云南家鼠鼠疫疫源地人群和指示動物血清鼠疫F1抗體調(diào)查

武 麗 ,賀琪楠 ,劉思彤 ,洪汝丹 ,李 瑞 ,張 垚 ,羅云燕,黎文鴻,劉正祥,尹家祥

鼠疫是由鼠疫耶爾森氏菌(Yersiniapestis)所引起一種自然疫源性疾病,主要通過媒介蚤在嚙齒動物間傳播,在一定條件下通過媒介蚤叮咬或者剝食患病動物感染人類,造成人間鼠疫的流行。除嚙齒動物外,犬、貓、豬、羊等動物對鼠疫耶爾森氏菌具有低敏感高抗性,染疫后大多能自然痊愈并在體內(nèi)長時間保留鼠疫菌特異性抗體,常被視為鼠疫指示動物,在我國指示動物血清學調(diào)查已作為一種有效手段被納入鼠疫監(jiān)測工作中[1-2]。該研究選擇在云南省家鼠鼠疫流行曾經(jīng)較為嚴重的彌勒市、芒市、梁河縣3個地區(qū)采集人血清和指示動物血清,檢測血清中鼠疫F1抗體,旨在了解云南省家鼠鼠疫疫源地靜息期人群和指示動物中鼠疫F1抗體情況,分析鼠疫發(fā)生和流行的風險。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 2019年7－8月,在云南省家鼠鼠疫疫源地選擇曾經(jīng)發(fā)生鼠疫疫情比較嚴重的彌勒市、芒市、梁河縣3個縣(市)作為研究區(qū)域,選擇8個發(fā)生過2次及以上鼠疫疫情的自然村為研究對象(疫村),同時在5～10 km 范圍選擇與發(fā)生過鼠疫的自然村具有相似特征(如戶數(shù)、民族等),但從未報告過鼠疫的8個自然村作為研究對照(對照村),共16個自然村。每個村采集人血清不低于20份,采集指示動物血清不低于10份。人采集肘部靜脈血,動物采集股動脈血,采血量約5 m L,血液自然沉降后分離血清。采血過程和分離血清嚴格保持無菌操作,采血前均獲得了被采血者和動物主人的同意。

1.2 檢測方法 采用間接血凝法(Indirect Heamagglutination Assay,IHA)對采集到的血清進行鼠疫F1抗體檢測,對IHA 判定的陽性樣本采用上轉(zhuǎn)發(fā)光法再次進行檢測確認。

1.3 檢測試劑 IHA 檢測試劑盒試劑批號20200201(蘭州生物制品研究所有限責任公司),上轉(zhuǎn)發(fā)光法檢測鼠疫F1 抗體試劑盒試劑批號20200701(北京熱景生物技術(shù)股份有限公司)。

1.4 判讀標準

1.4.1 IHA 法 空白對照、陰性對照孔不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象,陽性對照成立。當抑制列呈“＋＋”凝集的孔比試驗列少2孔以上,判定為特異性凝集。陽性最終效價為凝集排呈現(xiàn)“＋＋”的最高稀釋度。

1.4.2 上轉(zhuǎn)發(fā)光法 MiniUPT 上轉(zhuǎn)發(fā)光微生物檢測儀與上轉(zhuǎn)發(fā)光法鼠疫F1抗體試劑盒配套使用,檢測完成后讀取MiniUPT 上轉(zhuǎn)發(fā)光微生物檢測儀上的數(shù)值,顯示大于0.00的數(shù)值即為陽性。

2 結(jié)果

2.1 人群血清和動物血清樣本采樣分布情況 本次調(diào)查共采集人血清368份、指示動物血清319份(犬血清307份和貓血清12份)。每個自然村所采集的血清樣本數(shù)和地區(qū)分布情況見表1。

表1 云南省3個縣(市)16個自然村血清樣本采樣分布情況Tab.1 Sampling distribution of serum samples in 16 natural villages of 3 counties(cities)in Yunnan Province

人血清中男性181人,女性187人;平均年齡為44.9歲,最小10歲,最大77歲;傣族185 人,漢族118人,其他少數(shù)民族65人(景頗族31人,苗族19人,僳僳族9人,彝族6人)。指示動物中雄性197只,雌性122 只;馴養(yǎng)方式以拴養(yǎng)為主,占69.3%(221/319),散養(yǎng)(12只貓均為散養(yǎng))占30.7%(98/319)。

2.2 鼠疫F1抗體檢測結(jié)果 本次研究采用IHA對368份人血清進行鼠疫F1抗體檢測,在梁河縣對照組芒蒙村檢出1份鼠疫F1抗體陽性,滴度為1∶80。該份陽性樣本采用上轉(zhuǎn)發(fā)光法再次進行檢測結(jié)果為261.788,確認為陽性。2021年10月再次對該陽性者抽血檢測鼠疫F1抗體仍為陽性。對319份指示動物血清進行鼠疫F1抗體檢測,檢測結(jié)果均為陰性。

3 討論

人群對鼠疫普遍易感,在感染鼠疫得到有效治療后,患者體內(nèi)可產(chǎn)生抗體,從被檢者體內(nèi)檢出鼠疫F1抗體說明被檢者曾被鼠疫菌感染,或者是鼠疫高危地區(qū)居民曾注射鼠疫疫苗,也有研究發(fā)現(xiàn)在鼠疫疫區(qū)未接種疫苗的人中檢出鼠疫F1抗體,被認為是隱性感染[3]。指示動物犬和貓捕食小型嚙齒動物,感染鼠疫風險較高,與人類接觸密切,也增加了人感染鼠疫的風險[4]。若未曾有人間或動物鼠疫報道的地區(qū)血清中檢測出鼠疫F1抗體,可能是病例并未出現(xiàn)明顯的癥狀而被忽略或者是該地區(qū)可能出現(xiàn)小范圍的鼠疫流行但未被監(jiān)測到。此次調(diào)查的人群和動物來自于彌勒市,芒市和梁河縣。彌勒市在1999—2005年共發(fā)生鼠疫疫點96 個,其中人間鼠疫疫點36 個,發(fā)現(xiàn)鼠疫患者60 例,動物鼠疫疫點60個,從2006年至今鼠疫進入靜息期[5]。1989年芒市就檢測出動物鼠疫,2001—2002年在患者和貓血清中各檢出鼠疫F1抗體1份,并從芒海鎮(zhèn)確診腺鼠疫病人1例,檢測自斃鼠71只,檢出鼠疫菌8株,2003 年后鼠疫得到控制[6-7]。梁河縣1990—2007年鼠疫流行異?；钴S,2001年確診腺鼠疫病人1例,2003年發(fā)現(xiàn)7例腺鼠疫病人,2008年以后疫情得到了有效控制,鼠疫流行進入靜息期[8]。本次調(diào)查獲得的319份指示動物血清樣本均未檢測出鼠疫F1抗體,說明被調(diào)查的三縣(市)仍處于鼠疫靜息期,當?shù)匕l(fā)生動物鼠疫的風險不高。

本次研究采集的368份人血清里,僅在梁河縣芒蒙村1 份人血清樣本中檢測出鼠疫F1 抗體陽性,但該自然村從未報道過鼠疫病例。為了查找可能的原因,研究團隊于2021年10月對該鼠疫F1抗體陽性者再次抽血檢測核實并做了深入的調(diào)查,發(fā)現(xiàn)其血清鼠疫F1抗體仍為陽性。流行病學調(diào)查結(jié)果顯示,該血清陽性者為梁河縣芒東鎮(zhèn)芒蒙村人,女,1961年出生,傣族,從小居住在該自然村(1984年嫁到本村),主要從事農(nóng)牧業(yè),周圍農(nóng)作物主要為水稻,家中未飼養(yǎng)犬和貓,未接種過鼠疫疫苗,也未出現(xiàn)過感染鼠疫的癥狀。在該自然村采集到的20份犬血清和1 份貓血清鼠疫F1 抗體檢測均為陰性。團隊同時對在該村周圍捕獲的36只嚙齒動物進行反向間接血凝實驗檢測鼠疫F1抗原,結(jié)果均為陰性(結(jié)果部分未展示該結(jié)果)。但調(diào)查發(fā)現(xiàn)與該自然村相鄰的新寨和金勐自然村曾經(jīng)發(fā)生過鼠疫流行,該血清鼠疫F1抗體陽性者可能的原因是在勞作過程中或走親戚時被跳蚤叮咬而感染鼠疫菌,因為家鼠鼠疫疫源地鼠疫菌株毒力較弱,感染后臨床癥狀不明顯未引起重視或者自行服藥后癥狀消失。目前,該村村民出現(xiàn)鼠疫F1抗體陽性的情況,尚不能確定確切的原因,但應(yīng)加強關(guān)注,一方面需要加強鼠疫監(jiān)測,掌握鼠疫發(fā)生動態(tài),另一方面可以擴大范圍對人群、宿主動物、指示動物、媒介、周圍環(huán)境等進行鼠疫相關(guān)的調(diào)查和研究。

(感謝彌勒市CDC、芒市CDC、梁河縣CDC 等單位的現(xiàn)場協(xié)助,感謝云南省地方病防治所洪梅老師和鐘佑宏老師在實驗方面的指導(dǎo))

利益沖突:無

引用本文格式:武麗,賀琪楠,劉思彤,等.云南家鼠鼠疫疫源地人群和指示動物血清鼠疫F1抗體調(diào)查[J].中國人獸共患病學報,2022,38(6):553-555.DOI:10.3969/j.issn.1002－2694.2022.00.071