■王 萍 周繼術(shù)* 祁 蒙 梁 茂 晏顯芳 徐慶來(lái) 李 楊 吉 紅

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊凌 712100；2.安康市富硒產(chǎn)品研發(fā)中心，陜西安康 725000）

硒是魚類等生物的必需微量營(yíng)養(yǎng)元素，在促進(jìn)生物機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、提高繁殖性能、增強(qiáng)免疫應(yīng)答、提高抗氧化能力以及解除重金屬毒性等方面發(fā)揮重要作用。對(duì)水生生物而言，硒更是影響著生物體代謝、繁殖等多個(gè)重要生理過(guò)程。同時(shí)，由于硒對(duì)人類的生長(zhǎng)、生育及抗衰老等方面的多種有利作用，富硒產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)利用已成為研究熱點(diǎn)。硒在水生生物上的研究，多集中于在飼料中添加不同形態(tài)的硒，如無(wú)機(jī)硒（亞硒酸鈉）、有機(jī)硒（硒代蛋氨酸、酵母硒）以及納米硒等，以探討硒對(duì)魚體營(yíng)養(yǎng)和健康的影響。梁達(dá)智等（2019）選用亞硒酸鈉和蛋氨酸硒對(duì)斜帶石斑魚幼魚的生長(zhǎng)性能、免疫酶活性等方面展開(kāi)研究，發(fā)現(xiàn)兩種硒源均能促進(jìn)魚的生長(zhǎng)，有機(jī)硒的生物利用率更高。Kohshahi等（2019）的研究也發(fā)現(xiàn)，飼料中含有一定量硒能夠更好地促進(jìn)虹鱒的免疫功能，改善虹鱒生長(zhǎng)性能和抗氧化能力。

安康是陜西的一個(gè)地級(jí)市，其土壤和水體富硒，全市50%以上的土壤硒含量達(dá)到中硒（0.2 mg/kg）以上水平，全市耕作土壤平均硒含量達(dá)到0.57 mg/kg，是我國(guó)著名的“硒谷”，其天然的富硒地質(zhì)條件為富硒作物及富硒農(nóng)副產(chǎn)品的生產(chǎn)提供了極好的自然條件。利用富硒土壤生產(chǎn)富硒農(nóng)作物及其加工產(chǎn)品，在富硒地區(qū)是比較常見(jiàn)的一種產(chǎn)品生產(chǎn)方式，如富硒煙葉、富硒茶葉以及富硒小麥、富硒大米、富硒玉米等。研究表明，植物可吸收利用土壤中的硒，并將在其植物組織中富集，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為人或動(dòng)物能夠直接利用的硒（如含硒氨基酸等），通過(guò)食物鏈方式供給人類或動(dòng)物所需的硒元素。富硒菜籽餅就是這樣的一類富硒農(nóng)副產(chǎn)品，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，安康產(chǎn)地的菜籽餅，其硒含量遠(yuǎn)高于非安康產(chǎn)地的菜籽餅，如漢中菜籽餅。

菜籽餅是水產(chǎn)動(dòng)物常用的飼料原料之一，因其含有較高的蛋白質(zhì)和適宜的脂肪水平而廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物的配合飼料中。在這樣的配合飼料中，若使用安康產(chǎn)地的富硒菜籽餅，則因其硒含量較高進(jìn)而可能對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，或者使水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體貯積更高水平的硒，使富硒魚的生產(chǎn)成為一種可能，但相關(guān)研究還較為缺乏。

多鱗白甲魚（Onychostoma macrolepis），又名多鱗鏟頜魚，屬鯉形目（Cypriniformes），鯉科（Cyprinidae），白甲魚屬（Onychostoma），主要分布于陜西省南部巴山地區(qū)的鎮(zhèn)坪、嵐皋、紫陽(yáng)等地。該魚肉質(zhì)細(xì)嫩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，還具有獨(dú)特的藥用保健價(jià)值，是一種名貴的經(jīng)濟(jì)魚類，具有較高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。近年來(lái)，多鱗白甲魚的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值越來(lái)越得到重視，在其生物學(xué)、生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖學(xué)、病害學(xué)及其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等方面的研究較多，但關(guān)于多鱗白甲魚營(yíng)養(yǎng)需求及飼料利用等方面的研究報(bào)道較少，目前僅見(jiàn)該魚的飼料蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)需求水平、飼料硒需求水平、幼魚的開(kāi)口餌料以及多鱗白甲魚對(duì)黑水虻粉及裂殖壺藻粉的利用等方面的研究，在富硒飼料原料，尤其是富硒菜籽餅飼料原料的開(kāi)發(fā)利用方面，僅見(jiàn)張斌鑫（2019）及趙俊蘭（2020）的研究有所涉及，對(duì)于特定品種的天然富硒菜籽餅，如文章中將用到的中油雜及陜油28 等對(duì)多鱗白甲魚的生長(zhǎng)與健康的影響及其硒蓄積和富硒魚生產(chǎn)方面研究的相關(guān)報(bào)道尚為缺乏。

為此，本試驗(yàn)在多鱗白甲魚飼料配方中分別添加產(chǎn)自安康地區(qū)的兩種富硒菜籽餅，以非安康產(chǎn)地的菜籽餅為對(duì)照，通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)，分析多鱗白甲魚生長(zhǎng)、生物學(xué)性狀、血清生化指標(biāo)及魚體抗氧化能力及肌肉硒含量等指標(biāo)，探索安康富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚生長(zhǎng)與健康以及硒貯積的影響，以期為富硒多鱗白甲魚健康養(yǎng)殖以及富硒魚休閑食品的開(kāi)發(fā)提供有益參考，為富硒菜籽餅的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)以魚粉、菜籽餅、棉粕、豆粕、面粉及豆油為主要基礎(chǔ)飼料原料，其中的菜籽餅有三種，安康產(chǎn)地的兩種富硒菜籽餅，分別為中油雜菜籽餅及陜油28菜籽餅，其硒含量分別為0.13 mg/kg 與0.43 mg/kg，由陜西省安康市中國(guó)富硒產(chǎn)業(yè)研究院提供，非安康產(chǎn)地的菜籽餅，其硒含量為0.057 mg/kg，同其他飼料原料，由陜西華秦農(nóng)牧科技有限公司（陜西，楊凌）提供。將三種來(lái)源的菜籽餅分別添加于多鱗白甲魚基礎(chǔ)飼料配方中，配制出蛋白質(zhì)為37.28%、脂肪為8.93%三組等氮等脂飼料，其中A 組為普通非安康產(chǎn)地的菜籽餅，B 組為中油雜菜籽餅，C 組為安康陜油28 菜籽餅。將各飼料原料粉碎過(guò)80 目篩，按配方進(jìn)行稱量與配比，并將其充分混勻，添加10%～15%水后，用饸烙機(jī)制成直徑約為2 mm 圓條，于通風(fēng)干燥的地方室溫放置24 h，然后在50 ℃烘箱烘4 h，切斷料條，制成長(zhǎng)度約3 mm 柱狀顆粒。裝樣，放于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。試?yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 試驗(yàn)魚分組及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用多鱗白甲魚為三齡，購(gòu)自陜西省安康市綠水生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司，于西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖室開(kāi)展養(yǎng)殖試驗(yàn)。將魚暫養(yǎng)30 d，挑選體重相近、體質(zhì)健康的多鱗白甲魚153尾[（23.14±1.94）g]，隨機(jī)分配在9 個(gè)循環(huán)流水玻璃魚缸（300 L）中，按試驗(yàn)飼料不同分為3 個(gè)組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)17 尾魚，分別用以上三組飼料進(jìn)行飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間每天投喂4 次（07：30、11：30、15：30、19：30），投喂量以10 min 內(nèi)能吃完為宜，投飼率2%～3%；每3～5 d換水一次，換水量為魚缸水體的1/3。定期清洗抽水泵和過(guò)濾棉，以保持水質(zhì)清潔。光源為室內(nèi)白熾燈光。試驗(yàn)期間，水溫（21.3±1.4）℃，溶氧（7.43±0.35）mg/L，pH（7.1±0.15），氨氮＜0.065 mg/L，亞硝酸鹽＜0.03 mg/L。飼養(yǎng)周期為60 d。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)魚饑餓24 h，用丁香油0.03 mg/L（江西億森源植物香料有限公司）將魚麻醉稱重。每缸隨機(jī)取6尾魚進(jìn)行尾靜脈采血，將血液于4 ℃冰箱保存24 h后，3 000 r/min離心10 min，制備血清于-20 ℃低溫保存?zhèn)溆?。稱取每尾魚體重并測(cè)量其體長(zhǎng)，然后進(jìn)行解剖，分離肝胰臟、腸道、脾臟、肌肉、性腺、腹腔脂肪組織，稱取各器官組織的重量并測(cè)量腸長(zhǎng)。將每尾魚體的肌肉與腸組織于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫粚Ⅳ~體的肝胰臟和腸分別于4%甲醛溶液中固定備用，同時(shí)每組隨機(jī)選取9尾魚的肝胰臟于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。每缸隨機(jī)選擇8 尾魚胴體（去鱗、去內(nèi)臟），用面粉等包裹后，于140 ℃下油炸烹飪，制成香酥多鱗白甲魚旅游休閑食品試樣，用真空包裝機(jī)進(jìn)行真空包裝。每組隨機(jī)選取6 尾香酥魚，剝?nèi)〖∪?，用于硒含量檢測(cè)。

1.4 魚體生長(zhǎng)與生物學(xué)性狀指標(biāo)的測(cè)定

增重率（Weight gain rate，WGR，%）=[末均重（g）-初均重（g）]/初均重（g）×100

成活率（Survival ratio，SR，%）=試驗(yàn)結(jié)束魚數(shù)量（尾）/試驗(yàn)初魚數(shù)量（尾）×100

特定生長(zhǎng)率（Specific growth rate，SGR，%/d）=[Ln末均重（g）-Ln初均重（g）]/試驗(yàn)天數(shù)（d）×100

飼料系數(shù)（Feed conversion ratio，F(xiàn)CR）＝投飼總量（g）/體增重（g）

蛋白質(zhì)效率（Protein efficiency ratio，PER，%）=魚體增重量（g）/食入蛋白質(zhì)量（g）×100

肥滿度（Condition factor，CF，g/cm3）=體重（g）/[體長(zhǎng)（cm）]3×100

肝胰臟指數(shù)（Hepatosomatic index，HSI，%）=肝胰臟重（g）/魚體重（g）×100

內(nèi)臟指數(shù)（Viscerosomatic index，VSI，%）=內(nèi)臟重（g）/魚體重（g）×100

脾體比（Spleen index，SI，%）=脾臟重（g）/魚體重（g）×100

腸長(zhǎng)比（Gut length ratio，GLR，%）=腸長(zhǎng)（cm）/體長(zhǎng)（cm）×100

腸體比（Relative intestine length，RIL，%）=腸重（g）/魚體重（g）×100

腹腔脂肪指數(shù)（Intraperitoneal fat body index，IPFI，%）=腹腔脂肪重（g）/魚體重（g）×100

性腺指數(shù)（Gonad index，GI，%）=性腺重（g）/魚體重（g）×100

含肉率（Meat content rate，MC，%）=肌肉重（g）/魚體重（g）×100

1.5 魚體肌肉及腸組織硒含量的測(cè)定

分別將多鱗白甲魚的新鮮肌肉樣品、新鮮腸組織樣品及加工休閑熟食制品的肌肉樣（熟）送至西北農(nóng)林科技大學(xué)食品質(zhì)量檢測(cè)中心（陜西，楊凌）進(jìn)行硒含量檢測(cè)。硒含量測(cè)定方法參照國(guó)標(biāo)GB 5009.93—2017。

1.6 飼料及魚體肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分參照AOAC（2003）進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：采用105 ℃恒溫干燥法測(cè)定水分含量，索氏抽提法測(cè)定粗脂肪含量，凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白含量，馬弗爐灼燒法（550 ℃）測(cè)定粗灰分含量。

1.7 組織切片觀察

肝胰臟和腸道組織固定后，用梯度濃度乙醇進(jìn)行脫水，然后經(jīng)過(guò)二甲苯透明，石蠟包埋，切片機(jī)切片（厚度為5 μm），H.E.染色，中性膠封片。石蠟切片由武漢百仟度生物科技有限公司制作。將切片于顯微鏡（Nikon DS-Ri2）下進(jìn)行觀察并拍照。

1.8 血清生化指標(biāo)及抗氧化酶活性的測(cè)定

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）、葡萄糖（Glu）、膽固醇（Chol）、三酰甘油（TG）指標(biāo)由楊凌高新農(nóng)業(yè)示范區(qū)醫(yī)院（陜西，楊凌）采用全自動(dòng)生化分析儀（日立7600，東京，日本）進(jìn)行檢測(cè)。

血清抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）]活性、總抗氧化能力（T-AOC）及丙二醛（MDA）含量選用南京建成生物工程研究所有限公司試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.9 肝胰臟中抗氧化酶基因相對(duì)表達(dá)水平測(cè)定

分別采集三組魚的肝胰臟組織，以qPCR 技術(shù)檢測(cè)基因CAT、SOD和GPx在組織中的相對(duì)表達(dá)量。首先采用Trizol 法提取肝胰臟總RNA，用超微量分光光度儀（NanoDrop）測(cè)定260 nm 和280 nm 處的吸收值，檢測(cè)RNA 的含量和純度。取1 μg 總RNA，在20 μL的反應(yīng)體積內(nèi)按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa，中國(guó)大連）進(jìn)行cDNA 反轉(zhuǎn)。qRT-PCR 使用CFX 96 實(shí)時(shí)PCR 檢測(cè)系統(tǒng)（Bio-Rad，Hercules，CA，USA），參照ChamQ SYBR qPCR Master Mix 試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。所有引物在北京AuGCT 生物公司合成，選取管家基因β-actin作為內(nèi)參基因，引物序列見(jiàn)表2，采用2-ΔΔCt法分析數(shù)據(jù)并計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

1.10 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）”來(lái)表示。采用SPSS 19.0 Statistic 軟件進(jìn)行組間平均值的顯著性分析，以P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果分析

2.1 多鱗白甲魚生長(zhǎng)性能和生物學(xué)參數(shù)（見(jiàn)表3）

由表3可知，相比于A組，B組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著升高（P＜0.05），分別為（56.45±8.21）%和（0.74±0.09）%/d。B、C 組的飼料系數(shù)分別為（2.36±0.23）、（3.18±0.30），顯著低于A 組的（4.90±1.75）（P＜0.05），且B、C組之間差異不顯著（P＞0.05）。CF、HSI、VSI、SI、RIL、IPFI、GI等生物學(xué)指標(biāo)分別在1.38～1.50 g/cm3、0.93%～1.09%、12.11%～13.06%、0.16%～0.37%、2.45%～2.59%、0.72%～0.99%和1.20%～1.55%，在各組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表3 多鱗白甲魚生長(zhǎng)性能及生物學(xué)性狀

2.2 多鱗白甲魚肌肉與腸道硒含量（見(jiàn)表4）

表4 多鱗白甲魚肌肉與腸道硒含量（mg/kg）

由表4 可知，從橫向比較來(lái)看，多鱗白甲魚中期肌肉、末期肌肉、油炸加工熟食制品肌肉以及腸道組織的硒含量在A、B、C 三組均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。從縱向來(lái)看，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)，飼喂富硒菜籽餅的B、C組魚體鮮肌硒含量呈現(xiàn)逐步上升的趨勢(shì)，說(shuō)明魚體硒含量可能隨著養(yǎng)殖時(shí)間延長(zhǎng)而得以蓄積。

從油炸加工水產(chǎn)熟食制品來(lái)看，熟食制品肌肉的硒含量均表現(xiàn)出高于新鮮肌肉的硒含量的趨勢(shì)，且這種增高趨勢(shì)在A 組與C 組中表現(xiàn)更為明顯（P＜0.05），表現(xiàn)了該加工方式有助于水產(chǎn)品硒含量的增加。

從不同組織硒含量來(lái)看，三組中，各組內(nèi)魚體腸道硒含量（0.94～1.13 mg/kg）均顯著高于對(duì)應(yīng)組的新鮮肌肉硒含量（0.35～0.38 mg/kg，P＜0.05）。

2.3 多鱗白甲魚肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定（見(jiàn)表5）

表5 多鱗白甲魚肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干樣，%）

從表5 可知，多鱗白甲魚肌肉粗蛋白、粗脂肪及粗灰分含量分別在75.63%～80.20%、9.83%～10.38%、4.54%～5.39%，各營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)在三組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.4 肝胰臟及腸道H.E.染色觀察（見(jiàn)圖1）

多鱗白甲魚肝胰臟組織學(xué)形態(tài)未發(fā)生較明顯病理變化，肝細(xì)胞排列緊密規(guī)則，細(xì)胞核多位于中央、清晰可見(jiàn)，且三組間無(wú)明顯差異（圖1a）。各組多鱗白甲魚腸組織均發(fā)育較為良好，腸道微絨毛緊密排列，腸褶皺明顯，腸道結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯損傷（圖1b）。中腸絨毛高度結(jié)果顯示，B組的多鱗白甲魚腸絨毛高度顯著高于A、C組（圖1c，P＜0.05）。

圖1 多鱗白甲魚肝胰臟及中腸組織切片H.E.染色觀察及腸絨毛高度比較

2.5 多鱗白甲魚血清生化指標(biāo)及血清抗氧化酶活性（見(jiàn)表6）

由表6 可知，多鱗白甲魚血清生化指標(biāo)，如谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、葡萄糖、三酰甘油、總膽固醇、尿素、高密度膽固醇及低密度膽固醇等，在各組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05），但B、C 組的三酰甘油、總膽固醇、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量有上升的趨勢(shì)，B組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有低于A組的趨勢(shì)（P＞0.05）。

表6 多鱗白甲魚血清生化指標(biāo)及抗氧化能力

B組和C組的血清T-AOC均極顯著高于A組（P＜0.01）。C 組的血清GPx 活性顯著高于A、B 組（P＜0.05），且A、B兩組間差異不顯著（P＞0.05）。其他血清抗氧化指標(biāo)，如SOD、CAT 活性及MDA 含量，在三組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.6 多鱗白甲魚肝胰臟抗氧化酶基因相對(duì)表達(dá)量（見(jiàn)圖2）

圖2 多鱗白甲魚肝胰臟抗氧化酶基因相對(duì)表達(dá)量

由圖2 可知，飼喂含不同菜籽餅的飼料時(shí)，SOD相對(duì)表達(dá)量在各組間變化不顯著（P＞0.05）；B 組GPx的相對(duì)表達(dá)量極顯著高于A、C組（P＜0.01），且A、C組之間差異不顯著。C 組CAT的相對(duì)表達(dá)水平極顯著高于A、B兩組（P＜0.01）。

3 討論

3.1 不同富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚生長(zhǎng)、生物學(xué)性狀的影響

硒是水生生物生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要的營(yíng)養(yǎng)元素，魚類可以通過(guò)飼料硒來(lái)滿足其對(duì)硒的營(yíng)養(yǎng)需求。有研究表明，含硒飼料能夠有效提高尼羅羅非魚、石斑魚、鱸魚、軍曹魚等魚類的特定生長(zhǎng)率和增重率，同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)，硒的促生長(zhǎng)效果與飼料硒的濃度密切相關(guān)。在Zhang等（2021）的研究中發(fā)現(xiàn)，4 mg/kg硒含量的飼料比高硒飼料（16 mg/kg）和無(wú)硒飼料（0 mg/kg）更能提高虹鱒的特定生長(zhǎng)率和增重率，Hu 等（2016）在黃顙魚的研究也發(fā)現(xiàn)，飼料中缺乏硒（＜0.05 mg/kg）或補(bǔ)充過(guò)量硒（6.5 mg/kg）減緩了黃顙魚的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中，B 組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于A組（P＜0.05），且與C組無(wú)顯著差別，這表現(xiàn)出B組較高的增重率與生長(zhǎng)率，可能與這組硒含量（0.91 mg/kg）更適合多鱗白甲魚生長(zhǎng)有關(guān)，較低的硒含量（A組，0.88 mg/kg）或較高的硒含量（C組，1.0 mg/kg）均有削弱多鱗白甲魚生長(zhǎng)的趨勢(shì)，然而，以往的研究顯示，多鱗白甲魚對(duì)硒的營(yíng)養(yǎng)需求水平為0.70～2.08 mg/kg 或0.14～1.19 mg/kg，在這范圍內(nèi)，硒的含量并未影響多鱗白甲魚的生長(zhǎng)速度，本試驗(yàn)的飼料硒含量均在這一范圍內(nèi)，在這較窄的硒含量范圍內(nèi)，硒是如何影響到多鱗白甲魚的生長(zhǎng)，是否還有其他因素也參與到影響多鱗白甲魚的生長(zhǎng)上來(lái)，相關(guān)問(wèn)題還需進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)中，多鱗白甲魚的肥滿度、肝胰臟指數(shù)、內(nèi)臟指數(shù)等生物學(xué)指標(biāo)在三個(gè)飼料組間均無(wú)顯著差異，這在張斌鑫（2019）的研究結(jié)果中也有類似發(fā)現(xiàn)，表明安康產(chǎn)地的兩種富硒菜籽餅對(duì)魚體的生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖能力及攝食消化等均無(wú)不良影響，表現(xiàn)出該類富硒菜籽餅是多鱗白甲魚的優(yōu)質(zhì)飼料原料。同時(shí)，本試驗(yàn)結(jié)果還顯示，B、C 組飼料系數(shù)顯著低于A 組，且B、C 組的增重率和特定生長(zhǎng)率高于A 組（表3），進(jìn)一步說(shuō)明富硒菜籽餅，尤其是B 組中油雜菜籽餅的使用，在提高飼料效率和促進(jìn)多鱗白甲魚生長(zhǎng)方面更有優(yōu)勢(shì)和潛力。

3.2 不同富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚健康的影響

3.2.1 不同富硒菜籽餅對(duì)腸道及肝胰臟組織器官形態(tài)學(xué)特征的影響

腸道是動(dòng)物體消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要器官，兼有免疫、防御和內(nèi)分泌的功能，腸道健康與動(dòng)物機(jī)體健康息息相關(guān)，而魚類腸道健康是保證其高效生產(chǎn)的關(guān)鍵，同時(shí)，腸絨毛的高度和面積是評(píng)價(jià)動(dòng)物機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收能力的主要指標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)鯉魚飼喂納米硒飼料，其腸絨毛高度顯著高于無(wú)硒飼料組，作者推測(cè)，含硒飼料可有效改善了腸道中抗氧化酶活性和氧化應(yīng)激狀態(tài)，促進(jìn)了鯉的腸道健康，維持了鯉腸道完整性，保證了鯉腸上皮細(xì)胞的健康。對(duì)螯蝦的研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加硒可以通過(guò)增強(qiáng)消化酶的活性來(lái)改善消化系統(tǒng)的健康狀況，進(jìn)而促進(jìn)螯蝦生長(zhǎng)并改善其免疫力和健康。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組多鱗白甲魚腸道組織發(fā)育較為完整，未見(jiàn)明顯損傷，且B組的腸絨毛高度顯著高于A組（圖1C），表明安康菜籽餅提供的高硒含量在一定程度上改善了多鱗白甲魚的腸道健康，尤其是中油雜菜籽餅的使用，促進(jìn)了腸絨毛高度，增加了腸道表面積，更有利于促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收。

肝胰臟是水生生物主要的消化腺，也是機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和解毒的中心，對(duì)外界應(yīng)激極為敏感。陳劍杰等（2013）通過(guò)研究納米硒對(duì)氟損傷的鯉肝細(xì)胞的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)硒可以減輕因氟導(dǎo)致的肝細(xì)胞形態(tài)的異常變化，保護(hù)了肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性。姚朝瑞等（2021）以草魚肝細(xì)胞為研究對(duì)象，探討亞硒酸鈉對(duì)不同濃度亞硝酸鈉誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)給草魚肝細(xì)胞補(bǔ)充硒能在一定程度上維持肝細(xì)胞的形態(tài)及活力、緩解亞硝酸鈉導(dǎo)致的氧化系統(tǒng)失衡。本試驗(yàn)中，多鱗白甲魚肝胰臟組織學(xué)形態(tài)在三組間均未發(fā)生明顯病理變化，且各組魚體的肝細(xì)胞均排列緊密規(guī)則，細(xì)胞核多位于中央、清晰可見(jiàn)，細(xì)胞界限分明。由此可以看出，本試驗(yàn)所用的富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚肝胰臟產(chǎn)生了積極的營(yíng)養(yǎng)作用，是多鱗白甲魚良好的飼料資源。

3.2.2 不同富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)不僅可以作為魚類病理、毒理、生理學(xué)的參考指標(biāo)，還可以評(píng)價(jià)魚類的營(yíng)養(yǎng)健康狀況與環(huán)境適應(yīng)能力。GPT主要存在于肝臟、心臟和骨骼肌等組織中，GOT 主要存在于心肌細(xì)胞中，若血液中該酶活性超出正常范圍，則標(biāo)志著心臟、肝臟細(xì)胞受到損傷。血清總蛋白是白蛋白和球蛋白的總稱，在提供機(jī)體蛋白和機(jī)體免疫過(guò)程中發(fā)揮作用，可作為機(jī)體吸收蛋白質(zhì)的指標(biāo)。膽固醇主要來(lái)自于肝臟的合成，是動(dòng)物細(xì)胞必不可少的物質(zhì)，血液中的膽固醇應(yīng)在一定范圍內(nèi)，一旦膽固醇水平較高，易引起血管堵塞，造成高血壓和其他心血管疾?。谎喝８视褪茄褐|(zhì)的組成部分，當(dāng)機(jī)體脂肪含量過(guò)高，肝臟可對(duì)多余脂肪進(jìn)行分解，但當(dāng)血液中的三酰甘油和總膽固醇的含量異常高時(shí)，往往也說(shuō)明肝臟受損，使肝臟無(wú)法對(duì)多余血脂類進(jìn)行有效降解。本研究中，多鱗白甲魚各項(xiàng)血清生理生化指標(biāo)在三組間均無(wú)顯著差異，表明處理組和對(duì)照組的魚體具有一樣的健康水平，也說(shuō)明這兩種富硒菜餅同普通菜籽餅一樣，對(duì)多鱗白甲魚的營(yíng)養(yǎng)與生理健康有良好的促進(jìn)作用。

3.2.3 不同富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚抗氧化系統(tǒng)的影響

機(jī)體在代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量活性氧，這些存在于組織中的活性氧可對(duì)DNA、蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂質(zhì)造成破壞，這些潛在的有害反應(yīng)就是由機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)進(jìn)行控制，從而維護(hù)機(jī)體健康；該抗氧化系統(tǒng)包括酶類和非酶類兩部分。其中，酶類抗氧化體系包括谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）、過(guò)氧化物還原酶、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）等，除此之外，機(jī)體內(nèi)還存在多種新型抗氧化酶，如硫氧還蛋白、谷氧還蛋白、含硒蛋白和金屬基質(zhì)蛋白酶等，它們通過(guò)對(duì)氧化還原反應(yīng)的催化作用來(lái)清除機(jī)體的氧化物質(zhì)，保護(hù)機(jī)體免受損傷。非酶類抗氧化系統(tǒng)通常包括水溶性的維生素C、硫辛酸和尿酸等，以及脂溶性的胡蘿卜素、維生素E 和輔酶Q 等，這些物質(zhì)既可以在體內(nèi)合成又可以從自然界中獲取。酶類和非酶類抗氧化體系共同構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的抗氧化系統(tǒng)，共同作用抵抗?jié)撛诘难趸瘬p傷，對(duì)維持機(jī)體正常生理狀態(tài)具有重要意義。

硒是GPx的活性中心元素，從而使GPx具有抗氧化功能，使GPx能通過(guò)酶促反應(yīng)體系還原過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧化物，通過(guò)催化具有還原性質(zhì)的谷胱甘肽將有害的過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧化物還原為無(wú)害的水及烴基化合物，從而抵御細(xì)胞膜的損傷。已有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著飼料硒水平的升高，羅非魚血清和肝臟的GPx活性也隨之升高，在肖金星等（2020）、楊原志等（2016）的研究中也發(fā)現(xiàn)，黑鯛和軍曹魚血清GPx的活性隨飼料硒含量增加而顯著升高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，具有較高硒含量的C組顯著提高血清GPx活性，這可能與該飼料具有較高硒含量有關(guān)，而這較高的硒含量中所增加的硒含量部分，是由富硒菜籽餅中的硒所提供，因此，從某種程度上表明，以中油雜與陜油28為代表的兩種富硒菜籽餅在提升多鱗白甲魚GPx酶活性方面具有促進(jìn)作用。

T-AOC 是機(jī)體內(nèi)酶類和非酶類兩部分因子總抗氧化能力的總體現(xiàn)，在龍萌等（2015）的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平的酵母硒可顯著提高團(tuán)頭魴幼魚機(jī)體T-AOC 水平。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，使用兩種安康富硒菜籽餅的B、C 組極顯著提高了血清T-AOC，表明該安康菜籽餅的使用提升了多鱗白甲魚總抗氧化能力。

MDA是氧自由基攻擊生物膜引起脂質(zhì)過(guò)氧化反映而生成的產(chǎn)物，本試驗(yàn)三個(gè)組血清MDA 含量差異不顯著，陳春秀等（2019）在納米硒對(duì)半滑舌鰨幼魚抗氧化水平影響的研究中也發(fā)現(xiàn)，硒對(duì)MDA 含量的影響不顯著，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，由此也說(shuō)明，采用該富硒菜籽餅，沒(méi)有減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的生成量，也沒(méi)有加速脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的生成量，對(duì)多鱗白甲魚的抗氧化系統(tǒng)沒(méi)有形成負(fù)面壓力。

在分子水平上，抗氧化酶基因的相對(duì)表達(dá)量也能反映機(jī)體的抗氧化能力。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.3 mg/kg硒，在哺乳動(dòng)物山羊各組織中可檢測(cè)到較高GPx表達(dá)量。在雞的研究中也發(fā)現(xiàn)，日糧中添加硒時(shí)，GPx的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，且有機(jī)硒的效果要優(yōu)于無(wú)機(jī)硒。劉碧濤等（2014）的研究也發(fā)現(xiàn)，較0.045 mg/kg硒含量的日糧，0.4 mg/kg硒含量的日糧小鼠腎臟SOD、CAT表達(dá)有不同程度升高。本研究發(fā)現(xiàn)，富硒菜籽餅的使用，B組多鱗白甲魚肝胰臟GPx相對(duì)表達(dá)量極顯著增高；C 組中另一種抗氧化基因CAT相對(duì)表達(dá)量也極顯著上調(diào)；B、C組SOD相對(duì)表達(dá)量呈不顯著的上升趨勢(shì)。由此說(shuō)明，富硒菜籽餅?zāi)軌蛲ㄟ^(guò)提高SOD、GPx和CAT的表達(dá)水平來(lái)提高肝臟的抗氧化能力，以增強(qiáng)機(jī)體抵抗外界應(yīng)激變化的能力。

綜合血清生化指標(biāo)、血清抗氧化酶活性以及肝胰臟抗氧化酶基因的相對(duì)表達(dá)結(jié)果，可以看出，兩種富硒菜籽餅的使用比普通菜籽餅更能對(duì)抗多鱗白甲魚的氧化應(yīng)激狀態(tài)，對(duì)魚體健康呈現(xiàn)積極反應(yīng)。

3.3 不同富硒菜籽餅對(duì)多鱗白甲魚機(jī)體硒沉積及富硒魚養(yǎng)殖的影響

飼料的硒含量與魚體的硒含量密切相關(guān)，這與魚體腸道對(duì)來(lái)自飼料硒的消化、吸收與利用有關(guān)。本試驗(yàn)的研究結(jié)果表明，多鱗白甲魚腸道的硒含量0.94～1.13 mg/kg 遠(yuǎn)高于肌肉硒含量0.35～0.38 mg/kg，表明飼料硒是魚體腸道吸收硒的主要來(lái)源，同時(shí)也表明，腸道對(duì)飼料中硒的消化與吸收是魚體其他組織器官，包括肌肉中硒的主要來(lái)源。Liu 等（2017）的研究表明，隨著飼料硒含量的增加，硒在魚各組織中的沉積量也增加，表現(xiàn)為團(tuán)頭魴全魚、肌肉及肝臟的硒沉積量隨著飼料硒水平呈線性上升趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，三組試驗(yàn)飼料飼喂多鱗白甲魚，魚體肌肉（鮮）硒含量在各組間無(wú)顯著差異，這可能與本試驗(yàn)使用的三組飼料硒含量相近有關(guān)。經(jīng)檢測(cè)，三組飼料的硒含量分別為0.88、0.91 mg/kg和1.0 mg/kg（見(jiàn)表1），在335 mg/kg菜籽餅配制水平下，三組飼料中，由三種菜籽餅提供的硒含量分別為0.019、0.044 mg/kg及0.144 mg/kg，由此可見(jiàn)，由菜籽餅提供的硒使配合飼料的總硒含量有所不同，然而，魚體肌肉所蓄積的硒，要經(jīng)過(guò)腸道的消化、吸收以及其他組織器官的協(xié)同代謝和利用，這使得肌肉蓄積的硒并非完全反映飼料硒含量。肌肉硒含量究竟能多大程度地反映飼料硒含量，這將與不同的魚或不同的魚體狀態(tài)等方面有關(guān)，相關(guān)問(wèn)題尚需進(jìn)一步研究。

權(quán)群學(xué)等（2015）的研究發(fā)現(xiàn)，飼喂酵母硒的時(shí)間對(duì)育肥豬肌肉硒沉積量產(chǎn)生積極影響，肌肉硒含量隨著酵母硒飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。在本試驗(yàn)中，隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長(zhǎng)，肌肉硒含量由飼喂初始的0.26 mg/kg增加到中期（30 d采樣）的0.32 mg/kg，到末期（60 d采樣）時(shí)的0.37 mg/kg，表現(xiàn)出肌肉對(duì)硒蓄積量的增加趨勢(shì)。在以往對(duì)多鱗白甲魚的研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含納米硒飼料的多鱗白甲魚全魚的硒含量最高可達(dá)2.08 mg/kg，飼喂含酵母硒飼料的多鱗白甲魚肌肉硒含量可達(dá)0.5 mg/kg。本研究中，經(jīng)過(guò)60 d 的飼養(yǎng)，多鱗白甲魚肌肉的硒含量0.37 mg/kg，距離前人研究的0.5 mg/kg 硒含量還有較大差距，筆者推測(cè)，若延長(zhǎng)養(yǎng)殖時(shí)間，多鱗白甲魚肌肉硒沉積量可能會(huì)得到進(jìn)一步提升。

硒具有抗氧化、防衰老、保護(hù)和修復(fù)細(xì)胞、提高紅細(xì)胞的攜氧能力、提高人體免疫力、解除重金屬的毒害等功能。硒對(duì)人類的健康具有無(wú)可替代的作用。魚類是人類食物的重要組成部分，是人類硒營(yíng)養(yǎng)元素的重要且安全的來(lái)源。通過(guò)養(yǎng)殖富硒魚，來(lái)提高人類的硒攝入量，一直是水產(chǎn)養(yǎng)殖的研究熱點(diǎn)。2012 年7 月湖南省首例富硒魚研究成功，其產(chǎn)品硒含量達(dá)到1.28 mg/kg，符合富硒食品硒含量≥0.2 mg/kg 的標(biāo)準(zhǔn)。近幾年，有關(guān)富硒魚的養(yǎng)殖試驗(yàn)開(kāi)展越來(lái)越多，如富硒鱸魚、富硒草魚以及富硒鰱魚等的養(yǎng)殖，其目的都在于采取科學(xué)的技術(shù)手段，有效富集魚體硒元素，達(dá)到富硒標(biāo)準(zhǔn)，為人類所用。本試驗(yàn)中，多鱗白甲魚新鮮肌肉的硒含量從養(yǎng)殖初期的0.26 mg/kg 到養(yǎng)殖末期的0.35～0.38 mg/kg，均符合陜西省對(duì)非即食水產(chǎn)品的富硒標(biāo)準(zhǔn)，即硒含量≥0.15 mg/kg（DB 61/T 556—2018），因此，可以看出，通過(guò)本試驗(yàn)方法，養(yǎng)殖出的多鱗白甲魚為富硒魚。

有研究表明，水產(chǎn)品的不同烹飪與加工方法可能會(huì)影響魚體硒的含量，通過(guò)對(duì)淡水魚不同魚肉制品的硒含量的評(píng)估，發(fā)現(xiàn)腌制魚和熏制魚的肌肉硒含量要顯著高于原始樣品肌肉硒含量。根據(jù)陜西省地方標(biāo)準(zhǔn)DB 61/T 556—2018規(guī)定，當(dāng)水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)品中硒含量≥0.15 mg/kg時(shí)，即為富硒水產(chǎn)品。本試驗(yàn)中，三組飼料飼喂的多鱗白甲魚，經(jīng)油炸方式加工成熟食制品后，其肌肉硒含量為0.45～0.54 mg/kg，顯著高于0.15 mg/kg的硒含量標(biāo)準(zhǔn)，表明油炸加工可增加多鱗白甲魚體肌肉硒含量，且該加工方式生產(chǎn)多鱗白甲魚是富硒的即食水產(chǎn)品。由此可見(jiàn)，將多鱗白甲魚進(jìn)行油炸加工，是形成富硒多鱗白甲魚旅游休閑食品的有效途徑，這為本試驗(yàn)的后續(xù)研究，即將魚體進(jìn)行腌制或熏制，形成多樣化的富硒魚旅游休閑食品提供有益的參考。

4 結(jié)論