Gal-3及StarD13在卵巢癌組織及癌旁組織中的表達(dá)差異及臨床意義

許瑩平，王文新，朱 輝

湖北省十堰市人民醫(yī)院婦科，湖北十堰 442000

卵巢癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其中90%以上為上皮性卵巢癌[1]。卵巢癌起病隱匿，70%以上患者確診時(shí)已為中晚期，5年生存率僅為30%～40%[2]。盡管多數(shù)卵巢癌患者對(duì)以順鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療較為敏感，但后期復(fù)發(fā)依然較為常見。相關(guān)研究顯示，超過(guò)90%的上皮性卵巢癌患者死于化療耐藥，因此，明確化療耐藥相關(guān)分子機(jī)制，尋找較為有效的治療靶標(biāo)和耐藥逆轉(zhuǎn)劑對(duì)改善治療效果具有重要意義[3]。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，半乳糖凝聚素-3(Gal-3)、類固醇敏感性調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)脂類轉(zhuǎn)運(yùn)體結(jié)構(gòu)域13(StarD13)在卵巢癌中表達(dá)異常，并且與甲狀腺癌、膀胱癌等實(shí)體惡性腫瘤化療的敏感性有關(guān)[4-5]。本研究通過(guò)驗(yàn)證卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)情況，探討其與卵巢癌患者臨床病理、化療耐藥的關(guān)系及可能機(jī)制，為改善卵巢癌化療耐藥和患者預(yù)后提供一定參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年11月至2021年1月本院收治的106例上皮性卵巢癌患者作為研究對(duì)象，平均年齡(56.47±11.42)歲；組織分型[6]：漿液性52例，黏液性41例，透明細(xì)胞癌7例，子宮內(nèi)膜樣癌6例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)臨床分期[7]：Ⅰ期9例，Ⅱ期30例，Ⅲ期40例，Ⅳ期27例；組織學(xué)分級(jí)[8]：G1級(jí)21例，G2級(jí)30例，G3級(jí)55例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移68例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)符合《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南(第四版)》[6]中關(guān)于上皮性卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)首次確診患者，術(shù)后進(jìn)行足療程(Ⅰ期化療4～6個(gè)療程，Ⅱ期及以上6～8個(gè)療程)順鉑聯(lián)合化療；(3)手術(shù)前未進(jìn)行過(guò)放化療；(4)臨床資料完善者；(5)患者知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)近3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)激素類藥物的患者；(2)存在既往卵巢手術(shù)史，心、肝、肺、腎功能嚴(yán)重不全或其他惡性腫瘤的患者；(3)過(guò)敏體質(zhì)患者。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集及保存 采集患者術(shù)中卵巢癌組織及癌旁組織標(biāo)本，10%甲醛固定，采用梯度濃度乙醇脫水、二甲苯脫水透明，浸入石蠟中包埋，制作成約4 μm厚度切片備用。

1.2.2免疫組織化學(xué)檢測(cè)組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)情況 取石蠟切片進(jìn)行脫蠟至水，乙二胺四乙酸緩沖液行抗原修復(fù)，滴加過(guò)氧化物酶阻斷液，隨后動(dòng)物非免疫血清封閉15 min，加一抗(1∶50稀釋，鼠抗人Gal-3抗體試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)開發(fā)公司；鼠抗人StarD13抗體試劑盒購(gòu)自武漢益普生物科技有限公司)孵育4 ℃過(guò)夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照，采用生物素標(biāo)記的二抗室溫孵育，孵育完成后加入鏈霉菌抗生物素-過(guò)氧化物酶溶液，PBS沖洗后采用二甲氨基偶氮苯液(試劑盒購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司)顯色。此過(guò)程在顯微鏡下觀察以防顯色過(guò)度，隨后采用蘇木素復(fù)染、乙醇脫水、二甲苯透明、中性膠封片、鏡檢。

1.2.3結(jié)果判讀 在光學(xué)顯微鏡下觀察，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野并按染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；同時(shí)按照陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分，其中陽(yáng)性細(xì)胞比例低于5%者0分，5%～25%者1分，>25%～50%者2分，>50%～75%者3分，>75%者4分；蛋白表達(dá)量=染色強(qiáng)度計(jì)分×陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分，其中5分及以上作為目的蛋白表達(dá)陽(yáng)性(+)，低于5分為目的蛋白表達(dá)陰性(-)。每張切片由本院2名病理科醫(yī)師分別判讀，并取表達(dá)量均值作為最終判斷結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo) 比較卵巢癌組織、癌旁組織Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)情況，并分析Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果與卵巢癌患者不同臨床病理特征的關(guān)系。根據(jù)文獻(xiàn)[9]提出的標(biāo)準(zhǔn)將化療后患者分為敏感組和耐藥組，將化療后緩解且停藥6個(gè)月以后復(fù)發(fā)者作為順鉑敏感組(65例)，將初治有效但6個(gè)月以內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)灶者作為順鉑耐藥組(41例)，比較順鉑耐藥組和順鉑敏感組卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)情況，并分析Gal-3、StarD13對(duì)順鉑化療耐藥的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)情況對(duì)卵巢癌患者化療耐藥的預(yù)測(cè)價(jià)值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同組織Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較 卵巢癌組織中Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，StarD13陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 不同組織Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較[n(%)]

2.2不同病理特征卵巢癌患者卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較 Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05)；StarD13陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌患者FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征卵巢癌患者卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較[n(%)]

2.3順鉑耐藥組和順鉑敏感組卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較 順鉑耐藥組Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率高于順鉑敏感組，StarD13陽(yáng)性表達(dá)率低于順鉑敏感組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 順鉑耐藥組和順鉑敏感組卵巢癌組織中Gal-3、StarD13陽(yáng)性表達(dá)結(jié)果比較[n(%)]

2.4Gal-3、StarD13表達(dá)對(duì)順鉑耐藥的預(yù)測(cè)價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，Gal-3、StarD13預(yù)測(cè)順鉑耐藥的AUC分別為0.796、0.789，二者聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.923，高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的預(yù)測(cè)價(jià)值(P<0.05)，見圖1、表4。

圖1 Gal-3、StarD13預(yù)測(cè)順鉑耐藥的ROC曲線

表4 Gal-3、StarD13表達(dá)對(duì)順鉑耐藥的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

卵巢癌是一種起病隱匿、缺乏早期診斷技術(shù)的惡性腫瘤，目前主要治療方式為腫瘤減滅術(shù)與鉑類藥物輔助化療相結(jié)合，但有相當(dāng)一部分患者治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移擴(kuò)散[10]。相關(guān)研究顯示，晚期卵巢癌患者的5年生存率低于30%，而化療藥物耐藥是此類患者死亡的重要原因[11]。因此，尋找早期診斷及逆轉(zhuǎn)耐藥的分子靶點(diǎn)是改善患者預(yù)后的重要方向。

Gal-3是半乳糖凝聚素家族的唯一嵌合型蛋白，由14號(hào)染色體的LGALS基因編碼，在胚胎形成、細(xì)胞增殖、凋亡及分化過(guò)程中起重要作用[12-13]。相關(guān)研究顯示，Gal-3在多種惡性腫瘤中表達(dá)，且其表達(dá)強(qiáng)度與惡性腫瘤進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移能力有關(guān)[14]。有學(xué)者將干擾Gal-3表達(dá)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入卵巢透明細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)，由順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平明顯升高，而消除基因沉默效應(yīng)后細(xì)胞凋亡情況隨之改善[15]。StarD13是一種具有START結(jié)構(gòu)域的信號(hào)蛋白，主要參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。相關(guān)研究顯示，StarD13可參與調(diào)節(jié)卵巢透明癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、黏附及腫瘤血管形成等過(guò)程，從而影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[16]。有學(xué)者認(rèn)為，StarD13低表達(dá)可增強(qiáng)血管生成反應(yīng)，減弱內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移和小血管形成，并且最終加速腫瘤的惡性進(jìn)展[17]。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，StarD13在乳腺癌中呈低表達(dá)，并且參與了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過(guò)程[18]，但在卵巢癌中的作用尚不明確。

本研究發(fā)現(xiàn)，Gal-3在卵巢癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率較癌旁組織明顯升高，StarD13陽(yáng)性表達(dá)率較癌旁組織降低，其中Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌患者組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，StarD13陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌患者FIGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，由此提示Gal-3和StarD13均參與了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程，并且均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Gal-3、StarD13在組織學(xué)分級(jí)、FIGO臨床分期中表達(dá)存在差異，可能與兩種分級(jí)方式不同有關(guān)。此外，本研究結(jié)果顯示，順鉑耐藥組Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率高于順鉑敏感組，StarD13陽(yáng)性表達(dá)率低于順鉑敏感組，由此提示Gal-3、StarD13表達(dá)與順鉑化療療效有關(guān)，其中Gal-3高表達(dá)提示化療耐藥，而StarD13高表達(dá)提示化療敏感，這可能與Gal-3表達(dá)增加時(shí)腫瘤細(xì)胞凋亡受到抑制，順鉑難以通過(guò)誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用，從而產(chǎn)生耐藥性有關(guān)；而StarD13表達(dá)升高時(shí)加速了腫瘤細(xì)胞的凋亡，與順鉑等化療藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡起協(xié)同作用，因而表現(xiàn)為對(duì)化療敏感[19-20]。此外，本研究通過(guò)建立ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，Gal-3、StarD13對(duì)預(yù)測(cè)順鉑耐藥均具有一定價(jià)值，并且二者聯(lián)合檢測(cè)較單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)效能更佳，提示二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)臨床預(yù)測(cè)卵巢癌患者順鉑耐藥有一定指導(dǎo)意義，有助于臨床醫(yī)生制訂個(gè)性化化療方案，同時(shí)針對(duì)不同耐藥機(jī)制采用可能有效的耐藥逆轉(zhuǎn)治療，幫助患者獲益更多。

綜上所述，與癌旁組織比較，卵巢癌組織中Gal-3陽(yáng)性表達(dá)率偏高、StarD13陽(yáng)性表達(dá)率偏低，二者陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，并且對(duì)判斷病情進(jìn)展及預(yù)測(cè)順鉑化療及耐藥均具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。