梁超

摘要：目的 建立注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量測(cè)定方法。方法 HPLC法，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），以緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為30℃。結(jié)果 線性回歸方程為Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），EDTA-2Na濃度在3.95～39.40μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;平均回收率為99.60%（n=9），RSD為0.5%，樣品在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。 結(jié)論 本方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于測(cè)定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量。

關(guān)鍵詞：泮托拉唑鈉;EDTA-2Na;HPLC法;含量

【中圖分類號(hào)】 R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）13--01

注射用泮托拉唑鈉主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃粘膜病變、復(fù)合型胃潰瘍等所致的急性上消化道出血[1-2]，為質(zhì)子泵抑制劑，是一種良好的抑制胃酸藥物，臨床使用廣泛。EDTA-2Na是常用的金屬離子絡(luò)合劑，許可用于注射制劑。它能有效增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性，其原理為EDTA-2Na可以與金屬離子形成穩(wěn)定的水溶性螯合物，能夠防止自身的氧化，有利于提高藥物在制備、存儲(chǔ)和臨床配制過程中的穩(wěn)定性。因此需要在處方中加入EDTA-2Na提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性。中國藥典2020年版及進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)JX20150094均收錄了注射用泮托拉唑鈉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但標(biāo)準(zhǔn)中均未收錄EDTA-2Na檢測(cè)方法，為了更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究開發(fā)了一種簡(jiǎn)單、迅速、精確的用于測(cè)定注射用泮托拉唑鈉中的EDTA-2Na含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器? HPLC高效液相色譜儀（LC-20AT，島津）、電子天平（梅特勒）、PB-10型酸度計(jì)（梅特勒）。

1.2 試藥 硫酸銅（CuSO4·5H2O，分析純）、10%四丁基氫氧化銨（分析純）、三氟乙酸（色譜純）、乙腈（色譜純）、EDTA-2Na對(duì)照品（純度100%）、注射用泮托拉唑鈉（武田制藥，批號(hào)：442145）、純化水自制。

2 溶液的配制

2.1 溶劑：稱取硫酸銅250mg，加入水1000ml，攪拌使溶解，即得。

2.2 供試品溶液：取本品1瓶，全部取出稱重為45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品貯備液：取EDTA-2Na對(duì)照品約20mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 對(duì)照品溶液：精密量取對(duì)照品貯備液5ml，置50ml量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性溶液：取泮托拉唑鈉約40mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加對(duì)照品貯備液5ml，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），流動(dòng)相為緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68），流速為1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，柱溫為30℃。

3.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“空白溶劑”、“系統(tǒng)適用性溶液”和“對(duì)照品溶液”各20μl，注入高效液相色譜儀，采用“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖，由色譜圖可知EDTA-2Na的保留時(shí)間約為15min，系統(tǒng)適用性溶液中EDTA-2Na色譜峰與泮托拉唑色譜峰之間的分離度大于1.5;對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，保留時(shí)間RSD值小于1.0%，峰面積的RSD值小于5.0%，系統(tǒng)適用性符合要求。

3.3 線性關(guān)系考察 稱取EDTA-2Na對(duì)照品大約20mg，精密稱定置200ml容量瓶中，加入溶劑溶解并定容，分別精密移取EDTA-2Na對(duì)照品貯備液4ml、10ml、20ml、30ml、40ml分別加入到100ml容量瓶中，再分別加入溶劑稀釋至刻度，搖勻，即得各線性對(duì)照品溶液，含EDTA-2Na質(zhì)量濃度分別為4.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml、40.0μg/ml，采用“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積（Y）對(duì)濃度（X）為進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），說明EDTA-2Na濃度在3.95～39.40μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4 精密度試驗(yàn)? 取對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，EDTA-2Na的峰面積RSD為0.3%，結(jié)果表明此方法精密度良好。

3.5 定量限及檢測(cè)限? 取EDTA-2Na對(duì)照品貯備液用溶劑逐級(jí)稀釋，制備定量限及檢測(cè)限溶液，同法測(cè)定，定量限為0.62ng，S/N約為10，檢測(cè)限為0.16ng， S/N約為3。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)? 取本品1瓶，全部取出稱重為45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣測(cè)定，制備6份供試品溶液中，EDTA-2Na含量均在90.0%～110.0%之間，RSD值為1.1%，小于5.0%，表明此方法重復(fù)性良好。

3.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 供試品溶液中EDTA-2Na濃度為20μg/ml，考察濃度分別15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml。在3個(gè)濃度上考察EDTA-2Na的回收率，分別為供試品溶液中EDTA-2Na濃度的75%、100%、125%，每個(gè)濃度上平行制備3份樣品溶液。以外標(biāo)法計(jì)算EDTA-2Na的含量。9個(gè)樣品的回收率在95.0%～105.0%范圍內(nèi)，平均回收率為99.6%，RSD值為0.5%，小于5.0%，表明該方法準(zhǔn)確性良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0h、2h、4h、12h和24h進(jìn)樣測(cè)定，EDTA-2Na主峰峰面積相對(duì)于0h的比值在95.0%～105.0%之間，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.9 樣品含量測(cè)定 取注射用泮托拉唑鈉樣品3瓶，每瓶全部取出稱重為 45.3mg（含EDTA-2Na約1.0mg），將粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液按3.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣測(cè)定;同時(shí)取對(duì)照溶液進(jìn)樣測(cè)定，按照外標(biāo)法計(jì)算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑鈉粉末中EDTA-2Na含量分別為0.996mg、0.989mg、0.991mg。

4 討論

4.1 測(cè)定方法選擇? EDTA-2Na現(xiàn)有的檢測(cè)方法包括滴定法和比色法，該方法的靈敏度和專屬性較差，產(chǎn)生較大干擾;有報(bào)道采用HPLC 法測(cè)EDTA-2Na的方法，但該方法經(jīng)驗(yàn)證后峰形較差，檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性較差[3]。本研究以緩沖液（10%四丁基氫氧化銨溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）作為流動(dòng)相時(shí)，EDTA-2Na出峰時(shí)間適宜，峰形較好，基線平穩(wěn)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，檢測(cè)時(shí)間較短，靈敏度較高，檢測(cè)限低，干擾較少的高效液相色譜法。

4.2 色譜柱的選擇 本次實(shí)驗(yàn)采用緩沖鹽-乙腈-水（10：22：68）為流動(dòng)相，若使用常規(guī) C18柱，長(zhǎng)時(shí)間用純水相沖洗可能會(huì)導(dǎo)致固定相的流失，柱效下降，故試驗(yàn)中采用了更強(qiáng)的疏水性相互作用的Intersil ODS-3-Cl8色譜柱，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，多次進(jìn)樣后，色譜峰形保持良好。

本方法可用于測(cè)定注射用泮托拉唑鈉中的EDTA-2Na含量，快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高。因此可利用此法判斷該藥物輔料中EDTA-2Na的存在，判斷是否與參比制劑一致輔料用量，確保仿制產(chǎn)品質(zhì)量一致性。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳江飛，苗彩云，楊洪明.國產(chǎn)和進(jìn)口泮托拉唑鈉在輸液中的配伍穩(wěn)定性考察[J].中國臨床藥學(xué)雜志，2013，22（1）：27-30.

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[3]趙杰，HPLC法測(cè)定注射用泮托拉唑鈉中EDTA-2Na的含量[J].醫(yī)學(xué)信息，2013，31（11）：138-139.