抗凝與非抗凝血液標(biāo)本對(duì)4項(xiàng)傳染性指標(biāo)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)影響的研究

馬紅 張珊珊 何美香 楊靖

[摘要]目的觀察并比較抗凝與非抗凝血液標(biāo)本對(duì)4項(xiàng)傳染性指標(biāo)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果的影響效果。方法選擇2020年1月至2021年10月烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院采血的患者264例血液標(biāo)本進(jìn)行研究，均為全血標(biāo)本。每份血液標(biāo)本均使用非抗凝管留取靜脈血，每支5 ml，并使用抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取靜脈血，每支2 ml。所有樣本均接受離心處理，按照試劑說明書操作步驟手工加樣后進(jìn)行處理，獲得最終的檢測結(jié)果。結(jié)果經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)初步檢測，抗凝標(biāo)本與非抗凝標(biāo)本在乙型肝炎病毒（HBV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋體（TP）檢測結(jié)果方面比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。264個(gè)樣本標(biāo)本中，有5例初次檢測結(jié)果出現(xiàn)不一致，重復(fù)實(shí)驗(yàn)后結(jié)果顯示，上述5例標(biāo)本的復(fù)試結(jié)果趨于一致。初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標(biāo)本共有22份，對(duì)其進(jìn)行抗凝與非抗凝血各一孔的雙孔復(fù)試，22份標(biāo)本經(jīng)復(fù)試后，1份標(biāo)本的結(jié)果為灰區(qū)，其余21份標(biāo)本的結(jié)果為非反應(yīng)性，最終的復(fù)試結(jié)果一致率為95.45%。結(jié)論在血液標(biāo)本的檢測中，與非抗凝血液標(biāo)本比較，應(yīng)用枸櫞酸-枸櫞酸鈉抗凝血液標(biāo)本會(huì)對(duì)4項(xiàng)傳染性指標(biāo)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測結(jié)果產(chǎn)生一定的影響，導(dǎo)致一定假陽性的出現(xiàn)，但經(jīng)復(fù)試后，可有效排除干擾。

[關(guān)鍵詞]血液標(biāo)本;傳染性指標(biāo);酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);抗凝標(biāo)本;非抗凝標(biāo)本

[中圖分類號(hào)] R446.6? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616（2022）09-0146-04

Study on the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of ELISA detected four infectious indicators

MAHongZHANGShanshanHE? MeixiangYANGJing

1.Department of Clinical Laboratory， Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xinjiang， Urumqi 830000， China;2.Department of Blood Transfusion， the Fourth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Xinjiang， Urumqi 834000， China;3.Molecular Genetics Group of Clinical Laboratory Department， Xinjiang Purisaixin Medical Laboratory， Xinjiang， Urumqi 830000， China

[Abstract] Objective To observe and compare the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of four infectious indicators detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Methods A total of 264 blood specimens were selected for the study， all of which were whole blood specimens collected from patients in Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2020 to October 2021. Venous blood in each blood specimen was retained using non-anticoagulated tubes of 5 ml each and anticoagulated tubes （citrate-sodium citrate） of 2 ml each. All specimens were subjected to centrifugation and processed after the manual addition of specimens according to the operating procedures of the reagent instructions to obtain the final test results. Results The preliminary detection by ELISA showed that there were some differences between anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens in terms of the test results of hepatitis B virus （HBV）， human immunodeficiency virus （HIV） and treponema pallidum （TP）， with statistically significant differences （P <0.05）. Among the 264 specimens， there were 5 specimens with inconsistent initial test results， while the repeated test results of the above 5 specimens tended to be consistent. A total of 22 anticoagulated specimens with an initial test result of 0.8≤ S/CO ≤1 were double-well retested with one well each for anticoagulated and non-anticoagulated blood. The cumulative retest results revealed that after retesting 22 specimens， one specimen had the result distributed in the gray area， and the remaining 21 specimens had non-reactive results， with a final concordance rate of 95.45%. Conclusion Compared with non-anticoagulated blood specimens， the citrate-sodium citrate anticoagulated blood specimens can produce some influence on theresults of ELISA detected four infectious indicators， leading to the appearance of certain false positives， but after retesting， the interference can be effectively excluded.

[Key words] Blood specimens; Infectious indicators; Enzyme-linked immunosorbent assay; Anticoagulated specimens; Non-anticoagulated specimens

目前，在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的日常工作中，為確保臨床診斷準(zhǔn)確，需要對(duì)患者的血液標(biāo)本進(jìn)行一定的檢測，檢測相關(guān)的傳染性指標(biāo)，如梅毒等[1]。在檢測過程中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是應(yīng)用較多的方法[2-3]。檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性容易受到多種因素的影響，其中，標(biāo)本的抗凝血處理是一個(gè)十分重要的因素。根據(jù)上述情況，本研究選擇納入264例血液標(biāo)本進(jìn)行分組比較研究，對(duì)收集到的血液標(biāo)本分別實(shí)施非抗凝管留取血樣以及抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取血樣，并進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。通過對(duì)相關(guān)傳染性指標(biāo)檢測結(jié)果的比較，分析抗凝血處理血液標(biāo)本對(duì)最終檢測結(jié)果的影響情況，以期為臨床血液標(biāo)本檢測方案的制訂提供一定的參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

選擇2020年1月至2021年10月烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院采血的患者264例血液標(biāo)本進(jìn)行研究，均為全血標(biāo)本。非抗凝管留取血樣容量為每支5 ml，并使用抗凝管（枸櫞酸-枸櫞酸鈉）留取血樣，每支2 ml。 1.2試劑與儀器

本研究所使用試劑與儀器類型、所提供的廠家以及試劑和儀器的具體情況見表1。

1.3方法

非抗凝管血液標(biāo)本保持靜置，對(duì)枸櫞酸-枸櫞酸鈉抗凝管中的血液標(biāo)本來回顛倒，混勻5～8次[4]。一個(gè)酶標(biāo)板88個(gè)樣本，三板共264個(gè)樣本。應(yīng)用離心機(jī)對(duì)全部血液標(biāo)本進(jìn)行處理，離心時(shí)間均為5 min。離心處理完畢后，手工進(jìn)行加樣，應(yīng)用酶標(biāo)分析儀進(jìn)行后處理，經(jīng)處理獲得最終的檢測結(jié)果[5-6]。對(duì)系統(tǒng)處理后的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行完整的收集和整理，得出檢測所得不同血液標(biāo)本 A 值結(jié)果，均為初次檢測的數(shù)據(jù)結(jié)果。按照初次檢測結(jié)果進(jìn)行篩選，得出初次檢測結(jié)果不一致的血液標(biāo)本。對(duì)篩選得出的血液標(biāo)本進(jìn)行復(fù)試，方法與上述步驟保持一致。對(duì)復(fù)試后的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算出一致率。

1.4觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)不同血液標(biāo)本初次檢測傳染性指標(biāo) A 值數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)初次檢測結(jié)果不一致的標(biāo)本數(shù)量，對(duì)其進(jìn)行復(fù)試。統(tǒng)計(jì)初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標(biāo)本進(jìn)行復(fù)試，并計(jì)算一致率。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用 SPSS 19.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行處理，不同標(biāo)本的初次檢測傳染性指標(biāo) A 值平均數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ±s）表示，組間差異檢驗(yàn)采用 t 檢驗(yàn)，P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同血液標(biāo)本初次檢測傳染性指標(biāo)A值數(shù)據(jù)結(jié)果比較

對(duì)不同標(biāo)本的初次檢測傳染性指標(biāo) A 值平均數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行比較，乙型肝炎病毒（HBV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋體（TP）檢測結(jié)果方面，抗凝全血標(biāo)本均高于非抗凝全血標(biāo)本（P <0.05），在丙型肝炎病毒（HCV）檢測數(shù)據(jù)結(jié)果方面，非抗凝全血標(biāo)本低于抗凝全血標(biāo)本，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P >0.05），見表2。

2.2初次檢測結(jié)果不一致標(biāo)本情況分析

264個(gè)樣本標(biāo)本中，有5例初次檢測結(jié)果出現(xiàn)不一致，均表現(xiàn)為抗凝標(biāo)本初次檢測出現(xiàn)反應(yīng)性或灰區(qū)值。針對(duì)這5例標(biāo)本，再次用抗凝與非抗凝標(biāo)本各做一孔復(fù)試，上述5例標(biāo)本的復(fù)試結(jié)果趨于一致。

2.3初次檢測0.8≤S/CO≤1的抗凝標(biāo)本復(fù)試結(jié)果分析

初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標(biāo)本共有22份，對(duì)其進(jìn)行抗凝與非抗凝血各一孔的雙孔復(fù)試，22份標(biāo)本經(jīng)復(fù)試后，1份標(biāo)本的結(jié)果為灰區(qū)，其余21份標(biāo)本的結(jié)果為非反應(yīng)性。最終的復(fù)試結(jié)果一致率為95.45%。

3討論

在對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用十分廣泛。這一方法操作簡單，靈敏度很高，便于進(jìn)行結(jié)果分析判定[7-8]。但是，這一檢測方法的最終結(jié)果也容易受到一些因素的影響，如各種抗凝劑的使用等[9-10]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)初步檢測，抗凝標(biāo)本與非抗凝標(biāo)本在 HBV、HIV、TP 檢測結(jié)果方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）。提示在最終獲得的初次檢測結(jié)果方面，抗凝與非抗凝血液標(biāo)本之間存在一定的差異。對(duì)這一結(jié)果進(jìn)行分析，在血液標(biāo)本的檢測中，對(duì)血液標(biāo)本應(yīng)用一定的抗凝劑后進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，最終獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)一定的偏差，造成一些檢測干擾。研究中經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，有5例初次檢測結(jié)果出現(xiàn)不一致，進(jìn)行一孔復(fù)試后結(jié)果顯示，上述5例標(biāo)本的復(fù)試結(jié)果趨于一致。在一定程度上表明，抗凝劑對(duì)于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)確實(shí)存在干擾，但關(guān)于其具體機(jī)制，尚不十分清楚。另外，通過研究也發(fā)現(xiàn)，初次檢測0.8≤ S/CO ≤1的抗凝標(biāo)本共有22份標(biāo)本，對(duì)其進(jìn)行復(fù)試并對(duì)復(fù)試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析發(fā)現(xiàn)，22份標(biāo)本經(jīng)復(fù)試后，1份標(biāo)本的結(jié)果為灰區(qū)，其余21份標(biāo)本的結(jié)果為非反應(yīng)性。最終的復(fù)試結(jié)果一致率為95.45%。由此可知，如果對(duì)相關(guān)的假陽性反應(yīng)實(shí)施復(fù)試，則基本上可以解決這一問題。對(duì)這一過程中一過性假陽性出現(xiàn)的原因進(jìn)行分析，可能與以下一些操作不規(guī)范等因素相關(guān)，如在檢測過程中，洗板不夠徹底，則可能會(huì)影響到最終的檢測結(jié)果準(zhǔn)確性;如在進(jìn)行加樣操作的時(shí)候?qū)ρ暹M(jìn)行吹吸時(shí)產(chǎn)生一定的氣泡，或者扣干不完全，導(dǎo)致孔內(nèi)出現(xiàn)液體過量殘留等問題，均可能影響到最終的檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，導(dǎo)致一過性假陽性問題的出現(xiàn)[11-12]。另外，血液來源情況也可能會(huì)導(dǎo)致最終檢測結(jié)果出現(xiàn)不夠精確的情況。如果相應(yīng)血液標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者的血清中非特異性 IgG 濃度過高，則極易導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性。檢測時(shí)，在制作酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)板時(shí)，如果在包被操作中蛋白質(zhì)未能對(duì)聚苯乙烯表面予以完全覆蓋，那么便會(huì)導(dǎo)致添加到血清標(biāo)本中的免疫球蛋白被部分吸附在包被抗原表面，或者出現(xiàn)酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)部分吸附于包被抗原表面的情況[13-14]。上述情況的出現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致本底增加，進(jìn)而導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。另外，檢測過程中需要使用各種試劑，從試驗(yàn)中所使用的試劑角度進(jìn)行分析，目前國內(nèi)所普遍應(yīng)用的試劑標(biāo)本存在不夠統(tǒng)一的問題，試劑質(zhì)量控制情況不同，從而極易對(duì)最終的試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性產(chǎn)生一定的影響[15-16]。對(duì)上述研究結(jié)果進(jìn)行綜合分析也可以得到一定的啟示，在醫(yī)療機(jī)構(gòu)的日常血液標(biāo)本檢測工作中，需要綜合考慮不同因素可能會(huì)對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生的影響。在檢測時(shí)，針對(duì)抗凝血液標(biāo)本初次檢測結(jié)果為陽性的標(biāo)本，需要及時(shí)進(jìn)行復(fù)試，得出相應(yīng)結(jié)果，并進(jìn)行科學(xué)分析和判定后，方可得出最終的檢測結(jié)果，以保證血液標(biāo)準(zhǔn)檢測質(zhì)量。

綜上所述，在血液標(biāo)本的檢測中，與非抗凝血液標(biāo)本檢測結(jié)果進(jìn)行比較，應(yīng)用抗凝血液標(biāo)本進(jìn)行檢測時(shí)，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測所得傳染性指標(biāo)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陽性，但通過復(fù)試可有效排除干擾。

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（收稿日期：2021-11-29）