袁佩雯 王培森 侯秀英 李勤雨 李麗 張寶林 聶君毅 彭艷

[摘要]目的：探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌因子脂質(zhì)體用于黑素細(xì)胞痣激光治療后皮膚損傷的療效。方法：將56例激光治療后的黑素細(xì)胞痣患者隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組各28例，對(duì)照組術(shù)后用空白脂質(zhì)體涂抹治療，治療組術(shù)后用人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌因子脂質(zhì)體涂抹治療，比較兩組患者的損傷反應(yīng)、傷口愈合時(shí)間、皮膚鏡下愈合情況及總有效率。結(jié)果：術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)兩組損傷反應(yīng)評(píng)分呈遞減趨勢(shì)，術(shù)后2 d及術(shù)后4 d治療組損傷反應(yīng)弱于對(duì)照組（P<0.05），治療組傷口愈合時(shí)間明顯短于對(duì)照組（P<0.05），皮膚鏡下愈合情況優(yōu)于對(duì)照組，總有效率（100.00%）顯著高于對(duì)照組（78.57%，P<0.05）。結(jié)論：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌因子脂質(zhì)體用于黑素細(xì)胞痣激光治療后皮膚損傷有較好療效，值得臨床推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]人臍帶;間充質(zhì)干細(xì)胞;脂質(zhì)體;創(chuàng)面修復(fù);激光;黑素細(xì)胞痣

[中圖分類號(hào)]R739.5? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2022）05-0010-04

Effect of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Secretory Factor Liposome on Skin Damage after Laser Treatment of Melanocytic Nevus

YUAN Peiwen1，WANG Peisen1，HOU Xiuying2，LI Qinyu2，LI Li2，ZHANG Baolin2，NIE Junyi1，PENG Yan1

（1.The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，Shanxi，China;2.The First Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，Shanxi，China）

Abstract： Objective To observe the therapeutic effect of human umbilical cord mesenchymal stem cell secretory factor liposome on skin injury of melanocyte nevus after laser treatment. Methods 56 cases of melanocyte nevus after laser treatment of the patients were randomly divided into control group and treatment group. The control group was treated with blank liposome and the treatment group was treated with human umbilical cord mesenchymal stem cell secretory factor liposome. The injury response， wound healing time， cutaneous healing and total effective rate were compared between the two groups. Results The injury response scores of the two groups at different postoperative time points showed a decreasing trend， and the injury response of the treatment group at all other time points except 0 d after surgery was weaker than that of the control group （P<0.05）， and the wound healing time was significantly shorter than that of the control group （P<0.05）， the healing condition under dermoscopy was better than that of the control group， and the total effective rate （100.00%） was higher than that of the control group （78.57%， P<0.05）. Conclusion Human umbilical cord mesenchymal stem cell secretory factor liposome has a significant effect on skin injury after laser treatment of melanocyte nevus. It is worthy of clinical application.

Key words： human umbilical; cord mesenchymal stem cell; liposome; wound repair; laser; melanocytic nevus

黑素細(xì)胞痣（Melanocytic nevus），是最常見(jiàn)的一種良性皮膚腫瘤，由表皮、真皮內(nèi)黑素細(xì)胞數(shù)目增多引起[1]。對(duì)于較小的黑素細(xì)胞痣來(lái)說(shuō)，二氧化碳激光可在對(duì)病變處切割和灼燒的過(guò)程中瞬間完成氣化作用，以達(dá)到治療目的[2]。但不足的是，激光治療后，短時(shí)間內(nèi)會(huì)對(duì)患者皮膚造成損傷，若處理不當(dāng)則極易形成瘢痕及色素沉著，為此臨床醫(yī)生采用了多種方法解決激光后皮膚損傷問(wèn)題。間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells， MSCs）是一類具有強(qiáng)大自我更新和分化能力的多能干細(xì)胞，在組織工程和再生醫(yī)學(xué)中發(fā)揮著重要作用[3]。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs）易于獲取，其分泌因子中含有血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素8和單核細(xì)胞趨化蛋白1等細(xì)胞因子可誘導(dǎo)新生血管的形成、加速角質(zhì)形成細(xì)胞遷移及肉芽組織形成，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。脂質(zhì)體作為一種特殊性質(zhì)的磷脂，與皮膚角質(zhì)層具有相似的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)[4-5]，將hUC-MSCs分泌因子包裹在脂質(zhì)體中可以有效促進(jìn)分泌因子的透皮吸收，加快創(chuàng)面愈合。為此，本課題組將先前制備的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌因子脂質(zhì)體[6]用于黑素細(xì)胞痣激光治療后的皮損創(chuàng)面，探究其對(duì)損傷反應(yīng)、愈合時(shí)間、色素沉著及瘢痕形成的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：收集2018年12月-2020年3月就診于筆者醫(yī)院整形科的黑素細(xì)胞痣患者共56例，男26例，女30例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組（n=28）。對(duì)照組男12例，女16例;年齡17～42歲，平均（28.00±7.06）歲;黑素細(xì)胞痣分布，上肢8例，顏面部10例，軀干10例;痣直徑1.2～3.0 mm，平均（2.28±0.56）mm。治療組男14例，女14例;年齡16～42歲，平均（27.07±6.84）歲;黑素細(xì)胞痣分布，上肢8例，顏面部13例，軀干7例;痣直徑1.6～3.0 mm，平均（2.42±0.44）mm。兩組一般資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有可比性（P>0.05）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)：自愿接受本次研究并簽署知情同意書的患者;年齡16～45歲;臨床診斷為黑素細(xì)胞痣;痣直徑<3.0 mm;符合激光清除黑素細(xì)胞痣治療指征;能全程在筆者科室進(jìn)行換藥和隨訪管理。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他影響傷口愈合的基礎(chǔ)疾?。ㄈ缣悄虿　⒆陨砻庖咝约膊?、惡性腫瘤、肝腎功能衰竭、貧血等）;有惡性黑色素瘤病史或家族史;曾多次或嚴(yán)重曬傷;接受紫外線光療;增生性瘢痕或瘢痕疙瘩病史;懷孕或哺乳期女性;光敏感史或口服光敏藥物等。

1.4 治療方法

1.4.1 激光去除黑色素痣：所有患者均接受激光治療（JZ30GZ型CO2激光治療機(jī)，北京光電技術(shù)研究所），波長(zhǎng)10.6μm，TIMER模式，功率4.0 W，脈沖加載時(shí)間0.15 s。由皮損的表面逐層向深部汽化，每次汽化1遍，用生理鹽水擦拭創(chuàng)面，以肉眼監(jiān)測(cè)到黑色素組織完全被去除為治療終點(diǎn)。術(shù)后用碘伏消毒創(chuàng)面3次，用無(wú)菌紗布擦干。

1.4.2 創(chuàng)面用藥：治療組激光治療完成后30 min內(nèi)用hUC-MSCs分泌因子脂質(zhì)體0.1 ml涂抹創(chuàng)面，靜置1 min后用無(wú)菌紗布覆蓋創(chuàng)面并固定。術(shù)后第1天和第2天依前法換藥并觀察創(chuàng)面情況，此后每2天換藥1次，直到第14天。對(duì)照組每次用空白脂質(zhì)體0.1 ml涂抹。換藥時(shí)間同治療組。

從治療首日至最后換藥日共14 d，每組均換藥9次。兩組患者每次換藥前觀察創(chuàng)面外觀及分泌物情況，觀察有無(wú)感染及皮疹等不良反應(yīng)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 損傷反應(yīng)指標(biāo)：術(shù)后當(dāng)天和術(shù)后2、4、6、14 d分別對(duì)兩組患者受試部位紅腫、滲出、出凝血等情況和患者局部灼熱、疼痛等癥狀進(jìn)行半定量判定。0分為無(wú)上述癥狀;1分為紅腫、灼熱;2分為明顯紅腫灼熱，局部輕微滲血有灼痛感;3分為明顯的紅腫、灼熱、灼痛，單位面積內(nèi)明顯滲血。

1.5.2 創(chuàng)面愈合時(shí)間：以創(chuàng)面干燥結(jié)痂并脫落為標(biāo)準(zhǔn)，記錄從受傷日到結(jié)痂脫落的天數(shù)。

1.5.3 皮膚鏡下愈合情況：分別于術(shù)后1、4、6、12、18、28 d，以30倍放大倍數(shù)皮膚鏡（CH-DS50，廣州創(chuàng)弘醫(yī)療科技有限公司）對(duì)創(chuàng)面進(jìn)行攝影，評(píng)估患者傷口的大體病情變化，包括組織壞死、滲出、炎癥反應(yīng)、結(jié)痂、色素沉著、瘢痕及血管的形成與分布等。

1.5.4 療效評(píng)估：術(shù)后28 d時(shí)，由非治療的醫(yī)師根據(jù)觀察結(jié)果及照片進(jìn)行療效評(píng)估。療效分為4級(jí)：①痊愈，即皮損完全消失，無(wú)色素殘留，外觀基本上與正常皮膚一致，基本無(wú)瘢痕形成;②顯效，即皮損消失70%以上，外觀除有少數(shù)色素殘留外，余與正常皮膚無(wú)差異，略有瘢痕形成;③好轉(zhuǎn)，皮損消失50%以上，外觀有較多色素殘留外，與正常皮膚差異較大，瘢痕形成明顯;④無(wú)效，即皮損仍然存在，有較多色素殘留或瘢痕增生?？傆行?（痊愈+顯效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行分析：計(jì)量資料采用（xˉ±s）表示，等級(jí)資料應(yīng)用重復(fù)測(cè)量方差分析，組間比較應(yīng)用Fisher精確檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 兩組損傷反應(yīng)評(píng)分比較：表1為兩組患者術(shù)后0、2、4、6、14 d受試部位的創(chuàng)面損傷反應(yīng)評(píng)分情況。組內(nèi)對(duì)比，術(shù)后隨著時(shí)間的推移，組內(nèi)患者的損傷反應(yīng)得分呈下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;組間對(duì)比，術(shù)后2 d及術(shù)后4 d治療組損傷反應(yīng)評(píng)分低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 兩組傷口愈合時(shí)間比較：治療組患者激光治療部位皮膚創(chuàng)面愈合時(shí)間為（6.89±1.17）d，對(duì)照組患者皮膚創(chuàng)面愈合時(shí)間為（9.21±1.66）d，治療組患者愈合時(shí)間短于對(duì)照組，兩組傷口愈合時(shí)間對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.3 兩組各時(shí)間點(diǎn)鏡下皮膚愈合情況：如圖2所示，早期治療組傷口血痂形成薄，周圍紅腫消退快，血痂完全脫落后創(chuàng)面光滑，纖維形成少，與周邊正常皮膚大部分融合，創(chuàng)面下色素殘留和擴(kuò)張血管不多，瘢痕形成不明顯;如圖3所示，對(duì)照組血痂干燥且較厚，周圍紅腫消退慢，放射狀條形纖維形成明顯，創(chuàng)面下血管有明顯的增生和擴(kuò)張，有較多瘢痕形成。

2.4 臨床療效：術(shù)后28 d時(shí)，治療組總有效率為100.00%，對(duì)照組總有效率為78.57%，根據(jù)樣本量采用Fisher精確檢驗(yàn)，結(jié)果顯示P=0.023，提示治療組治療效果更佳，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3? 討論

近年研究發(fā)現(xiàn)MSCs可通過(guò)旁分泌作用改善組織的病理微環(huán)境，修復(fù)組織器官，在組織工程和再生醫(yī)學(xué)中發(fā)揮著重要作用[9-11]。MSCs外泌體（MSCs-exosomes， MSCs-Ex）作為MSCs旁分泌作用中傳遞信號(hào)的重要載體，主要通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)膜表面信號(hào)分子[12]、釋放膜融合后的內(nèi)容物[13]，或釋放內(nèi)部信號(hào)分子作用于細(xì)胞膜表面受體發(fā)揮作用。MSCs-Ex可攜帶mRNA、miRNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等生物信息[14]，誘導(dǎo)血管再生、促進(jìn)細(xì)胞增殖等[15]，在組織再生和修復(fù)領(lǐng)域具有廣闊的治療前景。臍帶具有不涉及道德、倫理和法律方面的問(wèn)題等諸多優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于hUC-MSCs的提取。許多研究證明臍帶MSCs分泌因子具有較好的組織損傷修復(fù)及促進(jìn)新生血管的生長(zhǎng)等作用：Hu等[16]發(fā)現(xiàn)hUC-MSC來(lái)源的外泌體富有miR-21-3p，可促進(jìn)創(chuàng)傷部位血管生成及誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞遷移。Fang等[17]通過(guò)高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)臍帶MSC外泌體中有一組特異microRNA（miR-21、miR-23a、miR-125b和miR-145）通過(guò)抑制α-平滑肌肌動(dòng)蛋白與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β/SMAD2信號(hào)通路活性相關(guān)的膠原沉積，抑制肌成纖維細(xì)胞的形成。也有學(xué)者證明臍帶來(lái)源的MSCs外泌體同樣具有對(duì)淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌的抑制作用，能夠抑制宿主抗移植物排斥反應(yīng)，減輕局部的炎癥反應(yīng)[18]。

本研究以脂質(zhì)體為載體，將hUC-MSCs分泌因子作用于黑素細(xì)胞痣激光治療后的皮膚創(chuàng)面，治療過(guò)程中治療組較對(duì)照組炎癥反應(yīng)輕，組織壞死少，肉芽組織新生速度快，結(jié)痂薄，色素沉著少，且創(chuàng)面愈合時(shí)間顯著短于對(duì)照組。在瘢痕形成方面，治療組愈合后創(chuàng)面平整、基本無(wú)瘢痕形成。其主要機(jī)制可能是hUC-MSCs依靠其旁分泌作用產(chǎn)生的營(yíng)養(yǎng)因子，可促進(jìn)上皮細(xì)胞的早期增殖、分化和移行，調(diào)控膠原的合成與降解不平衡，抑制成纖維細(xì)胞大量增生[7-8]。

但是，本研究的局限性在于所選創(chuàng)面面積較小，僅對(duì)激光治療后形成的創(chuàng)面進(jìn)行試驗(yàn)，對(duì)于其他類型的創(chuàng)面是否能產(chǎn)生類似的效果不能明確;未能對(duì)hUC-MSCs分泌因子干預(yù)后的創(chuàng)面取材進(jìn)行組織學(xué)分析，兩組的瘢痕厚度、不同類型的膠原比例及核心蛋白多糖等指標(biāo)未能量化，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

目前，MSCs的研究正逐步應(yīng)用于臨床，但其分泌因子中的各種物質(zhì)成分及作用機(jī)制有待進(jìn)一步明確。除此之外，具有特定效用的MSCs分泌因子的純化分離、快速制備以及臨床使用的安全性、具體劑量問(wèn)題也亟需研究?；趆UC-MSCs分泌因子脂質(zhì)體在黑素細(xì)胞痣的患者接受激光治療后促進(jìn)創(chuàng)面愈合、抑制瘢痕形成方面的作用，值得臨床應(yīng)用研究和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，為“無(wú)細(xì)胞”臨床治療提供新思路。

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[收稿日期]2020-11-11

本文引用格式：袁佩雯，王培森，侯秀英，等.人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌因子脂質(zhì)體治療黑素細(xì)胞痣激光治療后皮膚損傷療效觀察[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2022，31（5）：10-13.