山香圓葉提取物對濕熱條件下文昌雞生長性能、屠宰性能、血清免疫和抗氧化功能及腸道微生態(tài)的影響

宋文靜 宋瓊莉 陳小連 劉林秀 譚 佳 鄒志恒* 魏立民 熊平文 張 艷 孫瑞萍

(1.江西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，南昌 330200；2.海南省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，?？?571100；3.海南省熱帶動物繁育與疫病研究重點實驗室，?？?570203)

我國南方夏季濕熱，環(huán)境溫控設備降溫除濕效果有限，積極采用飼養(yǎng)管理和營養(yǎng)調控手段緩解家禽熱應激、提高家禽養(yǎng)殖效益是當前研究方向和熱點之一。山香圓屬植物來源于省沽油科，作為民間用藥歷史悠久，被收錄入2015年版《中國藥典》，山香圓葉為山香圓屬植物的主要藥用部位，其主要化學成分為黃酮類、酚酸類和多糖類，其性寒味苦，具有抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、增強免疫等藥理活性，能夠清熱解毒、利咽消腫、活血止痛，臨床上被用于咽喉炎、扁桃體炎、扁桃體膿腫、上呼吸道感染、氣管炎等治療系統(tǒng)[1-4]。研究表明，山香圓能夠提高小鼠的應激適應性(提高體表痛閾，抑制毛細血管通透性)，從而緩解人為應激模型下小鼠的疼痛反應和充血腫脹[5]。其有效成分山香圓葉黃酮等能夠調節(jié)小鼠的血清炎癥因子含量，緩解小鼠的炎癥反應[6-7]，能夠調節(jié)T細胞亞群的比例，提高血清免疫球蛋白G(IgG)含量，從而提高小鼠的體液免疫功能[8]。此外，山香圓屬植物的抑菌效果非常顯著，可以有效降低小鼠腹腔感染金黃色葡萄球菌后的死亡率[9]。山香圓葉提取物(Turpiniaefoliumextract ,TFE)是將干燥山香圓葉提取純化后的產物，其活性成分含量高，添加劑量小[10-11]，藥用效果確切，但未見其在家禽生產，尤其是緩解家禽熱應激方面的應用研究。TFE作為潛在的抗應激產品，在緩解文昌雞熱應激上具有一定的研究價值和意義。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加TFE對夏季濕熱條件下文昌雞生長性能、屠宰性能、血清抗氧化和免疫功能、腸道組織形態(tài)學結構和腸道微生態(tài)的影響，為TFE在夏季文昌雞生產上的應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

山香圓葉采自江西省農業(yè)科學院高安基地，經干燥粉碎后過80目篩，采用乙醇進行提取(料液比為1∶50，提取時間為1.5 h，提取溫度為70 ℃)，濃縮，噴霧干燥(由西安某生物工程有限公司代提取加工)獲得淡黃褐色粉狀TFE，提取物含總黃酮119.75 mg/g，總多糖10.15 g/100 g，多酚100.90 mg/g。

1.2 試驗設計與試驗飼糧

選取同一飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)至84日齡的健康、體重接近的文昌雞母雞240羽，隨機分為4組，分別飼喂在基礎飼糧中添加0(對照)、0.02%、0.04%、0.08% TFE的飼糧，每組6個重復，每個重復10羽。基礎飼糧參考《文昌雞飼養(yǎng)管理技術規(guī)程》(DB46/T 44—2011)[12]配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在江西省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所試驗雞場進行，開始于2021年7月2日，結束于2021年8月6日。試驗雞采用網上分欄籠養(yǎng)，自由采食和飲水。雞舍自然通風，試驗雞嚴格按常規(guī)管理程序管理和正常免疫程序進行免疫接種。每日記錄舍內不同的4個位置(門口、舍內、風機、濕簾)的最低和最高溫度、濕度，記錄死亡雞只個數。試驗期為35 d，試驗期間雞舍溫度最高為38 ℃，相對濕度最高為94%，溫濕指數最高為90.12。試驗期雞舍平均溫度為30.42 ℃、平均相對濕度為77.37%、平均溫濕指數為83.10。試驗期間溫濕指數始終大于80，因此文昌雞均處于熱應激狀態(tài)。試驗期間雞舍溫度、濕度情況見圖1。

圖1 試驗期間雞舍內溫度和濕度

1.4 檢測指標與方法

1.4.1 生長性能指標

試驗期間，每周以重復為單位記錄喂料量和剩料量。試驗開始和結束時，文昌雞禁食12 h后進行稱重，以此計算試驗雞的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指標

試驗結束時，雞只禁食12 h，各重復挑選健康、體重接近平均體重的文昌雞2羽，翅靜脈采集5 mL血樣，3 000 r/min離心15 min制備血清，-20 ℃保存待測。

血清抗氧化指標：血清中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性，總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物研究所的試劑盒測定，所用儀器為華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)。

血清免疫指標：血清免疫球蛋白A(IgA)、IgG、免疫球蛋白M(IgM)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、白細胞介素-10(IL-10)、白細胞介素-1β(IL-1β)含量采用南京建成生物研究所試劑盒測定，所用儀器為邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。血清熱應激蛋白70(HSP70)和胰島素(INS)含量采用北京華英生物技術研究所試劑盒測定，所用儀器為華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標儀(無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司)。

其他血清生化指標：血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量采用比色法進行檢測，試驗盒購自中生北控股份有限公司，所用儀器為邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.4.3 屠宰性能指標

屠宰前試驗雞禁食12 h，只供飲水，從各重復隨機選取2只生長發(fā)育正常、體況健康、接近平均體重的試驗雞進行屠宰，宰前稱活重后放血，浸燙脫毛，洗凈瀝干，參照《家禽生產性能名詞術語和度量統(tǒng)計方法》(NY/T 823—2020)[13]計算屠體率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率、腹脂率。剝離肌胃、腺胃、心臟、脾臟、肺等器官，用濾紙吸去血液，剝離脂肪稱重，用1 mg靈敏度的電子稱重并計算器官指數。

器官指數(%)=100×器官重/宰前空腹體重。

1.4.4 腸道組織形態(tài)學指標

試驗結束時，每重復選擇2只文昌雞屠宰，剖開腹部，分離出腸道，迅速截取3 cm左右空腸腸段用生理鹽水把腸道內容物沖洗干凈，放到4%甲醛溶液中固定，經過沖水、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等處理后，以5 μm的厚度切片，常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色。用光學顯微鏡(Nikon Eclipse CI，Nikon公司)觀察絨毛形態(tài)，使用Image-pro plus 6.0軟件(Media Cybernetics公司)測量絨毛高度(VH)和隱窩深度(CD)，并計算絨毛高度與隱窩深度比值(VH/CD)。

1.4.5 腸道微生物區(qū)系

試驗結束時，每重復選擇2只文昌雞屠宰，剖開腹部，分離出腸道，用滅菌細線將盲腸結扎，確保腸道內容物充足，剪下結扎的盲腸段，立即將內容物轉入2 mL滅菌凍存管中，置于-80 ℃冰箱保存，待測。根據TruSeq?DNA PCR-Free Sample Preparation Kit(Illumina公司, 美國)試劑盒構建文庫，用特異性引物(338F/806R)擴增16S rDNA的V3～V4區(qū)。引物序列338F:5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’；806R:5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’。文庫的質量通過Qubit@ 2.0熒光計(Thermo Scientific)和安捷倫生物分析儀2100系統(tǒng)進行評估。在Illumina NovaSeq平臺上對文庫進行測序，得到250 bp的配對末端序列。建庫和測序工作由北京諾禾致源生物信息科技有限公司完成。

1.5 數據統(tǒng)計分析

用Excel 2013對數據進行預處理，采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件對試驗數據進行單因素方差分析和Duncan氏多重比較。以P<0.05作為差異顯著的判斷標準，以0.05≤P<0.10作為有顯著趨勢的判斷標準。結果以平均值(mean)和均值標準誤(SEM)表示。

2 結 果

2.1 TFE對文昌雞生長性能的影響

由表2可知，各組文昌雞初始體重無顯著差異(P>0.05)，經過35 d的飼養(yǎng)試驗，各組終末體重、ADFI無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比，試驗組F/G呈下降趨勢(0.05≤P<0.10)。TFE添加組ADG顯著高于對照組(P<0.05)，且隨著飼糧TFE添加水平的增加，呈顯著線性(P=0.004)和二次曲線(P=0.001)變化。

表2 TFE對文昌雞生長性能的影響

2.2 TFE對文昌雞血清代謝指標的影響

由表3可知，與對照組相比，試驗組血清TP含量呈上升趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著降低了血清GLU含量(P<0.05)，且GLU含量與飼糧TFE添加水平呈線性(P=0.027)和二次曲線(P=0.014)相關。各組間血清ALB、GLB、TC、TG含量均無顯著差異(P>0.05)。

表3 TFE對文昌雞血清代謝指標的影響

2.3 TFE對文昌雞血清免疫指標的影響

由表4可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IgA、IgG含量呈顯著線性(P=0.001,P=0.001)和二次曲線(P=0.006,P=0.001)變化。與對照組相比，試驗組血清IgM含量呈升高趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著提高了血清IgA、IgG含量(P<0.05)。

表4 TFE對文昌雞血清免疫指標的影響

2.4 TFE對文昌雞血清炎癥因子含量的影響

由表5可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IL-10含量呈顯著線性(P=0.002)和二次曲線(P=0.006)變化，血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量呈顯著線性(P=0.004,P=0.005,P=0.011)和二次曲線(P=0.009,P=0.005,P=0.016)變化。與對照組相比，不同添加水平的TFE均顯著降低了血清IL-6含量(P<0.05)，0.04%和0.08%的TFE顯著提高了血清IL-10含量(P<0.05)，顯著降低了血清IL-1β、TNF-α含量(P<0.05)。

表5 TFE對文昌雞血清炎癥因子含量的影響

2.5 TFE對文昌雞血清抗氧化指標的影響

由表6可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清T-AOC、SOD和GSH-Px活性呈顯著線性(P=0.006,P=0.015,P=0.010)和二次曲線(P=0.009,P=0.028,P=0.015)變化，血清MDA含量呈顯著線性(P=0.007)和二次曲線(P=0.010)變化。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%顯著提高血清T-AOC、SOD和GSH-Px活性(P<0.05)，顯著降低血清MDA含量(P<0.05)。

表6 TFE對文昌雞血清抗氧化指標的影響

2.6 TFE對文昌雞血清熱應激蛋白和胰島素含量的影響

由表7可知，隨著飼糧額TFE添加水平增加，血清HSP70含量呈顯著線性(P=0.009)和二次曲線(P=0.021)變化，血清INS含量呈線性上升趨勢(0.05≤P<0.10)。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08%的TFE顯著降低血清HSP70含量(P<0.05)。

表7 TFE對文昌雞血清熱應激蛋白和胰島素含量的影響

2.7 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

由表8可知，各組間屠宰率、全凈膛率、半凈膛率、腹脂率、腿肌率、肌胃指數、腺胃指數、心臟指數、肝臟指數和肺指數無顯著差異(P>0.05)。不同添加水平的TFE均顯著提高了脾臟指數(P<0.05)，且隨飼糧TFE添加水平的增長，呈顯著二次曲線變化(P=0.043)。

表8 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

2.8 TFE對文昌雞空腸組織形態(tài)的影響

由表9可知，隨著飼糧TFE添加水平的增加，空腸VH和VH/CD呈顯著線性(P=0.013,P=0.009)和二次曲線(P=0.015,P=0.010)變化。0.04%和0.08% TFE添加組空腸VH和VH/CD顯著高于對照組(P<0.05)。飼糧添加TFE對空腸CD無顯著影響(P>0.05)。

表9 TFE對文昌雞空腸組織形態(tài)的影響

2.9 TFE對文昌雞腸道微生態(tài)的影響

由表10可知，在門水平上，盲腸內容物中微生物主要是擬桿菌門和厚壁菌門，占90%左右。隨著飼糧TFE添加水平的增加，盲腸變形菌門相對豐度呈顯著線性(P=0.016)和二次曲線(P=0.011)變化。與對照組相比，0.04%和0.08% TFE組的盲腸梭桿菌門相對豐度顯著下降(P<0.05)，飼糧添加0.08% TFE顯著提高了盲腸厚壁菌門相對豐度(P<0.05)。各組間盲腸中其他菌門相對豐度無顯著差異(P>0.05)。

表10 TFE對文昌雞盲腸菌群在門水平上的相對豐度的影響

由表11可知，盲腸內容物菌群中主要菌屬為擬桿菌屬和理研菌科RC9腸道群，占盲腸內容物屬水平相對豐度的50%左右，表中列出的為相對豐度較高的10個菌屬。與對照組相比，飼糧添加0.04%和0.08% TFE顯著降低了盲腸內容物中普雷沃氏菌科_UCG-001的相對豐度(P<0.05)，0.08% TFE組盲腸乳酸菌屬相對豐度顯著高于其他各組(P<0.05)，試驗組雙歧桿菌屬相對豐度呈增加趨勢(0.05≤P<0.10)。各組間盲腸中其他菌屬相對豐度無顯著差異(P>0.05)。

表11 TFE對文昌雞盲腸菌群在屬水平上相對豐度的影響

2.10 TFE在文昌雞飼糧中的最適添加水平

以TFE的添加水平為自變量X(0.00≤X≤0.80)，以ANOVA有顯著的指標為因變量Y，進行二次回歸分析，并計算TFE最適添加水平，結果如表12所示。選取上述指標的最適添加水平的平均值0.067%作為84～119日齡夏季文昌雞飼糧中TFE的最適添加水平。

表12 基于回歸模型參數的胰島素最適添加水平

3 討 論

3.1 TFE對文昌雞生長和代謝的影響

文昌雞為中國海南省地方家禽品種，其體型短小，單位體重體表面積相對較大，加之海南省熱帶季風島嶼氣候條件，使文昌雞對炎熱的適應性和高溫耐受力較強[14]。整個試驗期舍內平均溫度在30 ℃以上，溫濕指數在80以上，文昌雞處于慢性熱應激狀態(tài)。在熱應激暴露過程中，家禽會改變行為(飲水和張口呼吸增加，采食和運動減少)和生理穩(wěn)態(tài)(如通過體液和神經調節(jié)作用來抑制胰島素的分泌)來減少熱增耗和代謝產熱量，采食量減少導致生長所需營養(yǎng)物質攝入不足，家禽需要消耗自身存儲的體脂、體蛋白質等，增重隨之下降，飼料利用率降低[15]，INS含量的減少使機體血糖保持較高的水平，這些都是機體將能量由生長轉移用于生存，為適應熱應激而減少產熱的表現形式[16-17]。同時，熱應激會降低雞腸道消化酶的活性，擾亂腸道微生態(tài)，導致肉雞消化和吸收功能下降，生長性能下降[18]。TFE中的活性成分黃酮、多糖、酚類等被證實具有提高動物耐熱、生長和生產性能的效果[19-20]，本試驗結果表明，TFE對ADFI無顯著影響，但能夠顯著提高文昌雞的ADG，與前人研究發(fā)現植物提取物能夠改善熱應激引起的生長性能下降、提高熱應激肉雞的試驗末重和增重的結果[21-22]基本一致，說明TFE對濕熱條件下文昌雞生長性能的改善不是通過增加攝入而是通過減少消耗、增加營養(yǎng)物質沉積實現的。隨著飼糧AFE添加水平的增加，文昌雞血清TP含量呈增加趨勢，血清GLU含量顯著降低，血清INS含量升高。血清TP含量可以反映機體蛋白質的吸收狀況，INS是蛋白質、碳水化合物和脂肪代謝的關鍵激素，能刺激氨基酸和蛋白質的合成，減少脂肪細胞的脂肪分解，增加脂肪酸的同化，增加GLU的利用[23]。這說明TFE能夠在一定程度上促進蛋白質沉積，減少脂肪分解，并通過調節(jié)血清INS含量降低糖異生途徑強度，減少能量消耗[24]，TFE對INS的調節(jié)機制尚不明確，有待進一步研究。作為應激反應的一個標志性元素，HSP70在熱應激動物體內表達被激活，并大量釋放在血液中[25]。本試驗條件下，TFE能夠顯著降低文昌雞血清HSP70含量，說明TFE能夠有效緩解文昌雞在濕熱條件下的應激反應，可能原因是TFE提高了文昌雞的耐熱性能。

在本試驗中，TFE對文昌雞濕熱條件下生長性能的改善效果以及TFE對文昌雞血清免疫、抗氧化指標和腸道微生物的影響均呈現線性和二次相關關系，并且以0.04%和0.08%添加水平效果更優(yōu)，說明TFE主要是通過提高文昌雞免疫功能，降低文昌雞氧化應激，調節(jié)腸道菌群來保持文昌雞在濕熱條件下的健康狀態(tài)，從而促進營養(yǎng)物質吸收和沉積。本實驗室前期研究結果提示，在舍溫適宜條件下，0.03%～0.06% TFE可以顯著降低文昌雞F/G，而本試驗條件下0.08% TFE在一定程度上降低F/G，與對照組無顯著差異，可見TFE在濕熱條件下發(fā)揮促生長效果需要的添加水平更高。

3.2 TFE對文昌雞血清免疫、抗氧化功能的影響

熱應激能影響家禽的免疫器官和細胞因子，對家禽的體液免疫、細胞免疫和腸道免疫等免疫系統(tǒng)產生負面影響[26]。IgA、IgG和IgM是反映機體免疫應答的重要指標，其中以IgG在血清中含量最多，是機體主要的抗體，IgA在血清中含量僅次于IgG，IgM是體液免疫反應中最早產生的免疫球蛋白，其含量較少，主要由脾臟和B淋巴細胞產生[27]。家禽脾臟分布著大量的淋巴細胞及淋巴小體，是最大的淋巴器官和重要的外周免疫器官[28]。免疫器官指數是反映機體免疫狀況的重要參數，一般認為免疫器官指數升高能夠增強免疫力，相反若是受免疫抑制如熱應激等的影響，免疫器官指數則降低。本試驗條件下，TFE顯著提高了血清IgA和IgG含量，與張磊等[8]研究的山香圓黃酮可以提高免疫低下小鼠血清IgG含量的結果基本一致，可見，TFE中的黃酮是發(fā)揮免疫調節(jié)功能的主要活性成分。Lei等[29]研究表明，山香圓葉能夠促進脾細胞增殖，從而提高動物脾臟指數。本試驗中文昌雞脾臟指數隨著飼糧中TFE添加水平的增加而增大，與呂夢云[30]研究結果基本一致。隨著飼糧TFE添加水平的增加，血清IgM含量呈增加趨勢，說明TFE在增加脾臟指數的同時也促進了脾臟的分泌功能。本試驗結果提示，TFE可通過提高血清免疫球蛋白含量和免疫器官指數改善濕熱條件下文昌雞免疫功能。

熱應激情況下，氧自由基會攻擊腸絨毛和組織黏膜，誘發(fā)腸道和組織炎癥[31]。文昌雞為了散熱會加快呼吸頻率，容易引起呼吸道疾病(呼吸堿中毒)等，炎癥和疾病會引起機體免疫力進一步下降，誘發(fā)機體釋放各種炎癥介質，產生炎癥反應。促炎癥細胞因子如IL-1β、IL-6和TNF-α是先天免疫應答后引起代謝級聯改變的主要因子，在多種炎癥反應中發(fā)揮重要作用，并與炎癥的嚴重程度密切相關，IL-10是一種細胞因子合成抑制因子，可下調炎癥反應強度[32]。在本試驗中，隨著飼糧添加TFE水平的增加，血清促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低，抗炎因子水平IL-10含量增加，與陳世華等[6]的研究結果基本一致。這說明TFE調節(jié)機體發(fā)生了反饋性的炎癥因子改變，減少了促炎因子分泌，提高了抗炎因子水平，緩解了濕熱環(huán)境對文昌雞機體造成的炎癥損傷。

熱應激會引起畜禽代謝增強，破壞自由基平衡，導致活性氧的過量積累和細胞氧化損傷[33]，抑制線粒體呼吸鏈活動，導致抗氧化酶體系活性降低，MDA大量生成[34]。體內的抗氧化酶系統(tǒng)(T-AOC、SOD、GSH-Px)等可清除自由基，減少過氧化產物生成[35]。本試驗結果顯示，TFE提高了文昌雞血清T-AOC、SOD、GSH-Px活性，降低了脂質過氧化產物MDA含量，表明TFE能夠增強機體抗氧化酶系統(tǒng)活性，抑制脂質過氧化反應，有利于維持氧化還原平衡，緩解文昌雞在濕熱條件下的組織氧化應激。黃酮、多酚等是一種天然的抗氧化劑，其苯環(huán)上的羥基能夠清除氧自由基，TFE的抗氧化效果可能得益于其豐富的黃酮和多酚含量[36]。

3.3 TFE對文昌雞屠宰性能的影響

屠宰性能的主要影響因素是動物的品種和飼糧營養(yǎng)組成[37]。本試驗中TFE添加水平與血清TG含量有一定線性關系，并且在一定程度上降低了文昌雞的腹脂率，但均無顯著差異，與周萍芳[38]報道的苜蓿黃酮提取物對麻雞的腹脂率有降低作用和呂夢云等[30]報道的葛藤黃酮提取物可降低肉雞的腹脂率結果不一致，可能是不同植物提取物總黃酮組成和含量不同以及禽品種和飼養(yǎng)周期不同的原因。

3.4 TFE對文昌雞腸道組織形態(tài)和菌群的影響

小腸上皮細胞隱窩和絨毛組成常用于反映腸道形態(tài)結構完整性及功能強弱。腸道極易受熱應激影響，產生大量自由基并通過脂質過氧化作用損害腸道上皮細胞，使腸道絨毛萎縮，VH降低，CD增加，VH/CD降低[39]，影響營養(yǎng)物質的消化和吸收，導致生長性能下降。本試驗中，TFE可增加文昌雞抗氧化酶系統(tǒng)活性，緩解腸道局部氧化應激引起的腸道損傷，從而增加腸道VH和VH/CD，有利于維持腸道形態(tài)結構的完整性，促進營養(yǎng)物質吸收，提高文昌雞生長性能。

腸道微生態(tài)平衡對于維持文昌雞腸道黏膜形態(tài)和正常生理功能具有重要意義。熱應激會影響文昌雞腸道菌群結構，降低文昌雞腸道內乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量，提高大腸桿菌和梭桿菌的數量[40]。盲腸是微生物定植幾率最高的腸道部位[25]，因此本試驗研究了TFE對文昌雞盲腸微生物的影響，結果表明，文昌雞盲腸微生物結構在門水平上主要以擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、互養(yǎng)菌門為主，相對豐度占90%以上，為絕對優(yōu)勢菌群。TFE提高了文昌雞盲腸厚壁菌門、乳酸菌屬的相對豐度，雙歧桿菌屬相對豐度隨著飼糧TFE添加水平的增加呈上升趨勢。厚壁菌門發(fā)酵能力較強，可以促進機體脂肪的沉積，能夠發(fā)酵產生短鏈脂肪酸用，于維持機體腸道健康[41-42]。乳酸菌屬和雙歧桿菌屬是動物腸道的有益菌屬，菌體內含有大量的消化酶和SOD，能促進機體營養(yǎng)物質的消化，增強腸道宿主的抗氧化能力，同時參與多種維生素的合成、吸收和利用，發(fā)酵單糖或者雙糖產生乳酸和乙酸等降低腸道pH，通過生物拮抗作用調節(jié)腸道微生態(tài)[43-45]，維持動物機體健康和免疫調節(jié)功能。TFE降低了變形菌門、梭桿菌門和普雷沃氏菌科_UCG-001相對豐度。變形菌門相對豐度與消化不良有一定關系[46]，梭桿菌門為條件性致病菌，可導致潰瘍性結腸炎，潰瘍性腸道中變形菌門和梭桿菌門相對豐度均處于較高水平[47]。普雷沃氏菌科_UCG-001為條件致病菌，與機體促炎功能有關，它的定植會導致微生物群代謝變化，使腸道通透性增加從而加劇腸道炎癥[48]。因此，本試驗結果提示，TFE能夠通過促進文昌雞腸道有益菌的增殖，抑制有害菌或條件治病菌生長來調節(jié)腸道微生物菌群，改善腸道形態(tài)，緩解濕熱環(huán)境導致的文昌雞腸道菌群失調。

4 結 論

① 飼糧中添加TFE能提高ADG，改善濕熱條件下文昌雞生長性能。

② 飼糧中添加TFE有助于提高濕熱條件下文昌雞免疫和抗氧化功能，緩解機體炎癥反應。

③ 飼糧中添加TFE提高了文昌雞腸道VH和VH/CD，增加了腸道有益菌相對豐度，降低了有害菌和條件致病菌相對豐度，有利于維持腸道絨毛結構完整性，調節(jié)腸道微生物菌群。

④ 在本試驗條件下，文昌雞飼糧中TFE的最適添加水平為0.067%。