宋小飛，王紅芳，宋素麗，柴青葉，陳慧，張輝，游蓉麗

(山西振東制藥股份有限公司，山西長(zhǎng)治 046000)

鹽酸培唑帕尼，化學(xué)名稱為5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]嘧啶-2-基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺單鹽酸鹽，是第二代絡(luò)氨酸酶抑制劑，是一種新型口服血管生成抑制劑，可以干擾難治性腫瘤血管的生成[1-3]，用于治療晚期腎細(xì)胞癌[4]、非小細(xì)胞肺癌[5]、肉瘤等多種腫瘤[6-7]。

選擇適當(dāng)?shù)娜軇┖铣稍纤幙梢蕴岣呤章驶蛘呖刂扑幬锏男再|(zhì)，如晶型[8]、純度[9]和溶解度[10]。但殘留于原料藥中的溶劑，會(huì)對(duì)人體造成一定的危害，如苯[11]、甲醇[12]、乙醇[13]等，因此國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)及中國(guó)藥典均對(duì)原料藥中可能存在的殘留溶劑分為3 類進(jìn)行控制。根據(jù)鹽酸培唑帕尼合成工藝，確定需要控制的殘留溶劑為乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯和二甲基亞砜。鹽酸培唑帕尼為難溶性藥物，不溶于水，在常見有機(jī)溶劑中的溶解度較小?；旌先軇┛梢栽黾与y溶性藥物溶解度[14]。筆者以苯甲醇-水(體積比為95∶5)溶液為溶劑，依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2020 年版四部[15]相關(guān)要求及ICHQ3C(R8)殘留溶劑指導(dǎo)原則[16]，參考文獻(xiàn)[17-20]，建立了氣相色譜法測(cè)定鹽酸培唑帕尼原料藥中乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲基亞砜5 種殘留溶劑。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：GC 7890B 型，配有氫火焰離子化(FID)檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司。

電子分析天平：TB-215D 型，感量為0.01 mg，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。

超純水處理系統(tǒng)：Milli-Q References 型，美國(guó)密理博公司。

鹽酸培唑帕尼樣品：批號(hào)為210601，山西振東泰盛制藥有限公司。

乙醇：色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜：色譜純，北京百靈威科技有限公司。

碳酸二甲酯、苯甲醇：色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

高純氮?dú)猓杭兌葹?9.999%(體積分?jǐn)?shù))，山西省長(zhǎng)治炬能化工氣體有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水為超純水，由Milli-Q References 型超純水處理系統(tǒng)制備。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB-624 型毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm，3.0 μm，美國(guó)安捷倫科技有限公司)；載氣：高純氮?dú)猓恢郎爻绦颍浩鹗紲囟葹?0 ℃，保持5 min，以20 ℃/min 的速率升溫至120 ℃，保持5 min，以20 ℃/min 的速率升溫至200 ℃，保持10 min，以20℃/min 的速率升溫至220 ℃，保持3 min；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；檢測(cè)器：FID，溫度為300 ℃；柱流量：2.0 mL/min；進(jìn)樣方式：溶液直接進(jìn)樣；分流比為20∶1；進(jìn)樣體積：1 μL；定量方法：色譜峰面積外標(biāo)法。

1.3 溶液配制

苯甲醇-水溶液：由苯甲醇和水按體積比為95∶5 混合制得。

乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜對(duì)照品貯備溶液：25 mg/mL，分別取乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜各約0.25 g，精密稱定，分別置于10 mL容量瓶中，用苯甲醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。

碳酸二甲酯對(duì)照品貯備溶液：5 mg/mL，取碳酸二甲酯約0.05 g，精密稱定，置于10 mL 容量瓶中，用苯甲醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。

乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品貯備溶液：乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜的質(zhì)量濃度均為1 mg/mL，碳酸二甲酯的質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL，精密量取乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯對(duì)照品貯備溶液各1 mL，置于同一只25 mL 容量瓶中，用苯甲醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。

乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品溶液：乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜的質(zhì)量濃度均為0.5 mg/mL，碳酸二甲酯的質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL，精密量取乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯對(duì)照品貯備溶液各1 mL，置于同一只50 mL 容量瓶中，用苯甲醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻。

鹽酸培唑帕尼樣品溶液：100 mg/mL，取鹽酸培唑帕尼樣品約1 g，精密稱定，置于10 mL 容量瓶中，加入苯甲醇-水溶液溶解并稀釋至標(biāo)線，搖勻。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑選擇

鹽酸培唑帕尼是一種難溶性藥物，在水、N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氫呋喃溶劑中溶解度較小?；旌先軇┦翘岣唠y溶性藥物溶解度的一種有效的方法[21-22]。分別考察了鹽酸培唑帕尼在不同比例的甲醇-水溶液、N，N-二甲基甲酰胺-水溶液、四氫呋喃-水溶液、苯甲醇-水溶液4 種混合溶劑中的溶解度，結(jié)果表明，鹽酸培唑帕尼在苯甲醇-水(體積比為95∶5)溶液中的溶解度較好，各待測(cè)成分色譜峰形尖銳、對(duì)稱，分離度均符合要求，故選擇苯甲醇-水(95∶5)溶液為溶劑。

2.2 進(jìn)樣方式選擇

氣相色譜法常用的進(jìn)樣方式有溶液直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣，由于樣品中待測(cè)溶劑二甲基亞砜沸點(diǎn)為189 ℃，不易采用頂空進(jìn)樣，故采用直接進(jìn)樣方式。

2.3 色譜條件選擇

根據(jù)鹽酸培唑帕尼中待測(cè)溶劑的極性，確定選擇弱極性及中等極性的色譜柱進(jìn)行分離。分別考察了HP-35、DB-225、DB-5 及DB-624 色譜柱對(duì)5 種待測(cè)溶劑的分離度。結(jié)果表明，DB-624 色譜柱的分離效果較好，故選用DB-624 色譜柱。

乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯的沸點(diǎn)最低為78.3 ℃，最高為90 ℃，考察起始柱溫分別為50、60、70 ℃時(shí)5種待測(cè)溶劑的分離效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柱溫為50 ℃和70 ℃時(shí)乙酸乙酯和碳酸二甲酯的分離度分別為1.8 和2.0；柱溫為60 ℃時(shí)兩者分離度為2.5，故選擇初始柱溫為60 ℃。二甲基亞砜和苯甲醇的沸點(diǎn)分別為189 ℃和205 ℃，故采用程序升溫進(jìn)行分離，保證各待測(cè)成分的分離度達(dá)到要求。柱升溫程序優(yōu)化結(jié)果見1.2。

在選定的色譜條件下，分別對(duì)溶劑空白(苯甲醇-水溶液)、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品溶液和鹽酸培唑帕尼加標(biāo)樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，色譜圖如圖1～圖3 所示。結(jié)果表明，5 種待測(cè)溶劑理論塔板數(shù)均大于5 000，分離度均大于1.5，各待測(cè)組分分離度良好，互相不干擾測(cè)定，樣品基質(zhì)不干擾乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲基亞砜的測(cè)定。

圖1 溶劑空白溶液色譜圖

圖2 混合對(duì)照品溶液色譜圖

圖3 鹽酸培唑帕尼加標(biāo)樣品溶液色譜圖

2.4 線性方程與檢出限

精密量取乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯對(duì)照品貯備溶液，分別加入苯甲醇-水溶液并稀釋成適宜質(zhì)量濃度的溶液，在1.2 色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，分別以3 倍信噪比和10 倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為方法檢出限和定量限。

以定量限為起始質(zhì)量濃度，分別精密量取乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品貯備溶液2.5、4、5、7.5、10 mL，分別置于5 只10 mL 容量瓶中，用苯甲醇-水溶液稀釋至標(biāo)線，搖勻，配制成系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其中乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲基亞砜的質(zhì)量濃度見表1。

表1 系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中5 種溶劑的質(zhì)量濃度 μg/mL

在1.2 色譜條件下，分別測(cè)定乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲基亞砜系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以待測(cè)溶劑的質(zhì)量濃度為自變量、對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為因變量進(jìn)行線性回歸，計(jì)算線性方程和相關(guān)系數(shù)。5 種有機(jī)溶劑質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表2。

表2 質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

由表2 可知，5 種有機(jī)溶劑在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不小于0.998，方法檢出限為5.99～11.72 μg/mL。

2.5 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

精密稱取鹽酸培唑帕尼樣品9 份，按照所建方法測(cè)定5 種殘留溶劑含量，然后分別加入適量的乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品貯備溶液，進(jìn)行低、中、高3 種質(zhì)量濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每種質(zhì)量濃度水平的加標(biāo)樣品平行制備3 份樣品溶液，在1.2 色譜條件下分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表3 可知，乙醇回收率為95.97%～104.83%，異丙醇回收率為94.83%～99.94% 內(nèi)，乙酸乙酯回收率為94.74%～102.49%，碳酸二甲酯回收率為91.09%～118.97%，二甲基亞砜回收率為88.22%～94.35%，5 種有機(jī)溶劑平均回收率為90.73%～102.88%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.83%、1.79%、2.57%、8.31%、2.01%，均小于10.0%，表明該方法準(zhǔn)確度、精密度均較高。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取鹽酸培唑帕尼樣品，加入一定質(zhì)量濃度的乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯混合對(duì)照品貯備溶液，配制成加標(biāo)樣品溶液，分別于配制完成后第0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48 h 進(jìn)樣分析，結(jié)果見表4。由表4 可知，鹽酸培唑帕尼加標(biāo)樣品溶液在室溫下放置48 h，乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、二甲基亞砜質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.92%、1.04%、0.99%、2.77%、1.18%，均小于10.0%，表明鹽酸培唑帕尼加標(biāo)樣品溶液在室溫下放置48 h 穩(wěn)定性良好。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)5 種有機(jī)溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果 %

3 結(jié)語

建立了氣相色譜法測(cè)定鹽酸培唑帕尼中乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二甲基亞砜、碳酸二甲酯5 種殘留溶劑的分析方法，該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性好，準(zhǔn)確度高，耐用性好，為鹽酸培唑帕尼的質(zhì)量控制提供了一定的依據(jù)。