路 彤，李 姍，鄭鵬生*

(1 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，西安 710061；2 西安市人民醫(yī)院,西安市第四醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心；* 通訊作者,E-mail:zpsheng@mail.xjtu.edu.cn)

2020年，全球?qū)m頸癌新發(fā)病例約60.4萬，死亡病例約34.2萬，這使宮頸癌穩(wěn)居女性惡性腫瘤發(fā)病率及致死率第四[1]。確診宮頸癌及因?qū)m頸癌死亡的平均年齡分別是53歲和59歲，這極大地縮短了女性的平均壽命[2]?，F(xiàn)已明確，高危亞型人乳頭瘤病毒(HPV)慢性感染是宮頸癌的主要病因，這一認(rèn)識推動了宮頸癌疫苗和癌前病變篩查技術(shù)的發(fā)展，得益于此，近年來許多地區(qū)宮頸癌的發(fā)病率及死亡率顯著下降[3]。但HPV感染是宮頸癌的必要不充分條件[1]，單純HPV感染大多在短時間內(nèi)被機(jī)體清除，僅有10%～20%發(fā)展為侵襲性病變[4]，宮頸癌的發(fā)生還伴隨著癌基因突變、抑癌基因失活及表觀遺傳改變等。因此，進(jìn)一步闡明宮頸癌的發(fā)生機(jī)制、探索有診斷或預(yù)后價值的生物標(biāo)志物對于宮頸癌的防治具有重要意義。

ELF3(E74 like ETS transcription factor 3)基因位于染色體1q32.1，編碼蛋白包含371個氨基酸[5]，是ETS轉(zhuǎn)錄因子家族的一員[5,6]，其結(jié)構(gòu)中包含多種DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(如ETS、A/T hook及PNT等)，特異性地表達(dá)于分化完全的上皮細(xì)胞中，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖與分化等多種生理過程中發(fā)揮重要作用[7,8]。現(xiàn)有研究表明，ELF3在腫瘤中的作用具有組織特異性，即在不同組織類型的腫瘤中發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。例如，ELF3抑制雌激素受體陽性(ERα+)乳腺癌細(xì)胞增殖[9]，但卻促進(jìn)HER2陽性乳腺癌的形成[10,11]。同樣，ELF3是肺腺癌的癌基因[12]，但卻抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移[13]。目前，ELF3在宮頸癌中的表達(dá)及意義尚未明確。本研究擬通過Western blot、qRT-PCR等多種方法分析ELF3在宮頸癌組織中的表達(dá)特點，并擬構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的宮頸癌細(xì)胞株，通過細(xì)胞計數(shù)、CCK-8及流式細(xì)胞術(shù)探索過表達(dá)ELF3對宮頸癌細(xì)胞增殖能力及細(xì)胞周期的影響及可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)平臺與主要試劑

Oncominem數(shù)據(jù)平臺網(wǎng)址：https://www.oncomine.org；基因表達(dá)譜交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA)平臺網(wǎng)址：http://gepia.cancer-pku.cn；高通量基因表達(dá)(Gene Expression Omnibus，GEO)數(shù)據(jù)庫網(wǎng)址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo；Kaplan-Meier分析平臺網(wǎng)址：http://kmplot.com。人宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa和C-33A均購自美國菌種保存中心(ATCC，American Type Culture Collection)；胎牛血清(FBS)購自美國Invitrogen公司；高糖DMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司。pIRES2-AcGFP-Neo真核表達(dá)載體由西安交通大學(xué)環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點實驗室自行構(gòu)建、保存。抗ELF3多克隆抗體購自美國Abcam公司(貨號：#ab97310)；抗GAPDH多克隆抗體購自中國Proteintech公司(貨號：#60004-1-lg)。

1.2 數(shù)據(jù)庫資料分析

通過數(shù)據(jù)庫資料分析，了解ELF3在腫瘤中的表達(dá)情況，并初步評估ELF3在宮頸癌組織和正常宮頸組織中的表達(dá)差異。使用Oncominem數(shù)據(jù)平臺分析不同腫瘤組織與相應(yīng)正常組織中ELF3的表達(dá)差異。借助GEPIA平臺分析癌癥基因圖譜(The Cancer Genome Atlas，TCGA)數(shù)據(jù)庫中宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸腺癌(cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma，CESC)與正常宮頸組織中ELF3的表達(dá)差異，同時分析CESC中，ELF3與細(xì)胞周期相關(guān)基因CDK2、MCM2、CREPT表達(dá)量的相關(guān)性。通過GEO數(shù)據(jù)挖掘，分析宮頸癌組織和正常宮頸組織中ELF3的表達(dá)情況。采用Kaplan-Meier曲線法分析宮頸癌患者的無復(fù)發(fā)生存期(relapse-free survival，RFS)與ELF3表達(dá)水平的關(guān)系。

1.3 臨床樣本

宮頸癌組織樣本均收集自2014年4月至2017年1月期間于西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科接受手術(shù)治療的宮頸癌住院患者。所有納入患者術(shù)前均未曾接受過放、化療或免疫治療，且病歷資料完整。正常宮頸標(biāo)本取材于同時期因子宮肌瘤行子宮全切術(shù)者。所有樣本的病理診斷均由病理專家出具。本研究已通過西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理委員會的審查(批件號：2014倫審科字第113號)，所有患者均已簽署知情同意書。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)

人宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa和C-33A均常規(guī)培養(yǎng)(37 ℃，5% CO2)于含10%胎牛血清及1%青-鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基中。

1.5 構(gòu)建質(zhì)粒及細(xì)胞轉(zhuǎn)染

通過本方法構(gòu)建ELF3過表達(dá)載體并建立穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞株及相應(yīng)的對照細(xì)胞，為后續(xù)研究提供實驗基礎(chǔ)和工具細(xì)胞。根據(jù)GeneBank中檢索的ELF3 CDS區(qū)序列(NM_001114309.2)，借助Premier 6.0軟件設(shè)計ELF3的特異性引物(正向引物：5′-GGAAGATCTGCCACCATGGCTGCAACCTGTGAGATT-3′；反向引物：5′-ACGCGTCGACTCAGTTCCGACTCTGGAGAACC-3′)。以HeLa細(xì)胞為模板，借助PCR獲取ELF3的全長cDNA片段。利用限制性核酸內(nèi)切酶SalⅠ和BglⅡ分別雙酶切該PCR擴(kuò)增產(chǎn)物及pIRES2-AcGFP-Neo表達(dá)載體。酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，利用膠回收法純化。隨后，使用DNA連接酶連接酶切后的pIRES2-AcGFP-Neo表達(dá)載體和ELF3 cDNA片段。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至感受態(tài)后，挑取陽性克隆并提取其質(zhì)粒，依次行雙酶切鑒定及測序鑒定。測序結(jié)果與ELF3基因序列進(jìn)行比對，選定比對結(jié)果完全一致的克隆(命名為：pIRES2-AcGFP1-Neo-ELF3)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作。按照Lipofectamine 2000說明書，分別將空載體pIRES2-AcGFP-Neo和重組質(zhì)粒pIRES2-AcGFP1-Neo-ELF3轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞中。隨后借助含G418的培養(yǎng)基篩選陽性克隆，經(jīng)Western blot鑒定，選定穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的單克隆細(xì)胞株(命名為：HeLa-ELF3)，轉(zhuǎn)染了空載體的HeLa細(xì)胞作為對照細(xì)胞組(命名為：HeLa-GFP)。擴(kuò)增、傳代后凍存于-80 ℃冰箱或液氮中備用。

1.6 qRT-PCR檢測ELF3 mRNA的表達(dá)水平

通過此方法檢測收集的臨床組織樣本或本次研究中構(gòu)建的HeLa-ELF3中ELF3 mRNA的表達(dá)水平，以評估ELF3 mRNA在宮頸癌組織及正常宮頸組織中的表達(dá)差異，或評估其在外源性過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞中的表達(dá)情況。收集選取的7例宮頸癌組織(CC)和7例正常宮頸組織(NC)及處于對數(shù)生長期的HeLa-ELF3及對照細(xì)胞(HeLa-GFP)，利用TRIzol試劑提取總RNA，并用酶標(biāo)儀測定濃度。接著，借助反轉(zhuǎn)錄酶將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，備用或-20 ℃保存。qRT-PCR引物序列見表1，按照2×RealStar SYBR Mixture說明書操作，使用西安天隆科技有限公司的實時熒光PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

表1 qRT-PCR引物序列

1.7 免疫組化染色(IHC)和免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)檢測ELF3的表達(dá)

借助IHC檢測10例宮頸癌組織、8例高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL)和8例正常宮頸組織樣本中ELF3蛋白的表達(dá)情況，以評估不同組織樣本中ELF3蛋白的表達(dá)差異。經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋的臨床組織標(biāo)本，保存于4 ℃冰箱。切片(厚度5 μm)后，置于烤箱烘烤(65 ℃)4～6 h。依次浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ及無水乙醇Ⅰ、Ⅱ中各10 min，隨后將其依次浸入95%，80%乙醇中各5 min。PBS洗滌(1×PBS，5 min/次×3次，下同)后，浸入沸騰的檸檬酸鈉修復(fù)液中高壓修復(fù)2 min。PBS洗滌后，浸入3% H2O2中封閉10 min。PBS洗滌。甩除或吸除樣片多余水分，滴加稀釋濃度為1∶100的抗ELF3多克隆抗體，置于濕盒中孵育(4 ℃)過夜。PBS洗滌后滴加二抗，37 ℃孵育30 min。DAB顯色，蘇木素染核3 min，分化20 s，返藍(lán)1 min(每一步完成均流水沖洗后進(jìn)入下一步)。依次浸入80%，90%乙醇及無水乙醇、二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各10 min。封片后拍照記錄。

通過ICC檢測人宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa及C33-A中ELF3蛋白的表達(dá)水平，以助于工具細(xì)胞系的選擇。滅菌后的0.5 cm蓋玻片平鋪于3.5 cm培養(yǎng)皿中備用。將處于對數(shù)生長期的目標(biāo)細(xì)胞株制備成單細(xì)胞懸液，以一定比例接種于前述準(zhǔn)備好的皿中，培養(yǎng)48 h(細(xì)胞融合度約80%時)后，PBS洗滌。0.2% TritonX-100室溫打孔10 min，PBS洗滌。蓋玻片細(xì)胞面向上粘于載玻片上。后續(xù)抗體孵育等步驟同IHC檢測所述。

染色結(jié)果由兩位病理學(xué)工作者獨立、雙盲評定。具體評級細(xì)則為：按陽性細(xì)胞百分比分5級：<5%(0分)，5%～30%(1分)，30%～50%(2分)，50%～80%(3分)，≥80%(4分)；按染色強(qiáng)度分4級：陰性(0分)，弱(1分)，中(2分)，強(qiáng)(3分)。評分后計算公式：免疫反應(yīng)評分(immunoreactivity score, IRS)=陽性細(xì)胞百分比評分×染色強(qiáng)度評分。根據(jù)IRS評分結(jié)果將樣本分為陽性和陰性兩組，規(guī)定IRS>3為陽性。

1.8 Western blot檢測ELF3的表達(dá)

采用Western blot檢測隨機(jī)選取的8例宮頸癌和8例正常宮頸組織樣本及人宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa、C33-A中ELF3的表達(dá)情況并鑒定穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞中ELF3蛋白的表達(dá)水平。收集組織樣本和處于對數(shù)生長期的待測細(xì)胞株，用預(yù)冷的含1×cocktail的蛋白裂解液裂解后，采用BCA試劑盒測定蛋白濃度并計算上樣體積(上樣量50 μg)。SDS-PAGE分離蛋白，根據(jù)ELF3蛋白的分子量大小，選用的分離膠和濃縮膠濃度分別為10%，5%。隨后轉(zhuǎn)至PVDF膜上(轉(zhuǎn)膜60 min)，5%脫脂牛奶封閉1 h后，4 ℃過夜孵育稀釋濃度為1∶1 000的抗ELF3多克隆抗體或稀釋濃度為1∶10 000的抗GAPDH多克隆抗體，洗膜后孵育二抗(室溫，1 h)。再次洗膜后，滴加ECL發(fā)光液，使用全自動化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)自動曝光，并用ImageJ軟件進(jìn)行灰度分析。

1.9 細(xì)胞計數(shù)和CCK-8法檢測細(xì)胞的體外增殖速度

通過細(xì)胞計數(shù)和CCK-8法檢測HeLa-ELF3及對照細(xì)胞的體外增殖速度，評估ELF3對HeLa細(xì)胞生物功能的影響。按3×104個細(xì)胞/皿將細(xì)胞懸液接種于3.5 cm的培養(yǎng)皿中(共準(zhǔn)備12皿)，并用含1 g/L G418的DMEM培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。接種后24 h取任意3皿計數(shù)，此后隔天計數(shù)3皿。將單細(xì)胞懸液以400個細(xì)胞/孔的密度接種于96孔板，于接種后第1，3，5，7天按照CCK-8檢測試劑盒說明書加樣并檢測各組OD值(450 nm)。實驗結(jié)束后，繪制生長曲線并分析。

1.10 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期

通過流式細(xì)胞術(shù)檢測HeLa-ELF3及HeLa-GFP的周期時相分布，評估外源性過表達(dá)ELF3對HeLa細(xì)胞細(xì)胞周期的影響。選取生長狀態(tài)良好且融合度約80%的細(xì)胞，PBS沖洗2次后加入選擇培養(yǎng)基(不含F(xiàn)BS的高糖DMEM培養(yǎng)基)培養(yǎng)24 h。而后制備成單細(xì)胞懸液，并以50×104個細(xì)胞/皿的密度接種于3.5 cm的培養(yǎng)皿中，常規(guī)培養(yǎng)24～48 h。收集細(xì)胞并用4 ℃預(yù)冷的PBS洗2次。加入1 ml已-20 ℃預(yù)冷的75%乙醇于4 ℃固定細(xì)胞24 h。PBS洗滌2次，加入20 μl RNase及10 μl PI染液，于4 ℃避光染色30 min，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測。

1.11 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌中ELF3表達(dá)上調(diào)

Oncomine分析結(jié)果表明，ELF3在乳腺癌、卵巢癌等腫瘤中表達(dá)上調(diào)，而在另一些腫瘤(如頭頸癌、肉瘤)中表達(dá)下調(diào)(見圖1A)，這提示ELF3具有雙重作用。利用GEPIA數(shù)據(jù)平臺生成的ELF3基因在宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸腺癌中匹配TCGA常規(guī)數(shù)據(jù)和GTEx數(shù)據(jù)的箱線圖表明，相較于正常宮頸組織，宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸腺癌中ELF3 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(P<0.05，見圖1B)，GEO數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果與上述結(jié)論一致(P<0.05，見圖1B)。借助qRT-PCR分析隨機(jī)選取的7例宮頸癌和7例正常宮頸組織樣本中ELF3 mRNA的表達(dá)情況，結(jié)果進(jìn)一步證實了ELF3在宮頸癌中高表達(dá)(P<0.01，見圖1C)。此外，Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明，ELF3 mRNA表達(dá)水平與宮頸鱗狀細(xì)胞癌和宮頸腺癌患者的無復(fù)發(fā)生存期(RFS)正相關(guān)(P=0.019，見圖1D)。

圖1 宮頸癌中ELF3 mRNA高表達(dá)并與不良預(yù)后有關(guān)Figure 1 High ELF3 mRNA expression in cervical cancer and its association with poor prognosis

IHC檢測結(jié)果顯示ELF3蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核中也有表達(dá)(圖2A)，宮頸癌和高級別鱗狀上皮內(nèi)病變組織(HSIL)樣本的IRS評分均顯著高于正常宮頸組樣本(7.200 ±4.756，6.875 ±3.399vs2.625 ±3.739，P<0.05，見圖2B)。Western blot結(jié)果表明，與正常宮頸組織相比，宮頸癌組織樣本中ELF3蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)(0.56 ±0.49vs0.029 ±0.072，P<0.01，見圖3)。

圖2 免疫組化染色法檢測ELF3蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)情況Figure 2 Expression of ELF3 protein in cervical cancer detected by IHC

圖3 Western blot檢測ELF3蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)情況Figure 3 Expression of ELF3 protein in cervical cancer detected by Western blot

2.2 成功構(gòu)建了pIRES2-AcGFP1-Neo-ELF3重組質(zhì)粒

瓊脂糖凝膠電泳檢測雙酶切后的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，結(jié)果顯示，在DNA Marker指示的約1 000 bp處，可見一與預(yù)期大小(ELF3：1 116 bp)相符的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物(見圖4A)。重組質(zhì)粒pIRES2-AcGFP1-Neo-ELF3陽性克隆酶切預(yù)鑒定結(jié)果見圖4B。隨后，經(jīng)測序比對確認(rèn)pIRES2-AcGFP1-Neo-ELF3構(gòu)建成功。

圖4 構(gòu)建ELF3過表達(dá)質(zhì)粒Figure 4 Establishment of overexpression plasmid of ELF3

2.3 ELF3促進(jìn)HeLa細(xì)胞增殖

ICC和Western blot檢測結(jié)果顯示，C-33A中ELF3的表達(dá)量顯著高于HeLa和SiHa(見圖5)。本研究選用HeLa細(xì)胞系作為工具細(xì)胞。

圖5 Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測人宮頸癌細(xì)胞系中ELF3的表達(dá)情況Figure 5 Expression of ELF3 in cervical cancer cell lines detected by Western blot and ICC

G418篩選的陽性克隆細(xì)胞株的鑒定結(jié)果見圖6，轉(zhuǎn)染了過表達(dá)ELF3重組質(zhì)粒的HeLa細(xì)胞株中ELF3蛋白及mRNA的表達(dá)量均顯著高于轉(zhuǎn)染了空載體的對照細(xì)胞，這表明穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞株建立成功，命名為HeLa-ELF3。將轉(zhuǎn)染了空載體的細(xì)胞命名為HeLa-GFP。

與HeLa-GFP比較，* P <0.05,* * P <0.01

細(xì)胞計數(shù)實驗結(jié)果顯示，相比于HeLa-GFP，HeLa-ELF3組細(xì)胞生長速度顯著增快(P<0.05，見圖7)。CCK-8實驗結(jié)果顯示，HeLa-ELF3組OD值顯著高于HeLa-GFP組(P<0.05，見圖7)，即細(xì)胞活力顯著增加。這些結(jié)果表明，ELF3可促進(jìn)HeLa細(xì)胞生長及活力。

A.過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞的生長曲線B.CCK-8檢測過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞的活力與HeLa-GFP組比較,* P <0.05,* * P <0.01

2.4 ELF3加速HeLa細(xì)胞G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變

運用流式細(xì)胞儀檢測HeLa-ELF3及HeLa-GFP的細(xì)胞周期，結(jié)果顯示，HeLa-ELF3中處于G0/G1期的細(xì)胞比例顯著低于HeLa-GFP組(47.6% ±3.0%vs56.3% ±5.0%，P<0.05，見圖8)，而處于S期及G2/M期的細(xì)胞比例顯著高于對照細(xì)胞(28.3% ±2.9%vs23.2% ±3.5%，P<0.05；24.4% ±3.0%vs21.2% ±3.3%，P<0.05)。這些結(jié)果表明，ELF3可促進(jìn)HeLa細(xì)胞從G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變。

圖8 ELF3加速HeLa細(xì)胞周期進(jìn)程Figure 8 ELF3 accelerates cell cycle transition

另外，GEPIA數(shù)據(jù)平臺分析結(jié)果顯示，CESC中ELF3與CDK2、MCM2、CREPT(RPRD1B)的表達(dá)均呈正相關(guān)(r>0，P<0.05，見圖9)。

圖9 ELF3與CDK2、MCM2、CREPT的表達(dá)均呈正相關(guān)Figure 9 Positive correlation between ELF3 and CDK2, MCM2, CREPT in CESC

3 討論

宮頸癌的主要病因是高危亞型HPV慢性感染[14]，但流行病學(xué)研究和相關(guān)實驗數(shù)據(jù)表明，單獨HPV感染并不足以誘發(fā)宮頸癌[15]。因此，闡明HPV-宿主相互作用中的致癌模式和作用靶點，將可能推動宮頸癌的防治及靶向藥物的研發(fā)進(jìn)程，進(jìn)而有效降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。ELF3在胚胎發(fā)育、泌乳等生理過程及多種腫瘤(如肺癌、乳腺癌等)的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，但ELF3在宮頸癌中的表達(dá)與作用目前尚無報道。本研究結(jié)果顯示ELF3在宮頸癌組織中高表達(dá)并與患者預(yù)后不良有關(guān)，這提示ELF3在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。

本次研究成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)ELF3的HeLa細(xì)胞株。細(xì)胞功能學(xué)實驗結(jié)果顯示外源性過表達(dá)ELF3可促進(jìn)HeLa細(xì)胞增殖及活力。此外，與對照相比，HeLa-ELF3處于S期及G2/M期的細(xì)胞比例增高，而處于G0/G1期的細(xì)胞比例降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。這表明，ELF3通過加速HeLa的細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)其分裂、增殖。與本研究結(jié)果一致的是，已有研究表明，在非小細(xì)胞肺癌中，敲低ELF3的表達(dá)后細(xì)胞周期G1/S檢查點因子CDK4、CCND1、C-MYC和E2F1的表達(dá)被抑制，阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖[16]。已有研究表明，CDK2[17]、MCM2[18]、CREPT[19]等細(xì)胞周期相關(guān)分子可加速宮頸癌細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)其增殖。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中ELF3的表達(dá)水平與CDK2、MCM2、CREPT的表達(dá)均呈正相關(guān)。這提示ELF3加速HeLa細(xì)胞周期進(jìn)程可能與這些細(xì)胞周期相關(guān)分子高表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，本研究首次揭示了ELF3在宮頸癌組織中高表達(dá)。同時揭示了外源性過表達(dá)ELF3通過加速HeLa細(xì)胞G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，而這種細(xì)胞生物學(xué)功能的改變可能與CDK2、MCM2、CREPT等細(xì)胞周期相關(guān)分子的高表達(dá)有關(guān)，但相關(guān)分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本次研究為ELF3成為宮頸癌的治療靶點或評估宮頸癌患者預(yù)后的指標(biāo)提供基礎(chǔ)，但本研究存在組織樣本量少、工具細(xì)胞系少及缺乏體內(nèi)實驗相關(guān)結(jié)果等不足。下一步的研究工作將增加樣本量、構(gòu)建其他類型的工具細(xì)胞并開展動物實驗，進(jìn)一步證明ELF3對宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響。