陸春美,崔秀明

(1.紅河衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南 紅河 661100；2.云南省三七資源可持續(xù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650550；3.云南省三七研究院，云南 昆明 650550)

血瘀作為諸多臨床疾病的表征之一，通常表現(xiàn)出有腫塊、疼痛、瘀青斑等現(xiàn)象。在中醫(yī)里關(guān)于其誘因有“因寒生凝、因凝而生瘀”“陽氣虛衰所致脈道拘急”“行不暢致血瘀”“性情暴怒而致氣血運(yùn)行不暢”，終成氣滯寒凝血瘀體質(zhì)等說法?，F(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)一步證實(shí)了血瘀與血液循環(huán)障礙有不可分割的關(guān)聯(lián)性。研究已證實(shí)三七總皂苷具有顯著的活血化瘀作用，能預(yù)防血栓動脈硬化[1]。屏邊三七具有一定的藥用價值，其功效和三七接近[2]。在云南的屏邊縣、文山馬關(guān)和麻栗坡及靠近越南北方一帶，流傳民間有用屏邊三七治療跌打損傷及強(qiáng)筋健骨的習(xí)慣[3],但尚未載入中國藥典，至今未能大量開發(fā)應(yīng)用?；诖耍狙芯繉ζ吝吶咴碥者M(jìn)行活血化瘀及鎮(zhèn)痛效應(yīng)初步評價，為屏邊三七在治療外傷包扎、跌打損傷等方面的藥用價值評價提供一定的科學(xué)依據(jù)，也為日后開發(fā)外傷用藥提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

屏障環(huán)境(SPF級)雌性SD大鼠，體質(zhì)量170～200 g，由浙江省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號為SCXK(浙)2018-0033。

屏障環(huán)境(SPF級)昆明小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量17～22 g，由湖南省長沙市天勤生物技術(shù)公司提供,動物許可證號為SCXK(湘)2014-0011。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

鹽酸腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格：1 mL/mg)；烏拉坦(百奧萊博生物有限公司，規(guī)格：51-79-6,試劑級)；凝血四項檢測試劑盒(賽科希德科技有限公司，規(guī)格：2 mL×6支)；云南白藥粉(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，規(guī)格:4 g/瓶)；0.6%冰醋酸(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司，規(guī)格：500 mL/瓶)。

1.3 主要設(shè)備儀器

電子天平，型號：CP114,上海奧豪斯儀器有限公司;萬能高速粉碎機(jī)，型號：FLB-200，上海菲力博食品機(jī)械公司;超聲清洗儀，型號：BL10-2506 上海比朗儀器有限公司;旋蒸器，型號：RE-5205，上海亞榮生化儀器廠;紫外分光光度計，型號：UV-2000，日本津島公司;電熱干燥箱，型號：DGG-9123AD，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器公司;離心設(shè)備，型號：TD25-WS，湖南湘儀器實(shí)驗(yàn)室開發(fā)有限公司;血液流變學(xué)測定儀，型號：LG-R-80B；血小板聚集率測定儀，型號：LG-PABER-1，均由北京世帝科學(xué)儀器有限責(zé)任公司提供。

2 方法

2.1 屏邊三七總皂苷的制備

屏邊三七根部藥材購于紅河州苗鄉(xiāng)屏邊縣玉屏鎮(zhèn)大份子村委會個體戶彭興國三七資源訓(xùn)化種植大棚，清水洗凈后參照有關(guān)文獻(xiàn)方法進(jìn)行提取制備。稱取粉末1 kg，用70%乙醇(10 L)進(jìn)行超聲提取3次，每次提取時間約40 min,合并提取液并濃縮形成浸膏[4-5]。用5倍量的水溶解后大孔樹脂上樣，按(水∶30%乙醇∶70%乙醇)依次洗脫，收集洗脫液旋干后的黃白色粉末即得含量約為31.69%的屏邊三七總皂苷[5-7]。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥

2.2.1 屏邊三七總皂苷活血化瘀實(shí)驗(yàn)

取雌性大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d，每組10只，隨機(jī)分為正常組，模型組，云南白藥組，屏邊三七皂苷低、中、高劑量組，共6組[7]。在同等喂養(yǎng)的情況下，云南白藥組按0.4 g/kg灌胃云南白藥，實(shí)驗(yàn)藥物3組按屏邊三七總皂苷低、中、高劑量(分別為0.20、0.40、0.80 g/kg)灌胃給藥，正常組和模型組灌胃生理鹽水，連續(xù)灌胃10 d，末次給藥2 h后，除正常組外，其余組參照有關(guān)參考文獻(xiàn)方法用鹽酸腎上腺素和冰浴進(jìn)行造模[5-10]。上述造模實(shí)驗(yàn)完成后，大鼠禁食12～16 h，用20%烏拉坦(劑量為5 mL/kg)麻醉后從腹主動脈取血5 mL，用含肝素鈉的采血管封存?zhèn)溆肹10]。參照文獻(xiàn)方法檢測各組大鼠血液的全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞積壓值及凝血四項、血小板聚集率指標(biāo)[10-11]。

2.2.2 屏邊三七總皂苷鎮(zhèn)痛效果評價實(shí)驗(yàn)

取昆明小鼠60只，雌雄各半，按上述方法分為6組，于末次給藥2 h后，除正常組外，其余組參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，記錄給藥后15 min內(nèi)各小鼠的扭體次數(shù)，并計算扭體抑制率[12]，扭體抑制率=(對照組扭體次數(shù)-實(shí)驗(yàn)組扭體次數(shù))/對照組扭體次數(shù)×100%。

2.3 數(shù)據(jù)分析方法

3 結(jié)果

3.1 屏邊三七總皂苷對模型大鼠血液流變學(xué)影響

與正常組大鼠相比，模型組大鼠全血黏度值、血漿黏度值均顯著升高(P<0.05)，提示造模成功。與模型組比較，實(shí)驗(yàn)藥物組中大鼠的全血黏度、血漿黏度和全血相對黏度均顯著降低(P<0.05)，見表1。

表1 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的影響

3.2 屏邊三七總皂苷對模型大鼠的凝血四項指標(biāo)的影響

各組大鼠的凝血酶、凝血酶原時間，部分凝血酶、纖維蛋白含量變化差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠凝血四項指標(biāo)的影響

3.3 屏邊三七總皂苷對血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響

各組大鼠的血小板聚集率和抑制率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 屏邊三七總皂苷對大鼠血瘀模型的血小板聚集率的影響

3.4 屏邊三七總皂苷對醋酸所致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)次數(shù)及扭體抑制率影響

各組扭體模型小鼠的扭體次數(shù)及扭體抑制率存在顯著差異(P<0.05)，見表4。

表4 各組小鼠扭體實(shí)驗(yàn)次數(shù)及扭體抑制率結(jié)果

4 討論

已有研究表明，血瘀是血液循環(huán)異常的一種狀態(tài)，與血液的流變異常、凝血異常等現(xiàn)象有關(guān)[11]。而血液流變異常的主要原因?yàn)镠CT升高、紅細(xì)胞聚集率上升、血漿黏度增大等。炎癥介質(zhì)會引發(fā)循環(huán)血容量減少而造成血液的濃縮，造成局部紅腫疼痛，從而引發(fā)FIB等血漿蛋白濃度的相對升高而誘發(fā)血漿黏度的增加[11，13]。在出血的狀態(tài)下，機(jī)體凝血活性因子被激活，凝血指標(biāo)如PT、TT、APTT 等就會發(fā)生縮短[13]，促使凝血功能紊亂，從而加劇其他血漿凝血指標(biāo)升高，最終導(dǎo)致血瘀證[14-15]。

屏邊三七目前尚未載入中國藥典，僅作為藥用植物來使用，在對屏邊野生資源使用調(diào)查的過程中發(fā)現(xiàn)，其主要作為治療跌打損傷和強(qiáng)筋健骨的內(nèi)服藥及治療外傷包扎、跌打損傷等外用藥的形式使用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，屏邊三七總皂苷藥物實(shí)驗(yàn)組(低、中、高3個不同劑量)對血瘀大鼠的血液流變學(xué)指標(biāo)和凝血指標(biāo)均有改善作用,對醋酸所致扭體模型小鼠具有一定的抑制作用，表明屏邊三七總皂苷成分具有活血化瘀和鎮(zhèn)痛的活性。

本實(shí)驗(yàn)的研究為考察屏邊三七的活血化瘀和鎮(zhèn)痛作用提供了一定的參考。為開展屏邊三七在治療外傷包扎、跌打損傷、滋補(bǔ)氣血等方面的功效研究提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)依據(jù)。但還有不足之處，日后將繼續(xù)深入開展活血補(bǔ)血的分子藥理實(shí)驗(yàn)研究，為下一步的開發(fā)應(yīng)用提供更全面的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。