基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和生物信息學(xué)的小青龍湯治療哮喘和慢性阻塞性肺疾病的“異病同治”機(jī)制分析

翟芬芬 劉毓菲 張傳濤 楊洋 黃青松 高培陽(yáng) 陳新

〔摘要〕 目的 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與生物信息學(xué)研究方法，探討小青龍湯治療慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease， COPD）和哮喘“異病同治”的療效及其作用機(jī)制。方法 通過(guò)ETCM數(shù)據(jù)庫(kù)、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)搜集小青龍湯治療COPD和哮喘的作用靶點(diǎn)。通過(guò)STRING 11.0分析作用靶點(diǎn)之間的相互關(guān)系，運(yùn)用cytoNCA和MCODE插件篩選出核心作用靶點(diǎn)。使用ClueGO和DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)作用靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析和GO功能分析。在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)下載COPD和哮喘的基因芯片，運(yùn)用R語(yǔ)言sav包去批次效應(yīng)后驗(yàn)證核心作用靶點(diǎn)是否差異表達(dá)，并對(duì)差異表達(dá)明顯的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。結(jié)果 共篩選出小青龍湯治療COPD和哮喘的作用靶點(diǎn)95個(gè)，篩選出19個(gè)核心作用靶點(diǎn)。富集分析結(jié)果顯示共涉及82條信號(hào)通路及120種生物過(guò)程、16種分子功能、21種細(xì)胞組分。GEO芯片驗(yàn)證顯示NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1、PTGS2、TLR4、EGF、IL1B、HRAS在COPD和哮喘與健康樣本之間具有明顯的表達(dá)差異，繪制中藥-化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖后，進(jìn)一步對(duì)Degree值前5的靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)有良好的親和力。結(jié)論 小青龍湯主要通過(guò)NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1、PTGS2、TLR4、EGF、IL1B、HRAS等多靶點(diǎn)和TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等途徑發(fā)揮對(duì)COPD與哮喘“異病同治”作用。

〔關(guān)鍵詞〕 小青龍湯;慢性阻塞性肺疾病;哮喘;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);GEO數(shù)據(jù)庫(kù);分子對(duì)接

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R285 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.06.014

Mechanism of "treating different diseases with same method" of Xiaoqinglong Decoction in

treating asthma and chronic obstructive pulmonary disease based on network

pharmacology and bioinformatics

ZHAI Fenfen1， LIU Yufei2， ZHANG Chuantao2*， YANG Yang2， HUANG Qingsong2， GAO Peiyang3， CHEN Xin4

（1. Futian Center for Chronic Disease Control， Shenzhen， Guangdong 518000， China; 2. Department of Respiratory Medicine， Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu， Sichuan 610072， China; 3. Department of

Intensive Care Medicine， Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine， Chengdu， Sichuan 610072， China;

4. Department of Integrated Traditional and Western Medicine， Zigong First People's Hospital， Zigong， Sichuan 643000， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the efficacy and the mechanism of "treating different diseases with same method" of Xiaoqinglong Decoction for chronic obstructive pulmonary disease （COPD） and asthma based on network pharmacology and bioinformatics research methods. Methods The targets of Xiaoqinglong Decoction for COPD and asthma were collected through ETCM database， DisGeNET database， GeneCards database and OMIM database. The interrelationships between the targets were analyzed by STRING 11.0， and the core targets were screened using cytoNCA and MCODE plug-ins. KEGG pathway enrichment analysis and GO functional analysis were performed on the acting targets using ClueGO and DAVID databases. Gene chips for COPD and asthma were downloaded from the GEO database， and the R language sav package was applied to verify whether the core acting targets were differentially expressed after de-batching effect， and molecular docking was performed to verify the core targets with significant differential expression. Results A total of 95 action targets of Xiaoqinglong Decoction for COPD and asthma were screened， and 19 core action targets were screened. The results of enrichment analysis showed that a total of 82 signaling pathways and 120 biological processes， 16 molecular functions and 21 cellular components were involved. The GEO microarray validation showed that NR3C1， HSP90AA1， TNF， CASP3， AKT1， PTGS2， TLR4， EGF， IL1B， HRAS had significant expression between COPD and asthma and healthy samples. After mapping the herbal-compound-target network， further molecular docking of the targets in the top five of Degree showed that the active ingredients had good affinity with the key targets. Conclusion Xiaoqinglong Decoction mainly exerted the effect of "treating different diseases with same method" on COPD and asthma through multiple targets such as NR3C1， HSP90AA1， TNF， CASP3， AKT1， PTGS2， TLR4， EGF， IL1B， HRAS and signaling pathways such as TNF signaling pathway and Toll-like receptor signaling pathway.C6DB3500-88BA-4F5F-91C4-FED76FA56888

〔Keywords〕 Xiaoqinglong Decoction; chronic obstructive pulmonary disease; asthma; network pharmacology; GEO database; molecular docking

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease， COPD）和支氣管哮喘嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。COPD是以持續(xù)氣流受限為特征的一種可防治的疾病，氣流受限多呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對(duì)有害氣體或有害顆粒的炎性反應(yīng)有關(guān)[1]。哮喘是一種由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病[2]，常伴廣泛多變的可逆性氣流受限?！爱惒⊥巍笔侵嗅t(yī)重要的診療特色，小青龍湯可以有效治療COPD與哮喘，這體現(xiàn)了中醫(yī)“異病同治”原則，小青龍湯出自醫(yī)圣張仲景的《傷寒雜病論》，有解表散寒、溫肺化飲之功[3]。臨床研究表明，小青龍湯能夠有效改善COPD與哮喘患者咳嗽、咯痰等臨床癥狀，從而改善肺功能[4-5]。但是小青龍湯治療COPD與哮喘的異病同治分子機(jī)制尚待闡明，因此，本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討小青龍湯“異病同治”對(duì)COPD和哮喘的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 ?小青龍湯的活性成分與靶點(diǎn)收集

小青龍湯含麻黃、桂枝、白芍、細(xì)辛、五味子、干姜、半夏、炙甘草8味中藥。在中醫(yī)藥百科全書(shū)數(shù)據(jù)庫(kù)（ETCM，http：//www.tcmip.cn/ETCM/index.php/Home/Index/）[6]依次檢索有效成分與作用靶點(diǎn)，以可信度

≥0.8為條件進(jìn)行篩選。

1.2 ?COPD和哮喘的疾病靶點(diǎn)收集

利用疾病相關(guān)的基因與突變位點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（DisGeNET，https：//www.disgenet.org/，version 7.0）[7]、人類(lèi)基因數(shù)據(jù)庫(kù)（GeneCards，https：//www.genecards.org/，version 5.0）[8]、人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳綜合數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM，https：//omim.org/），以“Chronic Obstructive Pulmonary Disease”“Asthma”為關(guān)鍵詞檢索相關(guān)靶點(diǎn)，將3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索的靶點(diǎn)整合去重，即為COPD和哮喘的疾病靶點(diǎn)。

1.3 ?小青龍湯治療COPD與哮喘靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

運(yùn)用jvenn在線(xiàn)工具（http：//www.bioinformatics.com.cn/static/others/jvenn/index.html）[9]繪制小青龍藥物靶點(diǎn)與COPD和哮喘疾病靶點(diǎn)韋恩圖。將小青龍-COPD-哮喘的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/，version 11.0），物種選擇“Homo Sapiens”，閾值選擇“Medium Confidence”，進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction， PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，并下載TSV文件。

1.4 ?小青龍湯“異病同治”作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選

將小青龍-COPD-哮喘PPI網(wǎng)絡(luò)的TSV文件導(dǎo)入Cytoscape（version 3.7.2）軟件，使用cytoNCA插件進(jìn)行拓?fù)浞治?，以Degree、Betweenness Centrality、Closeness Centrality、Eigenvector均大于中位數(shù)篩選核心網(wǎng)絡(luò)，并運(yùn)用MCODE插件分析核心網(wǎng)絡(luò)，識(shí)別聯(lián)系緊密的子模塊。選取關(guān)鍵模塊進(jìn)一步分析，并根據(jù)Degree值和連接強(qiáng)度調(diào)整網(wǎng)絡(luò)展示效果。

1.5 ?GO和KEGG富集分析

運(yùn)用Cytoscape軟件的ClueGO插件對(duì)核心網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵模塊進(jìn)行KEGG通路富集分析，運(yùn)用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//david.ncifcrf.gov/tools.jsp）[10]進(jìn)行GO功能富集分析。

1.6 ?GEO芯片驗(yàn)證

在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo）中以“Chronic Obstructive Pulmonary Disease”“Asthma”為關(guān)鍵詞檢索相關(guān)數(shù)據(jù)集。下載COPD和哮喘基因表達(dá)芯片的矩陣文件（Matrix）和平臺(tái)注釋文件（Platforms），使用平臺(tái)注釋文件對(duì)探針進(jìn)行注釋?zhuān)蕹龥](méi)有匹配到基因的探針;對(duì)于不同探針映射到同一基因，則計(jì)算均值作為最終表達(dá)值。運(yùn)用R軟件（version 4.0.3）的sav包進(jìn)行去批次效應(yīng)處理，并進(jìn)行主成分分析（principal component analysis， PCA）評(píng)估批次效應(yīng)是否消除。然后使用ggpubr包繪制核心模塊的基因表達(dá)箱式圖。提取具有表達(dá)差異的靶點(diǎn)繪制藥物-化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.7 ?分子對(duì)接

根據(jù)GEO芯片驗(yàn)證的結(jié)果選取Degree值前5的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，在PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)下載Degree值前5活性成分的SDF文件，在 PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//www1.rcsb.org/）下載靶點(diǎn)蛋白的3D結(jié)構(gòu)，利用PyMOL軟件對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行去水、去小分子配體等操作，然后利用AutoDockTools 1.5.6及AutoDock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。對(duì)接結(jié)果根據(jù)自由能判斷結(jié)合強(qiáng)度，小于-5.0 kcal·mol-1表示有較好的結(jié)合活性，小于-7.0 kcal·mol-1表示有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。

2 結(jié)果

2.1 ?小青龍湯的活性成分與靶點(diǎn)

通過(guò)ETCM檢索，共搜集活性成分：麻黃17個(gè)、芍藥41個(gè)、細(xì)辛7個(gè)、甘草64個(gè)、干姜9個(gè)、桂枝8個(gè)、五味子41個(gè)、半夏21個(gè)，去除重復(fù)項(xiàng)后共獲得小青龍湯活性成分199個(gè)。利用數(shù)據(jù)庫(kù)中靶點(diǎn)預(yù)測(cè)功能，對(duì)上述活性成分進(jìn)行作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)，去除重復(fù)項(xiàng)后共獲得小青龍湯靶點(diǎn)581個(gè)。C6DB3500-88BA-4F5F-91C4-FED76FA56888

2.2 ?COPD和哮喘的靶點(diǎn)

以“Chronic Obstructive Pulmonary Disease”為關(guān)鍵詞在DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索到相關(guān)基因1428個(gè)、2842個(gè)、536個(gè);以“Asthma”為關(guān)鍵詞在DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索到相關(guān)基因2096個(gè)、5057個(gè)、42個(gè);在各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)基因以Score評(píng)分≥中位數(shù)為條件進(jìn)行篩選，最終整合去重后獲得COPD靶點(diǎn)2494個(gè)、哮喘靶點(diǎn)3007個(gè)。

2.3 ?PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

通過(guò)作圖工具jvenn將小青龍湯作用靶點(diǎn)和COPD、哮喘疾病靶點(diǎn)繪制韋恩圖（圖1）。獲得小青龍湯與COPD共同靶點(diǎn)133個(gè)，小青龍湯與哮喘共同靶點(diǎn)189個(gè)，COPD與哮喘共同靶點(diǎn)998個(gè)，小青龍湯與COPD和哮喘的共同靶點(diǎn)95個(gè)。將COPD與哮喘共同靶點(diǎn)、小青龍湯與COPD和哮喘的共同靶點(diǎn)上傳STRING數(shù)據(jù)庫(kù)，物種選擇“Homo Sapiens”，閾值選擇“medium confidence”，網(wǎng)絡(luò)展示選擇“hide disconnected nodes in the network”，得出共有靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)。

2.4 ?小青龍湯“異病同治”作用的PPI構(gòu)建與模塊分析

將PPI網(wǎng)絡(luò)的TSV文件導(dǎo)入Cytoscape軟件，根據(jù)Degree、Betweenness Centrality、Closeness Centrality和Eigenvector拓?fù)浞治龊螳@得一個(gè)具有32個(gè)節(jié)點(diǎn)、289條邊的核心網(wǎng)絡(luò)，使用MCODE插件分析獲得1個(gè)聯(lián)系緊密的子模塊，Score為17.333，包含19個(gè)節(jié)點(diǎn)、156條邊;其余節(jié)點(diǎn)未能構(gòu)成模塊。選取子模塊進(jìn)一步分析，以Degree值和連接強(qiáng)度優(yōu)化網(wǎng)絡(luò)展示。詳見(jiàn)圖2。

2.5 ?GO、KEGG富集分析

使用ClueGO對(duì)核心子模塊進(jìn)行KEGG富集分析，根據(jù)P≤0.05篩選共獲得82條信號(hào)通路（圖3），包括恰加斯?。绹?guó)錐蟲(chóng)?。NF信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、百日咳、癌癥的途徑、Toll樣受體信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路等。使用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)模塊一進(jìn)行GO分析，共獲得生物過(guò)程（biological process， BP）120項(xiàng)，包括一氧化氮生物合成過(guò)程的正調(diào)控、細(xì)胞對(duì)機(jī)械刺激的反應(yīng)、脂多糖介導(dǎo)的信號(hào)通路、干擾素γ產(chǎn)生的正調(diào)控、NF-κB導(dǎo)入細(xì)胞核的積極調(diào)控、MAPK活性的激活、炎癥反應(yīng)等;獲得細(xì)胞組成（cellular component， CC）16個(gè)，包括蛋白質(zhì)復(fù)合物、胞質(zhì)溶膠、核質(zhì)、細(xì)胞外區(qū)域、細(xì)胞表面等;獲得分子功能（molecular function， MF）21個(gè)，包括相同的蛋白質(zhì)結(jié)合、酶結(jié)合、蛋白質(zhì)結(jié)合、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)DNA結(jié)合、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)劑活性、細(xì)胞因子活性等，見(jiàn)圖4。

2.6 ?GEO芯片驗(yàn)證

在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)下載GSE8545、GSE64913、GSE69683、GSE74986、GSE106986、GSE112811數(shù)據(jù)集。對(duì)6個(gè)數(shù)據(jù)集進(jìn)行注釋、合并并去除批次效應(yīng)，運(yùn)用合并后的表達(dá)矩陣?yán)L制核心子模塊的基因表達(dá)箱式圖。由于HIF1A未在表達(dá)矩陣中，因此僅有18個(gè)核心靶點(diǎn)繪制箱式圖，見(jiàn)圖5。由圖可知NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1、PTGS2、TLR4、EGF、IL1B、HRAS在COPD和哮喘與健康樣本表達(dá)有明顯差異。將這些靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytocsape軟件繪制中藥-化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖6。

2.7 ?分子對(duì)接

選取Degree值最高的5個(gè)靶點(diǎn)NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示均有較高的結(jié)合活性，見(jiàn)表1。運(yùn)用PyMOL軟件對(duì)這些結(jié)合能較高的活性成分-核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化，見(jiàn)圖7。

3 討論

“異病同治”是中醫(yī)理論體系的重要診療特點(diǎn)，“異”是指疾病相異，“同”是指疾病的病機(jī)或證相同而給予相同的治法或方藥。COPD多屬于中醫(yī)學(xué)的“肺脹”“喘病”等范疇[11]，哮喘屬于中醫(yī)“哮病”范疇[12]，二者病名不同，但病位都在肺，均可見(jiàn)痰飲伏肺，外感寒邪引觸寒飲，痰阻氣道，肺失宣降而發(fā)病。二者雖病名不同，但病因、病位、病機(jī)相似，按照“異病同治”原則，以散寒化飲、溫肺理肺為法治療COPD與哮喘，在臨床上獲得較好療效。

小青龍湯為解表散寒、溫肺化飲的代表方劑。方中麻黃、桂枝共為君藥，辛溫發(fā)汗以散表寒，麻黃宣肺以平咳喘，桂枝化氣行水以散里;臣以干姜、細(xì)辛，溫肺化飲，兼助麻桂解表散寒;五味子、白芍、半夏為佐藥，五味子斂肺止咳、白芍?jǐn)筷庰B(yǎng)血，防諸藥辛散、耗傷肺氣，半夏降逆和胃、燥濕祛痰;炙甘草為佐使，益氣和中、調(diào)和諸藥[3]?？v觀(guān)全方，散中有收，開(kāi)中有合，外散風(fēng)寒，內(nèi)祛水飲，復(fù)肺氣之宣降，助水道之通調(diào)，治療外寒內(nèi)飲型COPD與哮喘患者療效良好?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，小青龍湯有止咳、平喘、抗炎、抗過(guò)敏、增強(qiáng)免疫等作用[13]，小青龍湯能夠有效減輕哮喘和COPD患者的臨床癥狀，改善炎性指標(biāo)與肺功能[4-5]。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)小青龍湯對(duì)COPD與哮喘“異病同治”的10個(gè)共同關(guān)鍵靶點(diǎn)：NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1、PTGS2、TLR4、EGF、IL1B、HRAS。NR3C1可以通過(guò)抑制炎癥基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮抗炎作用，作為COPD與哮喘主要治療藥物的糖皮質(zhì)激素可以通過(guò)作用于NR3C1以減輕氣道炎癥[14]。HSP90AA1基因編碼熱休克蛋白90α（heat shock protein 90α， Hsp90α），Hsp90α的上調(diào)與COPD在內(nèi)的多種疾病相關(guān)[15]。TNF是經(jīng)典的促炎細(xì)胞因子，在氣道炎癥中發(fā)揮重要作用，與哮喘、COPD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[16-17]。CASP3在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，研究表明，CASP3能通過(guò)PLK1-CASP3途徑參與調(diào)控氣道平滑肌細(xì)胞凋亡[18]。AKT1是PI3K-AKT信號(hào)通路中的重要因子，在細(xì)胞生長(zhǎng)、存活等許多生理過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[19]，與哮喘氣道炎癥及肺功能改變相關(guān)[20]。PTGS2激活產(chǎn)生前列腺素E2，作用于許多細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑，包括細(xì)胞增殖、血管生成、凋亡、侵襲和免疫抑制[21]，與哮喘、COPD氣道黏液分泌增多相關(guān)[22]，對(duì)于以長(zhǎng)期炎癥狀態(tài)為特征的疾病如COPD，抑制PTGS2已成為其關(guān)鍵的治療目標(biāo)[23]。TLR-4在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答以及刺激炎性趨化因子和細(xì)胞因子的產(chǎn)生中起關(guān)鍵作用[24]，TLR-4可能通過(guò)調(diào)控TNF-α、IL-17等細(xì)胞因子的表達(dá)從而參與哮喘的發(fā)生發(fā)展[25]，TLR-4表達(dá)水平增高和COPD的健康損害程度與肺功能改變具有相關(guān)性[26]。EGF刺激各種表皮和上皮組織的生長(zhǎng)[27]，阻斷其受體的激活可促進(jìn)TNF誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡和肺損傷[28]。IL-1B是一種炎癥介質(zhì)，存在于多種慢性炎癥中[29]。IL-1B參與COPD氣道炎癥[30]，并與哮喘嚴(yán)重程度密切相關(guān)[31]。一般認(rèn)為NRAS與黑色素瘤密切相關(guān)[32]，研究發(fā)現(xiàn)，NRAS或參與哮喘-COPD重疊綜合征發(fā)病機(jī)制[33]。C6DB3500-88BA-4F5F-91C4-FED76FA56888

使用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行GO分析發(fā)現(xiàn)，小青龍湯對(duì)COPD、哮喘的治療作用可能與一氧化氮生物合成過(guò)程正調(diào)控、細(xì)胞對(duì)機(jī)械刺激的反應(yīng)、脂多糖介導(dǎo)的信號(hào)通路、干擾素γ產(chǎn)生的正調(diào)控、NF-κB導(dǎo)入細(xì)胞核的正調(diào)控、MAPK活性的激活、炎癥反應(yīng)等密切相關(guān)。通過(guò)使用ClueGO進(jìn)行KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)排名靠前的通路為：TNF信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、癌癥的途徑、Toll樣受體信號(hào)通路、PI3K-AKT信號(hào)通路等。TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路可以促進(jìn)NF-κB的活化[34]，NF-κB被激活后參與哮喘氣道炎癥與氣道重塑形成的多個(gè)環(huán)節(jié)[35]，同時(shí)與COPD氣道炎癥、氣道重構(gòu)密切相關(guān)[36]。MAPK信號(hào)通路包括ERK、JNK、p38等蛋白激酶，與細(xì)胞增殖、分化、遷移、衰老和凋亡相關(guān)[37]，JNK的激活能夠促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞修復(fù)[38]，激活p38會(huì)促進(jìn)黏蛋白MUC5AC表達(dá)，抑制MAPK信號(hào)通路可改善氣道黏液分泌，修復(fù)氣道炎癥損傷[39]。Toll樣受體信號(hào)通路在激活免疫應(yīng)答和引發(fā)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[40]，TLRs能識(shí)別吸入氣道的有害物質(zhì)，參與COPD的發(fā)病過(guò)程，影響COPD加重次數(shù)與患者的免疫系統(tǒng)功能，由TLR-4啟動(dòng)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)最終激活NF-κB，釋放大量IL-8、IL-6等炎癥介質(zhì)，從而誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞參與COPD炎癥反應(yīng)[41]。TLRs與哮喘發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，TLRs配體引起下游TRIF和My D88信號(hào)通路激活，通過(guò)NF-κB通路導(dǎo)致炎性因子釋放[42]。PI3K-AKT信號(hào)通路是重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑，參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、轉(zhuǎn)錄等環(huán)節(jié)[43]，與氣道慢性炎性疾病相關(guān)，能夠調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的釋放、炎癥細(xì)胞活化與氣道重塑[44]，干預(yù)PI3K信號(hào)通路可以減輕COPD大鼠的氣道炎癥[45]，減少哮喘小鼠炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制黏液高分泌，減少氣道高反應(yīng)，改善氣道重塑[46]。據(jù)GO與KEGG分析所示，小青龍湯對(duì)COPD、哮喘過(guò)程發(fā)揮“異病同治”的作用機(jī)制主要集中在減輕炎癥、抑制黏液分泌、改善氣道重塑3個(gè)方面。其中，調(diào)控Toll樣受體信號(hào)通路與PI3K-AKT信號(hào)通路、抑制下游NF-κB的激活而調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的釋放，可能是小青龍湯發(fā)揮“異病同治”作用的主要生物機(jī)制。

通過(guò)分子對(duì)接分析發(fā)現(xiàn)，小青龍湯中的活性成分3-Methoxyherbacetin與AKT1、HSP90AA1，活性成分6-Dimethoxyisoflavone與AKT1、HSP90AA1，活性成分5-Desgalloylstachyurin與HSP90AA，活性成分Alexandrin與CASP3，活性成分Palbinone與CASP3、TNF，活性成分Schisanlactone D與NR3C1，活性成分Sitosterol與NR3C1均有較強(qiáng)的結(jié)合活性，提示小青龍湯治療COPD與哮喘的活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)有良好的親和力。

綜上所述，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與生物信息學(xué)分析，COPD與哮喘的發(fā)病均與NR3C1、HSP90AA1、TNF、CASP3、AKT1、PTGS2、TLR4等靶點(diǎn)及TNF信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、PI3K-AKT信號(hào)通路等密切相關(guān)，具有相似的發(fā)病機(jī)制。分子對(duì)接分析提示小青龍湯治療COPD與哮喘的活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)有良好的親和力，小青龍湯可以作用于上述靶點(diǎn)與通路，針對(duì)COPD與哮喘的共同發(fā)病機(jī)制，發(fā)揮“異病同治”的作用。小青龍湯能夠?qū)OPD和哮喘“異病同治”的前提是這兩種疾病存在共同病機(jī)——“外寒內(nèi)飲”，上述靶點(diǎn)與通路可能是“外寒內(nèi)飲”的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，今后可以借助體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

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