渝西地區(qū)兔球蟲病流行情況調(diào)查及蟲種鑒定

譚 純，賈紅菓，梅四鵬，王冰楠，孫 雪，羅 珊，周榮瓊,2

（1.西南大學動物醫(yī)學院，重慶 402460；2.西南大學醫(yī)學研究院，重慶 402460）

【研究意義】兔球蟲病是由艾美耳屬（Eimeria）球蟲寄生于兔肝膽管或腸上皮細胞內(nèi)而引起的一種寄生性原蟲病，在臨床上以腹瀉、生長緩慢、消瘦為主要特征［1-2］。該病一年四季均可發(fā)生與流行，尤其是在溫暖、潮濕的春夏多雨季節(jié)，常呈地方性流行［3］。不同品種、年齡的家兔均可感染［4］。根據(jù)球蟲不同的寄生部位，可將該病分為腸型、肝型和混合型，臨床上最為多見的是混合型［5］。目前已確定感染兔的球蟲有11 種，其中以侵害肝臟的斯氏艾美耳球蟲致病力最強，30 日齡以下的幼兔極易感，且感染率達90%以上，死亡率高達30%以上［6］，對養(yǎng)兔業(yè)可造成巨大的經(jīng)濟損失。目前，防治兔球蟲病多以藥物為主，將抗球蟲藥物添加進飼料或水中是防治兔球蟲病的常見方法［7-8］。由于抗球蟲藥物種類繁多且致病蟲株復雜多變，加上長期不合理使用藥物，兔球蟲不斷產(chǎn)生耐藥性。此外，抗球蟲藥物容易殘留于兔肉中，影響消費者健康［9］。因此，掌握渝西地區(qū)兔球蟲病流行情況和優(yōu)勢蟲種十分必要，有利于科學防治該地區(qū)的兔球蟲病。

【前人研究進展】近年來，一些國內(nèi)外學者對兔球蟲病流行情況進行了調(diào)查。據(jù)Dusynski等［10］報道，全球兔球蟲感染率為64%～100%。Jing 等［11］在對我國14 個省的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，兔球蟲的總體感染率為41.9%，其中流行率最高（70%）的是西北地區(qū)。兔球蟲感染過程中容易受到機體自身免疫程度和外界環(huán)境的影響，且兔球蟲種類多，不同地區(qū)流行蟲種有差異。白鑫等［12］報道斯氏艾美耳球蟲是致病力最強的兔球蟲蟲種，在我國感染范圍廣，主要分布在西南、中南、西北等地區(qū)。任永軍等［13］發(fā)現(xiàn)四川兔球蟲病的感染強度為中、輕度感染，其感染蟲種高達11 種，而致病蟲種為斯氏艾美爾球蟲、黃艾美爾球蟲和腸艾美爾球蟲。陳紅等［14］發(fā)現(xiàn)甘肅兔艾美耳球蟲的總體感染率為50%，其中地區(qū)、品種和年齡等因素是影響兔艾美耳球蟲感染率的風險因素?！颈狙芯壳腥朦c】重慶近10 余年來鮮有兔球蟲病流行病學報告，僅見樵星芳等［15］于2009 年6 月對重慶市中藥研究院實驗兔球蟲感染種類的鑒定。為掌握渝西地區(qū)兔球蟲病的流行情況，本研究對渝西地區(qū)兔球蟲感染情況進行調(diào)查?！緮M解決的關(guān)鍵問題】調(diào)查渝西地區(qū)不同年齡兔和不同規(guī)模養(yǎng)殖場的兔球蟲病流行情況，分析影響該地區(qū)兔球蟲病流行的主要因素，通過形態(tài)學對兔球蟲種類進行鑒定，以期掌握該地區(qū)兔球蟲的流行情況和優(yōu)勢蟲種，從而為兔球蟲病的防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2019 年9 月至2020 年8 月期間，采集渝西8 個區(qū)14 個不同規(guī)模及生產(chǎn)管理水平養(yǎng)殖場的兔糞便樣本1 273 份，其中榮昌區(qū)148 份、永川區(qū)121 份、大足區(qū)166 份、璧山區(qū)196 份、江津區(qū)142 份、銅梁區(qū)161 份、潼南區(qū)140 份、合川區(qū)199 份。將各糞便樣本置于無菌的塑料袋內(nèi)，編號并記錄場址、日齡、糞便外觀、養(yǎng)殖模式及用藥情況等，置于4 ℃冰箱中保存，待檢。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣本處理 采用飽和鹽水漂浮法對采集的糞樣逐一鏡檢。經(jīng)鑒定的陽性樣本通過麥克馬斯特氏法測定克糞便卵囊數(shù)（Oocysts Per Gram，OPG）［16］。

1.2.2 卵囊收集 將陽性樣本用研缽磨碎，加適量清水，充分混勻，先后使用孔徑為100、280 μm 的網(wǎng)篩過濾2 次；將濾液2 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入飽和食鹽水溶液，混勻，1 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入清水，混勻，2 500 r/min 離心10 min；棄上清，往沉淀中加入適量的1%氯胺T 溶液，置于26～28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h，直至95%以上的球蟲卵囊孢子化時停止培養(yǎng)，收集卵囊液，置于4 ℃冰箱中保存。

1.2.3 兔球蟲種類鑒定 參照文獻［15］進行兔球蟲種類鑒定。分別觀察各地區(qū)球蟲孢子化卵囊，從卵囊壁顏色、原生質(zhì)層顏色、有無殘體和卵膜孔等特征進行形態(tài)學鑒定。

采用Excel 2010 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行整理，SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 渝西地區(qū)兔球蟲感染情況

2.1.1 不同地區(qū)兔球蟲感染情況 對渝西地區(qū)1 273 份糞樣進行檢測，結(jié)果（表1）顯示，各地區(qū)均存在兔球蟲感染，平均感染率為90.65%，平均OPG 值為3.50×104。不同地區(qū)之間的感染情況存在不同程度的差異，其中璧山區(qū)和江津區(qū)的兔球蟲感染率最高、達100%，潼南區(qū)的感染率最低、為72.14%；大足區(qū)的兔球蟲OPG 值最高、達到6.56×104，永川的OPG 最低、為9.65×103。

表1 不同地區(qū)兔球蟲感染情況Table 1 Infection of rabbit coccidia in different regions

2.1.2 不同年齡兔球蟲感染情況 對不同年齡兔的糞樣進行鏡檢，結(jié)果（表2）顯示，2 月齡以下兔的球蟲感染率最高、達98.19%，極顯著高于2～4 月齡、4～9 月齡及9 月齡以上年齡段兔的感染率。9 月齡以上兔的球蟲感染率最低、為62.18%；隨月齡增大，兔球蟲感染率逐漸降低。此外，2～4 月齡兔球蟲OPG 最高、達到6.31×104，9 月齡以上的OPG 最低、為2.47×103。

表2 不同年齡兔球蟲感染情況Table 2 Infection of rabbit coccidia at different ages

2.1.3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場兔球蟲感染情況 對來自不同規(guī)模養(yǎng)殖場的兔糞樣進行鏡檢，結(jié)果（表3）顯示，大型養(yǎng)殖場的感染率最高、達到92.90%；小型養(yǎng)殖場的感染率最低、為86.53%，表明兔球蟲感染率隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增大呈上升趨勢。經(jīng)統(tǒng)計學分析，小型養(yǎng)殖場的兔球蟲感染率極顯著低于大型養(yǎng)殖場。中型養(yǎng)殖場的兔球蟲感染強度最高，OPG 達到4.96×104，而大型和小型養(yǎng)殖場的兔球蟲感染強度較低，OPG 分別為2.71×104和2.69×104。

表3 不同規(guī)模養(yǎng)殖場兔球蟲感染情況Table 3 Infection of rabbit coccidia in different breeding scales farms

2.1.4 不同用藥對兔球蟲感染情況的影響 對使用不同藥物的兔糞便樣本進行鏡檢，結(jié)果（表4）顯示，使用鹽霉素養(yǎng)殖場的感染率最高，達到92.31%；使用磺胺氯丙嗪鈉養(yǎng)殖場的感染率最低，為78.51%。經(jīng)統(tǒng)計學分析，使用磺胺氯丙嗪鈉的養(yǎng)殖場兔球蟲感染率極顯著低于使用地克珠利、鹽霉素的養(yǎng)殖場和未用藥養(yǎng)殖場。未用藥養(yǎng)殖場的兔球蟲感染強度最高，OPG 達到4.42×104，而使用磺胺氯丙嗪鈉養(yǎng)殖場的兔球蟲感染強度較低，OPG 為1.04×104。

表4 不同用藥對兔球蟲感染情況的影響Table 4 Effects of different drugs on rabbit coccidia infection

2.2 兔球蟲種類鑒定及優(yōu)勢蟲種分析

對渝西8 個區(qū)14 個養(yǎng)殖場感染的球蟲種類進行鑒定，結(jié)果（表5、圖1）共鑒定出10 種艾美耳球蟲，分別是斯氏艾美耳球蟲（E.stiedai）、大型艾美耳球蟲（E.magna）、中型艾美耳球蟲（E.media）、小型艾美耳球蟲（E.exigua）、無殘艾美耳球蟲（E.irresidua）、穿孔艾美耳球蟲（E.perforans）、黃艾美耳球蟲（E.f lavescens）、盲腸艾美耳球蟲（E.coecicola）、腸艾美耳球蟲（E.intestinalis）、梨形艾美耳球蟲（E.piriformis）。其中，優(yōu)勢蟲種為穿孔艾美耳球蟲（E.perforans）、大型艾美耳球蟲（E.magna）、盲腸艾美耳球蟲（E.coecicola）和中型艾美耳球蟲（E.media），檢出率分別為25.20%、23.38%、11.96%、10.02%；黃艾美耳球蟲和梨形艾美耳球蟲檢出率最低，僅為1.91%和1.40%。

圖1 渝西地區(qū)10 種兔球蟲（×400）Fig.1 Ten kinds of rabbit coccidia in western Chongqing (×400)

表5 渝西地區(qū)兔球蟲種類Table 5 Species of rabbit coccidia in western Chongqing

2.2.1 不同地區(qū)兔球蟲種類及優(yōu)勢蟲種 渝西8 個地區(qū)中檢出率最高的兔球蟲種類分別為穿孔艾美耳球蟲（24.08%～26.27%）、大型艾美耳球蟲（21.44%～24.01%）和盲腸艾美耳球蟲（10.60%～13.28%）；檢出率最低的是黃艾美耳球蟲（1.23%～2.66%）和梨形艾美耳球蟲（0.99%～2.09%）。8 個區(qū)前3 種優(yōu)勢蟲種均為穿孔艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲和盲腸艾美耳球蟲，榮昌、合川區(qū)中型艾美耳球蟲與無殘艾美耳球蟲檢出率相同，為第4 種優(yōu)勢蟲種；永川、璧山、江津和銅梁區(qū)中型艾美耳球蟲為第4 種優(yōu)勢蟲種；大足區(qū)第4 種優(yōu)勢蟲種為無殘艾美耳球蟲；斯氏艾美耳球蟲為潼南區(qū)的第4 種優(yōu)勢蟲種。

2.2.2 不同年齡兔球蟲種類及優(yōu)勢蟲種 不同年齡檢出率最高的兔球蟲分別為穿孔艾美耳球蟲（21.77%～24.53%）、大型艾美耳球蟲（21.77%～24.53%）、盲腸艾美耳球蟲（10.29%～14.29%）和中型艾美耳球蟲（9.28%～10.90%）；檢出率最低的是黃艾美耳球蟲（1.00%～2.54%）和梨形艾美耳球蟲（0.83%～2.18%）。2 月齡以下、2～4 月齡和9 月齡以上兔優(yōu)勢蟲種依次為穿孔艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲，4～9 月齡兔優(yōu)勢蟲種依次為大型艾美耳球蟲、穿孔艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲（表6）。

表6 不同年齡兔球蟲種類分布情況Table 6 Species of rabbit coccidia at different ages (%)

3 討論

我國是世界兔肉生產(chǎn)大國，無論是兔肉產(chǎn)量和出口方面均位列世界前茅。目前全世界兔肉總產(chǎn)量210 萬t，我國約85 萬t，占1/3 以上［17］。由于我國的兔產(chǎn)業(yè)具有品種不均勻及密集養(yǎng)殖的特點，因此防控兔球蟲病十分困難。據(jù)報道，我國不同地區(qū)、不同兔場以及不同日齡的兔球蟲總感染率為41.9%～87.4%［12-14,18］。Jing 等［11］發(fā)現(xiàn)西南地區(qū)兔球蟲的感染率為62.5%，Yin 等［19］報道四川兔球蟲感染率為56.4%。而本研究渝西地區(qū)兔球蟲的感染比較普遍，感染率達到90.65%，平均OPG 為3.50×104，其中2 月齡以下兔的球蟲感染率最高，與上述報道一致。

渝西地區(qū)不同規(guī)模養(yǎng)殖場兔球蟲的感染率隨養(yǎng)殖規(guī)模的增大呈上升趨勢。小型養(yǎng)殖場球蟲感染率（86.53%）低于大型養(yǎng)殖場（92.90%）和中型養(yǎng)殖場（90.89%）。而Jing 等［11］對我國14 個省48 個養(yǎng)殖場的兔球蟲進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小型養(yǎng)殖場的兔球蟲感染率（61.4%）高于大型（34.2%）和中型（37.1%）養(yǎng)殖場，本研究結(jié)果與其存在差異。分析原因可能是渝西地區(qū)大、中型養(yǎng)殖場養(yǎng)殖兔數(shù)量過多，衛(wèi)生狀況較差；同時因場地有限，各年齡段兔混養(yǎng)現(xiàn)象普遍存在，導致兔球蟲感染率及感染強度升高。

目前國際公認的兔球蟲有效種有11 種［13］，而不同地區(qū)兔球蟲種類的優(yōu)勢蟲種也存在差異。Maziz-Bettahar 等［20］報道阿爾及利亞北部的優(yōu)勢蟲種為大型艾美耳球蟲（42.5%）。Ladron等［3］發(fā)現(xiàn)墨西哥流行最廣的蟲種為腸艾美耳球蟲（11.3%）。Jing 等 ［11］報道了我國優(yōu)勢蟲種為穿孔艾美耳球蟲（35.2%）、中型艾美耳球蟲（31%）和大型艾美耳球蟲（28%）。Yin 等［19］發(fā)現(xiàn)四川兔球蟲流行種類為穿孔艾美耳球蟲（42.7%）、中型艾美耳球蟲（35.45%）、無殘艾美耳球蟲（34.55%）和大型艾美耳球蟲（31.82%）。本試驗在渝西地區(qū)共鑒定出10 種艾美耳球蟲，其中 優(yōu)勢蟲種為 穿孔艾美耳球蟲（25.20%）、大型艾美耳球蟲（23.38%）、盲腸艾美耳球蟲（11.96%）。本研究鑒定的優(yōu)勢蟲種與上述報道相符。穿孔艾美耳球蟲和盲腸艾美耳球蟲屬于輕微致病和無致病性的兔球蟲種類，而大型艾美耳球蟲和中型艾美耳球蟲屬于中等致病力的蟲種，與家兔腸道炎癥病變和腹瀉有關(guān)。

4 結(jié)論

渝西地區(qū)兔球蟲感染率較高，平均感染率為90.65%，平均OPG 為3.50×104，說明該地區(qū)兔球蟲感染非常普遍。其中2 月齡以下兔感染率為98.19%，顯著高于其他年齡段兔感染率，應加強對2 月齡以下兔球蟲病的防治。小型養(yǎng)殖場兔球蟲感染率為86.53%，顯著低于大型規(guī)?；B(yǎng)殖場，表明小型養(yǎng)殖場更易于兔球蟲病的控制。使用過磺胺氯丙嗪鈉的養(yǎng)殖場兔球蟲感染率極顯著低于使用地克珠利、鹽霉素的養(yǎng)殖場及未用藥的養(yǎng)殖場，表明磺胺氯丙嗪鈉能更有效地防治兔球蟲病。渝西地區(qū)兔球蟲種類呈現(xiàn)混合感染，不同地區(qū)的前3 位優(yōu)勢蟲種相同，均為穿孔艾美耳球蟲（E.perforans）、大型艾美耳球蟲（E.magna）、盲腸艾美耳球蟲（E.coecicola），第四優(yōu)勢蟲種存在差異，應針對優(yōu)勢蟲種選擇合適的抗球蟲藥物進行預防和治療。