原發(fā)性肝癌(HCC)多由HBV和(或)HCV感染后逐漸發(fā)展導(dǎo)致，HCC起病較為隱匿，部分患者確診時(shí)已處于中晚期，臨床預(yù)后較差。甲胎蛋白(AFP)是HCC的腫瘤標(biāo)志物之一，但其診斷敏感度和特異度均較低

。微小RNA(miRNA)是一種長(zhǎng)度為19～25個(gè)氨基酸的非編碼小RNA，其在調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖及分化等多種重要生理過(guò)程中均扮演了重要作用

。本課題組前期研究結(jié)果顯示，miRNA-29a能顯著促進(jìn)HBV的復(fù)制并加重肝臟損傷

。本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)RT-PCR法探討miR-29a在HCC患者血清中相對(duì)表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2018年1月1日至2020年6月1日于我院就診的30例慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB組)、45例乙型肝炎肝硬化(HBVRC)患者(HBVRC組)、60例HCC患者(HCC組)和來(lái)自體檢中心的40例健康體檢者(對(duì)照組)作為研究對(duì)象。CHB組患者男20例，女10例，平均年齡(54.75±7.93)歲；HBVRC組患者男25例，女20例，平均年齡(56.22±82.44)歲；HCC組患者男36例，女24例，平均年齡(55.43±8.96)歲；對(duì)照組人員男22例，女18例，平均年齡(55.17±7.45)歲。4組研究對(duì)象在性別和年齡上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) HCC及CHB診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》和《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》

。HBVRC診斷依據(jù)為既往有乙型肝炎病史多年，通過(guò)我院B超或CT確診肝硬化。所有患者近3個(gè)月內(nèi)均未進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)行抗HBV、抗纖維化藥物及保肝藥物治療，均沒(méi)有合并其他慢性肝臟疾病、嚴(yán)重腎功能不全、心肺功能不全及哺乳、妊娠婦女，精神疾病者。上述所有研究對(duì)象均知情同意且簽署知情同意協(xié)議書。

1.3 研究方法

1.3.1 血清miR-29a表達(dá)水平的檢測(cè) 于清晨空腹抽取4組研究對(duì)象外周靜脈血，按常規(guī)檢測(cè)方法操作。

lncRNA是一類長(zhǎng)度超過(guò)200nt的非編碼RNA。 Ling等[23]研究發(fā)現(xiàn)，CCAT2 lncRNA在微衛(wèi)星穩(wěn)定的結(jié)直腸癌組織中呈過(guò)表達(dá)，并且能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和染色質(zhì)不穩(wěn)定。 最近研究[24]發(fā)現(xiàn)MALAT-1 lncRNA可由腫瘤細(xì)胞分泌到外周血，其在血漿中的表達(dá)不受冷熱酸堿環(huán)境影響，證實(shí)了循環(huán)lncRNAs 作為標(biāo)志物用于腫瘤診斷和預(yù)測(cè)的可行性和可靠性。lncRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為全面認(rèn)識(shí)腫瘤和發(fā)現(xiàn)新標(biāo)志物提供了新的視角。 但有關(guān)lncRNA作為腫瘤標(biāo)志物的研究尚處于初步階段，我們需要大規(guī)模臨床探究和驗(yàn)證其臨床應(yīng)用價(jià)值。

2.4 相關(guān)性分析 HCC組患者血清AFP水平為(654.25±35.14)ng/ml。

相關(guān)分析結(jié)果顯示，HCC患者血清miR-29a相對(duì)表達(dá)水平與AFP呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)

=0.863，

<0.05。

2 結(jié)果

2.5 血清AFP、miR-29a單獨(dú)及聯(lián)合診斷HCC的臨床效能 以CHB組、HBVRC組和HCC組患者血清中AFP和miR-29a表達(dá)水平作為檢驗(yàn)變量，以HCC組患者血清中AFP和miR-29a表達(dá)水平作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線。結(jié)果顯示，AFP診斷HCC的曲線下面積為0.836(95%

：0.769～0.903)，當(dāng)截?cái)嘀禐?44.40 ng/ml時(shí)，此時(shí)敏感度和特異度分別為81.00%和66.70%；miR-29a相對(duì)表達(dá)水平診斷HCC的曲線下面積為0.913(95%

：0.866～0.959)；當(dāng)截?cái)嘀禐?.755，此時(shí)敏感度和特異度分別為84.3%和89.3%；AFP聯(lián)合miR-29a診斷HCC的曲線下面積為0.942(95%

：0.905～0.979)，敏感度和特異度分別為90.00%和92.62%。

2.2 HCC患者血清miR-29a相對(duì)表達(dá)水平的單因素分析 見(jiàn)表1。

對(duì)于企業(yè)這一特殊企業(yè)機(jī)構(gòu)而言，想要更好的改善傳統(tǒng)財(cái)務(wù)管理體制下財(cái)務(wù)管理狀況，就必須構(gòu)建完善健全的預(yù)算責(zé)任監(jiān)督機(jī)制，杜絕企業(yè)發(fā)展期間的收支混亂問(wèn)題出現(xiàn)。具體而言，主要包括以下幾點(diǎn)：(1)在企業(yè)內(nèi)部建立不同層級(jí)不同經(jīng)濟(jì)責(zé)任制管理體系，將不同層級(jí)管理人的責(zé)任及權(quán)責(zé)范圍規(guī)劃清晰，確保預(yù)算出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)“查有此人”。(2)建立預(yù)算監(jiān)督檢查制度，并在此期間完善固有的預(yù)算評(píng)估制度。在預(yù)算計(jì)劃確定并執(zhí)行期間，監(jiān)督檢查人員需要實(shí)時(shí)跟蹤定位預(yù)算資金的實(shí)際應(yīng)用情況，并就預(yù)算應(yīng)用結(jié)果進(jìn)行科學(xué)評(píng)估，一旦發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，需要對(duì)其進(jìn)行反復(fù)查驗(yàn)，直至找出根源為止，最終確保預(yù)算資金能夠真正應(yīng)用于經(jīng)營(yíng)項(xiàng)目中。

1.3.2 HCC患者臨床病理資料 通過(guò)我院住院系統(tǒng)收集HCC組患者的臨床病理資料。

說(shuō)來(lái)也怪，自有這觀音閣后，村里的水渠與河流從沒(méi)有干涸過(guò)，也沒(méi)泛濫過(guò)。而之前，村里是發(fā)過(guò)大水的，水漫過(guò)渠道，沖破堤岸，沖毀橋梁，淤塞了河床。

2.3 HCC患者血清中miR-29a相對(duì)表達(dá)水平的Logistic回歸分析 Logistic分析結(jié)果顯示，存在門靜脈癌栓(

=3.564)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(

=4.029)、TNM分期越高(

=5.113)均是HCC患者血清miR-29a相對(duì)表達(dá)水平升高的危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表2。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)若符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用

檢驗(yàn)。若不符合正態(tài)分布，以中位數(shù)和四分位數(shù)表示，兩樣本比較采用

-

檢驗(yàn)。多組間比較采用方差分析。相關(guān)性分析采用

檢驗(yàn)。影響因素采用

回歸分析。診斷效能利用ROC曲線分析。以

<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1 4組研究對(duì)象血清miR-29a的相對(duì)表達(dá)水平 見(jiàn)圖1。

3 討論

miRNA屬于非編碼RNA，不同miRNA在HCC的發(fā)生發(fā)展中起到促進(jìn)或抑制作用

，近年來(lái)多數(shù)研究致力于探討血液中不同miRNA相對(duì)表達(dá)水平對(duì)于HCC的早期診斷

。

三是創(chuàng)新優(yōu)化政務(wù)環(huán)境。全面落實(shí)深化改革各項(xiàng)工作，創(chuàng)造性成立商事審批服務(wù)虛擬辦公室，打破傳統(tǒng)審批固化程序，重構(gòu)審批流程，提前介入技術(shù)審查和業(yè)務(wù)指導(dǎo)，實(shí)行“一窗受理、集成服務(wù)”，目前在全省“施工許可50天”改革基礎(chǔ)上，最少可為項(xiàng)目建設(shè)方節(jié)約12-17天時(shí)間。暢通政企溝通渠道，設(shè)立企業(yè)投訴熱線，在“江蘇姜堰”微信公眾號(hào)開通網(wǎng)上投訴渠道，對(duì)企業(yè)的合理合法訴求第一時(shí)間回應(yīng)、第一時(shí)間解決。

MiRNA異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，同一個(gè)miRNA可有多個(gè)靶基因，而多個(gè)miRNA也可調(diào)節(jié)同一個(gè)基因的表達(dá)，人類miRNA-29主要由miR-29a、miR-29b1、miR-29b2和miR-29c組成，其中miR-29a和多種腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)

。研究證實(shí)，結(jié)直腸癌、乳腺癌及慢性淋巴細(xì)胞白血病患者血清中miR-29a表達(dá)水平顯著上調(diào)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲及不良預(yù)后有關(guān)，目前關(guān)于HCC患者血清中miR-29a表達(dá)水平尚不清楚

。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)慢性乙型肝炎逐漸發(fā)展為肝硬化和HCC的過(guò)程中，患者血清中miR-29a表達(dá)水平呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，提示miR-29a在CHB過(guò)渡到HCC的過(guò)程中可能扮演了重要作用。進(jìn)一步通過(guò)Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，存在門靜脈癌栓、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和較高TNM分期的HCC患者血清中miR-29a相對(duì)表達(dá)水平顯著升高，說(shuō)明miR-29a高表達(dá)與HCC患者預(yù)后不良有關(guān)。在致病機(jī)制中，本課題組前期通過(guò)對(duì)HBV感染的HepG2.2.15細(xì)胞研究后發(fā)現(xiàn)，miR-29a主要是通過(guò)調(diào)控SMARCE1而促進(jìn)HBV病毒的復(fù)制和過(guò)表達(dá)

，考慮到肝癌多數(shù)是由于慢性乙型肝炎發(fā)展而來(lái)，因此這也從臨床角度上解釋了miR-29a在CHB向HCC發(fā)展過(guò)程中所扮演的重要作用；Kong等

研究證實(shí)miR-29a在p21-HBx轉(zhuǎn)基因小鼠、HBx轉(zhuǎn)染肝癌HepG2-X細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中表達(dá)水平顯著增加，同時(shí)在HCC患者肝癌組織中同樣發(fā)現(xiàn)miR-29a表達(dá)水平上調(diào)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)過(guò)表達(dá)miR-29a能促進(jìn)HepG2細(xì)胞的遷移，而特異性miR-29a抑制劑可以部分抑制HepG2-X細(xì)胞的遷移；此外，生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，miR-29a調(diào)控的靶基因主要參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞黏附、細(xì)胞增殖與凋亡等生物學(xué)過(guò)程，主要涉及到PI3K-AKT、JAK-STAT、T細(xì)胞受體信號(hào)通路等

。因此，上述結(jié)果均提示miR-29a在HCC的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要作用。

第三種獎(jiǎng)勵(lì)把班級(jí)氛圍推向了高潮，同學(xué)們個(gè)個(gè)像打地鼠游戲中的地鼠一樣，接二連三地站起來(lái)，講述感動(dòng)他們的故事：

本研究結(jié)果顯示，HCC患者血清miR-29a相對(duì)表達(dá)水平顯著升高，且與AFP呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，提示miR-29a有可能作為HCC的一項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物。HCC患者血清miR-29a相對(duì)表達(dá)水平鑒別乙型肝炎和肝硬化的AUC可達(dá)0.913，而AFP僅僅為0.836，且miR-29a在診斷HCC的敏感度和特異度均高于AFP，當(dāng)miR-29a聯(lián)合AFP診斷HCC具有更高的AUC、敏感度及特異度。

綜上所述，HCC患者血清中miR-29a相對(duì)表達(dá)水平顯著上調(diào)，可作為HCC的一種血清學(xué)標(biāo)志物，與AFP聯(lián)合診斷時(shí)具有更高的敏感度和特異度。但本研究的局限性在于未探討HCC患者癌組織中miR-29a的表達(dá)水平及血清或組織中miR-29a表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系，這也是本課題組下一步研究的方向。

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