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      菜心和芥藍(lán)種間雜交創(chuàng)制異源四倍體蔬菜種質(zhì)

      2022-08-27 05:06:38呂鳳仙和江明李崇娟胡靖鋒楊紅麗徐學(xué)忠張麗琴
      關(guān)鍵詞:芥藍(lán)雜種菜心

      呂鳳仙,和江明,李崇娟,楊 鼎,胡靖鋒,*,楊紅麗,蘭 梅,徐學(xué)忠,張麗琴

      (1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 園藝作物研究所,云南 昆明 650205; 2.云南大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,云南 昆明 650504; 3.國家蔬菜改良中心云南分中心,云南 昆明 650205)

      菜心(L. sspvar.Tsen. et Lee, AA, 2=20)和芥藍(lán)(var., CC, 2=18)均為十字花科蕓薹屬中以花薹為產(chǎn)品的蔬菜,由于營養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特,廣受消費(fèi)者的喜愛。由于菜心和芥藍(lán)在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用的多為地方常規(guī)品種,存在產(chǎn)量低、品質(zhì)差、病蟲害嚴(yán)重等問題,需要選育商品性和品質(zhì)更好的品種。但菜心和芥藍(lán)現(xiàn)有遺傳資源背景狹窄,種質(zhì)資源不夠豐富,僅通過常規(guī)的種內(nèi)雜交很難在現(xiàn)有基礎(chǔ)上取得突破性進(jìn)展,選育的推廣品種抗逆性和品質(zhì)都不能很好地滿足市場和生產(chǎn)的需求。通過菜心和芥藍(lán)的種間雜交,可以創(chuàng)造綜合親本優(yōu)勢的新物種、新材料,是解決基因資源匱乏的重要手段。但遠(yuǎn)緣雜交胚乳的敗育導(dǎo)致胚的最終死亡,以及遠(yuǎn)緣雜交受精后的不親和性,雜交后無法結(jié)種,自然生長無法得到后代,需要通過人工胚挽救等措施才能得到種間雜種。梁紅等、喬海云通過蕓薹屬間的遠(yuǎn)緣雜交,創(chuàng)造了新的作物種類,豐富了蕓薹屬的遺傳背景。滿紅、魏云曉等通過種間雜交結(jié)合胚挽救的方法,創(chuàng)建了菜薹和芥藍(lán)的種間異源四倍體和異源三倍體種質(zhì),但作為重要的薹用蔬菜,有關(guān)菜心和芥藍(lán)的種間雜種創(chuàng)制新型薹用蔬菜的系統(tǒng)研究還不多。本研究以菜心作為母本,芥藍(lán)作為父本,在種間雜交后進(jìn)行人工胚挽救,并篩選適合的胚挽救方式、增殖擴(kuò)繁方式、染色體加倍方式,以克服種間雜交不親和性,提高種間雜種獲得率,創(chuàng)制異源四倍體蔬菜種質(zhì),以期獲得綜合兩親本優(yōu)良性狀、具有良好商品性和生產(chǎn)價(jià)值的新薹用蔬菜,為后續(xù)菜心和芥藍(lán)的育種過程提供材料。

      1 材料與方法

      1.1 材料

      供試的菜心編號(hào)CX001,芥藍(lán)編號(hào)JL001,均為云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所十字花科課題組多年選育材料。

      1.2 試驗(yàn)方法

      1.2.1 種間雜交

      于2020年6月16日播種,2020年7月8日定植于云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院嵩明實(shí)驗(yàn)基地塑料大棚內(nèi),進(jìn)行常規(guī)栽培管理。菜心于2020年7月20日開始抽薹,芥藍(lán)于2020年7月27日開始抽薹。在初花期,雜交前2 d摘除父本花序上已開放花朵套袋隔離。于母本開花當(dāng)天,去除母本植株上已開放和已露柱頭花蕾,對(duì)未開放花蕾進(jìn)行剝蕾去雄,授以父本花粉,授粉后套袋隔離,嚴(yán)防父本以外的花粉污染。

      1.2.2 培養(yǎng)基

      雜交后第13天,飽滿胚珠數(shù)量較多,觀察種莢生長情況。選取表面有明顯凸起的種莢,于超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%乙醇浸泡50 s,將乙醇倒出后用10%次氯酸鈉浸泡15 min,倒出次氯酸鈉后用無菌水沖洗3次,最后用無菌水浸泡3 min。用解剖刀沿子房腹縫線和背縫線處輕輕切開,用鑷子挑取飽滿且呈綠色的胚珠,接種到不同成分的培養(yǎng)基(表1)上,在(25±2) ℃、光周期12 h/12 h(L/D)、光照強(qiáng)度1 500 lx的條件下培養(yǎng),培養(yǎng)30 d,統(tǒng)計(jì)不同培養(yǎng)基的出胚率,篩選最適宜的培養(yǎng)基。

      表1 菜心和芥藍(lán)種間雜種胚挽救培養(yǎng)基成分

      1.2.3 取材時(shí)間

      分別于大田授粉后10、11、12、13、14、15 d,選取表面有明顯凸起的種莢,用1.2.2節(jié)方法消毒后,挑取飽滿且綠的胚珠,接種到ERM培養(yǎng)基上,在1.2.2節(jié)條件下培養(yǎng),接種一周后觀察是否發(fā)生污染,30 d后統(tǒng)計(jì)出胚率,觀察不同取材時(shí)間對(duì)出胚率的影響。

      1.2.4 生根培養(yǎng)基

      將成活并成功分化的胚珠轉(zhuǎn)移至增殖培養(yǎng)基DM(MS+0.9 mg·L6-BA+0.1 mg·LNAA)上進(jìn)行增殖分化,具有完整植株形態(tài)后轉(zhuǎn)接至1/2MS培養(yǎng)基上繼續(xù)生長,至植株具3對(duì)真葉后,轉(zhuǎn)移至MS或1/2MS添加不同生長素的RM、RM、RM、RM培養(yǎng)基,具體成分如表2所示,統(tǒng)計(jì)各培養(yǎng)基生根率和生根時(shí)間,篩選最適宜的生根培養(yǎng)基。

      1.2.5 人工誘導(dǎo)染色體加倍

      通過增殖分化培養(yǎng)基擴(kuò)繁后的植株,使用秋水仙堿處理進(jìn)行染色體加倍,處理方法分為3種。A處理:3對(duì)真葉幼苗轉(zhuǎn)接至含50~90 mg·L秋水仙堿的1/2MS培養(yǎng)基,在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)8 d,轉(zhuǎn)接至不含秋水仙堿的生根培養(yǎng)基,生根后定植。B處理:3對(duì)真葉幼苗轉(zhuǎn)接至含50~90 mg·L秋水仙堿的生根培養(yǎng)基,生根后定植。C處理:3對(duì)真葉幼苗轉(zhuǎn)接至不含秋水仙堿的生根培養(yǎng)基,生根后煉苗,在成活植株抽薹前,將0.2%秋水仙堿溶液滴于植株頂芽和葉腋之間(每日上午1次,連續(xù)5 d)。

      表2 菜心和芥藍(lán)種間雜種生根培養(yǎng)基成分

      處理后的植株,在田間常規(guī)管理,開花后取新鮮花朵,去除花瓣和雌蕊,將花粉置于干凈載玻片上,滴加2~3滴亞歷山大染色液(Alexander Stain),充分混合后蓋上干凈蓋玻片,染色5~10 h后在顯微鏡下觀察。

      1.2.6 種間雜種F代鑒定

      形態(tài)學(xué)鑒定:在F代雜種植株繁茂時(shí)觀察,記錄其葉形、葉色、葉表面特征、花器官的顏色大小、植株高度和開展度,以及生長習(xí)性,對(duì)經(jīng)秋水仙素處理植株和未處理植株進(jìn)行比較,并分別與菜心和芥藍(lán)兩親本進(jìn)行比較。

      花藥染色體觀察:經(jīng)人工染色體加倍處理后的植株現(xiàn)蕾后,取植株未開放花序,選取直徑≤2 mm的花蕾,用新鮮卡諾固定液(乙醇∶醋酸體積比3∶1)固定過夜,后視固定液顏色每6 h更換一次固定液,直至花蕾顏色泛白且固定液無色,剝?nèi)』ɡ偃∑渲?個(gè)花藥,參照楊漢等的方法進(jìn)行染色體制片,卡寶品紅染色液染色后,用電子顯微鏡觀察并統(tǒng)計(jì)花藥染色體數(shù)量。

      雌蕊染色體觀察:選取植株未開放花序上直徑2~3 mm花蕾,用解剖針取出完整雌蕊,置于0.002 mol·L8-羥基喹啉中,4 ℃冰箱中暗處理3 h,轉(zhuǎn)入卡諾固定液中固定過夜,取1個(gè)雌蕊置于1 mol·L鹽酸中,60 ℃水浴7.5 min后,蒸餾水浸泡材料1 min,在載玻片上搗碎材料后用卡寶品紅染色30 s,壓片后在電子顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)雌蕊染色體數(shù)量。分別將花藥和雌蕊染色體數(shù)量與親本染色體數(shù)量進(jìn)行比較。

      倍性鑒定:參照Yang等的解離液、染液配方和實(shí)驗(yàn)步驟,采用流式細(xì)胞儀對(duì)種間雜種F進(jìn)行倍性分析。以菜心、芥藍(lán)和甘藍(lán)型油菜為參照樣本,取F植株、親本、甘藍(lán)型油菜新鮮幼嫩葉片25 mg左右,加入400 μL預(yù)冷的“Aru” 緩沖液,用鋒利刀片快速切碎至沒有明顯大塊,經(jīng)400目過濾器過濾至5 mL管中,加入2.5 μL RNase A(20 mg·mL)和5 μL PI染液(10 mg·mL),充分混勻后于冰上避光孵化30 min,移至上樣管上機(jī)檢測,收集5 000~10 000個(gè)顆粒,觀察樣本主峰位置,分析樣本倍性。

      1.3 數(shù)據(jù)分析

      利用SPSS23.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性顯著分析。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 培養(yǎng)基成分對(duì)出胚的影響

      如表3所示,接種在ERM培養(yǎng)基上的胚珠均未成功分化,出胚率為0,其余4種培養(yǎng)基的出胚率均不同,ERM培養(yǎng)基出胚率為10.47%,顯著高于其他培養(yǎng)基。因此,ERM(MS+0.5 mg·L6-BA+0.5 mg·LNA+1.0 mg·LKT+1 g·LAC)為菜心和芥藍(lán)種間雜種的最佳胚挽救培養(yǎng)基。

      表3 菜心×芥藍(lán)雜種胚珠在不同培養(yǎng)基上出胚率

      2.2 不同取材時(shí)間對(duì)出胚的影響

      如表4所示,不同取材時(shí)間的胚珠,接種后出胚率均存在差異,授粉后10~12 d取材,出胚率逐漸增大,授粉后第12天取材出胚率達(dá)到最高,為26.32%,且顯著高于其他取材時(shí)間。因此,菜心和芥藍(lán)種間雜種胚挽救的最佳取材時(shí)間為授粉后第12天。

      2.3 不同生根培養(yǎng)基對(duì)生根效果的影響

      從表5可知,基本培養(yǎng)基添加不同種類和濃度的生長素,生根效果均存在差異。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,RM與RM生根率最高,分別為36.00%、37.21%,二者無顯著差異,但顯著高于其他培養(yǎng)基。生根時(shí)間最短的為RM,平均生根時(shí)間為8.33 d,與RM平均生根時(shí)間8.67 d無顯著差異,顯著短于其他培養(yǎng)基。

      將幼苗轉(zhuǎn)接至以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基的RM、RM、RM時(shí),部分幼苗出現(xiàn)鹽害現(xiàn)象,葉片部分黃化且逐漸脫落(圖1-A、B、C),轉(zhuǎn)接至以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基的RM,幼苗鹽害現(xiàn)象得到緩解(圖1-D)。綜上所述,RM(1/2MS+0.5 mg·LIBA)生根率最高、生根時(shí)間最短,幼苗生長狀況良好,為菜心和芥藍(lán)種間雜種的最佳生根培養(yǎng)基。

      表4 菜心×芥藍(lán)不同取材時(shí)間出胚率

      表5 菜心×芥藍(lán)種間雜種不同培養(yǎng)基生根情況

      A,RM1上發(fā)生鹽害現(xiàn)象的幼苗;B,RM2上發(fā)生鹽害現(xiàn)象的幼苗;C,RM3上發(fā)生鹽害現(xiàn)象的幼苗;D,RM4上正常生長幼苗。標(biāo)尺=1 cm。A, Seedlings with salt damage on RM1; B, Seedlings with salt damage on RM2; C, Seedlings with salt damage on RM3; D, Normal growth of seedlings on RM4; Bar scale=1 cm.圖1 菜心×芥藍(lán)種間雜種幼苗生根過程生長情況Fig.1 Growth during rooting of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrid seedlings

      2.4 秋水仙素處理誘導(dǎo)染色體加倍效果

      不同染色體加倍處理效果如表6所示,A、B處理幼苗受秋水仙堿影響,生根率較低,大部分苗會(huì)出現(xiàn)葉片枯黃脫落、生長點(diǎn)死亡至整株幼苗死亡(圖2);即使正常生根,在煉苗階段會(huì)由于根系發(fā)育不良,死苗率較高,煉苗后部分幼苗會(huì)出現(xiàn)根系褐化,逐漸腐爛,葉片枯萎脫落,幼苗死亡現(xiàn)象(圖3)。C處理因處理時(shí)間相對(duì)偏后,秋水仙堿對(duì)幼苗抑制效果較小,成活率較高,但誘導(dǎo)所得可育植株均為嵌合體,即出現(xiàn)同一植株部分側(cè)枝、同一側(cè)枝的部分花序可育,部分側(cè)枝、部分花序不可育的現(xiàn)象;經(jīng)花粉育性觀察結(jié)果顯示,可育的花粉粒經(jīng)染色后花粉壁呈綠色,原生質(zhì)呈紅色(圖4-A),花粉具有活性,不可育花粉粒呈綠色(圖4-B),不具有活性,還需要擴(kuò)繁至F代才能用于蔬菜育種試驗(yàn)。但統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,C處理的誘導(dǎo)加倍率可達(dá)62.26%,為最佳的染色體誘導(dǎo)加倍處理方式。

      表6 菜心×芥藍(lán)種間雜種染色體加倍方法處理效果

      1和2,A處理;3和4,B處理。標(biāo)尺=1 cm。1 and 2, Treatment A; 3 and 4, Treatment B. Bar scale=1 cm.圖2 菜心×芥藍(lán)種間雜種染色體加倍過程死亡現(xiàn)象Fig.2 Death of seeldings during the chromosome doubling process of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      2.5 雜種后代表現(xiàn)

      2.5.1 形態(tài)學(xué)表現(xiàn)

      菜心-芥藍(lán)種間雜種F代植株各性狀皆介于親本之間(圖5),基生葉形狀為長卵圓,葉色為深綠色,主薹形狀均與菜心相似,但主薹顏色為淺綠色,葉片和主薹表面都有微量蠟粉,更接近芥藍(lán)。此外,母本菜心所開的花為黃色,雜種植株所開花朵顏色與父本芥藍(lán)相同,為白色。綜合各性狀判斷,雜種植株為菜心×芥藍(lán)種間雜交真雜種。經(jīng)染色體加倍后可育的植株與不育植株相比,花器官和花瓣均較大,可育株的雄蕊飽滿且有花粉,不育株雄蕊干癟無花粉(圖6)??捎甑慕枪^長,表面有明顯膨大,內(nèi)部有飽滿胚珠;不育株的角果較短,表面無膨大,內(nèi)部無胚珠。

      A,A處理;B,B處理。標(biāo)尺=1 cm。A, Treatment A; B, Treatment B. Bar scale=1 cm.圖3 菜心×芥藍(lán)種間雜種經(jīng)染色體加倍處理后幼苗煉苗后死亡現(xiàn)象Fig.3 Death of seeldings with chromosome doubling treatment after the seedling hardening of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee× Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      A,可育株花粉; B,不育株花粉;標(biāo)尺=25 μm。A, Pollen of fertile plant; B, Pollen of sterile plant. Bar scale=25 μm.圖4 菜心×芥藍(lán)種間雜種經(jīng)染色體加倍處理后花粉染色觀察結(jié)果Fig.4 Observation of pollen staining of interspecific hybrids of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra after chromosome doubling treatment

      2.5.2 染色體分析

      對(duì)菜心×芥藍(lán)種間雜交胚挽救獲得的F代植株進(jìn)行花藥和柱頭染色體數(shù)量鑒定,結(jié)果表明,不育的植株柱頭染色體數(shù)量為19條(圖7-A),與預(yù)期染色體數(shù)量相符,且A組染色體和C組染色體分界明顯,為異源二倍體。經(jīng)秋水仙堿處理花粉可育的植株,柱頭染色體數(shù)量為38條(圖7-B),花藥染色體數(shù)量為19條(圖7-C),為親本菜心(2=20)和芥藍(lán)(2=18)的染色體數(shù)量之和,進(jìn)一步證明所獲得雜種為種間雜交真雜種,且為異源四倍體。

      2.5.3 倍性鑒定

      以親本菜心和芥藍(lán),以及甘藍(lán)型油菜作為參照樣本,對(duì)可育和不育的種間雜種F代植株進(jìn)行倍性檢測,結(jié)果顯示,不育植株(圖8-D)熒光強(qiáng)度最高峰與親本菜心(圖8-A)的熒光強(qiáng)度最高峰處于同一位置,結(jié)合染色體分析結(jié)果判斷不育植株為異源二倍體;可育植株(圖8-E、8-F)熒光強(qiáng)度最高峰位置與甘藍(lán)型油菜(圖8-C)的熒光強(qiáng)度最高峰位置相同,為異源四倍體,倍性檢測結(jié)果與染色體數(shù)量鑒定結(jié)果一致。

      3 結(jié)論與討論

      A和D,菜心;B和E,種間雜種;C和F,芥藍(lán);A、B、C的標(biāo)尺=5 cm;D、E、F標(biāo)尺=0.5 cm。A and D, Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee; B and E, Einterspecific hybrid; C and F, Brassica oleracea var. Alboglabra; Bar scales of figure A, B and C were 5 cm; Bar scales of figure D, E and F were 0.5 cm.圖5 菜心×芥藍(lán)種間雜種植株形態(tài)Fig.5 Plant morphology of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      A、D、E、G、I為可育株;B、C、F、H、J為不育株;標(biāo)尺=1 cm。A, D, E, G and I were fertile plants; B, C, F, H and J were sterile plant. Bar scale=1 cm.圖6 菜心×芥藍(lán)種間雜種花朵和角果形態(tài)Fig.6 Flower and pod forms of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      邱德勃等研究蕓薹屬植物遠(yuǎn)緣雜交發(fā)現(xiàn),胚乳的敗育導(dǎo)致胚的敗育,最終無法獲得種子,遠(yuǎn)緣雜交的發(fā)展受到制約。戴林建研究發(fā)現(xiàn),遠(yuǎn)緣雜交的不親和性主要受雜交組合方式和親本基因型的影響,且雜交親本親緣關(guān)系越近,越容易取得成功。本試驗(yàn)選擇了蕓薹屬中A和C組染色體進(jìn)行種間雜交,相較于B和C、A和B組染色體,A和C組染色體親緣關(guān)系較近,更容易克服不親和性。李明山等研究表明,適宜的種間雜種幼胚離體培養(yǎng)方式,可有效克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性。Harberd研究表明,雜交胚珠的培養(yǎng)受到胚齡大小和培養(yǎng)基成分等多種因素的影響。滿紅對(duì)四倍體菜心和四倍體芥藍(lán)種間雜種進(jìn)行子房培養(yǎng),得出的最佳取材時(shí)間為授粉后7 d;譚亞飛對(duì)白菜型油菜黃籽沙遜與芥藍(lán)種間雜種胚珠進(jìn)行培養(yǎng),得出的最佳取材時(shí)間為授粉后11 d,最佳培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L6-BA+0.2 mg·LNAA+1.0 mg·LAC。受幼胚培養(yǎng)方式和母本基因型的影響,本試驗(yàn)最佳胚挽救培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L6-BA+0.5 mg·LNAA+1.0 mg·LKT+1g·LAC,出胚率為10.47%;最佳取材時(shí)間為授粉后第12天,出胚率為26.32%。

      A,不育株柱頭染色體;B,可育株柱頭染色體;C,可育株花藥染色體。A, Stigma chromosome of sterile plant; B, Stigma chromosome of fertile plant; C, Anther chromosomes of fertile plants.圖7 菜心×芥藍(lán)種間雜種染色體數(shù)量Fig.7 Chromosome number of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      A,菜心;B,芥藍(lán)C,甘藍(lán)型油菜;D,不育株;E和F,可育株。A, Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee; B, Brassica oleracea var. Alboglabra; C, Brassica napus L.; D, Sterile plant; E and F, Fertile plant.圖8 菜心×芥藍(lán)種間雜種倍性鑒定直方圖Fig.8 Histogram of ploidy identification of Brassica rapa L. ssp chinensis var. utilis Tsen. et Lee×Brassica oleracea var. Alboglabra interspecific hybrids

      對(duì)胚珠培養(yǎng)后獲得的幼苗進(jìn)行快速增殖擴(kuò)繁,是獲得菜心和芥藍(lán)種間雜種的重要階段,胚培苗的生根過程是擴(kuò)繁的重要環(huán)節(jié)。不同植物誘導(dǎo)生根的適宜生長調(diào)節(jié)劑種類不同,本試驗(yàn)中添加不同生長素的培養(yǎng)基生根率和生根時(shí)間均有差異,1/2MS+0.5 mg·LIBA培養(yǎng)基最適宜生根。石淑敏等在誘導(dǎo)甘藍(lán)型油菜小孢子再生苗染色體加倍的研究中,利用培養(yǎng)基內(nèi)添加秋水仙堿溶液的方法,小苗成活率低且操作復(fù)雜,利用秋水仙堿溶液涂抹生長點(diǎn)2次的方法,加倍率極低。本試驗(yàn)中將單倍體苗接種于含秋水仙堿溶液的培養(yǎng)基中,也存在成活率極低的問題;但將秋水仙堿涂抹次數(shù)增加至5次時(shí),可將染色體加倍率提高至62.26%,加倍效果佳。

      江瑩芬等對(duì)埃塞俄比亞芥和白菜型油菜遠(yuǎn)緣雜種進(jìn)行鑒定,認(rèn)為形態(tài)學(xué)鑒定操作簡單易行,但還需結(jié)合細(xì)胞學(xué)等方法確保結(jié)果準(zhǔn)確。本研究結(jié)果顯示,黃花菜心和白花芥藍(lán)雜交所得后代均開白花。盧長明等統(tǒng)計(jì)了人工合成甘藍(lán)型油菜,結(jié)果也顯示,白花對(duì)黃花基因具有上位性。黃花菜心和白花芥藍(lán)雜交所得后代葉形、葉色、主薹形狀等接近母本,主薹顏色接近父本,初步確定為真雜種;觀察花器官大小、花藥,以及是否正常結(jié)籽,區(qū)分出可育株和不育株,判斷染色體加倍是否成功。同時(shí)利用染色體觀察和流式細(xì)胞儀倍性鑒定對(duì)形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn),鑒定結(jié)果均顯示可育株為異源四倍體,不育株為異源二倍體。

      本試驗(yàn)創(chuàng)制了菜心和芥藍(lán)種間雜交的異源四倍體種質(zhì),但由于人工染色體加倍處理,秋水仙堿溶液對(duì)植株毒性大,影響植株正常生長。后續(xù)研究將擴(kuò)繁至F代,進(jìn)一步觀察田間表現(xiàn),并對(duì)可溶性糖和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)含量進(jìn)行研究,分析后代作為薹用蔬菜的應(yīng)用價(jià)值。

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