王麗，錢國雙，吳霖

(南陽市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科，河南 南陽 473002)

單核細(xì)胞增生李斯特菌(簡稱單增李斯特菌)是一種人畜共患病原菌，在自然界廣泛存在，主要通過污染的食品感染人類。其中老年人、孕婦、新生兒和免疫功能障礙者是易感人群，且在感染后容易出現(xiàn)腸胃炎、敗血癥、腦膜炎、孕婦流產(chǎn)、死胎等，病死率高達(dá) 20%～30%[1-2]，危險(xiǎn)性極強(qiáng)。近年來歐美國家單增李斯特菌食物中毒事件不斷發(fā)生，如2020年美國金針菇污染事件、2019年法國奶酪污染事件、2017年加拿大黃油污染事件[3]等。我國也屢有關(guān)于圍生期母嬰感染單增李斯特菌導(dǎo)致新生兒敗血癥等嚴(yán)重后果的報(bào)道[4-5]。自2000年我國將食品中的單增李斯特菌監(jiān)測納入食品污染物監(jiān)測網(wǎng)以來，大量研究報(bào)告了我國不同城市或食品中有單增李斯特菌檢出，且檢出率大于10%[6-8]，說明單增李斯特菌已成為威脅我國人群健康的潛在病原菌。按照河南省食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測要求，本研究對南陽市肉與肉制品、餐飲食品和含乳冷凍飲品中的單增李斯特菌進(jìn)行檢測，主動(dòng)發(fā)現(xiàn)可能藏納李斯特菌病的重點(diǎn)食品，為地方食品安全提供風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警。

1 材料與方法

1.1 樣品來源和種類為了解南陽市食品中單增李斯特菌的污染狀況，及時(shí)發(fā)現(xiàn)食品中的安全隱患，根據(jù)河南省食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測工作方案中微生物及其致病因子的監(jiān)測要求，采用簡單隨機(jī)抽樣方式，于2019—2021年在南陽市及所轄區(qū)縣的超市、網(wǎng)店、農(nóng)貿(mào)市場、飯店、快餐店、學(xué)校食堂、街頭攤點(diǎn)等食品銷售場所，采集三大類食品樣品共270份，包括肉與肉制品93份，餐飲食品146份和含乳冷凍飲品31份。采樣過程嚴(yán)格按微生物要求無菌操作。

1.2 儀器和試劑VITEK 2 Compact型全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)由生物梅里埃公司生產(chǎn)，恒溫培養(yǎng)箱購自美國SHELLAB公司，增菌液LB1、LB2及細(xì)菌生化試劑盒購自北京陸橋技術(shù)有限公司，單增李斯特菌顯色平板和哥倫比亞血平板購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，革蘭陽性菌鑒定卡購自梅里埃診斷產(chǎn)品(上海)有限公司，單增李斯特菌分型用血清購自天津生物芯片技術(shù)有限責(zé)任公司，藥敏板購自上海星佰生物技術(shù)有限公司。所有培養(yǎng)基和試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 檢驗(yàn)方法按照GB 4789.30—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)》[9]的方法對樣品進(jìn)行檢測，采用全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK 2 Compact 鑒定菌株。參照單增李斯特菌血清分型方法(SN/T 2521—2010)[10]，根據(jù)菌體抗原和鞭毛抗原的血清學(xué)反應(yīng)，通過玻片凝集試驗(yàn)對35株單增李斯特菌進(jìn)行血清分型。 參考既往耐藥監(jiān)測結(jié)果，根據(jù)美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)文件M100—S29[11]和M45—A3[12]抗生素選擇原則，確定了耐藥監(jiān)測的抗生素有青霉素、氨芐西林、美羅培南、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星和四環(huán)素共6種。用微量肉湯稀釋法對35株單增李斯特菌進(jìn)行耐藥性檢測和分析，參照美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)M45—A3相關(guān)解釋標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定[12]。

1.4 質(zhì)量控制檢測時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)量控制，并對使用的試劑進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)收，所檢出的陽性菌株送河南省疾病預(yù)防控制中心復(fù)核。本實(shí)驗(yàn)室每年參加質(zhì)控考核，且考核合格。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)和率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)ɑ=0.05。

2 結(jié)果

2.1 總體情況2019—2021年對南陽市270份食品樣品進(jìn)行單增李斯特菌檢測，共檢出陽性菌株35株，總檢出率為12.96%。2019—2021年檢出率分別為13.79%(8/58)、16.98%(18/106)和8.49%(9/106)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.432，P=0.180)。

2.2 不同季度食品單增李斯特菌的檢出情況4個(gè)季度均有陽性菌株檢出，其中第一季度檢出率最低，第三季度檢出率最高，約為第一季度的2倍，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.556，P=0.669)。見表1。

表1 2019—2021年間不同季度食品單增李斯特菌的檢出情況[n(%)，份]

2.3 不同類別食品單增李斯特菌的檢出情況不同類別食品中肉與肉制品的檢出率最高，其次為餐飲食品，含乳冷凍飲品最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.555，P<0.001)。肉與肉制品類別中的各細(xì)分種類均檢出陽性菌株，其中生禽肉檢出率最高；餐飲食品類別中，陽性菌株檢出主要集中在預(yù)包裝冷藏食品、外賣配送餐和流動(dòng)攤販?zhǔn)称?，其他種類則未檢出。見表2。

表2 不同類別食品單增李斯特菌的檢出情況[n(%)，份]

2.4 單增李斯特菌的血清分型結(jié)果35株單增李斯特菌分屬于3個(gè)血清型(1/2b、1/2a和4e)，其中1/2b型為主要血清型，有19株，占比54.29%；其次是1/2a型，有15株，占比42.86%；4e型只有1株，在含乳冷凍飲品中檢出，占2.86%。1/2b型、1/2a型在肉與肉制品和餐飲食品中均有檢出。

2.5 單增李斯特菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果35株單增李斯特菌對青霉素、氨芐西林、美羅培南和四環(huán)素都敏感。僅有2株對環(huán)丙沙星耐藥，耐藥率為5.71%，均分離自生雞肉；有1株對復(fù)方新諾明的耐藥處于中介，中介率為2.86%，分離自調(diào)理雞翅；有3株對環(huán)丙沙星的耐藥處于中介，中介率為8.57%，分別分離自雞肉、鴨肉和調(diào)理牛肉。

3 討論

南陽市2019—2021年食品中單增李斯特菌的陽性檢出率為12.96%(35/270)，高于寶雞市(8.49%)[13]和自貢市(7.67%)[14]，更遠(yuǎn)高于臨沂市(4.62%)[15]和吉林市(4.25%)[16]，與上海市(12.61%)[8]接近，說明相較于國內(nèi)其他城市，南陽市市售食品的單增李斯特菌污染風(fēng)險(xiǎn)相對較高。此外，各年度陽性檢出率呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢，雖然2021年度的陽性檢出率下降，但各年度陽性檢出率無明顯差異，提示衛(wèi)生部門應(yīng)持續(xù)重點(diǎn)關(guān)注本地單增李斯特菌污染風(fēng)險(xiǎn)，加大監(jiān)測力度和監(jiān)測范圍，以獲得更全面的數(shù)據(jù)，對食品安全風(fēng)險(xiǎn)做出預(yù)警。

本研究結(jié)果顯示，南陽市4個(gè)季度均檢出含有單增李斯特菌的食品，各季度檢出率無明顯差異，這與北京市東城區(qū)只有二、三季度檢出的結(jié)果不同[17]。不同類別食品的單增李斯特菌檢出率差異顯著，說明南陽市食品中單增李斯特菌的污染與采樣季節(jié)無關(guān)，與食品類別密切相關(guān)。

本研究中單增李斯特菌在南陽市的肉與肉制品、餐飲食品和含乳冷凍飲品均有檢出，說明該菌的污染范圍較廣，易污染各類食品。其中肉與肉制品檢出率最高，與多地監(jiān)測結(jié)果[18-20]一致，提示肉與肉制品的單增李斯特菌污染風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)成為南陽市的重點(diǎn)監(jiān)測食品之一。從具體種類來看，生禽肉、熟肉、調(diào)理肉、冷凍魚糜等待加工食材的檢出率高于預(yù)包裝冷藏食品、外賣配送餐和流動(dòng)攤販?zhǔn)称返人偈郴蚣词呈称返臋z出率。其中生禽肉的檢出率最高，可能與原料肉被污染或在屠宰加工、低溫貯藏、運(yùn)輸、銷售過程中的交叉污染有關(guān)。散裝熟肉制品是在我國各年齡組人群中均可能發(fā)生李斯特菌病的高風(fēng)險(xiǎn)食品[21]，如果購買者食用前不加熱或加熱不充分，引起食物中毒的潛在風(fēng)險(xiǎn)更大。單增李斯特菌的溫度適應(yīng)性很強(qiáng)，能在0～45 ℃下生存，在冰箱的冷藏溫度下仍可以生長繁殖，甚至在-20 ℃的冷凍室也能存活1 a，能夠承受高鹽環(huán)境和冷凍環(huán)境等，被稱為冰箱殺手[22]。如果冰箱、冰柜不能定期清洗消毒，容易造成病原菌在冰箱和食品間形成污染循環(huán)，導(dǎo)致持續(xù)污染，這也是在冷凍魚糜和預(yù)包裝冷藏食品中檢出單增李斯特菌的原因。外賣和流動(dòng)攤販等食品因其流動(dòng)性強(qiáng)、人員復(fù)雜、衛(wèi)生條件差等原因很難監(jiān)管到位。如果加工設(shè)備帶菌，加上從業(yè)人員對食品的無防護(hù)處理，可能就會(huì)在生產(chǎn)銷售過程中通過加工人員或器具污染食品，而且一旦污染就很難被消除和控制。建議監(jiān)管部門加強(qiáng)衛(wèi)生監(jiān)督，規(guī)范街頭攤點(diǎn)等，改善生產(chǎn)場所衛(wèi)生條件，提高市售食品安全性。

單增李斯特菌的血清型分為1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e和7型，與人或動(dòng)物感染單增李斯特菌有關(guān)的血清型90%以上都是1/2a、1/2b和4b 3種[23]。本研究與廣州[24]和溫州[25]的結(jié)果相似，分離的35株單增李斯特菌血清型是以1/2b、1/2a為主的致病性血清型，有引起食源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)，有待于進(jìn)一步與臨床標(biāo)本結(jié)合研究，探討食品分離株與臨床分離株之間的關(guān)系。

同時(shí)耐藥監(jiān)測結(jié)果顯示，35株單增李斯特菌對臨床推薦用藥青霉素、氨芐西林、美羅培南和四環(huán)素均未出現(xiàn)耐藥，有利于臨床治療控制。此外，有2株菌對環(huán)丙沙星耐藥，有4株菌對復(fù)方新諾明和環(huán)丙沙星的耐藥處于中介，且都分離自生禽肉和調(diào)理肉中，說明南陽市生肉中抗生素濫用，可能與養(yǎng)殖戶長期使用抗生素預(yù)防動(dòng)物疾病有關(guān)，提示相關(guān)部門在嚴(yán)格控制抗生素使用的同時(shí)，應(yīng)高度重視并持續(xù)開展耐藥監(jiān)測，掌握本地區(qū)菌株耐藥的動(dòng)態(tài)變化，及時(shí)給臨床用藥提供參考。

南陽市食品受單增李斯特菌污染廣泛，污染風(fēng)險(xiǎn)相比其他城市較高，肉與肉制品，尤其生禽肉是高風(fēng)險(xiǎn)食品。建議擴(kuò)大食品的監(jiān)測種類及范圍，增加原料、生產(chǎn)加工及銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)的專項(xiàng)監(jiān)測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染的源頭；加強(qiáng)食品衛(wèi)生管理，做好食品衛(wèi)生與健康宣傳，告知消費(fèi)者安全的食品處理方法，提高廣大市民的衛(wèi)生防范意識和自我保護(hù)能力；進(jìn)行基因測序和分子溯源，探明食源性單增李斯特菌和臨床單增李斯特菌之間的關(guān)系，增強(qiáng)南陽市對李斯特菌病的防控能力。