王放 薛今俊

[摘要] 目的 探討兒童功能性便秘不同嚴重程度腸道菌群特點及胃腸激素水平變化。方法? 回顧性分析2019年1月至2020年10月浙江省立同德醫(yī)院診治的120例功能性便秘患兒的臨床資料，將其設(shè)置為觀察組，依據(jù)嚴重程度分為重度組（43例）與輕中度組（77例）。另選擇同期進行體檢的健康兒童120名為對照組。所有患者均檢測腸道菌群數(shù)量及胃腸激素P物質(zhì)（SP）、血管活性腸肽（VIP）、生長抑素（SS）、促胃動素（MTL）水平。結(jié)果? ①觀察組患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯少于對照組，大腸埃希菌明顯多于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。②輕中度組患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯多于重度組，大腸埃希菌數(shù)量明顯少于重度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。③觀察組患兒的SP、MTL水平明顯低于對照組，VIP、SS水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。④輕中度組患兒的SP、MTL水平明顯高于重度組，VIP、SS水平明顯低于重度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 兒童功能性便秘會造成腸道菌群失調(diào)及胃腸激素分泌不正常，同時病情越嚴重，腸道菌群失調(diào)及胃腸激素分泌不正常越明顯。

[關(guān)鍵詞] 功能性便秘;兒童;腸道菌群;胃腸激素;嚴重程度

[中圖分類號] R725.7? ? ? ? ? [文獻標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）11-0073-03

[Abstract] Objective To investigate the characteristics of intestinal bacteria and changes in gastrointestinal hormone levels in children with different severities of functional constipation. Methods The clinical data of 120 children with functional constipation diagnosed and treated in Tongde Hospital of Zhejiang Province from January 2019 to October 2020 were retrospectively analyzed and set as the observation group. According to the severity， the patients in the observation group were divided into the severe group （43 cases） and the mild to moderate group （77 cases）. Another 120 healthy subjects who underwent physical examination during the same period were selected as the control group. The number of intestinal bacteria and the levels of gastrointestinal hormone substance P（SP）， vasoactive intestinal skin （VIP）， somatostatin （SS）， and motilin （MTL） were measured in all patients. Results ①The number of Lactobacillus and Bifidobacterium in the observation group was significantly less than in the control group. The number of Escherichia coli was significantly more than that in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ②The number of Lactobacillus and Bifidobacterium in the mild to the moderate group was significantly more than that in the severe group. The number of Escherichia coli was significantly less than that in the severe group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ③The SP and MTL levels of the children in the observation group were significantly lower than those in the control group. The VIP and SS levels were significantly higher than those in the control group. The differences were statistically significant （P<0.05）. ④The SP and MTL levels of the children in the mild to moderate group were significantly higher than those in the severe group. The VIP and SS levels were significantly lower than those in the severe group. The differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Functional constipation in children may cause intestinal flora imbalance and abnormal gastrointestinal hormone secretion. The more severe the disease， the more obvious the intestinal flora imbalance and abnormal gastrointestinal hormone secretion.2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843

[Key words] Functional constipation; Children; Intestinal bacteria; Gastrointestinal hormones; Severity

功能性便秘是兒科常見的一種疾病，可于不同年齡段發(fā)生，占兒童便秘的90%～95%，臨床特征主要有排便時間延長、排便次數(shù)減少以及大便堅硬干燥等，對患兒的身心健康產(chǎn)生嚴重影響，同時給家屬帶來嚴重困擾[1-2]。功能性便秘患兒的發(fā)病機制與病因十分復(fù)雜，相關(guān)文獻顯示，心理、飲食、內(nèi)臟感覺神經(jīng)不正常、遺傳、腸道菌群失調(diào)、平滑肌與血管病變、胃腸激素水平紊亂等均是導(dǎo)致此病的主要因素[3]。腸道菌群失調(diào)對功能性便秘的發(fā)展起著非常重要的作用，同時調(diào)節(jié)腸道菌群對功能性便秘的療效已經(jīng)取得臨床認可[4]。胃腸激素是胃腸道中的神經(jīng)細胞與分泌細胞產(chǎn)生的一類小分子活性多肽，與胃腸運動功能息息相關(guān)[5]。本研究探討兒童功能性便秘不同嚴重程度腸道菌群特點及胃腸激素水平變化，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019年1月至2020年10月浙江省立同德醫(yī)院診治的120例功能性便秘患兒的臨床資料，將其設(shè)置為觀察組，依據(jù)嚴重程度分為重度組（43例）與輕中度組（77例）。輕度便秘是指3～4 d排便1次，便干燥，成形;中度便秘是指5～6 d排便1次，便干燥，為大塊;重度便秘是指7 d以上排便1次[6]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①與《功能性胃腸道疾病羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)》[7]內(nèi)記載的標(biāo)準(zhǔn)相符;②檢查直腸發(fā)現(xiàn)糞團可觸及;排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有器質(zhì)性消化系統(tǒng)病變者;②合并腸易激綜合征者;③近15 d使用便秘藥物治療者;④出現(xiàn)嚴重心理疾病者。另選擇同期在浙江省立同德醫(yī)院進行體檢的健康兒童120名為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。

觀察組女48例，男72例;年齡6～12歲，平均（8.02±1.65）歲;病程6～16個月，平均（11.14±2.36）個月。對照組女52例，男68例;年齡7～12歲，平均（8.35±1.52）歲;病程4～16個月，平均（10.89±2.44）個月。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 腸道菌群與胃腸激素水平檢測方法

1.2.1 腸道菌群檢測? 無菌收集新鮮糞便200 mg置入無菌離心管內(nèi)，保存于-70℃環(huán)境中;選擇試劑盒Pow-erfecal DNA Isolation Ki對糞便內(nèi)的DNA進行提取，按照雙歧桿菌、大腸埃希菌、乳桿菌的基因序列16S rDNA對PCR引物進行設(shè)計，實施熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)的體系合計20 μl，其中1 μl下游引物、1 μl上游引物、9 μl SYBRGreen、7 μl DNA模板、2 μl ddH2O;反應(yīng)條件為預(yù)變性95℃ 30 s、變性95℃ 5 s、退火34 s、延伸72℃ 30 s，最后延伸10 min，共計40個循環(huán);純化回收擴增的產(chǎn)物，對純化產(chǎn)物的濃度與吸光度值進行測定，換算為1 μl標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù)設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)曲線;選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線與系統(tǒng)軟件自動分析循環(huán)閾值對雙歧桿菌、大腸埃希菌、乳桿菌的拷貝數(shù)進行計算，使用Ig CFU/g濕便的方式表達。其中雙歧桿菌上游引物為CTCCTGGAAACGGGTGGT，下游引物為GCTGCCTCCCGTAGGAGT;大腸埃希菌上游引物為CATGCCGCGTGTATGAAGAA，下游引物為CGGGTAACGTCAATGAGCAAA;乳桿菌上游引物為AGCAGTAGGGAATCTTCCA，下游引物為CACCGCTACACATGGAG。

1.2.2 胃腸激素水平測定? 選擇降結(jié)腸黏膜，于4℃條件下保持3000 r/min的速度離心30 min，合計2次，上清液合并后于-80℃環(huán)境中保存，等待檢查;選擇放射免疫法對P物質(zhì)（substance P，SP）、血管活性腸肽（vasoactine intrestinal peptide，VIP）、生長抑素（somatostatin，SS）、促胃動素（motilin，MTL）進行測定，試劑盒由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.3 觀察指標(biāo)

比較分析觀察組患兒與健康組及輕中度組與重度組患兒腸道菌群數(shù)量（主要包括乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌）、觀察組患兒與健康組及輕中度組與重度組患兒胃腸激素水平（包括SP、VIP、SS、MTL）

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組腸道菌群數(shù)量比較

觀察組患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯少于對照組，大腸埃希菌數(shù)量明顯多于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 輕中度組與重度組腸道菌群數(shù)量比較

輕中度組患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯多于重度組，大腸埃希菌數(shù)量明顯少于重度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 觀察組與對照組胃腸激素比較

觀察組患兒的SP、MTL水平明顯低于對照組，VIP、SS水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.4 輕中度組與重度組胃腸激素比較分析

輕中度組患兒的SP、MTL水平明顯高于重度組，VIP、SS水平明顯低于重度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

兒童功能性便秘是兒科門診較常見的一種胃腸道疾病，于經(jīng)濟加速發(fā)展、生活方式不斷變化的趨勢下，該疾病的出現(xiàn)與缺乏運動、飲食結(jié)構(gòu)不合理、遺傳因素、精神因素等密切相關(guān)，造成患兒的胃腸道功能不正常、腸道菌群紊亂[8]。兒童功能性便秘的發(fā)生率呈持續(xù)上升趨勢，發(fā)病的平均年齡為2歲，其中近25%的病患于成人階段會發(fā)生其他消化系統(tǒng)疾病[9-10]。兒童功能性便秘的發(fā)病機制、病因十分復(fù)雜，患兒于臨床上的表現(xiàn)具有多樣性，如排便不盡、排便持續(xù)性較差等，極易影響患兒的生活質(zhì)量[11]。如果患兒長時間服用瀉藥，則有可能引起藥物依賴、電解質(zhì)紊亂及大便失禁等狀況[12]。2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843

相關(guān)文獻顯示，選擇實時熒光定量PCR對功能性便秘患兒糞便標(biāo)本內(nèi)的乳桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、腸桿菌的數(shù)量進行檢測，結(jié)果顯示其乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯少于正常兒童，腸球菌、腸桿菌的數(shù)量明顯多于正兒童[13-15]。本研究結(jié)果顯示功能性便秘患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量明顯少于健康體檢兒童，大腸埃希菌數(shù)量明顯多于健康體檢兒童，同時重度功能性便秘患兒的乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量與輕中度患兒相比，數(shù)量明顯減少，大腸埃希菌數(shù)量明顯增多，說明功能性便秘患兒會出現(xiàn)腸道菌群失調(diào)，呈現(xiàn)出益生菌乳桿菌、雙歧桿菌數(shù)量減少，致病菌大腸埃希菌數(shù)量增多，同時隨著疾病的不斷發(fā)展，患兒腸道菌群失調(diào)的程度愈加明顯。

MTL從空腸與十二指腸黏膜中的M細胞中產(chǎn)生，其生理作用主要是引起消化過程中的移形復(fù)合運動，進而對膽管與胃腸道的運動實施刺激，使食管下括約肌的張力提高，促進胃排空并使小腸轉(zhuǎn)運時間縮短，血液循環(huán)內(nèi)MTL的水平同胃腸道收縮有關(guān)[16-17]。本研究顯示功能性便秘患兒的MTL水平明顯低于健康體檢兒童，此結(jié)果的原因可能是消化道平滑肌的張力降低、蠕動減弱，從而延長傳輸時間，最終引發(fā)便秘。SP為速激肽家族中的一員，由胃腸中的分泌細胞與神經(jīng)細胞生產(chǎn)并分泌，其生理作用主要是加速括約肌與平滑肌的收縮，參與痛覺反射刺激使膽囊受到刺激并收縮[18]。SS屬于腦腸肽類激素之一，由胃腸黏膜D細胞產(chǎn)生，其生理作用主要是通過抑制內(nèi)外分泌功能，從而抑制膽囊的收縮與胃腸道的蠕動，進而減少腸道營養(yǎng)成分、水電解質(zhì)的吸收[19]。VIP主要于消化道細胞DI內(nèi)分布，屬于非腎上腺素之一，其生理作用主要是通過對胃腸道的括約肌與平滑肌進行抑制，進而對膽囊收縮及胃蠕動實施抑制，也可以促進腸液分泌，使胰腺受到刺激而分泌碳酸氫鹽[20]。本研究的結(jié)果顯示，功能性便秘患兒的SP、MTL水平明顯低于健康體檢兒童，VIP、SS水平明顯高于健康體檢兒童，同時重度功能性便秘患兒的SP、MTL水平同輕中度患兒比較明顯高，VIP、SS水平明顯低，說明功能性便秘患兒會引發(fā)胃腸激素分泌不正常，隨著疾病的不斷發(fā)展，患兒胃腸激素分泌不正常的程度更加明顯。

綜上所述，兒童功能性便秘會造成腸道菌群失調(diào)及胃腸激素分泌不正常，同時病情越嚴重，腸道菌群失調(diào)及胃腸激素分泌不正常越明顯。

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（收稿日期：2021-05-18）2A8C9683-8A9E-46B4-8DE6-41F3EACD5843