韋松曉 潘美秀 麥瑩瑩 黎鳳元 覃煒玲 李丹 陳秀勤 梁偉

α?地中海貧血（α?地貧，α? thalassemia）是世界上最常見(jiàn)的單基因遺傳病，多數(shù)是由于α 珠蛋白基因缺失致使α 珠蛋白鏈生成減少或缺如，導(dǎo)致α 鏈與非α 鏈數(shù)量的不平衡，不能合成正常的血紅蛋白［1?2］。臨床表現(xiàn)主要為溶血性貧血，疾病的嚴(yán)重程度和臨床分型與缺失的α 基因數(shù)量相關(guān)［3?5］。廣西作為地貧高發(fā)區(qū)之一，缺失型α?地貧攜帶率為14.23%［6?7］；梧州地區(qū)缺失型α?地貧則高達(dá)41%［8］。然而，目前少見(jiàn)有對(duì)梧州地區(qū)缺失型α?地貧的血液學(xué)參數(shù)的截?cái)嘀档膱?bào)道。本研究對(duì)缺失不同α 基因數(shù)量的α?地貧的血液學(xué)參數(shù)紅細(xì)胞（Red blood cell，RBC）、血紅蛋白（Hemoglobin，HGB）、平均紅細(xì)胞體積（Mean corpuscular volume，MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（mean corpusular hemoglobin，MCH）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（Mean corpusular he?moglobin concentration，MCHC）和紅細(xì)胞分布寬度（Red cell distribution width，RDW）進(jìn)行分析，并評(píng)價(jià)血液學(xué)參數(shù)的精確斷點(diǎn)是否可以鑒別缺失不同α 基因患者，為本地區(qū)篩查缺失型α?地貧提供一定的理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年4月至2020年4月在本院行地貧基因檢測(cè)確診為缺失型α?地貧的患者370 例為研究對(duì)象，其中男性146 例，女性224 例，年齡3～86歲，均為梧州地區(qū)患者，所有病例均排除健康、α 復(fù)合β 地貧和異常血紅蛋白病。同期67 名健康人群為正常對(duì)照組。所有研究對(duì)象均知情同意。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 血細(xì)胞分析儀（XE ?5000，Sysmex，日本）進(jìn)行血細(xì)胞分析；用羅氏全自動(dòng)生化分析儀（c702，德國(guó)）檢測(cè)血清鐵和血清鐵蛋白；用血紅蛋白地貧檢測(cè)儀（Variant Ⅱ，Bio?rad，美國(guó)）進(jìn)行血紅蛋白組分的分析；所有操作嚴(yán)格按照各自說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑均為廠家原裝配套試劑。

1.2.2 以DNA提取試劑盒提取基因組DNA。采用跨越斷裂點(diǎn)PCR技術(shù)檢測(cè)3種缺失型α?地貧基因突變類型（??SEA、?α3.7和?α4.2），所有地貧基因診斷試劑盒均購(gòu)于亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司，具體操作按試劑盒（批號(hào)：THAA20181007）說(shuō)明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)數(shù)資料以（n，%）表示；計(jì)量資料以（）表示，多組間計(jì)量資料采用單因素方差分析；用MedCalc 軟件繪制受試者工作特征（Receiver Operating Characteris?tic，ROC）曲線，計(jì)算曲線下面積，評(píng)價(jià)血液學(xué)參數(shù)篩查缺失型α 地貧的敏感性、特異性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者一般資料

基因確診的370 例缺失型α?地貧中，共有8種基因型。其中 以??SEA/αα 缺失型最常見(jiàn)，占61.62%。其次是?α3.7/αα 缺失型與??SEA/?α3.7復(fù)合缺失型，分別占13.24%和10.00%。見(jiàn)表1。

表1 缺失型α?地貧的基因型分布及其構(gòu)成Table 1 Genotypic distribution and composition ratio of missing α?thalassemia

2.2 正常對(duì)照組和缺失不同α 基因數(shù)量的患者血液學(xué)參數(shù)比較

四組患者的血液學(xué)參數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。正常對(duì)照組的HGB、MCV、MCH 和MCHC 均顯著高于（?α/αα）組，RDW 則顯著低于（?α/αα）組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（??/?α）組的MCV、MCH、MCHC 值顯著低于（?α/αα）組和（??/αα，?α/?α）組，而RDW 值則高于（?α/αα）組、（??/αα，?α/?α）組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（??/αα，?α/?α）組RBC、HGB、MCV、MCH 和MCHC 顯著高于（?α/αα）組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表2 正常對(duì)照組、缺失不同α 基因數(shù)量的患者血液學(xué)參數(shù)比較（±s）Table 1 2 Comparison of haematological parameters of patients with different number α missing genes in normal control group（±s）

表2 正常對(duì)照組、缺失不同α 基因數(shù)量的患者血液學(xué)參數(shù)比較（±s）Table 1 2 Comparison of haematological parameters of patients with different number α missing genes in normal control group（±s）

注：與正常對(duì)照組相比，aP<0.05；與?α/αα 組相比，bP<0.05；與（??/αα，?α/?α）組相比，cP<0.05。

組別正常對(duì)照?α/αα?α/?α 和??/αα??/?α F 值P 值n 67 83 237 50 RBC（1012/L)4.71±0.57 4.66±0.86 5.45±0.93ab 5.08±1.08abc 22.85 0.022 HGB(g/dL)13.83±1.61 11.94±2.50a 11.43±1.97ab 8.68±1.56abc 64.95 0.010 MCV(fL)87.50±3.48 79.80±7.00a 67.46±5.55ab 58.83±7.49abc 337.52 0.001 MCH(pg)29.37±1.14 25.66±3.06a 20.94±2.36ab 17.28±1.91abc 362.56 0.029 MCHC(g/dL)33.58±0.84 32.09±1.98a 31.22±1.34ab 29.47±1.42abc 87.47＜0.001 RDW(%)12.77±0.60 14.93±4.44a 15.75±2.72ab 23.66±4.51abc 123.33＜0.001

2.3 血液學(xué)參數(shù)對(duì)缺失不同數(shù)量α 基因患者的鑒別診斷價(jià)值

以αα/αα 組為參考，各血液學(xué)參數(shù)鑒別診斷?α/αα 組的性能指標(biāo)見(jiàn)表3，圖1。其中MCV 和MCH 的曲線下面積（AUC）均大于0.8（P<0.05）。MCV≤83.8 fl 及MCH ≤27.6 pg 在區(qū)分αα/αα 組和?α/αα 組的診斷效能較高，敏感性達(dá)到84.3%及88.0%，特異性分別為88.1%及95.5%。見(jiàn)表3。

表3 血液學(xué)參數(shù)對(duì)αα/αα 組（對(duì)照組）與?α/αα 組的診斷價(jià)值Table 3 The value of hematological parameters in differential diagnosis between αα/αα and α/αα groups

圖1 血液學(xué)參數(shù)對(duì)αα/αα組（對(duì)照組）與?α/αα組的診斷價(jià)值Figure 1 The value of hematological parameters in differential diagnosis between αα/αα and α/αα groups

以?α/αα 組為參考，各血液學(xué)參數(shù)鑒別診斷（??/αα，?α/?α）組的性能指標(biāo)見(jiàn)表4，圖2。其中MCV 和MCH 的曲線下面積（AUC）均大于0.8（P<0.05）。MCV 在截?cái)嘀禐?4.9 fl、MCH 為23.8 pg 時(shí)，可以較好地區(qū)分?α/αα 組和（??/αα，?α/?α）組，敏感性達(dá)到92.8%及96.6%，特異性達(dá)到86.7%及88.0%。

表4 血液學(xué)參數(shù)對(duì)?α/αα 組（對(duì)照組）與（??/αα、?α/?α）組的診斷價(jià)值Table 4 The value of hematological parameters in differential diagnosis of α/αα group（control group）and αα、?α/?α）group

圖2 血液學(xué)參數(shù)對(duì)?α/αα 組（對(duì)照組）與（??/αα、?α/?α）組的鑒別診斷價(jià)值Figure 2 The value of hematological parameters in differential diagnosis of α/αα group（control group）and（αα、?α/?α）group

以（??/αα，?α/?α）組為參考，各血液學(xué)參數(shù)鑒別診斷（??/?α）組的性能指標(biāo)見(jiàn)表5，圖3。其中MCV、MCH、MCHC 和RDW 的曲線下面積（AUC）均大于0.8（P<0.05）。RDW>18.8%時(shí)其敏感性達(dá)到100%，特異性為92.0%，AUC 為0.957；HGB 在在截?cái)嘀禐?.8 g/dL、MCV 為62.9 fl、MCH 為18.7 pg 及MCHC 為30.2 g/dL 時(shí)，區(qū)分兩組的敏感性也可達(dá)到74.0%～90.0%，特異性為80.2%～93.7%。

表5 血液學(xué)參數(shù)對(duì)（??/αα、?α/?α）（對(duì)照組）與（??/?α）組的鑒別診斷價(jià)值Table 5 Value of hematological parameters in differential diagnosis of（?/αα、?α/?α）（control）and（?/α））groups

圖3 血液學(xué)參數(shù)對(duì)（??/αα、?α/?α）（對(duì)照組）與（??/?α）組的鑒別診斷價(jià)值Figure 3 Value of hematological parameters in differential diagnosis of（?/αα、?α/?α）（control）and（?/α））groups

3 討論

α?地貧是兩廣地區(qū)高發(fā)的遺傳性疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)我國(guó)α?地貧的攜帶率高達(dá)7.88%［6］。α?地貧攜帶者臨床上沒(méi)有表現(xiàn)或是輕微的小細(xì)胞低色素貧血，中間型的臨床表現(xiàn)差異比較大，嚴(yán)重的需要輸血、去鐵治療維持生命，治療費(fèi)用非常大；重型α?地貧會(huì)導(dǎo)致妊娠晚期胎?；蚍置浜笮律鷥褐舷⑺劳觯?］。

在本研究的370 例缺失型患者中，??/αα 占61.62%，α3.7 型13.24%，與龍駒［10］報(bào)道的廣西南部地區(qū)、徐玉嬋等［11］報(bào)道的廣西柳州地區(qū)α?地貧基因攜帶構(gòu)成比??SEA/αα（53.25%，67.31%）與?α3.7/αα（19.09%，18.51%）為主相似。此外，在臨近地區(qū)廣東，劉勇［12］等185 例α?地貧分析結(jié)果??SEA/αα 占54.59%、?α3.7/αα 占19.46%，也與本研究結(jié)果相似。而海南地區(qū)黎族人群則以?α4.2/αα 和?α3.7/αα最常見(jiàn)，??SEA/αα 較為少見(jiàn)［13］。以上研究顯示，缺失型α?地貧基因攜帶率還是很高，分析其血液學(xué)參數(shù)并用于初步鑒別缺失數(shù)量，可以給地貧防控提供更多的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

本研究表明，MCV 和MCH 是有效預(yù)測(cè)α 基因缺失數(shù)量的指標(biāo)。絕大部分健康人群的MCV>83.8 fl 及MCH>27.6 pg；缺失1 個(gè)α 基因者，MCV在74.9～83.8 fl 之間，MCH 在23.8～27.6 pg 之間。從ROC 曲線上看，MCV≤83.8 fl 及MCH ≤27.6 pg在區(qū)分αα/αα 組和?α/αα 組的診斷效能較高，與地貧初篩陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)中的MCV<80 fl 和（或）MCH <27.6 pg［8］有差異，而廣東地區(qū)則建議MCV<81.45 fl和MCH <27.35 pg［12］、福建地區(qū)MCV<81.25 fl 和MCH <27.35 pg［2］作為篩查α?地貧的標(biāo)準(zhǔn)。各地存在差異的原因可能跟基因頻率存在地域性以及研究數(shù)量不同有關(guān)。本次研究顯示，MCV 在截?cái)嘀禐?4.9 fl、MCH 為23.8 pg 時(shí)，能較好地區(qū)分?α/αα 組和（??/αα，?α/?α）組；國(guó)外有Diego Velasco?Rodríguez［14］對(duì)不同缺失型α?地貧紅細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行比較鑒別報(bào)道，結(jié)果為當(dāng)MCH<21.90 pg 和（或）MCV<70.80fl 強(qiáng)烈提示存在α0等位基因，而國(guó)內(nèi)有缺失型α?地貧的血液學(xué)參數(shù)比較［15］，鑒別價(jià)值少見(jiàn)報(bào)道。盡管缺失兩個(gè)的α 基因在臨床上沒(méi)有很大的影響（只有輕微的小細(xì)胞低色素貧血），但它為高危夫婦需進(jìn)行遺傳咨詢提供了充分的證據(jù)。

HbH 病患者的MCV、MCH 比（??/αα、?α/?α）組明顯降低，血紅蛋白（Hb）的范圍在7～10 g/dL，大部分表現(xiàn)為輕中度貧血，極少為重度貧血。這與農(nóng)雪娟等［16］報(bào)道保持一致。缺失3 個(gè)α 基因者，MCV 一般小于62.9 fl，MCH 一般小于18.7 pg，另外RDW>18.8%；與缺失兩個(gè)α 基因者有明顯的分別。

α 基因缺失的數(shù)量對(duì)MCV、MCH 和RDW 有很大的影響，與MCH 的相關(guān)性最強(qiáng)；α 基因缺失越多，MCH 和MCV 值越低，RDW 呈現(xiàn)相反的趨勢(shì)。此外，與MCV 相比，MCH 在血液保存過(guò)程中的穩(wěn)定性更高［17?18］。因此許多作者建議使用MCH 而不是MCV 來(lái)篩查地貧。本次研究的結(jié)果與這項(xiàng)建議是一致的。

綜上所述，本研究通過(guò)血液學(xué)表型與缺失α基因數(shù)量的關(guān)系，了解應(yīng)用血液學(xué)參數(shù)初步鑒別不同亞型的缺失α 地貧的價(jià)值，以提示地貧高危夫婦進(jìn)行進(jìn)一步的基因診斷，降低出生缺陷，提高人口質(zhì)量。