戴超然，劉希茹，趙 玲△

1 上海中醫(yī)藥大學，上海 201203；2 上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院，

關節(jié)炎（arthritis）是關節(jié)及關節(jié)周圍組織，因炎癥、感染、創(chuàng)傷、退化或其他因素引起的炎性疾病。針刺鎮(zhèn)痛是臨床常用的減緩關節(jié)炎患者痛苦的方法。痛閾、對疼痛的敏感性和耐受性對針刺鎮(zhèn)痛效果有著重要影響，目前研究表明不同性別間的痛閾、對疼痛的敏感性和耐受性有明顯差異[1-2］。疼痛差異的機制可能與性激素、內源性鎮(zhèn)痛系統(tǒng)、大腦結構和功能以及社會心理因素等有關。因此性別差異是針刺鎮(zhèn)痛中需要考慮的因素。

佐劑關節(jié)炎（adjuvant-induced Arthritis，AA）大鼠模型在臨床表現(xiàn)、病理機制等方面與人類關節(jié)炎有許多相似之處，是研究電針對人類關節(jié)炎鎮(zhèn)痛作用的理想動物模型[3］。本文成功建立AA大鼠模型，通過探究性別因素對電針治療無束縛狀態(tài)下AA 大鼠的鎮(zhèn)痛作用的影響，為臨床電針治療提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物選擇40 只健康SD 大鼠，雌雄各半，體質量190～220 g，由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：SCXK（浙）2019-0001。飼養(yǎng)條件：環(huán)境溫度（22±2）℃，相對濕度53%～57%，12 h光照，自由攝食飲水。

1.2 儀器與試劑韓式HANS-100B 疼痛治療儀（上海聚慕醫(yī)療器械有限公司）；JLBehv-CPP 位置偏愛分析系統(tǒng)（曠場實驗箱）（上海欣軟信息技術有限公司）；電子稱（上海香川電子衡器有限公司）。10%戊巴比妥鈉（上海氟德化工有限公司，批號：860901）；弗氏（Freud's）完全佐劑（Sigma-Aldrich LLC，批號：sigmaF5881）；0.25×25 mm 無菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，蘇械批注：20162270970）。

1.3 實驗方法

1.3.1 造模及分組 實驗開始時，將雌、雄各20只大鼠（雌雄各取1 只做預實驗）分別按隨機數(shù)字表法分為3 組?？瞻讓φ战M6 只，模型對照組7只，治療組7 只。除空白對照組外，其余兩組制備AA 大鼠模型：于實驗第1 天向大鼠腹腔注射10%戊巴比妥鈉，雄性1.5 mL，雌性1.2 mL，待完全麻醉后，在大鼠左后足由足墊部向外踝關節(jié)方向注入弗氏（Freud's）完全佐劑0.1 mL[4］，完成后將大鼠放回對應鼠籠。造模成功表現(xiàn)：28只AA大鼠在造模完成后，踝關節(jié)較之前明顯腫脹，行動困難且行動意愿降低。

1.3.2 處理方法 實驗第3 天，將空白對照組及模型對照組大鼠置于治療箱內20 min，不進行治療。治療組采用無束縛針刺，取雙側后三里（膝關節(jié)后外側，腓骨小頭下約5 mm），用0.25×25 mm毫針，直刺7 mm，連接韓式HANS-100B 疼痛治療儀，選用連續(xù)波，頻率100 Hz，電壓以大鼠耐受為度，治療20 min，后持續(xù)治療10天。

1.4 觀察指標以大鼠在曠場實驗箱內活動的總路程和活動時間來判定大鼠疼痛程度。將大鼠放入曠場內，保持周圍環(huán)境安靜，連接計算機，記錄15 min 內大鼠活動軌跡，每次4 只大鼠。在每只大鼠實驗后，用酒精噴灑清潔實驗箱后通風換氣，以防嗅覺暗示傳遞給下一只大鼠。記錄完畢后，用位置偏愛分析系統(tǒng)軟件計算大鼠活動總路程、總時間、邊路路程及邊路時間。

1.5 統(tǒng)計學方法采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以xˉ±s表示，與篩選期基礎值進行比較，采用Wilcoxon 秩和檢驗，組內采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

曠場實驗指標 1）與空白對照組比較，模型對照組大鼠自發(fā)活動總路程、總時間，自發(fā)活動邊路路程及邊路時間均減少（P＜0.05）。2）與模型對照組比較，雌性治療組大鼠自發(fā)自發(fā)活動總路程及總時間，自發(fā)活動邊路路程及邊路時間均增加（P＜0.05），且增加程度大于雄性治療組大鼠（P＜0.05）。3）雄性治療組大鼠自發(fā)活動邊路路程模型小于模型對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），自發(fā)邊路時間多于模型對照組（P＜0.05）。見表1—2。

表1 3組不同性別大鼠曠場自發(fā)活動總路程及總時間比較（xˉ±s）

表2 3組不同性別大鼠曠場自發(fā)活動邊路路程及邊路時間比較（xˉ±s）

3 討論

3.1 穴位選擇穴位電刺激在全身均可產生一定程度的鎮(zhèn)痛效應，且相關穴位的研究探討與日俱增。隨著研究進展的日益豐富[5-7］，研究者發(fā)現(xiàn)在炎性疼痛病癥治療時，針灸對其鎮(zhèn)痛效果存在選穴的相對特異性，以疼痛局部或鄰近穴位效果為佳[8-9］。足三里靠近大鼠關節(jié)炎發(fā)生位置，具有強壯身心的作用。寧云等[10］在對3組單發(fā)性AA多次100 Hz TENS 治療中觀察到不論急性期或穩(wěn)定期，足三里穴位刺激組背屈評分較對照組明顯降低。AA 大鼠模型既有關節(jié)的局部炎癥反應，又有諸如大鼠精神萎靡、毛發(fā)失去光澤、體質量下降、耳朵、鼻和尾根部出現(xiàn)“關節(jié)炎”結節(jié)等全身癥狀表現(xiàn)[11］。故綜合上述考量，筆者電針治療時選擇大鼠后三里穴位。

3.2 觀察指標的選擇在曠場內，是以大鼠總運動距離、活動時間等新指標進行觀察，從而避免了因傳統(tǒng)人為觀察手工記錄所造成的標準不一致性、主觀性程度大、費時費力等缺點，能夠更直接地反應動物的興奮程度，也能取得更加真實準確的實驗數(shù)據(jù)[12］。

3.3 使用無束縛法針刺的原因在傳統(tǒng)針刺鎮(zhèn)痛實驗中，研究者幾乎都傾向于針刺本身就是一種強烈的軀體刺激，所以一般實驗動物在治療過程中必須被抑制或麻醉[13-15］。麻醉劑或抑制誘導的應激往往伴隨著復雜的激素反應模式和中樞神經系統(tǒng)的功能變化[16-20］。而本次實驗采取的無束縛針刺治療法對于動物在接受治療時的狀態(tài)也能進行控制，可以排除以往抑制、麻醉等刺激對實驗結果的干擾，得出更能夠準確反映鎮(zhèn)痛效果的結果。

3.4 性別因素對AA 大鼠曠場數(shù)據(jù)的影響李甲文[21］發(fā)現(xiàn)雌性大鼠100 Hz電針的鎮(zhèn)痛作用強于雄性大鼠，這種差異以電針20 min時最為顯著，后將這種差異的形成原因指向了中樞神經系統(tǒng)的差異。

本實驗數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，不同性別大鼠電針治療效果相互對比，對大鼠在曠場內自發(fā)活動總路程、時間和邊路路程的改善程度有明顯差異，邊路時間改善程度有輕微差異。得出100Hz 電針無束縛針刺AA 大鼠的鎮(zhèn)痛效果中，雌性大鼠的療效要優(yōu)于雄性大鼠的結論，與查閱的文獻結果相符合。

今后可以繼續(xù)研究性別因素對電針或手針緩解不同種類疼痛的影響，并探求其深層機制。也可進一步研究針刺不同性別大鼠鎮(zhèn)痛的信號通路是否相同，以獲得更好的臨床療效。