植物源益生乳酸菌的篩選及其特性

聶紫玉，吳艷陽，王增光，李子晗，康文麗，潘麗娜，汪家琦，戴智勇，趙玲艷,*，鄧放明,*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學食品科學技術學院，湖南 長沙 410128；2.澳優(yōu)乳業(yè)（中國）有限公司，人體微生態(tài)制品湖南省工程研究中心，湖南 長沙 410200）

聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織將益生菌定義為“劑量充足時，對宿主健康有益的活的微生物”。對于益生菌的研究，從1899年發(fā)現(xiàn)到目前已有122 年。據(jù)統(tǒng)計，2013—2017年，全球益生菌市場價值由320.6億 美元增至3 472.51億 美元，增長近10 倍。2017—2020年，中國益生菌產(chǎn)業(yè)市場價值由559億 元增至850億 元，發(fā)展迅速。益生菌具有對抗腸道病原菌與致病微生物菌群競爭黏連的獨特能力，可以與致病性微生物群競爭黏附位點進而疏遠病原體，或通過在宿主腸道外激活特定基因刺激和調(diào)節(jié)宿主的免疫反應；益生菌還被證明可以調(diào)節(jié)脂肪貯存和刺激腸道血管生成、維持腸道菌群的穩(wěn)定、減少乳糖不耐癥、預防抗生素誘發(fā)的腹瀉、預防結腸癌、提高免疫力、降膽固醇、治療抑郁癥、帕金森癥等與大腦神經(jīng)中樞有關的疾病等；且近年來病毒感染頻發(fā)，有相關研究表明益生菌或可與病毒發(fā)生拮抗。因此，益生菌研究是食品和醫(yī)藥領域熱門課題。

乳酸菌是最常見的益生菌，其來源廣泛，可從人類、動物、植物和環(huán)境中分離出來。傳統(tǒng)上，大多數(shù)益生菌來自腸道。發(fā)酵蔬菜是一種以蔬菜為原料，利用微生物進行發(fā)酵的冷加工方式。我國自公元前3世紀就已有發(fā)酵蔬菜的生產(chǎn)，且發(fā)酵蔬菜種類繁多。自然發(fā)酵蔬菜制品是一個較為復雜的微生態(tài)環(huán)境，其微生物菌群組成既有優(yōu)勢菌群存在的共性，也有樣品特異性。在蔬菜的起始發(fā)酵和主發(fā)酵階段，占優(yōu)勢的細菌包括腸膜狀明串珠菌、短乳桿菌、啤酒片球菌、植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌以及糞鏈球菌等，乳酸菌是所有自然發(fā)酵蔬菜中最主要的微生物菌群，因此，發(fā)酵蔬菜是重要的乳酸菌分離源，從植物源中分離的乳酸菌主要用作發(fā)酵劑或益生菌，目前對植物源益生菌研究較多的是韓國泡菜，而有關中國傳統(tǒng)發(fā)酵食品的報道較少。植物源乳酸菌相對于動物源乳酸菌具有更高的安全性，但由于分離源的特殊性，植物源乳酸菌能否適應人體腸道環(huán)境和表現(xiàn)出益生功能需要進行研究。潛在益生菌篩選的主要指標包括：對胃酸的耐受性、腸道膽鹽的耐受性、以及對潛在致病性微生物的抗菌性、抗生素的藥物敏感性等。對于選擇具有特定作用的益生菌菌株，還可以考慮一些額外的益生菌特性，如降低膽固醇的能力、抗炎抗氧化活性或?qū)Π┘毎募毎拘宰饔?。工業(yè)化生產(chǎn)發(fā)酵蔬菜時，一般接種發(fā)酵劑，以確保發(fā)酵的高效性和安全性，而家庭制備發(fā)酵蔬菜都是自然發(fā)酵，沒有受到商業(yè)益生菌的干擾。本實驗從農(nóng)家制備的傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜中分離乳酸菌，并進行一系列益生特性的初步研究及菌種鑒定，旨在開發(fā)具益生潛力的中國本土植物源乳酸菌菌株。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

MRS固體瓊脂培養(yǎng)基、改良MC培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、革蘭氏染色試劑盒、技術瓊脂粉、牛膽鹽、血平板、賴（酪/組/精）氨酸脫羧酶與氨基酸脫羧酶對照試劑盒廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；抗菌藥物藥敏紙片杭州微生物試劑有限公司；鹽酸、氯化鈉、丙三醇、無水乙醇、瓊脂糖 國藥集團化學試劑有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH） 東京化成工業(yè)株式會社；48、96 孔板無錫耐思生命科技股份有限公司；細菌基因組DNA快速抽提試劑盒、針式濾菌器 美國默克公司；電泳純化聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）引物 上海派森諾生物科技有限公司；D4030A dNTP、DRR20AM TaKaRa LA聚合酶 寶日醫(yī)生物技術（北京）有限公司。

1.2 儀器與設備

PHS-2F pH計 上海儀電科學儀器有限公司；ULTS1368超低溫冰箱 美國賽默飛世爾公司；全套精密移液槍 德國艾本德股份公司；SQ810C自動高壓蒸汽滅菌器 重慶雅瑪拓科技有限公司；YP-B10002電子天平 上海光正醫(yī)療儀器有限公司；HCB-1300V潔凈工作臺 青島海爾生物醫(yī)療股份有限公司；CX31光學顯微鏡 日本奧林巴斯株式會社；Heraeus MultifugeX1R高速冷凍離心機、渦旋振蕩儀 賽默飛世爾科技（中國）有限公司；SPL250生化培養(yǎng)箱 天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司；TECAN spark多功能酶標儀 西安縱橫儀器科技有限公司；MNT-150游標卡尺 上海美耐特實業(yè)有限公司；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司；Mini Pro 300V Power Supply電泳儀 美國Major Science公司；Labnet Sub System 70電泳槽 美國萊伯特公司；UV-1801分光光度計 北京北分瑞利分析儀器（集團）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 乳酸菌的分離與形態(tài)學鑒定

從中國不同地區(qū)采集農(nóng)戶按傳統(tǒng)方法自制的發(fā)酵蔬菜。采樣時用無菌鑷子取足量樣品至100 mL無菌管內(nèi)，密封，暫存于低溫采樣箱中，隨后送回實驗室。在超凈臺中用無菌鑷子取適量樣品于無菌生理鹽水中浸泡，用滅菌生理鹽水進行10 倍梯度稀釋。選取合適濃度的3 個梯度，各取0.1 mL稀釋液，在含有碳酸鈣的MC培養(yǎng)基平板上進行涂布。生長48 h后挑選有融鈣圈且表面光滑的白色、淡黃色菌落劃線至MRS培養(yǎng)基，反復劃線至純，待長出后挑選單個菌落進行革蘭氏染色并鏡檢。革蘭氏染色結果為陽性且鏡檢菌體外圍無半透明薄膜、無芽孢的判定為乳酸菌。將其菌落挑選至MRS肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 h后，與40%甘油按1∶1保藏至-80 ℃冰箱中。

1.3.2 乳酸菌耐酸性篩選

初篩：菌株活化2 代后，培養(yǎng)12 h，以2%接種量接入用濃鹽酸調(diào)節(jié)至pH 3.0的MRS肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)12 h后肉眼觀察是否有顯著沉淀且搖勻后培養(yǎng)液是否顯著渾濁。記錄渾濁的菌株編號進行復篩。

復篩：菌株活化至穩(wěn)定，培養(yǎng)12 h后，按1%的接種量接入用濃硫酸調(diào)節(jié)至pH 2.5的酸性MRS培養(yǎng)基中，分別培養(yǎng)0 h和4 h后進行稀釋涂布，待菌落長出后進行計數(shù)，按式（1）計算存活率，并按照GB 4789.2—2016《食品微生物學檢驗 菌落總數(shù)測定》方法分別進行活菌數(shù)計算，平行3 次。

1.3.3 乳酸菌耐膽鹽能力篩選

菌株培養(yǎng)至穩(wěn)定，培養(yǎng)12 h后，取6 mL培養(yǎng)液倒入無菌離心管中，12 000 r/min離心8 min，去除上清液，用生理鹽水反復洗滌沉淀物表面，去除雜質(zhì)，然后加入含0.3%牛膽鹽的生理鹽水7 mL，制成菌懸液，分別于0 h和2 h進行稀釋涂布，培養(yǎng)48 h后平板計數(shù)，按式（2）計算存活率，并按照GB 4789.2—2016方法分別進行活菌數(shù)計算，平行3 次。

1.3.4 16S rDNA鑒定

按試劑盒步驟提取DNA后進行擴增，乳酸菌引物為通用引物（27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT），經(jīng)過電泳檢測擴增產(chǎn)物后，送至上海派森諾生物科技股份有限公司測序。綜合測序峰圖將測序結果截取800 bp的區(qū)域，將測序得到的序列在NCBI（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome）中比對，選擇相似度最大的序列作為物種鑒定結果。

1.3.5 乳酸菌藥敏性實驗

采用紙片擴散法，菌株活化3 代離心后棄去上清液，再用生理鹽水重懸得到菌懸液。采用比濁法調(diào)節(jié)菌懸液濃度為1×10CFU/mL左右（＝0.5±0.05），吸取1 mL菌懸液于培養(yǎng)皿中，倒入15 mL固體培養(yǎng)基（50 ℃），混勻，待培養(yǎng)基凝固后，在每個培養(yǎng)皿中均勻放置3 張藥敏紙片，37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h后測量抑菌圈直徑，并根據(jù)表1標準進行藥物敏感性判定。

表1 微生物藥物敏感實驗執(zhí)行標準Table 1 Criteria for microbial drug susceptibility test

1.3.6 乳酸菌抑菌實驗

采用瓊脂擴散法。平板中倒入15 mL融化的素瓊脂（2%），待其充分冷卻凝固后，放入已滅菌的牛津杯數(shù)個，并按一定次序排列整齊。將指示菌稀釋成合適濃度菌懸液，取該菌懸液l mL與15 mL經(jīng)融化后保持在45 ℃左右的MRS培養(yǎng)基迅速混合均勻，冷卻后用無菌鑷子取出牛津杯，即形成若干孔洞。分別向孔洞里加入等量待檢菌的離心上清液，37 ℃培養(yǎng)12 h，游標卡尺測量抑菌圈直徑。

1.3.7 乳酸菌溶血性實驗

取血瓊脂培養(yǎng)基，采用點種法，中心以金黃色葡萄球菌為對照，外圍取實驗乳酸菌菌點種3 次。37 ℃培養(yǎng)48 h，觀察實驗菌與對照菌溶血情況。

1.3.8 乳酸菌氨基酸脫羧酶活性實驗

試劑盒法：菌株活化3 代，培養(yǎng)18 h后，取0.05 mL菌液添加至不同試劑瓶中，并加0.5 mL滅菌液體石蠟封層。37 ℃培養(yǎng)18～24 h后根據(jù)說明書觀察變色情況。

氨基酸脫羧酶基因、毒力因子檢測：參考黃曉棠方法；精氨酸脫羧酶氨基因、毒力因子引物引自文獻[30-32]。

1.3.9 乳酸菌DPPH自由基清除能力測定

制備菌懸液，采用比濁法調(diào)節(jié)濃度至1×10CFU/mL。配制DPPH-無水乙醇溶液0.2 mmol/L，并進行無菌過濾。在避光環(huán)境中，按樣品+DPPH（）、樣品+無水乙醇（）、純水+DPPH（）分組加入48 孔板中，每組3 個孔。避光反應40 min后，收集液體，離心后取上清液，于517 nm波長處測吸光度。DPPH自由基清除率計算如下：

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用方差分析和最小顯著差異法，＜0.05，差異顯著。分析、計算分別采用DPS數(shù)據(jù)處理軟件和Origin 2018 64Bit。所有測定均為3 次重復取平均。

2 結果與分析

2.1 乳酸菌耐酸能力分析

益生菌要在腸道中發(fā)揮作用，必須通過胃液環(huán)境。人體空腹時胃液pH值約為1.3～2.0，進食后pH值約為3.0～5.0。益生菌必須在pH 3.0的條件下存活1.5～2 h，故篩選植物源潛在益生菌在胃腸道中的生存和持久性至關重要。由于菌種數(shù)目過多，為有效篩選耐酸的乳酸菌，實驗初期采用pH 3.0的培養(yǎng)基進行初篩，通過肉眼觀察培養(yǎng)基是否渾濁，獲得沉淀明顯乳酸菌82 株。82 株菌經(jīng)pH 2.5 MRS培養(yǎng)得乳酸菌49 株（表2）。其中577、602、722、933、755、578、580、582、584、592、594、601這12 株菌在pH 2.5 MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 h后活菌數(shù)較之前增加，表明具有極強的耐酸能力。

表2 菌株對pH 2.5 MRS培養(yǎng)基的耐受能力Table 2 Survival of strains in MRS medium at pH 2.5

2.2 乳酸菌耐膽鹽能力結果

正常人小腸內(nèi)膽鹽質(zhì)量濃度在0.3～3.0 g/L之間。高濃度膽鹽可以拮抗益生菌的生長，因為它們會改變細胞膜的通透性，分解膜蛋白，從而導致細胞破裂和死亡。經(jīng)pH 2.5 MRS培養(yǎng)得到的49 株乳酸菌進行耐膽鹽實驗，發(fā)現(xiàn)49 株乳酸菌均具有耐膽鹽能力，可見耐酸菌株同時具備耐膽鹽能力，耐酸與耐膽鹽之間可能有某種聯(lián)系機制。其中來自不同樣品的19 株菌株實驗結果見表3。19 株菌中有13 株耐膽鹽能力極強，2 h后活菌數(shù)增加（577、602、664、674、722、6-12、H3D、856、729、727、z1-11、z1-6、z22）（＜0.05）。

表3 菌株對0.3%牛膽鹽溶液的耐受能力Table 3 Tolerance of strains to 0.3% bovine bile salt solution

2.3 乳酸菌菌株形態(tài)及鑒定結果

表4 乳酸菌來源及鑒定結果Table 4 Sources and identification of lactic acid bacteria

將挑選出的19 株乳酸菌進行16S rDNA，鑒定結果見表4。由于菌株來源于發(fā)酵蔬菜，所以大部分菌株為植物乳桿菌及發(fā)酵乳桿菌，嫩江桿菌、戊糖片球菌、利莫西桿菌、戊糖乳桿菌、屎腸球菌、短乳桿菌分別各1 株。其中577為嫩江桿菌，為中國特有乳酸菌種，因首次分離于黑龍江省嫩江縣而得名，1 株從酸菜中分離的嫩江桿菌被證實具有較強低溫降解亞硝酸鹽的能力，但幾乎沒有關于其益生特性的研究。z1-11為屎腸球菌，其一般分離自動物，植物源屎腸球菌較少見。胡勇等從青海自然生長的植物花朵中分離鑒定出10 株乳酸菌，其中包括屎腸球菌。利莫西發(fā)酵乳桿菌是乳酸桿菌科中的一種厚壁菌，1 株來源于母乳的利莫西發(fā)酵乳桿菌被臨床證實有抗炎功效。

2.4 乳酸菌安全特性分析

益生菌理論上可能導致全身性感染、有害代謝活動、易感個體過度免疫刺激和輕微胃腸道不適癥狀4 種副作用。需注意的是，每一種益生菌菌株，包括那些尚未開發(fā)的，都可能有不同的安全特性。故對各菌進行安全性測評尤為重要。

2.4.1 乳酸菌對抗生素的耐藥性

益生菌中的抗生素耐藥基因可轉(zhuǎn)移到某些病原體上，導致病原體耐藥性提高。因此，對各菌株進行全面的藥敏測試以了解其藥敏譜是非常必要的。從表5可看出，本實驗供試菌株除729、933外，都對青霉素類的苯唑西林表現(xiàn)敏感，這與Charteris等發(fā)現(xiàn)乳酸菌對青霉素和頭孢菌素類藥物敏感的結果相同。經(jīng)統(tǒng)計，供試菌株有63.16%對頭孢類供試藥物表現(xiàn)敏感，且乳酸菌對第1代頭孢菌素的敏感性普遍高于第3代產(chǎn)品，與相關報道一致。19 株菌都對紅霉素表現(xiàn)敏感或中介，紅霉素作為廣譜抗生素的抑菌效果已被多次報道證實。供試菌株只有577、602、664、662、6d-16這5 株菌對供試的氨基糖苷類藥物表現(xiàn)敏感，據(jù)報道，乳酸菌通常對氨基糖苷類（慶大霉素、卡那霉素和鏈霉素）耐藥，因為氨基糖苷的攝取是由細胞色素介導的電子傳遞，而這在厭氧菌（包括乳酸菌）中不存在。供試菌株對四環(huán)素類藥物中的米諾環(huán)素和多西環(huán)素均較敏感，大多數(shù)菌株四環(huán)素較敏感，但個別菌株對四環(huán)素表現(xiàn)出一定的耐藥性，這與Dec等研究中乳酸菌對四環(huán)素耐藥性大于多西環(huán)素的結果相似。

綜合上述結果，供試乳酸菌對多種藥物具有敏感性，其中664、662、577、602、6d-16對20 種藥物均敏感。

2.4.2 乳酸菌抑菌能力

供試菌株對李斯特菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌能力的檢測結果見表6，可見19 株菌對3 種典型致病菌具有不同程度的抑制能力（＜0.05）。所有菌株對李斯特菌的抑菌直徑在（14.95±0.62）mm以上，最高達到（23.65±0.60）mm，表明具有極強的抑菌作用；所有菌株對大腸桿菌的抑菌直徑在（10.98±0.27）～（21.24±0.25）mm之間，表明具有較強的抑菌作用；所有菌株對大腸桿菌的抑菌直徑在（15.38±0.32）～（25.50±0.12）mm之間，表明具有極強的抑菌作用。

表5 菌株對抗生素的耐藥性Table 5 Antibiotic susceptibility of strains

表6 乳酸菌對致病菌的抑菌直徑Table 6 Inhibition zone diameter of lactic acid bacteria against pathogenic bacteria

抑菌性是益生菌的重要特性之一，乳酸菌對病原菌不僅有抑制效果，而且能削弱病原菌的毒力，是制備發(fā)酵劑和食品生物防腐劑的理想選擇。乳酸菌的抗菌活性主要來源于其代謝產(chǎn)生的HO、有機酸（乳酸、乙酸和甲酸）、蛋白質(zhì)類化合物、小分子肽及乳酸。乳酸菌在宿主腸道中定植后，會產(chǎn)生超氧陰離子自由基并通過呼吸作用轉(zhuǎn)化為毒性較小的過氧化氫，過氧化氫的持續(xù)積累抑制了其他細菌的生長；一些非均相發(fā)酵的乳酸菌通過代謝己糖產(chǎn)生CO，降低環(huán)境中氧氣濃度，產(chǎn)生厭氧環(huán)境，抑制有害需氧細菌的生長；乳酸菌還能通過糖酵解代謝檸檬酸產(chǎn)生雙乙酰，抑制多種有害微生物。

2.4.3 乳酸菌溶血性分析

圖1 菌株溶血性觀察結果Fig. 1 Hemolytic activity observation of strains

一些菌株在血平板上培養(yǎng)時，菌落周圍會形成明顯的透明溶血環(huán)，根據(jù)使綿羊血細胞瓊脂溶血的能力分類為完全溶血（β溶血）、部分溶血（α溶血）和不溶血（γ溶血），α溶血的鏈球菌呈現(xiàn)半透明草綠色溶血環(huán)，β溶血的鏈球菌呈現(xiàn)透明溶血環(huán)，大多數(shù)溶血性菌株是致病性的。供試菌株的溶血性實驗結果見圖1，可看出平板中心的指示菌（金黃色葡萄球菌）產(chǎn)生了明顯的溶血環(huán)，而周圍的3 個供試菌株的菌落無溶血環(huán)，故19 株菌皆無溶血性。一般認為乳酸菌屬是安全的共生菌，缺乏溶血素，不會產(chǎn)生機會性毒力，符合食品安全的要求。

2.4.4 乳酸菌氨基酸脫羧酶活性

食品中的生物胺大部分由微生物脫羧氨基酸形成，它的產(chǎn)生需耍3 個條件：足夠的氨基酸、有氨基酸脫羧酶活性的微生物和利于微生物生長的低酸環(huán)境。常見產(chǎn)生物胺菌株有乳酸桿菌屬、腸桿菌屬、腸球菌屬和乳桿菌屬。適量生物胺有利于人體的正常生理活動，一旦過量則會對人體產(chǎn)生不利影響，故產(chǎn)生物胺能力也是選擇發(fā)酵乳酸菌和益生菌的標準之一。由于對人體健康威脅較大的組胺、酪胺、腐胺和尸胺的前提物質(zhì)分別為組氨酸、酪氨酸、精氨酸與賴氨酸，因此本實驗對供試菌株這4 種氨基酸脫羧酶活性進行檢測。發(fā)現(xiàn)722、647、z1-6、729、6-12、577、yz16-3、856的精氨酸脫羧酶呈陽性（圖2），其余皆為陰性。

圖2 精氨酸脫羧酶陽性對照結果Fig. 2 Evaluation of arginine decarboxylase activity of strains

精氨酸脫羧酶可與腐胺、精胺、亞精胺的生成有關。氨基酸脫羧酶試劑瓶顯色是一種簡便快速的方法，卻也有一定的局限性，易受環(huán)境影響，為進一步確定菌株是否具有氨基酸脫羧酶活性，利用PCR法在基因?qū)用鎸υ噭┢筷栃缘木赀M行檢測。基因擴增電泳圖（圖3）顯示，8 株乳酸菌均不攜帶氨基酸脫羧酶基因（精氨酸脫羧酶基因；組氨酸脫羧酶基因、、；酪氨酸脫羧酶基因、、）及毒力因子（asal、esp、ace、gelE、cylA、cylB、cylM）。

圖3 乳酸菌基因擴增電泳圖Fig. 3 Electrophoretic patterns of amplified lactic acid bacterial genes

2.5 乳酸菌體外抗氧化能力

DPPH自由基清除實驗是目前乳酸菌的抗氧化作用研究中最常用的方法，據(jù)文獻報道，乳酸菌的DPPH自由基清除率高于40%則可認為其體外抗氧化能力較強。由圖4可看出，z1-6、H3D、856、6D-16、z1-11的DPPH自由基清除率分別為（45.28±5.43）%、（43.01±6.58）%、（46.52±2.51）%、（51.07±6.50）%、（59.41±0.32）%（＜0.05），表明體外抗氧化能力較強，可考慮用作進一步抗氧化研究。

圖4 各菌株對DPPH自由基的清除效果Fig. 4 DPPH radical scavenging effect of each strain

3 結 論

以傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜中分離的乳酸菌為出發(fā)菌株，經(jīng)pH 3.0 MRS培養(yǎng)得乳酸菌82 株，再經(jīng)pH 2.5 MRS培養(yǎng)得乳酸菌49 株；49 株菌經(jīng)0.3%膽鹽測試，均具有耐膽鹽能力，表明植物源乳酸菌具有益生菌的基本特性；根據(jù)鏡檢形態(tài)結合植物源發(fā)酵樣品的不同，從耐酸耐膽鹽菌株中挑選19 株乳酸菌，經(jīng)生理生化實驗、形態(tài)觀察和16S rDNA鑒定，7 株為發(fā)酵乳桿菌、6 株為植物乳桿菌，嫩江桿菌、戊糖片球菌、利莫西桿菌、戊糖乳桿菌、屎腸球菌、短乳桿菌分別各1 株，其中577為嫩江桿菌，屬中國特有乳酸菌種屬。19 株乳酸菌對所選20 種抗生素多數(shù)表現(xiàn)敏感，其中4 株菌對20 種抗生素都較敏感，部分菌株對氨基糖苷類表現(xiàn)出一定抗藥性，可能由于氨基糖苷類藥物本身特點是對厭氧菌和腸球菌無效，對李斯特菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌具有較強的抑制能力，且在血平板中均沒有表現(xiàn)出溶血性；經(jīng)氨基酸脫羧酶活性試劑盒結合PCR擴增檢測表明無產(chǎn)生物胺的潛在威脅；以上研究表明19 株菌具有益生菌的安全特性；體外DPPH自由基清除實驗中，有5 株菌體外抗氧化能力高于40%；綜上所述，該19 株菌均可做為潛在益生菌。由此可見，我國傳統(tǒng)發(fā)酵蔬菜是益生菌選育的重要來源之一。