5份大白菜葉卷曲突變體卷曲特性研究

張 楠， 趙姣姣， 崔維霞， 劉富強(qiáng)， 秦瑞鑫， 軒淑欣， 劉夢洋， 李 娜， 趙建軍， 孫曉雪， 盧 銀

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院/河北省蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新與利用重點(diǎn)實驗室/河北省蔬菜產(chǎn)業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，河北保定 071000；2.保定市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河北保定 071033)

葉片是植物進(jìn)行光合作用，維持機(jī)體生長發(fā)育的主要器官。卷曲是葉片的一種特殊形態(tài)，受多基因互作、激素水平和外界環(huán)境因素的調(diào)控。葉片卷曲與作物生長發(fā)育密不可分，一方面葉片卷曲程度和類型的變化通過影響光合作用、蒸騰作用等重要生理生化反應(yīng)，進(jìn)而降低植物的生長發(fā)育及生物量的積累，導(dǎo)致多個葉片相關(guān)性狀發(fā)生改變；同時葉片卷曲也是植物響應(yīng)、反饋并適應(yīng)外界環(huán)境的自我保護(hù)行為。對于大白菜、結(jié)球甘藍(lán)等葉菜類蔬菜而言，葉片向內(nèi)卷曲形成葉球是其典型的發(fā)育特征，葉球的形狀、抱合方式、緊實程度等重要農(nóng)藝性狀均與葉片的卷曲形態(tài)、程度等息息相關(guān)，因此準(zhǔn)確評價葉片卷曲、挖掘葉卷曲調(diào)控基因意義重大。

葉片卷曲屬于立體的三維形態(tài)變化，卷曲程度、卷曲發(fā)生部位、卷曲方向等變化多樣，僅通過肉眼觀察和語言描述很難進(jìn)行準(zhǔn)確全面的評價，因當(dāng)前技術(shù)條件有限，三維立體成像技術(shù)無法在大規(guī)模田間表型性狀調(diào)查中廣泛應(yīng)用，因此須建立一個適于大規(guī)模開展、較目測更為準(zhǔn)確的卷曲評價方法。水稻葉片卷曲評價的研究較多，水稻卷葉突變體、()、、、以及雜交水稻均以卷曲指數(shù)(LRI)評價葉片卷曲的程度。該指數(shù)也被成功地應(yīng)用于花生和玉米的葉片卷曲的評價中。袁玉菊等則采用縱卷指數(shù)(LC)和側(cè)卷指數(shù)(TC)分別評價擬南芥、甘藍(lán)和結(jié)球甘藍(lán)的葉片卷曲。Liu等用曲率指數(shù)(CI)評價擬南芥突變體的葉片彎曲。李平霞進(jìn)一步將CI拓展為葉片橫向卷曲度(CIT)和葉片縱向卷曲度(CIL)來評價白菜葉片的卷曲?？偨Y(jié)分析發(fā)現(xiàn)，雖然這些卷曲指數(shù)的名稱不同，但測量和計算方法具有一致性，因此該指數(shù)能夠在一定程度上實現(xiàn)卷曲的快速、準(zhǔn)確的評價。

影響葉片卷曲的因素眾多，在能夠準(zhǔn)確評價葉片卷曲的基礎(chǔ)上，探究卷曲形成因素首先應(yīng)進(jìn)行表型性狀的調(diào)查分析，即明確葉片卷曲特點(diǎn)，觀察分析葉片其他表型變化及二者之間的關(guān)系。如在以往葉卷曲的相關(guān)研究中普遍發(fā)現(xiàn)，葉卷曲突變體多伴有植株矮小、發(fā)育遲緩等不良表型。在眾多表型中，葉片形狀作為葉片最基本的形態(tài)特征與葉片卷曲是否存在必然的聯(lián)系，在以往的報道中，因研究材料較少規(guī)律性不明顯、遺傳背景不一致等因素相關(guān)報道較少，因此有待進(jìn)一步深入研究。

細(xì)胞是植物結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要包括上下表皮、柵欄組織和海綿組織等，這些細(xì)胞的狀態(tài)和行為之間的相互作用最終決定了葉片的形態(tài)，因此觀察葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化也是葉片卷曲研究的重要方法。在玉米和水稻等禾本科植物葉片卷曲材料的細(xì)胞學(xué)變化研究中，發(fā)現(xiàn)泡狀細(xì)胞大小和數(shù)量的變化是導(dǎo)致葉片發(fā)生卷曲的關(guān)鍵因素。在其他無泡狀細(xì)胞的作物中，多認(rèn)為細(xì)胞形態(tài)、極性、細(xì)胞的不均勻生長等是引起葉片卷曲的重要因素。Nath等在對金魚草葉片邊緣褶皺突變體的研究中，推測葉片中心區(qū)域的葉肉細(xì)胞分裂速度慢于葉邊緣區(qū)域是葉片發(fā)生褶皺的原因。Nelson 等認(rèn)為引起玉米突變體葉片向上卷曲的原因是葉片表皮細(xì)胞近遠(yuǎn)軸細(xì)胞發(fā)生了極性顛倒。史靈敏認(rèn)為柵欄組織細(xì)胞間隙增大，貯水組織排列疏松是花生卷葉突變體發(fā)生葉片卷曲的直接原因。余琳認(rèn)為葉片柵欄組織和海綿組織細(xì)胞形態(tài)一致，未正常分化，是擬南芥葉片內(nèi)卷突變體與野生型具有不同葉片卷曲表型的原因。劉慧珊對比分析大白菜野生型和葉片內(nèi)卷突變體的葉肉細(xì)胞，認(rèn)為細(xì)胞分布不均勻，柵欄組織與海綿組織細(xì)胞較小且排列不規(guī)則是導(dǎo)致葉片發(fā)生內(nèi)卷的原因。由于這些結(jié)果源于不同物種，且只是針對1份或幾份材料的研究分析，因此未發(fā)現(xiàn)明確的規(guī)律性。

本研究以相同遺傳背景下的大白菜野生型A03和5份不同葉卷曲突變體為試驗材料，通過表型性狀調(diào)查、卷曲指數(shù)測定、卷曲部位的葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察，探討突變體的其他變異表型、卷曲指數(shù)、葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化、葉形指數(shù)及葉片不同部位葉長變化與葉片卷曲表型的關(guān)系，以期為葉片卷曲評價體系的建立、葉形和葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)與卷曲表型的相關(guān)性研究提供思路，為卷曲調(diào)控基因的深入挖掘及互作研究打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本研究以大白菜野生型A03和甲基磺酸乙酯(EMS)誘變獲得5份不同葉卷曲突變體S59、S300、S313、S339、SL6為試驗材料。于2020年8月8日在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)試驗基地溫室內(nèi)進(jìn)行播種和標(biāo)準(zhǔn)化育苗，9月3日定植于露地，緩苗后開始進(jìn)行調(diào)查，每份材料成活30株以上，各株生長條件一致，四周設(shè)保護(hù)行，進(jìn)行常規(guī)田間管理。

1.2 試驗方法

1.2.1 葉片相關(guān)表型性狀的調(diào)查 表型性狀調(diào)查參考GB/T 19557.5—2017《植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南 大白菜》(即大白菜DUS測試)，以苗期真葉、蓮座期蓮座葉和結(jié)球期最大球葉(不結(jié)球突變體選取相同葉位的葉片)為調(diào)查對象，通過觀察和測量調(diào)查葉片相關(guān)的21個表型性狀，其中可觀測性狀13個，分別為各時期葉片的卷曲情況，蓮座期葉色、葉緣鋸齒、葉緣褶皺、葉緣波狀、茸毛，結(jié)球期株型、結(jié)球情況、球頂部包合狀態(tài)，收獲期中肋顏色、葉球顏色、球內(nèi)葉顏色、中心柱形狀?？蓽y量性狀共8個，分別為各時期的葉形指數(shù)(leaf shape index，簡稱LSI)，結(jié)球期株高、株展、外葉數(shù)，收獲期葉球高、葉球?qū)挕⑷~球質(zhì)量及植株鮮質(zhì)量，具體調(diào)查方法見表1。以葉片為測定對象的性狀，測定3株，每株選取相同葉位3張葉片，共9個生物學(xué)重復(fù)，其他性狀3個生物學(xué)重復(fù)。

表1 表型性狀調(diào)查方法、分類標(biāo)準(zhǔn)及調(diào)查時期

1.2.2 卷曲指數(shù)測定 選取相同的葉片測定LSI，每份材料9個生物學(xué)重復(fù)，分別測量自然狀態(tài)和壓平狀態(tài)下的葉長、葉寬，計算側(cè)卷曲指數(shù)(CIW)和CIL，葉片向內(nèi)(近軸側(cè))卷曲則卷曲指數(shù)為正值，葉片向外(遠(yuǎn)軸側(cè))卷曲時卷曲指數(shù)為負(fù)值，具體測定方法見表2和圖1-A、圖1-B。

表2 卷曲指數(shù)測量和計算方法

1.2.3 葉片卷曲部位的細(xì)胞觀察 以LSI測定相同葉位葉片，3株生物學(xué)重復(fù)，選取具有明顯卷曲表型且位置相同的部位[葉片兩側(cè)靠近葉緣1～2 cm處(圖1-C)]制作石蠟切片。觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)并利用image軟件統(tǒng)計葉片表皮細(xì)胞、柵欄組織和海綿組織的細(xì)胞層數(shù)、細(xì)胞厚度、細(xì)胞大小(以隨機(jī)選取的10個細(xì)胞切面面積的平均值作為細(xì)胞大小)。計算海綿組織與柵欄組織厚度比(spongy tissue and palisade tissue cell thickness ratio，簡稱SPTR)=海綿組織厚度/柵欄組織厚度；葉片細(xì)胞厚度比(cellthickness ratio，簡稱CTR)=(海綿組織厚度+下表皮厚度)/(柵欄組織厚度+上表皮厚度)，分別計算蓮座期和苗期的CTR、SPTR及側(cè)卷指數(shù)(CIW)的比值()，并進(jìn)行相關(guān)性分析。=/；=/；=/。

1.2.4 葉長葉寬變化與卷曲指數(shù)的相關(guān)性分析 選取未卷曲的新生葉片，將葉片最長和最寬位置分別記為L和W，將葉長和葉寬平均劃分7等份，左側(cè)和上側(cè)記為L～L、W～W；右側(cè)和下側(cè)記為L～L、W～W(圖1-E、圖1-F)。以10 d為1個周期，分別于2020年10月5日至11月4日連續(xù)4次測定同一葉片不同部位的葉長、葉寬，并計算LSI、CIW、CIL和葉片中間較兩側(cè)葉長的差異Δ，ΔL-(L+L)/2，3個生物學(xué)重復(fù)?？紤]葉形及葉片長度本身的差異，以第1次葉片未發(fā)生卷曲時的LSI、CIW及Δ為基礎(chǔ)，分別計算第次較第1次測量LSI、CIW和Δ的變化，并進(jìn)行相關(guān)性分析。Δ=(-LSI)/LSI；Δ=-；Δ-1=(Δ-Δ)/Δ。

1.3 統(tǒng)計分析

使用Excel和SPSS軟件對上述表型和細(xì)胞學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)差計算、顯著性分析及相關(guān)系數(shù)的計算。

加快農(nóng)業(yè)發(fā)展、增加農(nóng)民收入是農(nóng)業(yè)、農(nóng)村工作面臨的首要問題和中心任務(wù)，也是農(nóng)業(yè)、農(nóng)村工作的出發(fā)點(diǎn)和落腳點(diǎn)。鑒于林芝市深入貫徹落實西藏自治區(qū)第九次黨代會和西藏自治區(qū)農(nóng)村工作會議精神，特別是西藏自治區(qū)領(lǐng)導(dǎo)的重要講話精神和指示要求，筆者結(jié)合林芝市青稞生產(chǎn)實際就如何提高青稞產(chǎn)量提出自己的淺見。

2 結(jié)果與分析

2.1 葉片表型性狀調(diào)查與變異分析

通過對3個時期的葉片卷曲表型觀察發(fā)現(xiàn)，野生型A03在3個時期均表現(xiàn)為兩側(cè)稍內(nèi)卷。突變體S59、S300、SL6在3個時期也表現(xiàn)為葉片兩側(cè)內(nèi)卷且內(nèi)卷程度大于A03，S339苗期呈現(xiàn)葉緣內(nèi)卷，后期兩側(cè)內(nèi)卷程度大于A03；S313苗期和蓮座期表現(xiàn)為兩側(cè)稍內(nèi)卷，結(jié)球期葉緣外翻(圖2)。3個時期6份材料葉片兩側(cè)均有卷曲變化，通過觀察發(fā)現(xiàn)苗期和蓮座期葉片兩側(cè)向內(nèi)卷曲程度表現(xiàn)為SL6>S59≈S339>S300>S313≈A03；結(jié)球期表現(xiàn)為 SL6>S59 ≈A03>S300≈S339>S313(外翻)。

計算LSI并參考國標(biāo)中的分類標(biāo)準(zhǔn)，A03各時期的LSI介于1.3～1.7之間，葉形為倒卵形。SL6各時期的LSI介于1.83～1.86之間，且顯著大于A03的LSI，葉形為長倒卵形。S313早期的LSI與A03的LSI無顯著差異，僅結(jié)球期的LSI為1.90，且顯著高于A03的LSI，因此早期為倒卵形，結(jié)球期變?yōu)殚L倒卵形(表3)。

表3 大白菜不同時期的葉形指數(shù)

在13個可觀察表型性狀中，野生型A03主要表現(xiàn)為葉緣大波，結(jié)球、包合方式為舒心。5份突變體僅在葉緣波狀和結(jié)球性2個性狀上發(fā)現(xiàn)表型突變，不結(jié)球突變材料共有4份，分別為S59、S300、S313、S339，其中S313雖然并未抱合成球但成熟期中部葉片排列緊湊，此外，S300出現(xiàn)葉緣中波變異(表4)。

在8個可測量性狀中，5份突變體變異性狀在 3～11個不等，其中S59、S300、S339、SL6等4份材料的株高、株展、 鮮質(zhì)量均顯著小于A03， 結(jié)球突變體SL6所有4個葉球相關(guān)的性狀均顯著小于A03(表4、表5)。

表4 表型性狀調(diào)查與分析

表5 5份大白菜葉卷曲突變體的表型變異統(tǒng)計分析結(jié)果

2.2 以CI評價葉卷曲情況

分析6份材料3個時期的CIW和CIL，結(jié)果(圖3)表明，野生型A03的CIL在3個時期均為0，突變體中2份材料的CIL具有數(shù)值，其中S313結(jié)球期的CIL為 -0.04，極顯著小于A03，S339苗期的CIL為0.02，顯著大于A03。CIW表現(xiàn)多樣，A03在3個時期的CIW分別為0.13、0.25、0.31，呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。突變體中S313結(jié)球期的CIW為-0.30，苗期、蓮座期與野生型A03無顯著差異；S59、S300、S339、SL6在苗期和蓮座期的CIW均極顯著大于A03，結(jié)球期僅SL6仍極顯著大于A03，其余3份與A03無顯著性差異。 根據(jù)不同時期的CIW由大到小排序，苗期和蓮座期表現(xiàn)為SL6>S59>S339>S300>S313>A03，結(jié)球期表現(xiàn)為SL6>S59>A03>S300>S339>S313，與目測結(jié)果一致且兩側(cè)向內(nèi)卷曲程度與CIW呈正相關(guān)。

2.3 大白菜突變體葉片卷曲部位細(xì)胞結(jié)構(gòu)分析及相關(guān)性分析

2.3.1 葉片卷曲部位的細(xì)胞結(jié)構(gòu)變異分析 比較分析A03和5份突變體卷曲部位葉片細(xì)胞的層數(shù)，結(jié)果表明，在細(xì)胞層數(shù)上，6份材料苗期和蓮座期上下表皮細(xì)胞均為1層。S59、S313柵欄組織和海綿組織細(xì)胞層數(shù)與A03均無顯著差異，且苗期和蓮座期細(xì)胞層數(shù)基本一致。苗期S300、S339和SL6海綿組織的細(xì)胞層數(shù)均顯著小于A03，蓮座期3份突變體的細(xì)胞層數(shù)與A03均無顯著差異(圖4-A，表6)。

表6 不同時期細(xì)胞層數(shù)統(tǒng)計分析結(jié)果

比較分析葉片卷曲部位不同類型細(xì)胞厚度的差異，結(jié)果表明，6份材料的上下表皮細(xì)胞厚度差異不明顯，僅2份突變體具有顯著性差異，其中S59僅在蓮座期柵欄組織的細(xì)胞厚度極顯著大于A03；S339海綿組織的細(xì)胞厚度在苗期和蓮座期均顯著大于A03，柵欄組織的細(xì)胞厚度僅在蓮座期極顯著大于A03(圖4-B，表7)。

表7 不同時期細(xì)胞厚度統(tǒng)計分析結(jié)果

表8 不同時期細(xì)胞大小統(tǒng)計分析結(jié)果

2.3.2 細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化與卷曲的相關(guān)性分析 通過分析葉肉細(xì)胞相關(guān)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，5份突變體較野生型A03未發(fā)生不同細(xì)胞排列、結(jié)構(gòu)或類型的明顯變異，表皮細(xì)胞的層數(shù)、厚度及大小變化也不明顯，而柵欄組織和海綿組織細(xì)胞厚度、大小及細(xì)胞生長速度變化明顯，細(xì)胞層數(shù)也發(fā)生不同程度的變化，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大小及層數(shù)變化與卷曲形態(tài)無明顯相關(guān)性，而不同細(xì)胞或不同部位細(xì)胞的厚度比與卷曲表型存在一定聯(lián)系，其關(guān)系表現(xiàn)為與的變化規(guī)律一致，計算相關(guān)系數(shù)為0.91，因此二者相關(guān)性較強(qiáng)。此外與的變化規(guī)律也具有一致性，相關(guān)系數(shù)為0.84，因此也具有一定相關(guān)性(圖5，表9)。

表9 細(xì)胞厚度比、柵欄組織與海綿組織厚度比與卷曲變化的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4 葉長葉寬變化與卷曲的相關(guān)性分析

2.4.1 葉片不同部位生長情況的變異分析 分析同一葉片4次測定的LSI數(shù)據(jù)，結(jié)果表明，除S313第4次測量葉形指數(shù)高達(dá)2.04外，S313前3次測定以及其余5份材料4次測定的LSI均介于1.31～1.65之間(表10)。

分析連續(xù)4次測量的L～L和W～W數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，6份材料不同部位長寬數(shù)值均呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢，L的葉長較兩側(cè)生長迅速，L～L生長趨勢呈倒“V”形趨勢，而葉寬W～W生長趨勢呈較均勻的拋物線狀，葉長長勢與葉寬長勢不同，因此葉形發(fā)生變化(圖6)。比較4次測定3個周期的葉長和葉寬生長情況發(fā)現(xiàn)，6份材料均表現(xiàn)為第2周期生長最快，第3周期生長最慢，僅S313在第3周期仍保持較快的生長速度，可能與其卷曲形態(tài)的特定表達(dá)時期有關(guān)，即該時期S313開始出現(xiàn)葉片外翻表型。

2.4.2 葉形指數(shù)與卷曲指數(shù)的相關(guān)性分析 分析6份材料葉形指數(shù)(LSI)與CI的關(guān)系，計算表型調(diào)查數(shù)據(jù)中苗期、蓮座期和結(jié)球期LSI與CIW的相關(guān)系數(shù)分別為0.62、0.29、-0.36，苗期和結(jié)球期LSI與CIL的相關(guān)系數(shù)分別為-0.17、-0.69(蓮座期CIL均為0，無法分析)，相關(guān)性較弱(表10)。不同材料、不同葉位的葉片大小和形狀差異的影響，計算同一葉片連續(xù)4次測定的LSI～LSI與CIW～CIW的相關(guān)系數(shù)分別為-0.35、-0.11、-0.03，相關(guān)性較弱(表10)。

表10 葉形指數(shù)與卷曲指數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果

以第1次未發(fā)生卷曲的LSI和CI為基礎(chǔ)，進(jìn)一步分析ΔLSI與ΔCIW的相關(guān)系數(shù)，分別為-0.28、-0.13、0.08，因此相關(guān)性也不大(表11)。除第4次測定S313的CIL有數(shù)值外，6份材料4次測定的CIL均為0，而LSI的大小變化各異，因此LSI與CIL無明顯相關(guān)性。綜上所述，未發(fā)現(xiàn)LSI與CI存在明顯相關(guān)性。

表11 ΔLSI與ΔCIW的相關(guān)性分析結(jié)果

2.4.3 葉片不同位置葉長變化與側(cè)卷指數(shù)的相關(guān)性分析 前期觀察發(fā)現(xiàn)，葉片卷曲往往伴有葉片形狀尤其是葉長的變化，本研究結(jié)果證實LSI與CI相關(guān)性不大，進(jìn)一步分析葉片不同部位葉長變化與側(cè)卷表型變化的關(guān)系，計算4次測定的3個Δ與Δ的相關(guān)系數(shù)，分別高達(dá)0.91、0.97、0.98(圖7，表12)，因此可知L較兩側(cè)的葉長差變化與葉片側(cè)卷程度變化相關(guān)性極強(qiáng)。

表12 葉形與側(cè)卷指數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論與結(jié)論

表型性狀調(diào)查結(jié)果表明，5份葉卷曲突變體變異表型數(shù)量為3～11個不等，分析發(fā)現(xiàn)在突變性狀中除S300存在葉緣中波變異外，其他性狀如不結(jié)球、株高、株展、鮮質(zhì)量等與葉卷曲相關(guān)，推測葉片發(fā)生卷曲后有效光合面積降低，使突變體有機(jī)物積累能力變?nèi)?，生物量積累減少，從而伴有植株生長緩慢、矮小、葉片變小等性狀。這與前人的研究結(jié)果相同，如陳亞同發(fā)現(xiàn)水稻葉卷曲突變體株高、鮮質(zhì)量明顯小于野生型；劉慧珊發(fā)現(xiàn)白菜葉卷曲突變體伴有植株矮小性狀，葉長、葉寬顯著小于野生型。此外，本研究試材為EMS誘變2次所得，多次誘變也是產(chǎn)生多表型變異的重要原因，在同一突變體庫的其他研究中也有相似結(jié)果。

本研究以觀察和卷曲指數(shù)2種方法評價野生型A03和5份突變體的卷曲形態(tài)，結(jié)果證實卷曲指數(shù)較目測可以在一定程度上更準(zhǔn)確地評價葉片卷曲程度。余琳等在擬南芥、大白菜、水稻葉片的卷曲研究中均獲得了相同的結(jié)論。然而該指數(shù)并不完善，本研究中6份材料因卷曲形態(tài)比較簡單，CI規(guī)律可以比較，如遇到葉片兩側(cè)卷曲方向不一致(擰卷)或卷曲部位不規(guī)則等情況較難準(zhǔn)確評價。此外由于測量計算相對較為耗時耗力，因此在大規(guī)模材料的田間調(diào)查中更先進(jìn)、準(zhǔn)確、便捷的葉片卷曲評價技術(shù)手段有待進(jìn)一步開發(fā)。

在葉形、葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化與葉片卷曲表型變化的相關(guān)研究中，受限于遺傳背景差異或研究材料的數(shù)量，以往學(xué)者僅能獲得1～2份葉卷曲材料的葉片形狀、葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)或比較2～3份材料間的差異，雖發(fā)現(xiàn)葉片卷曲多伴有葉形的變化，明確葉卷曲必然由葉片細(xì)胞變化相關(guān)，但如何相關(guān)卻無人探討。本研究中6份材料的遺傳背景一致，環(huán)境條件一致，葉片兩側(cè)均具有內(nèi)卷表型且CIW表現(xiàn)各不相同，石蠟切片取材的葉片部位基本一致且均為卷曲發(fā)生部位，因此是研究葉形及葉片細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化與卷曲表型變化規(guī)律的良好材料。本研究也分別獲得了階段性的創(chuàng)新研究結(jié)果，為卷曲的深入研究奠定了基礎(chǔ)。但本研究中僅分析了側(cè)卷部位一個位置的細(xì)胞變化，雖然不同細(xì)胞厚度變化與卷曲表型具有較強(qiáng)的相關(guān)性，但無法判斷是否為直接引起葉片卷曲表型變化的原因，需要進(jìn)一步對比分析卷曲部位和未卷曲部位的細(xì)胞結(jié)構(gòu)差異，以探討引起突變體不同葉片卷曲表型的具體細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化成因。此外，本研究結(jié)果源于遺傳背景相同的6份大白菜，在不同作物、不同背景或數(shù)量規(guī)模較大的群體中是否成立有待進(jìn)一步研究。