟黃嘌呤氧化酶活性顯著下降（P＜0.01）。結(jié)果表明，葵肽清風(fēng)組對于大鼠肝臟中肝臟黃嘌呤氧化酶活性有顯著抑制作用。

圖3 葵肽清風(fēng)對大鼠肝臟中黃嘌呤氧化酶活性的影響

3.4 葵肽清風(fēng)對大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響 如圖4 所示，在注射尿酸鈉晶體（MSU）的12、24、48 h 后，與空白對照組相比，模型組大鼠右膝關(guān)節(jié)腫脹度均顯著增加（P＜0.05），由此可見，注射尿酸鈉結(jié)晶能成功建立急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，且所建立的動物模型相對穩(wěn)定[19]。秋水仙堿組在0.48 mg/kg 劑量時，未能調(diào)節(jié)由尿酸鈉晶體（MSU）引起的腫脹（P＞0.05）。注射尿酸鈉晶體12 h 后，葵肽清風(fēng)高劑量組、葵肽清風(fēng)中劑量組、葵肽清風(fēng)低劑量組顯著抑制了右膝的腫脹（P＜0.05）；而在48 h，葵肽清風(fēng)高劑量組顯著抑制腫脹（P＜0.01）。各組中，葵肽清風(fēng)高劑量組在尿酸鈉晶體注射誘導(dǎo)的急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠中，顯示出對右膝腫脹的最佳抑制作用。

圖4 葵肽清風(fēng)對大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響

4 討論

痛風(fēng)是一種以體內(nèi)尿酸過量為基礎(chǔ)的臨床和病理特征表現(xiàn)的疾病，部分表現(xiàn)為高尿酸血癥，其定義為血清尿酸水平大于6.8 或7.0 mg/dL。關(guān)節(jié)及其他部位細(xì)胞外液中尿酸鈉結(jié)晶的沉積，介導(dǎo)痛風(fēng)的大部分臨床和病理特征[20]。

在治療方面，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要以非甾體抗炎藥、糖皮質(zhì)激素、抑制尿酸生成藥、促進(jìn)尿酸排泄藥等為主要治療手段，其或多或少存在毒副作用[21]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)[22]，葵肽清風(fēng)干預(yù)高尿酸血癥模型大鼠及急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠過程中，血尿酸水平較模型組明顯下降[23]，同時中藥干預(yù)各組大鼠的患病關(guān)節(jié)腫脹程度較模型組輕微，表現(xiàn)為中藥組患病關(guān)節(jié)直徑增大的幅度小，且恢復(fù)時間快，表明葵肽清風(fēng)可控制血尿酸水平、痛風(fēng)局部癥狀[24]。進(jìn)一步統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在高、中、低3 個濃度梯度上，高濃度組葵肽清風(fēng)無論是對于大鼠病足關(guān)節(jié)腫脹程度的改善，還是對于血尿酸水平的降低，均優(yōu)于其余2 個濃度梯度[25]。

綜上所述，葵肽清風(fēng)能顯著改善痛風(fēng)癥狀，改善關(guān)節(jié)腫脹程度，降低血尿酸水平[26]。