代紅梅，劉志朋，張 霞，霍海龍，王 配，趙 筱，霍金龍

（1. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2. 呂梁學(xué)院 生命科學(xué)系，山西 呂梁 033001；3. 云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650212）

極光激酶C（AURKC）屬于絲氨酸/ 蘇氨酸極光激酶（Aurora）家族成員，是雄性生殖細(xì)胞減數(shù)分裂過程中紡錘體形成的必需酶，該家族由控制染色體分離和濃縮、中心體復(fù)制、G2/M 期轉(zhuǎn)換、著絲粒附著和胞質(zhì)分裂的調(diào)節(jié)因子組成［1］，包括AURKA、AURKB 和AURKC 3 個(gè)成員，屬于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)酶，能確保細(xì)胞分裂過程中染色體分離和紡錘體形成的正常進(jìn)行，并且在減數(shù)分裂過程中調(diào)節(jié)聯(lián)會復(fù)合體的動力［2］。該家族的3 個(gè)成員之間有60%以上的氨基酸序列同源性，但每種蛋白質(zhì)在細(xì)胞中特定的定位模式和獨(dú)特的功能又有所不同［3］。與在多組織中廣泛表達(dá)的AURKA 和AURKB 不同，AURKC 主要在睪丸中高表達(dá)，在肺、骨骼、卵巢和血液白細(xì)胞中弱表達(dá)［4］，AURKC 在減數(shù)分裂中期定位于著絲粒和染色體，在后期則定位于紡錘體中帶和中間體［5］，是減數(shù)分裂期間染色體正確排列和分離的必需因子，在分裂期間的紡錘體形成中起關(guān)鍵作用，并在減數(shù)分裂過程中紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)中發(fā)揮作用，輔助染色質(zhì)在減數(shù)分裂期間的濃縮和分離［6］。AURKC 也是染色體乘客復(fù)合體（Chromosomal passenger complex，CPC）的一個(gè)重要組成部分，它能結(jié)合染色體乘客復(fù)合體亞基并在絲氨酸殘基上磷酸化組蛋白H3，從而調(diào)節(jié)染色體的濃縮和胞質(zhì)分裂，以確保減數(shù)分裂中染色體和微管之間的正確結(jié)合［7］。在雄性小鼠中敲除AURKC，小鼠的睪丸重量和精子數(shù)量正常，但精子易發(fā)生頭部變鈍、頂體丟失、染色質(zhì)凝聚異常等缺陷，小鼠生育力明顯下降［8］。睪丸中的AURKC可調(diào)節(jié)精子細(xì)胞的分裂，確保每一個(gè)新的精子細(xì)胞的形態(tài)正常并包含每條染色體的一個(gè)拷貝，在精子發(fā)生中，AURKC基因突變會產(chǎn)生無活性或可快速降解的蛋白質(zhì)，缺乏正常的AURKC蛋白會使精子細(xì)胞的分裂受阻，引起人類大頭精子癥，進(jìn)而導(dǎo)致男性原發(fā)性不育［9］。AURKC的異常表達(dá)還能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定并引發(fā)惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化，其在人體組織中過表達(dá)會導(dǎo)致癌細(xì)胞的非典型有絲分裂，驅(qū)動許多癌細(xì)胞系的腫瘤發(fā)生［10］。

版納微型豬近交系（Banna mini-pig inbred line,BMI），已利用全同胞和親子交配的高度近交方式繁育41 年，是云南農(nóng)業(yè)大學(xué)培育的大型近交系哺乳動物模型［11］。本研究以BMI 睪丸為研究材料，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，獲得AURKC基因的表達(dá)水平；克隆BMIAURKC基因的編碼區(qū)序列，分析其基因的分子特征，檢測編碼區(qū)序列是否存在SNP；獲悉AURKC 蛋白質(zhì)的基本特性，挖掘AURKC 蛋白的互作蛋白；并通過注釋AURKC基因，構(gòu)建其ceRNA 轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為進(jìn)一步研究AURKC基因在BMI 精子發(fā)生中的作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

BMI 12月齡成年公豬4頭，去勢取睪丸組織樣品。

1.2 轉(zhuǎn)錄組測序及AURKC 基因表達(dá)量分析

對4 個(gè)BMI 睪丸組織樣品構(gòu)建文庫，利用Illumina Hiseq 4000 平 臺 進(jìn) 行RNA-seq 測 序，利用Illumina novaseq 6000 平 臺 進(jìn) 行small RNA 測序。利用fastp 軟件對RNA-seq 原始數(shù)據(jù)質(zhì)控并過濾低質(zhì)量數(shù)據(jù)，使用bowtie2-2.1.0 比對工具將過濾好的數(shù)據(jù)比對到豬核糖體參考序列，并去除比對到核糖體的序列。從Ensembl 網(wǎng)站下載豬參考基因組（Sus scrofa 11.1）和注釋文件（gtf 11.1），使用STAR-2.5.2a 軟件構(gòu)建參考基因組的索引，并將已去除核糖體序列的數(shù)據(jù)與豬參考基因組比對。用featureCounts-2.0.1 軟件 和salmon-1.5.1 軟件進(jìn)行表達(dá)量計(jì)算，得到AURKC基因的原始表達(dá)量和TPM 值校正表達(dá)量。對small RNA 原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控，利用bowtie 軟件去除樣本中的rRNA、tRNA、snRNA 和snoRNA，把剩余的clean reads 與miRBase 數(shù)據(jù)庫中所有物種的前體miRNA 和成熟的miRNA 序列進(jìn)行比對，獲得樣本中miRNA 的表達(dá)量值。

1.3 基因擴(kuò)增及序列測定

根 據(jù)AURKC轉(zhuǎn) 錄 組 數(shù) 據(jù) 釣 取 到Ensembl 數(shù) 據(jù) 庫 對 應(yīng) 的 豬AURKC轉(zhuǎn) 錄 本ENSSSCT00000051895.2，利用該轉(zhuǎn)錄本序列設(shè)計(jì)特異性引物（F: CCCTTCTCAGGATCACCCA；R:AGACAGATGAGATACCAGAGC），以BMI 睪 丸cDNA 為模板擴(kuò)增AURKC基因全長編碼區(qū)。反應(yīng)體系25 μL：Premix TaqTM version 2.0 12.5 μL，10 μmol/LAURKC上下游引物F/R 各1 μL，25 ng/μL cDNA 1 μL，H2O 9.5 μL；擴(kuò)增程序：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 45 s，72 ℃ 2 min，30 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物送昆明擎科生物公司測序。

1.4 AURKC 功能分析

利用Lasergene7.1 校對測序的AURKC序列；利用NCBI 的ORFfinder 工具對AURKC的開放閱讀框進(jìn)行查找分析；用ProtParam 程序預(yù)測AURKC蛋白質(zhì)的分子量、分子式、等電點(diǎn)、正負(fù)電荷殘基數(shù)；AURKC 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)、疏水結(jié)構(gòu)和功能位點(diǎn)分別使用SOPMA、Swiss-model、ProtScale 和Prosite 預(yù) 測； 使 用TMHMM 2.0 和SignalP 5.0 分別預(yù)測AURKC 蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)和信號肽；使用MEGA7 構(gòu)建AURKC 蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹；使用Weblogo 工具對結(jié)構(gòu)域區(qū)的氨基酸序列進(jìn)行多物種保守性分析；用String v11.0b 進(jìn)行蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析；通過Ensembl 數(shù)據(jù)庫下載其它豬種的AURKC基因編碼區(qū)序列并與BMI 進(jìn)行比對。

1.5 AURKC 的功能注釋和ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

利 用Uniprot 進(jìn) 行GO（Gene Ontology） 注釋；利用已獲得的豬RNA-seq 數(shù)據(jù)進(jìn)行miRNA 和lncRNA 表達(dá)分析；利用miRanda 3.3 和RNAhybrid 2.1.2 軟 件 挖 掘 潛 在 調(diào) 控AURKC的miRNA 和lncRNA，用Cytoscape 3.8.2 繪制可視化網(wǎng)絡(luò)圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 AURKC 基因及氨基酸結(jié)構(gòu)信息

RNA-seq 測序分析結(jié)果顯示，每個(gè)樣品獲得6 Gb clean data，平均測序深度為38.6 百萬reads；比對率均在96%以上，共注釋到17 040 個(gè)編碼基因、63 023 個(gè) 轉(zhuǎn) 錄 本 和9 342 個(gè)lncRNA。Small RNAseq 測序分析結(jié)果顯示，每個(gè)樣品均獲得了10 M 以上的clean data，平均測序深度為14.7 百萬reads，注釋到成熟的miRNA 共458 個(gè)。其中AURKC基因在BMI 睪丸中的原始平均表達(dá)量為721.25，其對應(yīng)Ensembl 網(wǎng)站的轉(zhuǎn)錄本ENSSSCT00000051895.2 的平均表達(dá)量（TPM）值為18.37。利用AURKC-F/R 引物擴(kuò)增BMIAURKC基因的完整編碼區(qū)（CDS）及部分非編碼區(qū)（UTR），獲得1 063 bp 長的產(chǎn)物（圖1A）。AURKC基因CDS 序列長894 bp，編碼297個(gè)氨基酸（圖1B）。該基因定位于豬（Sscrofa11.1）6 號染色體，全長5 464 bp，Ensembl 網(wǎng)站分析發(fā)現(xiàn)包含7 個(gè)外顯子和6 個(gè)內(nèi)含子，AURKC 蛋白含有STKc_Aurora-B_like 保守結(jié)構(gòu)域（圖1C）。

圖1 AURKC 基因結(jié)構(gòu)Fig. 1 Gene structure of AURKC

2.2 BMI AURKC 蛋白質(zhì)序列及結(jié)構(gòu)分析

豬AURKC 蛋白質(zhì)分子量34.2 kD，分子式C1539H2445N435O431S9，等電點(diǎn)8.93，負(fù)電荷殘基數(shù)為36，正電荷殘基數(shù)為41，為堿性氨基酸。AURKC蛋白質(zhì)297 個(gè)氨基酸的二級結(jié)構(gòu)中無規(guī)則卷曲占比最大（38.05%），包含113 個(gè)氨基酸；α 螺旋次之（36.36%），包含108 個(gè)氨基酸；延伸鏈占18.52%，包含55 個(gè)氨基酸；β 轉(zhuǎn)角最少，僅占7.07%，有21 個(gè)氨基酸（圖2A）。利用SWISSMODEL 構(gòu)建三級結(jié)構(gòu)可知，AURKC 三級結(jié)構(gòu)與二級結(jié)構(gòu)相似，主要包含無規(guī)則卷曲、α 螺旋、延伸鏈和β 轉(zhuǎn)角（圖2B）。蛋白質(zhì)的第59 位氨基酸具有最大疏水值2.667，第234 位氨基酸處具有最小疏水值-2.224，N 端親水、C 端疏水。含1 個(gè)蛋白質(zhì)功能域S_TKc，含有酶磷酸化活化位點(diǎn)，無亮氨酸富集的核輸出信號、無跨膜結(jié)構(gòu)域，無信號肽。

圖2 AURKC 蛋白的空間結(jié)構(gòu)Fig. 2 The spatial structure of AURKC protein

2.3 AURKC 基因的保守性及系統(tǒng)進(jìn)化分析

將BMIAURKC基因的CDS 序列與野豬（ENSSSCT00000051895.2）、大白豬（ENSSSCT 00025104349.1）、 長 白 豬（ENSSSCT000450640 29.1）、巴 克 夏 豬（ENSSSCT00065011958.1）、漢普夏豬（ENSSS CT00035013414.1）、皮特蘭豬（ENSSSCT00055002061.1）、八眉豬（ENSSSCT000 50027876.1）、金華豬（ENSSSCT00060104185.1）、梅 山 豬（ENSSSCT00040097989.1）、 榮 昌 豬（ENSSSCT00030011616.1）、藏豬（ENSSSCT00 015108641.1）等11 個(gè)豬品種AURKC的CDS 序列進(jìn)行比對，未發(fā)現(xiàn)AURKC基因CDS 序列在不同品種豬間存在差異位點(diǎn)。20 個(gè)哺乳動物AURKC 氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)，BMI 與馬的相似度最高（91.9%），其次為雙峰駱駝（91.6%）、羊駝（90.4%）、北海獅（90.4%）、北海狗（90.1%）、海豹（89.8%）、北極狐（89.8%）、黑猩猩（87.7%）、人（87.4%）、貓（87.4%）、孟加拉虎（87.1%）、非洲獅（87.1%）、狒狒（85.6%）、綠猴（85.3%）、山羊（84.1%）、牛（82.9%）、綿羊（77.2%）、大鼠（76.3%），與小鼠的相似性最低（69.5%）。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，BMI 與馬、雙峰駱駝、羊駝聚為一支（圖3A）。通過構(gòu)建20 個(gè)哺乳動物AURKC 保守結(jié)構(gòu)域S_TKc的Weblogo 圖發(fā)現(xiàn)AURKC 在物種間較為保守（圖3B），20 種哺乳動物間共有86 個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)；除大鼠、小鼠外，其他18 種哺乳動物間有57 個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)（圖3C）。

圖3 20 種哺乳動物AURKC 的氨基酸序列分析Fig. 3 Amino acid sequences analysis of AURKC from 20 mammals

2.4 AURKC 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析顯示豬AURKC 與10 個(gè)蛋白可能存在相互作用，包括AURKB、BIRC5、INCENP、CDCA8、NDC80、BUB3、CENPA、TACC2、KIF11 和HIST2H3PS2，其 中 與AURKB蛋白相互作用最為密切，與BIRC5、INCENP、CDCA8、NDC80、BUB3 相互作用較為密切（見圖4）。

圖4 AURKC 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)Fig.4 Interacting network of AURKC protein

2.5 豬AURKC 功能注釋及ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

分析AURKC的注釋結(jié)果共發(fā)現(xiàn)26 個(gè)GO：在生物學(xué)過程（Biological process），主要涉及調(diào)節(jié)胞質(zhì)分裂、有絲分裂、精子生成、蛋白質(zhì)磷酸化、減數(shù)分裂、紡錘體中央組裝、卵母細(xì)胞發(fā)育、磷酸化、細(xì)胞分裂、細(xì)胞周期、組蛋白-絲氨酸磷酸化等11個(gè)GO；在細(xì)胞組分（Cellular component），主要涉及濃縮染色體、紡錘體中央、紡錘體微管、中心體、染色體過客復(fù)合體、中間體等6 個(gè)GO；在分子功能（Molecular function）方面，主要涉及一系列蛋白激酶活性以及ATP 結(jié)合和核苷酸結(jié)合等9 個(gè)GO（見圖5）。

miRNAs 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)，BMIAURKC受4個(gè)miRNAs（ssc-miR-28-3p、ssc-miR-202-3p、ssc-miR-1296-5p 和ssc-miR-361-5p）靶向調(diào)控；有1 個(gè)lncRNA 與AURKC競爭性結(jié)合ssc-miR-28-3p，有2 個(gè)lncRNAs 與AURKC競 爭 性 結(jié) 合sscmiR-202-3p，有6 個(gè)lncRNAs 與AURKC競 爭 性結(jié)合ssc-miR-1296-5p，有1 個(gè)lncRNA 與AURKC競爭性結(jié)合ssc-miR-361-5p（見圖5）。

圖5 豬AURKC 的功能注釋及ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)Fig.5 Functional annotation of porcine AURKC and ceRNA regulatory network

3 結(jié)論與討論

3.1 BMI AURKC 序列特征及與其他物種的進(jìn)化關(guān)系

本研究通過睪丸轉(zhuǎn)錄組測序獲得了BMI 睪丸中AURKC基因的表達(dá)量，獲悉了其對應(yīng)Ensembl 數(shù)據(jù)庫的轉(zhuǎn)錄本為ENSSSCT00000051895.2；利用BMI睪丸cDNA 擴(kuò)增獲得了AURKC基因序列1 063 bp，其中CDS 序列894 bp，編碼297 個(gè)氨基酸，序列提交GenBank 獲得基因登錄號為OK042305。蛋白功能域預(yù)測發(fā)現(xiàn)，AURKC 蛋白包含S_TKc 結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶催化結(jié)構(gòu)域，從原核生物的大腸桿菌到真核生物的人類都較為保守，特別其催化亞基更高度保守［12］，表明AURKC蛋白功能在物種間較為保守。氨基酸序列比對發(fā)現(xiàn)BMI 與馬、雙峰駱駝、羊駝、北海獅、北海狗的相似度均在90%以上，與除綿羊、大鼠、小鼠外的其它哺乳動物的相似度均大于80%。在進(jìn)化上BMI與馬、雙峰駱駝、羊駝的親緣關(guān)系較近，說明BMI AURKC 與其他哺乳動物在進(jìn)化上具有高度的保守性和序列同源性。

3.2 AURKC 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)AURKC 與AURKB、BIRC5、INCENP、CDCA8、NDC80、BUB3、CENPA、TACC2、KIF11、HIST2H3PS2 等10 個(gè)蛋白存在相互作用，其中與AURKB 的相互作用最密切，AURKB 和AURKC 在功能上能相互補(bǔ)償，從而確保哺乳動物正常的精子發(fā)生，在雄性小鼠中，雙敲AURKB和AURKC后，會導(dǎo)致精母細(xì)胞無法協(xié)調(diào)聯(lián)會復(fù)合體側(cè)向元件的分解與染色體的濃縮和分離，進(jìn)而影響了減數(shù)分裂的進(jìn)程［2］。AURKC 和AURKB 通過與IN box 結(jié)構(gòu)域的相互作用和磷酸化穩(wěn)定內(nèi)著絲粒蛋白（INCENP），確保染色體的正常分離［13］，此外，AURKB 可通過負(fù)調(diào)控AURKC 來防止非整倍體的產(chǎn)生，而AURKC 可挽救AURKB沉默的多核表型［14］。BIRC5 是凋亡抑制蛋白IAP家族成員，可影響細(xì)胞分裂、增殖并抑制細(xì)胞凋亡，其作為染色體乘客復(fù)合物（CPC）的組成成分，通過與AURKC 相互作用在G2/M 期調(diào)節(jié)微管的動力并促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂［13］。INCENP 與BIRC5 一樣可作為CPC 的一個(gè)組成部分，不僅可靶向著絲粒，而且可與AURKB 形成復(fù)合物，在有絲分裂期間協(xié)調(diào)染色體分離、紡錘體出現(xiàn)和胞質(zhì)分裂［15］。CDCA8 也是脊椎動物CPC 的重要組成部分，與減數(shù)分裂期間紡錘體的形成和染色體的分離密切相關(guān)，在腫瘤發(fā)生中起調(diào)節(jié)作用，其高表達(dá)與多種癌癥的發(fā)生、侵襲相關(guān)，是多種癌癥潛在預(yù)后的生物標(biāo)志物［16］。NDC80 是位于動粒外層的異源四聚體蛋白復(fù)合物，在有絲分裂中起關(guān)鍵作用，NDC80 磷酸化影響其獨(dú)立于微管的降解，進(jìn)而影響動粒蛋白的降解［17］。BUB3 是有絲分裂紡錘體組裝復(fù)合體的保守組分，還是早期胚胎發(fā)生過程中紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)激活通路的重要部分，在維持哺乳動物卵母細(xì)胞中染色體的正確分離和染色體的穩(wěn)定性方面起重要作用［18］。CENPA 位于活性著絲粒上，能影響動粒形成和染色體分離，CENPA 核小體是著絲粒活躍的表觀遺傳標(biāo)記［19］。TACC2 在促進(jìn)細(xì)胞分裂和維持有絲分裂中染色質(zhì)的穩(wěn)定性方面發(fā)揮作用，TACC2 還是雄激素調(diào)節(jié)基因，通過調(diào)節(jié)有絲分裂的細(xì)胞周期來促進(jìn)前列腺癌的細(xì)胞增殖，是前列腺癌和乳腺癌中的促癌因子［20］。KIF11 不僅是一種有絲分裂調(diào)節(jié)器，還是維持兩極紡錘體有絲分裂的驅(qū)動蛋白，能在有絲分裂后介導(dǎo)中心體遷移并移動高爾基體［21］。

3.3 AURKC 基因突變與精子畸形癥

AURKC的突變會引起人類罕見的大頭精子癥，Dieterich 等［9］研究發(fā)現(xiàn)，AURKC外顯子3 中的C.144delc 純合突變產(chǎn)生了移碼突變，致使AURKC翻譯提前終止，最終生成了具有不完全催化結(jié)構(gòu)域的無功能截短蛋白質(zhì)，從而導(dǎo)致了大頭精子癥。Ben Khelifa 等［6］發(fā)現(xiàn)AURKC外顯子6 中的無義突變c.744C＞G（p.Y248*）與C.144delc 具有相似的效果，會導(dǎo)致AURKC蛋白質(zhì)功能缺失。Dieterich等［22］發(fā)現(xiàn)AURKC 外顯子6 的錯(cuò)義突變c.686G＞A（p.C229Y）雖然沒有前面2 個(gè)突變嚴(yán)重，可以保留AURKC的部分功能，但不足以支持減數(shù)分裂的進(jìn)程。Ben Khelifa 等［23］發(fā)現(xiàn)位于AURKC外顯子5 的受體共剪接位點(diǎn)的雜合突變c.436-2A＞G，會導(dǎo)致第5 外顯子跳躍，進(jìn)而產(chǎn)生缺乏部分S_TKc 結(jié)構(gòu)域的截短蛋白。Hua 等［24］發(fā)現(xiàn)位于AURKC外顯子3 的純合錯(cuò)義突變c.269G＞A 與大頭精子癥相關(guān)。BMIAURKC基因編碼區(qū)與野豬、大白豬、長白豬、巴克夏豬、漢普夏豬、皮特蘭豬、八眉豬、金華豬、梅山豬、榮昌豬、藏豬等11 個(gè)豬品種進(jìn)行比對未發(fā)現(xiàn)變異位點(diǎn)，表明BMI 雄性不育及大頭精子不是由AURKC基因編碼區(qū)序列突變引起，可能由于表達(dá)差異、轉(zhuǎn)錄及翻譯后修飾或者其他基因異常所引起，有待進(jìn)一步研究。

3.4 AURKC 相關(guān)ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

對BMIAURKC基因功能注釋及構(gòu)建ceRNA 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖發(fā)現(xiàn)，有4 個(gè)miRNAs 靶向調(diào)控AURKC，分別是ssc-miR-28-3p、ssc-miR-202-3p、ssc-miR-1296-5p 和ssc-miR-361-5p。miRNA 是高度保守的內(nèi)源性小非編碼RNA，可以在轉(zhuǎn)錄后或翻譯水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)，它沒有開放閱讀框（ORF），也不編碼蛋白質(zhì)，主要通過與其靶標(biāo)mRNA 的3'UTR 結(jié)合來干擾基因表達(dá)，且miRNA 在物種間高度保守。sscmiR-28-3p 屬于mir-28 家族，參與磷脂酰肌醇信號通路，與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)［25］。ssc-miR-202-3p 能通過靶向Wnt/β-catenin 信號通路的LRP6和Cyclin D1調(diào)控細(xì)胞的增殖和凋亡，從而決定細(xì)胞的命運(yùn)［26］；miR-202 在雄性小鼠精原干細(xì)胞中是細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)控因子，敲除miR-202 能夠加速細(xì)胞周期進(jìn)程，引起分化后的精原細(xì)胞大幅度凋亡［27］。ssc-miR-1296-5p 位于豬miR-1296 的5’臂，可通過靶向DDIT4基因作用于mTOR 和PI3K-Akt 信號通路［28］。ssc-miR-361-5p 位于ssc-miR-361 的5’臂，可通過靶向信號傳感器和轉(zhuǎn)錄激活因子6（STAT6）在前列腺癌中發(fā)揮抑癌作用［29］。這4 個(gè)miRNAs 的發(fā)現(xiàn)為BMIAURKC基因進(jìn)一步的功能研究指明了方向。